学术投稿

人白细胞介素21的原核表达及初步纯化

付强;王斌

关键词:白细胞介素21, 基因表达, 蛋白表达, 纯化
摘要:目的利用PCR技术从人扁桃体细胞cDNA中克隆出IL-21编码基因,并将其在原核细胞大肠杆菌中进行表达,并进行了初步纯化.方法以人扁桃体细胞经PHA刺激的cDNA文库为模板,经PCR获得IL-21全基因片段.测序确认后,分别设计含BamH Ⅰ和Sal Ⅰ酶切位点的引物,经PCR获得IL-21成熟肽的编码基因.将此IL-21基因插入表达载体pGEX-4T-2,重组克隆经酶切与测序确认后转化大肠杆菌DH5α进行IPTG诱导表达.用琼脂糖珠结合的方法纯化.结果琼脂糖凝胶电泳显示重组质粒的PCR和双酶切产物与理论大小相等.SDS-PAGE显示经IPTG诱导后的大肠杆菌DH5α亦表达一与理论相符的条带.目的蛋白约占总菌体蛋白的10%.并获得了与理论值相符的纯化条带.结论成功地构建了IL-21编码基因克隆载体并获得在原核细胞大肠杆菌中的成功表达,同时建立了该蛋白的琼脂糖珠纯化的方法.
滨州医学院学报杂志相关文献
  • 大鼠颈部和腹腔心脏移植模型建立的体会和比较

    目的为移植免疫、病理和器官保护等方面的实验研究提供操作简便、易于观察的大鼠心脏异位移植实验动物模型.方法以Ono和Heron等术式为基础并加以改进.结果每个部位的移植均有其优缺点,可根据实验过程的要求、实验室的装备、动物的大小和术后饲养时间、给药方式等加以选择.结论两种部位的心脏移植经过简化和改进,整个过程均可单人操作,无需显微镜,手术成功率高,经济实用.

    作者:范钦明;廖崇先;单忠贵;林智 刊期: 2006年第03期

  • 实验性脑损伤中c-fos的表达与脑水肿的相关性研究

    目的探讨脑损伤后c-fos基因和蛋白的表达变化规律与脑水肿之间的关系.方法利用Feeney's自由落体法制作局灶性脑损伤动物模型,应用原位杂交和免疫组化技术检测不同受伤时间段c-fos mRNA和蛋白的表达,同时观察脑组织的水肿情况.结果c-fos mRNA在伤后15 min即有高水平表达,并出现两次表达高峰,分别出现于30 min和16 h.c-fos蛋白随受伤时间的延长表达逐渐增强,在16 h表达强,随后表达下降,48 h时表达又有升高现象.脑水肿在伤后30 min开始发生,逐渐加重,6 h达高峰,持续至16 h,后逐渐减轻,48 h基本正常.结论脑损伤后c-fos的首次表达高峰可能参与了损伤神经元的修复和生存,与神经细胞的保护机制有关.c-fos第二次表达高峰与脑水肿所致缺血缺氧有关,参与脑损伤后的继发性损害.

    作者:吴淑华;李建民;王霞;李勐;李冰;朱玉红;吕增华 刊期: 2006年第03期

  • 胰腺实性假乳头状瘤2例临床分析

    胰腺实性假乳头状瘤(SPTP)是一种罕见的胰腺肿瘤,其组织来源尚不清楚,1959年由Frantz首先报道[1],WHO(2004年)肿瘤组织学分类中将其统一命名为实性假乳头状瘤.现就解放军总医院2000年8月至2005年2月收治的2例胰腺实性假乳头状瘤的诊断和治疗并结合有关文献总结如下.

    作者:张衍胜;苏传伟;王建东 刊期: 2006年第03期

  • 遗传性痉挛性截瘫一家系8例

    遗传性痉挛性截瘫也称Strimpell-Lorrain病,临床上较少见,我们调查了一个家系8例患者,现报道如下.

    作者:王玉维 刊期: 2006年第03期

  • 支气管内膜结核临床特征及误诊探讨

    支气管内膜结核(Endobronchial Tuberculosis,EBTB)是由于结核杆菌侵袭支气管粘膜、粘膜下层或进一步深入破坏弹力纤维网和肌层,终瘢痕愈合导致支气管狭窄,通常为肺结核的一部分.本病的病程和预后变异较大,可以是无症状到严重的支气管狭窄伴肺不张和支气管扩张,而且早期缺乏特异的临床表现,因此临床误诊率较高.为了强化对EBTB早期诊断意识,本文对我院1995年1月-2004年12月间经纤维支气管镜检查确诊的90例EBTB患者的临床特点和误诊原因进行了分析.

    作者:高绪胜 刊期: 2006年第03期

  • 静脉尿激酶溶栓治疗急性心肌梗死24例临床观察

    1临床资料1.1一般资料2002年12月-2005年12月,我们对24例急性心肌梗死患者,在急诊室进行了溶栓治疗.其中男22例,女2例,大者66岁,小者42岁,平均51岁.前壁6例,前间壁、下壁3例,均发病在6 h内,平均3.8 h,胸痛持续超过30 min.含化硝酸甘油无缓解,心电图示有两个以上导联ST段抬高,无异常Q波,均无溶栓禁忌证.

    作者:刘彩霞 刊期: 2006年第03期

  • 基层医院心脏刀刺伤的救治体会

    心脏刀刺伤发生率虽不高,但病情危重,若处理不当,患者很快死亡.我院自1997年以来先后收治5例,均术前诊断明确,手术抢救成功,现报告如下.

    作者:李征宇;刘传安 刊期: 2006年第03期

  • 会阴体重建阴道紧缩术

    近年来,我们采用会阴体重建的方法,为10例陈旧性Ⅲ度会阴裂伤的患者进行会阴体重建的阴道紧缩术,取得良好效果,现报告如下.

    作者:李风泽;李迎斋;陈学军;毕艳春;邢桂云;聂士峰 刊期: 2006年第03期

  • 胃十二指肠溃疡穿孔腹腔镜修补术24例体会

    自首例腹腔镜胆囊切除术成功后,经过十余年的探索和应用,腹腔镜外科手术无论在手术数量和范围方面,均积累了大量经验.腹腔镜用于溃疡病穿孔的治疗,首先由Mouret等报告,现已广泛应用于临床,该方法与开腹单纯修补术具有同样的适应证[1].作为微创外科的典型代表,其具备的不违反经典的外科手术原则、损伤轻、恢复快、住院时间短的优点,被迅速推广.作者在2003年5月-2005年10月,对24例胃溃疡穿孔行急诊腹腔镜修补术,疗效满意,报告如下.

    作者:张永刚 刊期: 2006年第03期

  • 标准大骨瓣开颅同步行硬膜减张缝合治疗重型颅脑损伤

    目的探讨标准外伤大骨瓣开颅减压术同步术中行硬膜减张缝合修补治疗重型额颞部颅脑损伤的疗效.方法将136例符合手术治疗的重型颅脑损伤病人随机分为A组(行标准外伤大骨瓣开颅同步术中行硬膜减张缝合修补)和B组(传统去骨瓣减压硬膜敞开),调查术后并发症发生情况、后期对颅骨修复的影响及术后6个月根据GCS评价进行疗效判断.结果A组并发症脑积水、硬膜下积液、脑脊液漏、外伤性癫痫发生率明显低于B组;A组颅骨修复手术平均时间短、平均术中出血量少、术中植片下积液少等差别较B组有显著意义;A组恢复良好率高于B组,A组重残及死亡率低于B组,差别有显著意义.结论标准外伤大骨瓣开颅减压术同步术中行硬膜减张缝合修补是治疗重型颅脑损伤的较好方法,可降低死亡率,提高病人的生存质量.

    作者:杜忠胜;刘晓祥 刊期: 2006年第03期

  • 无创正压通气治疗老年慢性阻塞性肺部疾病24例临床分析

    慢性阻塞性肺部疾病(COPD)患者常因感染因素而呈急性发作状态,使气道阻塞进一步加重,加之呼吸肌疲劳,使通气功能恶化,发生更为明显的低氧血症和二氧化碳潴留,即Ⅱ型呼吸衰竭.临床上虽给予控制感染、氧疗、呼吸兴奋、祛痰、扩张支气管等治疗,但往往难以达到满意效果.我院2003年10月-2005年10月应用无创正压通气治疗24例患者,取得良好效果,现报告如下.

    作者:牟春华 刊期: 2006年第03期

  • 胰岛素瘤的外科诊治分析(附8例报告)

    目的探讨胰岛素瘤的临床特点及诊治方法.方法回顾性分析8例胰岛素瘤患者的临床资料.结果7例患者临床表现均符合Whipple三联症.平均病程23个月,B超和CT联合诊断为6例,单发瘤5例,多发瘤3例.7例行手术切除,1例术中未能找到.术后随访中,1例为MEN-Ⅰ,2例出现恶变并转移.结论外科手术是治疗胰岛素瘤的主要方法,手术方式应根据病变的性质、部位、数量等因素确定,术后随访非常必要.

    作者:欧琨;陈强谱;张帆;管清海;林绪涛 刊期: 2006年第03期

  • 两种血吸虫病诊断试剂盒在云南大山区应用效果的比较

    目的对NP30诊断试剂盒和SEA/ELISA法试剂盒在云南大山区应用的效果进行比较.方法用NP30诊断试剂盒和SEA/ELISA法分别检测取自云南大山区血吸虫病流行社区的506份血清,并对两者结果进行比较.结果NP30诊断试剂盒和SEA/ELISA法的阳性符合率分别为87.88%(144/164)、84.71%(139/164),两者无显著性差异;在粪孵阴性血清样本中,两者的检出率分别为44.15%(151/342)、70.47%(241/342),存在显著性差异.结论NP30诊断试剂盒在云南大山区血吸虫病流行社区应用效果要好于SEA/ELISA法.

    作者:吴玉龙;程梅;孟玮;李红星 刊期: 2006年第03期

  • 全血反复冻融后对HLA基因分型结果的影响 (附1例鼻咽癌患者全血分析)

    为提取鼻咽癌患者全血中的DNA进行综合分析,需要较长时间内收集相当数量的鼻咽癌患者血样,冻存后集中送到骨髓库组织配型实验室进行HLA基因分型,这就难免存在血液反复冻融问题.为此我们将同一份鼻咽癌全血分成两组,一组立即提取全血DNA,进行HLA基因分型;另一组将全血反复冻融后再提取DNA,进行HLA基因分型,以探讨血液反复冻融对DNA及HLA基因分型结果的影响和异地采集血样的可行性,现报告如下.

    作者:陈会昌;陈妍;翟培聪;李钦伟 刊期: 2006年第03期

  • 巩膜瓣下滤道成形小梁切除术治疗青光眼临床应用研究

    青光眼手术目的是为了控制眼压,挽救视功能,但部分病人由于术后房水引流不畅甚至闭塞,使术后眼压失控而致手术失败.针对这一问题,我们设计并开展了巩膜瓣下滤道成形小梁切除术,经观察效果满意,报告如下.

    作者:付金强;张吉平;王志红;邢兰英;付延芬 刊期: 2006年第03期

  • α-干扰素治疗小儿秋季腹泻60例疗效观察

    目的观察肌肉注射α-干扰素治疗小儿秋季腹泻的疗效.方法将60例小儿秋季腹泻患儿随机分为两组,在常规治疗基础上,对照组30例经静脉滴注病毒唑;治疗组30例使用α-干扰素5万u/kg肌肉注射,每天1次,连用3~5 d.对两组临床疗效进行对比分析.结果治疗组与对照组的治愈率分别为83.3%和56.7%,止泻时间分别为(2.20±0.80)d和(4.20±1.65)d,平均住院日分别为(5.20±1.10)d和(8.60±1.40)d,差异均有显著性(P<0.05).结论α-干扰素治疗小儿秋季腹泻疗效好于病毒唑,缩短了患儿病程,可考虑临床应用.

    作者:曹爱国;孙培;荆友科;郝宁 刊期: 2006年第03期

  • 癌症与C型行为相关性研究的现状

    癌症对人类健康和生命的肆虐引起全球高度的关注,生物学家、医学家、心理学家、社会学家为了更好地预防和治疗癌症,共同致力于癌症的病因学和诱发因素的研究.目前的研究认为,癌症的发生是一个复杂的过程而且受诸多因素的影响.除了遗传因素、内分泌因素、免疫因素、生物因素、理化因素、环境污染因素之外,很多学者更加重视了社会因素、不健康的生活方式、生活事件、心理因素、性格及行为等对癌症发生相关性的研究,本文重点介绍癌症与易感性行为--C型行为相关性研究的现状.

    作者:韩臻;陈洪华;王卫红 刊期: 2006年第03期

  • 鼻内窥镜下诊治鼻出血180例

    鼻腔任何部位均可发生出血,而且有些病人出血来势凶猛,为临床常见急症之一,需尽可能迅速找到出血点并采取有效的止血措施.我科于2002年1月-2005年12月应用鼻内窥镜(德国Wolf公司生产的5507.101型鼻内窥镜)诊治鼻出血180例,效果满意,现报告如下.

    作者:车娟;蒲章杰;栗岩;吴玉坤 刊期: 2006年第03期

  • 儿童胆脂瘤型中耳炎54例临床分析

    胆脂瘤型中耳炎是临床上常见的中耳炎类型,目前在儿童中发病率仍然较高,是经济不发达地区儿童听力下降的主要原因之一,并可引起多种颅内外并发症,严重影响儿童的身心健康.由于儿童自身特点不同于成年人,给早期诊断带来困难.为提高对儿童胆脂瘤型中耳炎的认识,进行早期诊治,现将我院自1990年1月-2002年10月收治的54例胆脂瘤型中耳炎的临床资料进行回顾性分析,报告如下.

    作者:刘福海;刘志红;赵景杰 刊期: 2006年第03期

  • 股静脉位置及大隐静脉注入部位变异2例

    在解剖一例老年女性尸体时发现,左侧股静脉重叠于股动脉的深面稍偏内侧,股静脉内侧缘距股动脉内侧缘偏内1 mm,向下距腹股沟韧带中点191mm处股静脉移行至股动脉的内侧,大隐静脉末端越过股动脉前面至其外侧行经股动脉和股深动脉起始部夹角处,距腹股沟韧带中点下方56 mm处注入股静脉,此处大隐静脉、股动脉和股静脉横径分别为7 mm,5 mm和6 mm.股深动脉在腹股沟韧带中点下方50 mm处从股动脉深面发出,起始处横径3mm.股深静脉在腹股沟韧带中点下方79 mm处汇入股静脉,此处股深静脉横径为4 mm.

    作者:李琳;马永强;刘德琳;武玉杰 刊期: 2006年第03期

滨州医学院学报杂志

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