乙型肝炎病毒X蛋白基因型特异性功能差异

林旭；徐晓；黄清玲；郑大利；陈婉南；林建银

关键词：肝炎病毒, 乙型, 基因型, 反式激活(遗传学), 集落形成单位测定, 细胞凋亡

摘要：目的研究B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)功能差异.方法B、C基因型乙型肝炎病毒X基因真核表达载体(分别为pcDNA 3.1-XB及pcDNA3.1-XC)及空白载体pcDNA3.1/Hygro(-)以脂质体2000分别转染Chang细胞,转染细胞2 d后以流式细胞仪检测凋亡率;转染细胞以潮霉素筛选,14 d后形成的抗性细胞集落以冷甲醇固定、Gimsa染色并计数;各载体与指示载体pCMVβ共转染细胞,转染2 d后裂解细胞并检测胞内β-半乳糖苷酶的活性.所有数据均以配对t检验进行分析.结果各载体转染Chang细胞后细胞的凋亡率为pcDNA3.1-XC＞pcDNA3.1-XB＞pcDNA3.1/Hygro(-),形成的抗潮霉素细胞集落数为pcDNA3.1/Hygro(-)＞pcDNA3.1-XB＞pcDNA3.1-XC,细胞内β-半乳糖苷酶活性为pcDNA3.1-XB+pCMVβ＞pcDNA3.1-XC+pCMVβ＞pcDNA3.1/Hygro(-)+pCMVβ.结论B基因型HBx反式激活能力高于C基因型HBx,而抗细胞增殖及致细胞凋亡能力都低于C基因型HBx,HBx这些功能差异可能与B、C基因型乙型肝炎病毒致病性差异有关.

中华传染病杂志相关文献

中华医学会第十二次全国病毒性肝炎及肝病学术会议纪要

由中华医学会感染病学分会和肝病学分会联合召开的第十二次全国病毒性肝炎及肝病学术会议于2005年5月13至16日在北京召开.来自全国各省市自治区及香港和台湾地区代表共960人参加了会议.13位病毒性肝炎及肝病领域的专家做了专题报告.

作者：王贵强；魏来；翁心华；庄辉刊期： 2005年第04期
《传染病学》第四版出版

作者：刊期： 2005年第04期
人源抗-HBs轻链与干扰素-α融合蛋白的克隆及表达

目的构建人源单克隆抗-HBs Fab片段-IFN-α表达载体,对原核表达该融合蛋白的可行性及其效果进行实验研究.方法用聚合酶链反应(PCR)体外扩增目的基因IFN-α,单酶点插入已含人源抗-HBs Fab基因的载体,插入点位于轻链基因3'末端,利用酶切、PCR鉴定,测序筛选正确插入的阳性克隆,转化大肠埃希菌Top10,挑选单克隆表达、纯化目的蛋白,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测融合蛋白的抗原性,用Dot-blot和WISH细胞检测其生物学活性.结果利用插入了人源抗-HBs Fab段基因及IFN-α基因的pBAD/gⅢA原核表达系统,成功表达了具生物活性的轻链与IFN-α的融合蛋白,其与HBsAg的亲合力与抗-HBs-Fab相近,而且具有干扰素的活性.融合蛋白对HepG2.2.15细胞初步实验结果亦显示出其具有良好的靶向性及致凋亡作用.结论轻链与干扰素IFN-α融合蛋白的成功表达表明,应用原核系统能够同时表达特异抗体和其介导的某些生物活性因子,不失为一种经济、有效的方法,为特异抗体及其介导融合蛋白的制备和临床应用提供了实验依据.

作者：陆慧琦；韩焕兴；安峰；叶伟民；曾万杰；薛菖刊期： 2005年第04期
《肝病细胞治疗》出版

作者：刊期： 2005年第04期
静脉输氧治疗感染性疾病43例

严重急性呼吸综合征(SARS)患者肺泡弥散功能障碍,通气/血流比例严重失调,以至于无论是自主呼吸或是经气道给氧,吸入肺泡腔的氧分子均不能有效地透过肺泡壁进入血流,导致患者发生Ⅰ型呼吸衰竭的低氧血症,而且常规气道输氧疗法难以纠正[1].

作者：蒋小玲；何清；许诚；王松；崔建军；段刚；叶涛生；杨大国；周伯平；赵连三刊期： 2005年第04期
不同人群和标本中前S1抗原检测的意义

乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白为HBV外膜蛋白,在HBV感染者的血液和肝组织中,前S1蛋白与HBV DNA、HBeAg和HBcAg等HBV复制标志密切相关[1,2].近期的研究重点转向前S1基因突变病毒株对细胞感染力的影响、乙型肝炎治疗及新型疫苗的研究方面[3-5].

作者：冯福民；孙淑丰；米志宝；张习坦；杨红刊期： 2005年第04期
2005年全国肝病学术会议暨研修班举办

作者：刊期： 2005年第04期
潮汕地区散发性病毒性脑膜炎的病毒病原学分析

目的对1998年1月至2003年12月潮汕地区病毒性脑膜炎(包括脑膜脑炎,不包括乙型脑炎)患者的病毒病原分布情况进行调查.方法用Hep-2细胞做病毒培养,微量塑料板法做血清中和抗体检测.结果从512例患者的583份脑脊髓液、血液、咽拭子和粪便标本中分离出病毒共116株(4种16个型),病毒分离检出率为19.9%;从患者50例双份血清检出病毒抗体阳性24例(其中4例为自身分离到病毒者),阳性率为48.0%.以上512例患者病毒分离阳性和/或血清学阳性共136例,总感染率为26.6%.患者感染的病毒型别分布及构成比分别为:柯萨奇病毒(Cox)89例(0.6544),其中A24型17例,B1型31例,B5型39例和B4、B6型各1例;埃可病毒(ECHO)18例(0.1324),其中7型、15型各5例,14型2例、24型4例,3型、6型各1例:肠道病毒(EV)23例(0.1691),其中70型17例,71型6例:腺病毒(AdV)6例(0.0441),其中2型1例,3型2例和7型3例.不同年龄组患者病毒感染率:儿童组27.9%,成人组25.8%.两组感染率比较差异无统计学意义(x2=0.249,P＞0.05).结论潮汕地区病毒性脑膜炎患者的肠道病毒感染,其中以Cox的感染高,值得引起疾病预防部门、临床医生及科研单位的重视.

作者：费选文；谢若男；曾嫦；韩丽君；林祥伟；杨育芳；陈景武刊期： 2005年第04期
乙型肝炎病毒X蛋白基因型特异性功能差异

目的研究B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)功能差异.方法B、C基因型乙型肝炎病毒X基因真核表达载体(分别为pcDNA 3.1-XB及pcDNA3.1-XC)及空白载体pcDNA3.1/Hygro(-)以脂质体2000分别转染Chang细胞,转染细胞2 d后以流式细胞仪检测凋亡率;转染细胞以潮霉素筛选,14 d后形成的抗性细胞集落以冷甲醇固定、Gimsa染色并计数;各载体与指示载体pCMVβ共转染细胞,转染2 d后裂解细胞并检测胞内β-半乳糖苷酶的活性.所有数据均以配对t检验进行分析.结果各载体转染Chang细胞后细胞的凋亡率为pcDNA3.1-XC＞pcDNA3.1-XB＞pcDNA3.1/Hygro(-),形成的抗潮霉素细胞集落数为pcDNA3.1/Hygro(-)＞pcDNA3.1-XB＞pcDNA3.1-XC,细胞内β-半乳糖苷酶活性为pcDNA3.1-XB+pCMVβ＞pcDNA3.1-XC+pCMVβ＞pcDNA3.1/Hygro(-)+pCMVβ.结论B基因型HBx反式激活能力高于C基因型HBx,而抗细胞增殖及致细胞凋亡能力都低于C基因型HBx,HBx这些功能差异可能与B、C基因型乙型肝炎病毒致病性差异有关.

作者：林旭；徐晓；黄清玲；郑大利；陈婉南；林建银刊期： 2005年第04期
结核分枝杆菌异烟肼耐药性的噬菌体测定技术研究

目的建立噬菌体生物扩增法快速测定异烟肼(INH)耐药性的方法,并探讨其在结核分枝杆菌(MTB)INH耐药性测定中的应用价值.方法用PhaB法检测167株MTB临床分离株INH耐药性,并与Bactec-960测定结果比较,分析PhaB法的敏感性、特异性和准确性.结果0.2μg/ml INH与菌液37℃作用48 h后,通过噬菌体检测,以噬菌斑减少95%为适判断标准,噬菌斑减少高于95%的判为敏感株,噬菌斑减少低于95%的为耐药株.以Bactec-960测定结果为判断标准,则PhaB的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值及符合率分别为96.4%、96.4%、93.1%、98.2%和96.4%.结论PhaB检测INH耐药性具有很高的敏感性和特异性,与Bactec-960的符合率达96.4%,只需3 d时间,且操作简便、不需特殊仪器设备,可作为MTB的INH耐药性快速筛选方法.

作者：崔振玲；胡忠义；王洁；张莹蓉；陈慧萍；张文宏；翁心华刊期： 2005年第04期
首届全国中西医结合传染病学术会议征文通知

作者：刊期： 2005年第04期
都柏林念珠菌和白念珠菌分子指纹图谱差异性分析

目的建立快速分子指纹图谱分析法,应用于都柏林念珠菌和白念珠菌分子指纹图谱差异性分析.方法以野生株噬菌体M13微卫星特异核心序列为单一引物,分别进行都柏林念珠菌和白念珠菌基因组DNA的聚合酶链反应(PCR)扩增,并将产生的分子指纹图谱分别应用琼脂糖凝胶电泳和微流DNA芯片分析.结果17株都柏林念珠菌和白念珠菌基因组DNA的扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析,见都柏林念珠菌和白念珠菌各有5条固定阳性条带出现,两者之间阳性条带大小差异有统计学意义.微流DNA芯片显示都柏林念珠菌固定出现阳性条带大小依次为960、1177、1297、1495、1797 bp;白念珠菌固定出现阳性条带大小依次为653、1323、1531、2021、2875 bp.结论都柏林念珠菌和白念珠菌分子指纹图谱存在显著差别,可应用于两者的快速鉴别,尤其是微流DNA芯片法简便、快速、重复性好,更适合于大规模分子流行病学监测.

作者：朱利平；章强强；龚华斐；李莉；翁心华；王家俊；张永信刊期： 2005年第04期
血浆胆红素吸附治疗重症肝病125例

目前,对各种原因所致肝功能衰竭的治疗尚缺乏特效手段,人工肝支持系统(ALSS)被认为是暂时替代肝脏的部分解毒、代谢功能,改善人体内环境,为肝细胞再生创造条件的有效方法.特异性胆红素吸附(BSA)是ALSS常用治疗方法之一,能有效降低血清胆红素水平,并能祛除血氨等有害毒性物质.

作者：苏菲；魏少峰；费永秀；杨龙云刊期： 2005年第04期
重新认识严重败血症

严重败血症是指败血症伴动脉低血压和因灌流减少而引起一个或一个以上器官衰竭.从流行病学观点看,近20年来,严重败血症在败血症中的比例明显增加,从25%上升至80%,成为监护病房第一死亡原因[1].现就严重败血症的相关进展作一概述.

作者：贾杰刊期： 2005年第04期
甲型流感病毒基因变异与生存选择压力相关性分析

目的研究甲型流感病毒基因变异与生存选择压力的关系,指导保守疫苗靶位点的寻找.方法选择相同血凝素(HA)血清型具有全基因组序列的分化距离较近的多个流感病毒株系,利用Blast2程序计算各株系之间的核酸保守性、蛋白质保守性、变异核苷酸在密码子序位中的频率以及生存选择压力指数,分析与生存选择压力指数的相关性.结果HA基因较其他基因的核酸保守性为显著低;HA抗原蛋白质保守性与NS基因同为较低;HA基因受生存选择压力作用;NS、聚合酶B1(PB1)基因受选择压力较小;NA、核蛋白(NP)基因受选择压力较大;生存选择压力指数与核苷酸第3密码子位点变异频率完全相关.结论流感病毒基因变异受复制机制形成差异和生存选择压力淘汰差异双重作用影响;各基因在流感病毒生物功能中地位不同,NA、NP基因保守性较强,适宜作为疫苗靶位点候选,HA基因相比较具有一定的保守性,有望寻找到保守区段,NS、PB1基因保守性较弱,不宜作为靶位点.

作者：周晓明；赵慧芳；陆嘉良；潘浩；徐眉；赵根明；姜庆五；汪华；俞顺章刊期： 2005年第04期
严重急性呼吸综合征患者康复期T淋巴细胞亚群变化的临床应用分析

严重急性呼吸综合征(SARS)是由SARS冠状病毒(SARS-CoV)感染引发的一种新型传染性疾病[1,2],以肺部病变为主,出现合并感染[3,4],并引起肺外多器官损伤、功能衰竭.SARS传染性极强,人群普遍易感,发病后,机体出现严重的细胞免疫和体液免疫损害[5-7].

作者：段朝晖；黄嘉凌；罗晓红；刘然义；邵静；魏菁；闵军；黄健；黄文林刊期： 2005年第04期
乙型肝炎病毒复制状态对轻度慢性乙型肝炎患者肝组织中转化生长因子β1表达的影响

慢性乙型病毒性肝炎(CHB)在我国发病率较高,危害较大,CHB患者体内病毒复制状况以及肝纤维化进程在临床倍受重视.目前认为,转化生长因子β1(TGF-β1)对细胞的增殖和发育、转化和分化有一定的调节作用,同时也是重要的肝纤维化递质,在肝硬化的形成中占有重要地位,细胞外基质(ECM)的合成和降解主要由TGF-β1调控[1].

作者：刘勇钢；卢建华；王欣欣；郎振为；杨建林；孟忻；张立洁；孙琳；张世杰；李俊强；宋晨朝刊期： 2005年第04期
《医院感染管理与监控》系列教材(VCD)出版

作者：刊期： 2005年第04期
肺炎支原体引起的传染性单核细胞增多综合征临床分析

近年来,肺炎支原体(mycoplasmas pneumoniae,MP)感染有增加趋势,除引起呼吸道症状外,肺外并发症多,有多系统损害.但MP引起传染性单核细胞增多综合征却是个新的临床问题,国内、外仅报道数例.现将我院确诊的12例MP引起的传染性单核细胞增多综合征临床特征报道如下.

作者：张晓敏；刘玉玲；付四毛刊期： 2005年第04期
拉米夫定联合苦参素抗肝纤维化的临床观察

乙型肝炎病毒(HBV)DNA在肝细胞内复制引起肝细胞病理损伤是肝纤维化形成的启动因素,拉米夫定通过抑制HBV DNA复制而间接阻断肝纤维化形成[1],苦参素(氧化苦参碱)有抗肝纤维化作用[2,3].我们对139例HBV复制的不同肝病患者采用联合治疗(拉米夫定联合苦参素)/单一拉米夫定治疗6个月后血清肝纤维化指标的含量变化,并初步探讨其抗肝纤维化的临床疗效.

作者：覃后继；周耀南；唐任光；方文珠刊期： 2005年第04期