学术投稿

人脐带间充质干细胞的无动物血清培养及向肝细胞诱导分化

张辉;时庆;侯怀水;李栋

关键词:脐带, 干细胞, 脐血清, 细胞培养
摘要:目的 探索从脐带组织中分离培养间充质干细胞的无动物血清方法,并将其向肝细胞诱导分化.方法 分离自体脐血清用于后续细胞培养,利用酶消化法从脐带组织中分离培养问充质干细胞,检测其形态和免疫表型,并采用两步法诱导其向肝细胞诱导分化.结果 流式细胞术检测结果表明,自体脐血清培养得到的贴壁细胞表型符合间充质干细胞特征,且在合适诱导条件下能肝样细胞分化,经过4周处理,能表达肝细胞特异性基因.部分细胞具有吞噬低密度脂蛋白的能力.结论 采用自体脐血清有效地培养脐带闻充质干细胞,具备向肝细胞的分化能力.
山东大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 慢性肛瘘癌变诊疗分析

    目的 探析慢性肛瘘癌变的临床病理特征.方法 以1例典型病例进行分析,并回顾性总结文献报道的19例诊治经验.结果 反复发作的慢性炎症刺激是肛瘘癌变的主要诱因.结论 肛瘘继发癌变,病程发展慢,易被漏诊.应及时对可疑、复杂肛瘘患者行组织病理学检查.

    作者:吕艳锋;丁克;王建新;禹化龙;贝绍生 刊期: 2009年第06期

  • 主动脉瘤的外科治疗(附32例报告)

    主动脉瘤病情危重,自然预后差,及时手术治疗是挽救生命的有效方法,但对急性夹层动脉瘤,尤其是广泛动脉瘤手术创伤大,病死率高.现回顾性分析我院2005年9月~2008年10月对32例主动脉瘤行手术及术中置入象鼻支架治疗的资料,旨在探讨手术方法的选择和提高治疗效果.

    作者:霍玉峰;张延安;刘美明;信红雁;王维;李健;许振强 刊期: 2009年第06期

  • 人脐带间充质干细胞的无动物血清培养及向肝细胞诱导分化

    目的 探索从脐带组织中分离培养间充质干细胞的无动物血清方法,并将其向肝细胞诱导分化.方法 分离自体脐血清用于后续细胞培养,利用酶消化法从脐带组织中分离培养问充质干细胞,检测其形态和免疫表型,并采用两步法诱导其向肝细胞诱导分化.结果 流式细胞术检测结果表明,自体脐血清培养得到的贴壁细胞表型符合间充质干细胞特征,且在合适诱导条件下能肝样细胞分化,经过4周处理,能表达肝细胞特异性基因.部分细胞具有吞噬低密度脂蛋白的能力.结论 采用自体脐血清有效地培养脐带闻充质干细胞,具备向肝细胞的分化能力.

    作者:张辉;时庆;侯怀水;李栋 刊期: 2009年第06期

  • 小剂量泼尼松辅助金匮肾气丸治疗系统性硬化症20例报告

    系统性硬化症(systemic sclerosis,SSC)是一种以皮肤胶原纤维硬化为特征的结缔组织病.该病可发生于任何年龄,且以女性多见,男女之比约为1:3,治疗多以青霉胺、环磷酰胺、钙拮抗剂及肾上腺皮质激素为主.

    作者:王丽 刊期: 2009年第06期

  • NT4-SAC-HA2-TAT融合基因表达载体的构建及鉴定

    目的 构建NT4-SAC-HA2-TAT融合肽cDNA克隆,探讨前列腺凋亡反应基因-4(Par-4)核心区凋亡肽(SAC)作为目的基因对前列腺癌的治疗作用.方法 应用互为引物模板法合成两端具有Noel和KpnI酶识别位点的SACcDNA片段.将所得SAC和已有HA2-TAT片段克隆到具有相应酶切位点的pBV220-NT4质粒,得到pBV220-NT4-SAC-HA2-TAT重组质粒.PER扩增NT4-SAC-HA2-TATcDNA片段,并将其克隆到pGEM-T easy中,转化细菌筛选阳性克隆,酶切鉴定,序列测定分析.结果 经DNA测序、限制性内切酶酶切等证实,PCR获得了编码NaeI和KpnI酶切位点的SAC cDNA片段,并将NT4-SAC-HA2-TAT亚克隆于pBV220内.结论 成功构建了NT4-SAC-HA2-TAT融合基因的原核表达栽体pBV220NT4-SAC-HA2-TAT.

    作者:张士宝;刘庆勇;阮喜云;陈杰;张建军;李宗武;杨广笑;王全颖 刊期: 2009年第06期

  • 肝细胞癌血管生成及其成熟度的临床意义

    目地 探讨肝细胞癌(HCC)血管生成及其成熟度对其生物学行为的影响.方法 选取行手术切除并经病理证实的HCC病例31例,手术后分别在边缘和中心进行标本取材并综合分析.利用免疫组化技术检测VEGP、Flk-1、PCNA的表达情况,并对微血管和成熟血管的数目、平均面积、总面积、周长、直径、异型指数、血管间距、表达部位,以及动脉数、静脉数、动脉比、静脉比、血管成熟指数和平均灌注分数等进行计数.分析以上血管生成相关参数与病灶大小、Edmondson病理分级、包膜情况、肝硬化及侵袭转移的关系.结果 在小、中、大病灶之间,微血管总面积和成熟血管总面积均具有统计学差异(P<0.05);在EdmondaonⅠ~Ⅳ级之间,灌注分数逐渐增加,也存在统计学差异(F=3.452,P=0.049).有包膜病灶的成熟血管平均面积、成熟血管周长、成熟血管平均直径及成熟血管管距明显大于无包膜的病灶(P<0.05);侵袭转移组的成熟血管异型指数也大于阴性组(t=2.260,P=0.039).在有、无肝硬化组之间,所有血管相关参数未见统计学差异(P>0.05).结论 HCC的一些生物学行为更多依赖肿瘤的成熟血管.

    作者:于德新;蔡跃红;马祥兴;张晓明;李传福 刊期: 2009年第06期

  • 不同剂量舒芬太尼对脊柱手术患者全麻诱导期血流动力学及血浆皮质醇的影响

    目的 观察不同剂量舒芬太尼在脊柱手术患者全麻诱导期对机体血流动力学和Cor的影响.方法 将60例择期行脊柱手术患者随机分为S1、S2、S3三组,各组诱导所用舒芬太尼剂量分别为0.2、0.4、0.6μg/kg.各组分别于诱导前(T0,基础值),插管前即刻(T1),插管后1 min(T2)、3 min(T3)、5 min(T4),记录患者SBP、DBP、MAP、HR、SPO2,并在各时点抽取静脉血,用放射免疫法检测血浆Cor浓度.结果 同组比较:各组不同时点的SBP、DBP、MAP、HR差异具有统计学意义(P<0.05);各组T1时SBP、DBP、MAP、HR均低于T0时(P<0.05).组间比较:T1时S1、S2组MAP高于S3组(P<0.05);T2、T3时:S1组SBP、DBP、MAP、HR均高于S2、S3组(P<0.05);T4时:S1、S2组SBP、MAP、HR均高于S3组(P<0.05),S1组DBP高于S2、S3组(P<0.05).S1组血浆Cor的浓度在T2、T3时高于T0,亦高于相同时点的S2、S3组(P<0.05).结论 和0.2μg/kg舒芬太尼相比,0.4μg/kg和0.6μg/kg均能有效抑制插管时应激反应,0.4μg/kg舒芬太尼更有利于血流动力学稳定.

    作者:张小艳;李刚;王令平 刊期: 2009年第06期

  • 舒血宁注射液对高碘致培养血管内皮细胞损伤的保护作用

    目的 探讨舒血宁注射液对高碘致人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用.方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞株HUECV-304,在培养液中预先加入不同浓度的碘化钾和舒血宁注射液.在碘化钾的终浓度分别为4.0、5.0、6.0、8.0μmol/L组中分别加入浓度为0、2、5、10μl/mL的舒血宁注射液,观测4,8,12和24 h时细胞形态、细胞计数、MTT法测定细胞活性及上清液中SOD的含量.结果 ①在碘浓度5.0μmol/L以上组,4h时可见内皮细胞内有中毒颗粒出现,且随浓度增加和时间延长而增加.加入舒血宁后,碘浓度5.0μmol/L以上组该变化明显减轻,且与时间和剂量相关(P<0.05);②随时间的延长及舒血宁浓度的升高,细胞增殖活性受到抑制的碘浓度相应升高(P<0.05);③SOD含量随碘浓度的升高而升高(P<0.05),加入舒血宁后,SOD含量变化不明显.结论 舒血宁注射液对高碘所引起的内皮细胞损伤有一定的对抗作用,其作用存在时间-剂量效应关系;舒血宁的作用可通过增强细胞的抗氧化作用拮抗高碘的损伤作用.

    作者:王晓磊;张海涛;张辉;郭成浩 刊期: 2009年第06期

  • 聚乙丙交酯膜预防硬膜外瘢痕粘连的实验研究

    目的 观察新型生物可吸收材料聚乙丙交酯(pob lactate glycollic acid,PLGA)薄膜预防椎板切除术后硬膜外瘢痕粘连的作用,并与临床常用的明胶海绵进行比较.方法 36只成年新西兰雄兔切除L6(第6腰椎)椎板,制作椎板切除模型,在椎板缺损处分别覆盖PLGA膜(A组)、明胶海绵(B组)、0.9%生理盐水(C组).术后每日观察动物的一般情况,第2、4、8周每组各处死四只,取标本行大体、组织学观察,术后2、4周同时行超微结构观察.结果 与对照组相比,PICA膜可以明显减轻术后硬脊膜与硬膜外瘢痕之间的粘连;明胶海绵不能减轻硬膜外瘢痕粘连.结论 PLGA膜能有效减轻硬脊膜与硬膜外瘢痕之间的粘连而不影响刀口的愈合,临床应用前景广阔.

    作者:李彦明;李冬青;陈鹏;张科峰 刊期: 2009年第06期

  • 肝癌31磷磁共振波谱数据的分类

    目的 利用31P磁共振波谱分析数据,区别肝细胞肝癌、肝硬化和正常的肝组织.方法 从33例包括肝细胞肝癌、肝硬化和正常肝的志愿者中选择66个有效体素样本,利用1.5T超导MR扫描仪采集31P MRS数据,通过BP神经网络和SVM模型的实验来区别肝细胞肝癌、肝硬化和正常肝脏组织.结果 有限的样本实现了良好的分类性能,反向传播神经网络(BP)和支持向量机(SVM)模型可以提高31P MRS识别率,识别率可达92.31%.结论 基于BP和SVM的31P MRS数据分析,对于活体肝细胞肝癌的诊断提供了一种可选择的有价值的技术.

    作者:王韶卿;刘毅慧;付婷婷;成金勇;刘强 刊期: 2009年第06期

  • 前列腺素E2对阻塞性黄疸大鼠小肠粘膜形态的保护作用

    目的 探讨前列腺素E2(PGE2)对阻塞性黄疸大鼠小肠粘膜的保护作甩.方法 Wistar大鼠50只,随机分成阻塞性黄疸组(A组)10只、阻塞性黄疸再通组(B组)10只、阻塞性黄疸PGE2干预组(C组)10只、阻塞性黄疸再通加PGE2干预组(D组)10只和假手术组(E组)10只.采用直接结扎法制成阻塞性黄疸大鼠模型.再通组采用导管法再通.结扎后1周给予PGE2,结扎后2周再通,再通手术后1周取标本,观察大鼠小肠粘膜的形态学变化.结果 PGE2干预组小肠粘膜损伤评分为(2.21±0.75),手术再通组大鼠小肠损伤评分为(2.05±0.71),均较黄疸组减轻(5.26±0.57,P<0.05).结论 阻塞性黄疸大鼠小肠粘膜明显受损,PGE2及手术再通均可减少其损伤.但两者没有协同作用.

    作者:祝林;胡三元;张光永;丁祥就 刊期: 2009年第06期

  • 血清磷酸丙酮酸水合酶检测对诊断侵袭性白念珠菌感染的临床价值

    目的 通过对侵袭性白念珠菌感染时磷酸丙酮酸水合酶血清水平检测,评价磷酸丙酮酸水合酶抗原在诊断中的价值.方法 选择40例患者,其中确诊、临床拟诊、浅表定植白念珠菌患者分别为18、12、10例作为实验组,同时选择健康体检人员10例作为阴性对照组,留取血标本.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清中磷酸丙酮酸水合酶的OD值,通过标准曲线反应出待测血清中抗原含量.结果 确诊组和临床诊断组血清磷酸丙酮酸水合酶的平均浓度与后两组差异显著;用ELISA检测血清磷酸丙酮酸水合酶的浓度,以0.35μg/mL诊断阈值的敏感性、特异性分别为77%、100%.结论 侵袭性白念珠菌感染时血清磷酸丙酮酸水合酶水平明显高于定植组和健康组.提示血清磷酸丙酮酸水合酶抗原检测可作为侵袭性白念殊菌感染的诊断指标,以0.35 μg/mL为诊断阈值对诊断侵袭性白念珠菌感染的敏感性、特异性较为理想.

    作者:王欣;邢春燕;杨艳平 刊期: 2009年第06期

  • 自发性高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2的表达

    目的 观察不同月龄的自发性高血压大鼠(SHR)的肾脏血管紧张素转换酶2(ACE2)的mRNA和蛋白质表达水平,探讨ACE2与血压状态的内在联系.方法 12周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)18只和12周龄Wistar-Kyo-to(wl(Y)大鼠18只.随机分为SHR组和WKY组,每组抽取各9只处死后与喂养12周后处死的24周龄大鼠一并进行ACE2的检测.采用实时定量RT-PCR法检测ACE2 mRNA的表达,免疫组织化学检测ACE2蛋白的表达.结果 与同周龄WKY组比较,SHR组大鼠的血压显著增加(P均<0.001),ACE2 mRNA表达显著降低(P均<0.001);与12周龄SHR组比较,24周龄SHR的血压显著增加(P<0.01),ACE2 mRNA表达显著降低(P<0.01);与同周龄的WKY组比较,SHR组肾脏ACE2免疫染色表达显著减少.结论 肾脏ACE2 mRNA和蛋白质的表达与血压升高相关.

    作者:吴逸南;葛志明;李方;贺红;姜虹;张运 刊期: 2009年第06期

  • 三氯化铁及络合铁的抗银屑病作用研究

    目的 探讨三氯化铁(FeCl3)及络合铁(Fe-EDTA)抗银屑病的作用.方法 建立昆明种雌激素周期雌鼠阴道上皮细胞有丝分裂和雄鼠尾鳞片表皮颗粒层两种银屑病的动物实验模型.将昆明小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组,FeCl3低、中、高剂量组,Fe-EDTA低、中、高剂量组和朴雪口服液组.后1次给药后,脱颈椎处死小鼠,光学显微镜下观察雌鼠阴道上皮细胞有丝分裂情况及雄鼠尾鳞片表皮颗粒层形成情况,计算有丝分裂指数和100个鳞片中有颗粒层的鳞片数.结果 与阴性对照组比较,各补铁组和阳性对照组均可抑制雌鼠阴道上皮细胞的有丝分裂(P<0.05),均对雄鼠尾鳞片表皮颗粒层形成起促进作用(P<0.05);除阴性对照组外,其余各组两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 三氯化铁及络合铁均有一定的抗银屑病作用.

    作者:杨晓倩;季静;刘娜;郭冬梅;崔晞 刊期: 2009年第06期

  • VEGF-C、NF-кBp65及Survivin在鼻咽癌中的表达及临床意义

    目的 通过检测VEGF-C、NF-кBp65及Survivin在鼻咽癌组织(实验组)及鼻咽部慢性炎症组织(对照组)中的表达,探讨它们在鼻咽癌发生、发展过程中的作用及相互关系.方法 采用免疫组织化学技术SP法检测VEGF-C、NF-кBp65及Survivin在57例鼻咽癌和20例对照组中的表达情况,并观察其与鼻咽癌的临床病理特征的关系.结果 VEGF-C、NF-кB065及Survivin在鼻咽癌组织的阳性表达率分别为73.68%、61.40%、68.42%,而在对照组中的表达率分别为40.00%、30.00%、20.00%,两者差异有统计学意义(P<0.05).VEGF-C、NF-кBp65及Survivin的表达与临床分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05).NF-кBp65的表达与VEGF-C及Survivin的表达呈显著正相关,VEGF-C与Survivin的表达亦呈显著正相关.结论 NF-кBp65可能通过上调VEGF-C及Survivin的表达促进鼻咽癌的发生、发展及颈部淋巴结转移;VEGF-C和Survivin在鼻咽癌的发生发展中存在着协同作用.

    作者:黄方;康瑞;吴春林 刊期: 2009年第06期

  • 体外原代培养胎鼠大脑皮层神经元NMDAR1亚基表达的发育性变化

    目的 探讨体外原代培养胎鼠大脑皮层神经元NMDAR1(NR1)亚基表达的发育性变化.方法 利用体外原代培养Wistar孕14~15 d胎鼠大脑皮层神经元,采用免疫荧光法鉴定神经元的纯度和NR1亚基在神经元上的定位,采用流式细胞术和免疫印迹法(Western blot)检测不同培养时间神经元NR1亚基的表达情况.结果 体外原代培养的胎鼠大脑皮层神经元纯度均达到90%以上,免疫荧光标记显示NR1亚基主要分布在神经元胞膜及树突干膜上,流式细胞仪检测培养1、2、3、4、6、9、12 d神经元NR1亚基平均荧光强度分别为4.57±0.99、8.18±1.22、13.67±1.99、20.33±1.03、26.30±2.88、31.71±2.47、28.63±1.40,Western blot显示细胞膜蛋白中NR1亚基在1~2d表达微弱,3~6 d表达逐渐增高,6d以后保持稳定.结论 q体外原代培养的胎鼠大脑皮层神经元NR1亚基有发育性变化,这种变化与神经元的成熟度有关.

    作者:张道来;孙涛;谢珊珊;王玉卓;赵玲;冯玉新;辛华 刊期: 2009年第06期

  • 农村居民日常活动的主观幸福感分析

    目的 分析农村居民日常活动的净效应值,探讨提高主观幸福感的途径.方法 采用昨日重现法调查农村居民的日常活动,比较分析不同活动的净效应值.结果 休闲娱乐类活动的主观幸福感高,而不得不做事情的低,性别、年龄和文化程度对农村居民日常活动所带来的主观幸福感都有影响.结论 在农村增加体闲娱乐活动种类,延长娱乐活动时间,提高不同性别、年龄和文化程度居民对各类活动兴趣,有助于整体提高农村居民的主观幸福感.

    作者:王健;孟庆跃;曲江斌;王丽娜 刊期: 2009年第06期

  • 脑膜瘤中PPAR-γ的表达及曲格列酮对脑膜瘤培养细胞生长的影响

    目的 探讨PPAR-γ在脑膜瘤中的基因和蛋白表达以及其激动剂可能的抗肿瘤作用.方法 应用RT-PCR、免疫组化方法对48例脑膜瘤的手术标本进行PPAR-γ的基因和蛋白表达分析,并体外培养16例人脑膜瘤细胞,应用MTT方法探讨曲格列酮对脑膜瘤细胞生长的作用,应用流式细胞仪检测曲格列酮干预后凋亡情况.结果 PPAR-γ在48例脑膜瘤细胞中均有表达,且非典型组高于良性组(P<0.05),女性患者PPAR-γ基因表达高于男性;其表达与脑膜瘤增殖性正相关,曲格列酮体外抑制脑膜瘤细胞生长,并可以诱导脑膜瘤细胞凋亡,其作用具有时间和浓度的依赖性.结论 非典型脑膜瘤PPAR-γ表达高于良性组,其表达与增殖活性成正相关;其配体活化后体外可以抑制脑膜瘤细胞生长并可诱导凋亡.

    作者:鹿向东;杨伟;徐广明;曲元明 刊期: 2009年第06期

  • 多药耐药基因1 C1236T多态性与癫痫患者对药物反应性的相关性

    目的 了解多药耐药基因1(MDR1)C1236T多态性在癫痫患者中的分布,并探讨其与癫痫患者耐药的相关性.方法 选择70例难治性癫痫患者及88例对抗癫痫药物敏感的癫痫总者,提取其外周血DNA,应用多聚合酶链反应(PCR)扩增后继以限制性内切酶片断长度多态性(RFLP)分析,检测基因MDR1的第12个外显子中C1236T的多态性.结果 两组病例的基因型频率和等位基因频率相比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 MDR1Cl236T多态性与癫痫患者对抗癫痫药物反应没有相关性.

    作者:葛丽娟;金瑞;王纪文;许新升;李堃 刊期: 2009年第06期

  • S-100和C-kit蛋白在儿童先天性巨输尿管中的表达

    目的 探讨S-100阳性的神经节细胞和C-kit阳性的Caial间质细胞在儿童先天性巨输尿管症发病中的作用.方法 取25侧先天性巨输尿管症末端输尿管标本(末端组)和25侧先天性巨输尿管症扩张段输尿管标本(扩张组),另取15例肾母细胞瘤输尿管下段无肿瘤细胞浸润的标本作对照组,采用免疫组化SP法对3组进行S-100和C-kit染色.计数平均高倍镜下S-100阳性的神经节细胞数和C-kit阳性的Caial间质细胞数,分析计算S-100染色高倍镜平均光密度,进行统计学分析.结果 末端组中S-100阳性神经节细胞教及S-100染色平均光密度值较扩张组和对照组明显减少(P均<0.01);扩张组S-100阳性神经节细胞数及S-100染色平均光密度值和对照组比较差异无统计学意义(P均>0.05);末端组C-kit阳性Cajal间质细胞数与扩张组和对照组比较明显减少(P均<0.01).直线相关分析显示,S-100阳性的神经节细胞数和C-kit阳性的Caial间质细胞数在对照组、末端组和扩张组中均呈正相关关系(r分别为1.08、0.81、1.33).结论 S-100蛋白和C-kit蛋白在儿童先天性巨输尿管末端输尿管组织中表达减少,在扩张段输尿管组织中表达正常,提示S-100阳性的神经节细胞数和C-kit阳性的Cajal间质细胞数的减少与本病关系密切.

    作者:于嘉智;王克来;庄岩;张连海 刊期: 2009年第06期

山东大学学报(医学版)杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:山东大学