蛔虫感染期幼虫的分离

彭国华；袁铿；周宪民；彭卫东；翁培兰

关键词：蛔虫, 感染期, 幼虫, 密度梯度离心法, 方法, 磁力搅拌器, 匀浆器, 卵壳, 淋巴细胞, 孵化法, 操作步骤, 玻璃珠, 盖玻片, 分离液, 悬液, 收集, 人工, 基础, 获取, 纯净

摘要：长期以来,对人蛔虫感染期幼虫的分离和收集,主要是①采用盖玻片人工孵化法[1,2],②用玻璃匀浆器匀浆使幼虫孵化[3,4],③将感染期虫卵悬液加玻璃珠,用磁力搅拌器搅拌[1,2].前两种方法一次只能分离少量幼虫,操作步骤烦琐,费时;第③种方法虽能一次性分离出大量幼虫,但幼虫与卵壳较难分开.为了获取大量纯净的幼虫,我们在第③种方法的基础上,用淋巴细胞分离液通过密度梯度离心法将幼虫与卵壳分开,获得纯度较高的幼虫,操作简便易行.

中国寄生虫学与寄生虫病杂志相关文献

猪囊尾蚴线粒体NADH脱氢酶的基因克隆

目的研究猪囊尾蚴线粒体NADH脱氢酶亚单位1基因的结构特点.方法提取猪囊尾蚴mRNA,反转录合成cDNA,构建cDNA文库.用兔抗囊尾蚴抗血清筛选文库,得到阳性克隆,将其亚克隆到pBluescript SK质粒中测序,并与GenBank中核苷酸序列进行同源性分析.结果与结论 3次筛选得到1个阳性克隆,其长度为1082bp.其中1～578 bp为开放阅读框,编码猪囊尾蚴线粒体NADH脱氢酶亚单位1的192个氨基酸残基,579～1082 bp为tRNA-Asn、tRNA-Ile与tRNA-Pro的基因编码区.

作者：张莉；刘殿武刊期： 2003年第01期
微波ELISA法对日本血吸虫病流行区不同人群的检测结果

作者前已报道用微波ELISA法诊断日本血吸虫病具有快速ELISA类同的敏感性和特异性,而且具有更为快速的优点,全过程仅需5min即可显色观察结果,可提高血吸虫病检测的工作效率[1].本文进一步将此法应用于现场,结果报告如下

作者：张宏莹；袁红；顾启章刊期： 2003年第01期
旋毛虫新生幼虫期特异性基因丝氨酸蛋白酶的结构预测与功能分析

我国旋毛虫病患者数及死亡率居三大食源性人兽共患寄生虫病之首[1].旋毛虫新生幼虫肠型期(NBL)为非细胞内寄生并在血液中移行,对宿主的免疫作用较敏感.利用基因工程技术制备NBL抗原用于旋毛虫病的诊断和预防具有重要意义.本文对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行筛选,获得其特异性全长基因,采用生物信息学原理对其进行分析,结果报告如下.

作者：任瑞文；徐晓立；卢强；刘明远刊期： 2003年第01期
在老挝感染的输入性恶性疟一例

患者男性,29岁,工人.2000年9月赴老挝参加我国ADB第八工程援助项目,2001年5月回成都休假,出现畏寒、发热、全身乏力等症状,持续10 h左右缓解.之后,每天或隔天周期性发作1次.曾在多家医院就医,均以感冒治疗,无效.6月26日上午到我院就诊,血常规检查:WBC 6.6×109/L,中性粒细胞0.76,淋巴细胞0.24;RBC 3.96×1012/L,血红蛋白28.3 g/L,血片镜检未查见疟原虫.以原因不明发热收治入院.当天下午2点,患者再次发热(39℃),涂制薄血膜,瑞氏液染色,镜检,查见疟原虫环状体及配子体,据此拟诊为恶性疟.再经成都市卫生防疫站采血镜检确诊为恶性疟.给与肌注蒿甲醚80 mg/次,上、下午各1次,次日再次查血常规:WBC 5.4×109/L,中性粒细胞0.67,淋巴细胞0.33;RBC3.26×1012/L,血红蛋白26.7 g/L.体温降至37℃.之后,连续3次薄血膜镜检复查,未见疟原虫.继续治疗1 wk后出院,随访1年未复发,2002年7月来院复查未见异常.

作者：蒋祖辉刊期： 2003年第01期
中华血吸虫在广西那坡县的发现

1989年12月,作者等于广西那坡县异盘并殖吸虫病流行区作中间宿主调查,在当地的拟钉螺(Tricula sp,种名待定)体内查获短叉尾蚴寄生.研究结果报告如下:

作者：胡文庆；刘登宇；周世祜刊期： 2003年第01期
永嘉县1956～1998年丝虫病防治与监测

永嘉县位于浙江省南部,属班氏丝虫病低度流行区.1956～1998年全县丝虫病防治工作经历了3个阶段:调查防治阶段、基本消灭丝虫病后10年内监测阶段和基本消灭丝虫病10年后监测阶段.累计病原学血检910395人次,检出微丝蚴血症者16700例次,用乙胺嗪治疗21493例次.1987年1～6月42乡镇279040人食用0.35%乙胺嗪药盐和药酱油全民防治丝虫病.1998年血检17乡镇15233人,全部阴性,证实丝虫病传播已被阻断.

作者：陈胜则；陈仁裕；徐以勒刊期： 2003年第01期
建坝蓄水对湖区血吸虫病传播的影响

目的阐明建坝蓄水后钉螺消亡规律及其对血吸虫病传播的影响.方法选择江西省进贤县军山湖为调查点,收集其建坝前洲滩钉螺分布高程与血吸虫病疫情资料;抄录1995～2001年坝内外逐日水位记录,测算不同高程有螺洲滩全年及4～6月份水淹天数,分析钉螺消亡与水位变化的相关性;在一个历史疫情资料较为完整的寺背村开展现况调查,确认当前血吸虫病流行态势.结果军山湖沿岸曾有3乡6村流行血吸虫病,但有螺面积仅1 394 030m2(2 090亩),钉螺集中分布在16.6～17.2 m高程范围内.建坝前居民血吸虫病平均感染率为12.5%,建坝后坝内水位波幅显著缩小,低水位抬高至16.0～16.8 m.在此水情条件下,2年后未再检获活螺,居民血吸虫病感染率相应剧降.寺背村现况调查未发现患者、病牛和钉螺.结论军山湖建坝蓄水2年后阻断了血吸虫病传播.

作者：张建华；胡飞；官春林；洪献林；林丹丹；宁安；刘跃民；胡林生；张绍基刊期： 2003年第01期
感染细粒棘球蚴绵羊诱发过敏性休克期间IgG、IgG1和IgE水平的探讨

目的测定感染细粒棘球蚴(E.g)绵羊诱发过敏性休克期间特异性IgG、IgG1和IgE抗体水平.了解抗原B对人工感染E.g绵羊IgG抗体的反应性.方法从绵羊E.g囊液中制备抗原B和E.g囊液粗制抗原,ELISA测定感染E.g绵羊诱发休克期间特异性IgG、IgG1和IgE抗体的动态变化.结果感染E.g绵羊6个月,特异性IgG、IgG1和IgE抗体水平较正常绵羊显著升高;诱发休克后特异性IgE抗体水平显著下降,尤其因休克致死的绵羊下降更为明显;IgG及IgG1抗体的衰减时间不同,趋势各不相同;抗原B和E.g囊液粗制抗原与血清IgG抗体反应阳性率分别为91%、32%.结论特异性IgE是导致棘球蚴病所致过敏性休克的主要抗体,而IgG和IgG1抗体也起着重要作用.抗原B与感染E.g绵羊IgG抗体的血清反应性较好,可作为一种血清免疫学诊断方法监测绵羊感染E.g的状况.

作者：郑宏；徐志新；杨戈雄；温浩刊期： 2003年第01期
斯氏狸殖吸虫病32例临床分析

我院于1992年1月至2001年12月共收治斯氏狸殖吸虫病患者32例,均以胸肺部表现为主,报道如下.

作者：杨书明刊期： 2003年第01期
用DNA序列分析我国5种并殖吸虫的分类地位

目的采用分子生物学技术分析河口并殖吸虫、白水河并殖吸虫、勐腊并殖吸虫、曼谷并殖吸虫及象山并殖吸虫的分类地位.方法用明胶、乙基苯基聚乙二醇(NP40)、聚山梨酸200法抽提基因组DNA,用特异引物,PCR扩增ITS2和部分COⅠ基因的目的基因.PCR扩增产物纯化后直接测序分析其同源性,构建种系发生树.结果与结论DNA序分析结果表明,这4种并殖吸虫在并殖吸虫在并殖吸虫属中彼止比较接近,分类地位位于卫氏并殖吸虫与斯氏并殖吸虫之间.河口并殖吸虫与斯氏并殖吸虫在进化及亲缘关系上非常接近.

作者：崔爱利；常正山；陈名刚；David BLAIR；陈韶红；张永年；冯正刊期： 2003年第01期
消灭丝虫病资料整理方法与体会

丝虫病的防治、监测和科研等有关方面的资料是消灭丝虫病审评的重要凭证.为了迎接审评,我们对滕州市消灭丝虫病资料进行了整理.其工作方法和体会如下:

作者：孟军；张学启刊期： 2003年第01期
黑须污蝇所致的齿龈蝇蛆病两例报告

污蝇幼虫寄生于哺乳动物的创伤和自然腔道内[1,2],这种专性寄生的蝇类,是西北地区牛、羊、骆驼等动物的重要蝇蛆病病原,也侵袭人体引起皮肤、耳、鼻等组织器官蝇蛆病[3].在新疆北部曾有黑须污蝇[Wohlfahrtia magnifica(Schiner)]所致的7例耳蝇蛆病的报道[4].我室1988和1999年在石河子地区发现2例齿龈蝇蛆病[5],经鉴定为污蝇属黑须污蝇幼虫.齿龈内寄生污蝇幼虫国外已有报道,我国未曾发现,现将该病报道如下.

作者：唐慧；王晓闻；唐光辉；姜素华刊期： 2003年第01期
免疫捕获乳酸脱氢酶活性测试在恶性疟诊断中的初步应用

近来发现,疟原虫乳酸脱氢酶(LDH)与宿主红细胞LDH在理化、免疫学特性和酶学方面差异较大.在催化乳酸生成丙酮酸的反应中,疟原虫LDH能迅速利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)类似物3'-乙酰吡啶NAD(APAD)作辅酶,而红细胞LDH在存在时参与反应速率较慢[1,2].这一特性为利用疟原虫LDH活性检测疟原虫提供了依据.另外,基于疟原虫LDH为检测靶抗原的免疫层析试剂盒-OptiMAL法,其实验室和现场检测均作了评估,与传统镜检法相比,其诊断恶性疟的敏感性和特异性分别为88%和99%,对间日疟分别为94%和100%[3].因此,疟原虫LDH具有重要的诊断应用价值.本研究利用业已制备的抗恶性疟原虫LDH单抗[4],结合其酶学特性,建立检测恶性疟原虫的免疫捕获LDH活性测试法,评价其疟疾诊断应用价值.

作者：吴英松；李明；董文其；毕惠祥；李英杰刊期： 2003年第01期
日本血吸虫成熟虫卵与未成熟虫卵的二维数据测量

日本血吸虫虫卵的二维数据在教科书及文献早有记载.用图像分析仪测量其成熟及未成熟虫卵的多种数据并进行比较尚未见报道.为了设计人门静脉日本血吸虫虫卵过滤器孔眼的大小并比较成熟与未成熟虫卵的相关二维数据,分别测量了228个未成熟虫卵及118个成熟虫卵的6项数据,报道如下.

作者：王则胜；黎辉；胡虹；熊国胜；彭善友刊期： 2003年第01期
日本血吸虫重组抗原rSjGST-32诱导小鼠保护性免疫效果的比较

目的探索日本血吸虫重组抗原rSjGST-32适合的免疫剂量.方法以50、100、200μg 3个不同剂量rSjGST-32加佐剂皂角甙A(QuilA)50μg免疫BALB/c小鼠,同时设QuilA和PBS对照组.ELISA法检测抗体水平.末次免疫4 wk后攻击感染,用减虫率及减卵率表示保护力.结果与PBS对照组比较,50、100、200μg rSjGST-32组的减虫率分别为38.1%,47.8%和48.8%;每克肝卵(LEPG)减少率分别为39.1%,53.5%和53.6%;每条雌虫每克肝所含虫卵数(LEPF)减少率分别为22.5%,22.8%和21.8%;抗体滴度分别达1:51 200,1:102 400和1:102 400. 结论重组抗原rSjGST-32加QuilA佐剂免疫小鼠,以100μg rSjGST-32剂量较为适合.

作者：田明礼；蔡春；易新元；曾宪芳；张顺科刊期： 2003年第01期
处在十字路口的我国寄生虫病防治事业--写在本刊创刊二十周年之际

寄生虫病流行状况不仅是一个国家的公共卫生、也是其公众福利及社会文明的一种重要指标.因受地理、气候、社会经济发展等方面的影响,寄生虫病在我国广泛流行,极大地危害民众健康及生命,影响社会的发展.建国以来,党和政府大力支持重大寄生虫病的防治和研究工作,取得了举世瞩目的成就.然而到了20世纪末,由于多方面原因,这条战线正面临多种寄生虫病继续流行而专业队伍明显萎缩的严峻局面.

作者：余森海刊期： 2003年第01期
重庆市不同媒介疟区灭疟后期监测结果分析

重庆市位于长江三峡库区腹地,东经105°15＇～110°10＇,北纬28°～31°45＇.总面积为82000 km2.1997年设为直辖市,辖40县(市、区),人口3060万.东南多为山区,西北多为丘陵.海拔1980 m,低为195 m.年平均气温18℃,降雨量1100mm.为间日疟流行区,偶有输入性恶性疟.传疟媒介有嗜人按蚊和中华按蚊.20世纪70年代,中华按蚊区疟疾流行已控制.嗜人按蚊区疫情波动不定.经过大量的媒介调查试点研究,80年代中期采取了灭蚊措施,自1993年后疟疾年发病率降至1‰以下.1997～2000年监测结果报告如下.

作者：蒋诗国；肖邦忠；李继银；肖鹏；吴成果；黄文利刊期： 2003年第01期
蛔虫感染期幼虫的分离

长期以来,对人蛔虫感染期幼虫的分离和收集,主要是①采用盖玻片人工孵化法[1,2],②用玻璃匀浆器匀浆使幼虫孵化[3,4],③将感染期虫卵悬液加玻璃珠,用磁力搅拌器搅拌[1,2].前两种方法一次只能分离少量幼虫,操作步骤烦琐,费时;第③种方法虽能一次性分离出大量幼虫,但幼虫与卵壳较难分开.为了获取大量纯净的幼虫,我们在第③种方法的基础上,用淋巴细胞分离液通过密度梯度离心法将幼虫与卵壳分开,获得纯度较高的幼虫,操作简便易行.

作者：彭国华；袁铿；周宪民；彭卫东；翁培兰刊期： 2003年第01期
犬钩虫特异性抗原基因的克隆与表达

目的寻找可诱发宿主保护性免疫力的犬钩虫特异性抗原.方法用犬钩蚴免疫获得保护性免疫力的家犬血清,免疫筛选犬钩虫Ⅲ期幼虫λZAPⅡcDNA文库,阳性克隆基因经测序,在质粒PUC18、PET28中进行一系列亚克隆,重组pET28C质粒诱导表达并对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析.结果从cDNA文库中筛获5个相同的阳性克隆,携带的犬钩虫抗原(AcAg)外源基因片段在原核体系(pET28C)中表达分子量为43kDa的融合蛋白.Western blotting分析该重组蛋白可与筛库的犬血清反应.结论 AcAg为新的犬钩虫特异性抗原,其基因与美丽纤杆线虫(Caenorhabditis elegans)基因unc-89同源性为35%.该抗原诱发宿主保护性免疫力及作为疫苗的潜力值得进一步研究.

作者：郭湘荣；薛海筹；李铁华；刘森刊期： 2003年第01期
西藏自治区米林县一起旋毛虫病爆发

2002年1月9～18日,米林县雪卡村一家3人相继发病,住进米林县医院,后转入林芝地区人民医院,经专家会诊确诊为旋毛虫病.

作者：次仁；斯塔；王洪举；马兵成；嘎玛次仁刊期： 2003年第01期