黄晶；安倍莹；单红丽；张朝冠；白岩
目的 制备有免疫原性的白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶(fructose-bisphosphate aldolase,Fba1)重组蛋白.方法 以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,用PCR法扩增Fba1 DNA序列,与克隆载体pMD18-T连接、测序,再与原核表达载体pET28a(+)连接,构建成重组表达质粒pET28a(+)/Fba1,转化大肠埃希菌BL21( DE3),IPTG诱导重组融合蛋白表达,亲和层析柱纯化重组蛋白.用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊为侵袭性白念珠菌病(ICAI)、且抗白念珠菌烯醇化酶抗体阳性的患者血清进行抗原性鉴定.结果 Fba1 DNA序列与GenBank中的序列一致.在大肠埃希菌中获得白念珠菌Fab1重组蛋白的高效表达,表达产物以可溶性蛋白为主,终蛋白质得率为7.6 mg/g湿菌.经免疫印迹鉴定,重组蛋白与抗His标签的单克隆抗体和确诊ICAI患者血清呈特异性反应,显示出良好的抗原反应性.结论 成功制备了具有良好抗原反应性的重组蛋白,为建立特异性诊断ICAI的新方法打下基础.
作者：陆静芬；李芳秋；史利宁；王颖 刊期： 2011年第05期
并殖吸虫(Paragonimus)也称为肺吸虫(lung fluke),主要寄生于宿主的肺内,引起肺吸虫病[1].肺吸虫病是一种人兽共患寄生虫病,容易误诊和漏诊.现报告因感染肺吸虫后出现嗜酸性粒细胞增多而被多家医院误诊的1例患者.1病历简介患者,男,27岁,贵州省遵义人.因头痛、胸闷、皮肤瘙痒3个月入广西宜春某院.血常规:白细胞29.5×109/L,嗜酸性粒细胞0.48.X线胸片:双下肺感染.B超:肝脾大,双侧胸腔少量积液.
作者：刘流；晏容；刘晖；贺莉芳 刊期： 2011年第05期
目的 探讨载脂蛋白A5(apoA5)c553G/T基因多态性与代谢综合征(MS)的相关性.方法 用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析apoA5 c533G/T位点多态性在203例MS患者和216名体检健康者中的分布,并用酶法检测其血脂和血糖水平.结果 c553T等位基因在高三酰甘油(TG)血症人群中的分布频率明显高于健康对照组(P＜0.05).Logistic回归分析显示,apoA5 c553T等位基因对MS高TG血症(OR=3.380,P＜0.05)具有独立的影响.MS组和健康对照组apoA5 c553TT纯合子及GT杂合子个体比GG纯合子个体具有高TG水平.结论 apoA5 c553G/T基因多态性与血浆TG具有相关性,apoA5 c553T等位基因可能为MS的危险因素.
作者：丁妍；来名安；朱静；卢智勇；袁雅红；王小莉；李东升 刊期： 2011年第05期
我们于2008年2月、2011年1月从2例流行性脑脊髓膜炎患者的脑脊液标本中分别分离出W135群和B群脑膜炎奈瑟菌(N.meningitidis).这两种脑膜炎奈瑟菌血清群均为广西壮族自治区首次报告.1病历摘要病例1,女,14岁,在校学生.2008年2月22日无明显诱因出现发热、头痛,伴喷射状呕吐,于2月24日收住我院.入院时查体:T 37.5℃,神志清,急性痛苦面容,颈抵抗,心肺未见异常,克氏征双侧阳性,四肢肌张力、肌力正常,皮肤黏膜无黄染,皮下无瘀斑,全身浅表淋巴结未扪及,头颅CT扫描未见异常.
作者：林岗；劳炳焕；潘启祯 刊期： 2011年第05期
目的 制备嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophilia cationic protein,ECP)双抗体夹心ELISA法检测试剂盒.方法 葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化抗ECP单克隆抗体,过碘酸钠法进行抗ECP多克隆抗体HRP标记,制备ELISA试剂盒,进行条件优化和实验效能评价,检测过敏性皮肤病患者ECP水平.结果 通过对各种反应条件的优化,确定了适工作条件:单抗适包被浓度为1:500稀释,酶标多抗适浓度为1:8000稀释,适血清稀释液为稀释液Ⅱ(0.01 mol/L PBS,0.1％ Tween 20,0.1％溴化十六烷基三甲基铵,2.0 g/L小牛血清清蛋白,20 mmol/L乙二胺四乙酸),佳反应时间为60 min,反应温度为37℃；本研究制备的试剂盒线性范围为2.5 ～ 200 ng/mL,灵敏度为2.75 ng/mL,相对偏差为11.5％,批内变异系数(CV)＜10％,批间CV＜ 15％,与美国ADL试剂盒比较相关系数(r)为0.97,本试剂盒天津地区居民的正常参考值为(9.0±3.7)ng/mL.过敏性皮肤病患者ECP水平与健康人差异具统计学意义.结论 该双抗体夹心ELISA检测ECP试剂盒具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点,可在临床上广泛应用,为过敏性疾病的诊治提供依据.
作者：赵俊芳；王学谦；李桂珍；李会强 刊期： 2011年第05期
目的 探讨结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验(TB-IGRA)在结核病诊断中的应用价值.方法 用国产TB-IGRA试剂定量检测268例结核病患者和104例体检健康者外周血结核特异性γ-干扰素的含量,同时与澳大利亚QFT-GIT试剂和结核菌素纯化蛋白质衍生物(PPD)皮试进行平行比较分析.结果 国产TB-IGRA试剂、QFT-GIT试剂和PPD皮试3种方法的敏感性分别为90.7％、88.1％和75.4％,特异性分别为76.9％、80.8％和54.8％,阳性预测值分别为91.0％、92.2％和81.1％,阴性预测值分别为76.2％、72.4％和46.3％,准确性分别为86.8％、86.0％和69.6％.三种方法对肺结核与肺外结核的检测效果无显著差异.结论 TB-IGRA法对诊断结核病有较高的敏感性和准确性,在结核病防控中有较好的应用价值.
作者：李晓非；熊俊辉；汪亚玲；朱莉莉；吕松琴；张军 刊期： 2011年第05期
总胆汁酸(total bile acid,TBA)是易受污染的生化项目之一.本实验分别通过检测样本针、试剂针、搅拌棒、比色杯携带污染程度,探讨脂肪酶(lipase,LPS)试剂对TBA测定结果的干扰及解决办法.1材料与方法1.1仪器与试剂 Achitect 16000全自动生化分析仪(美国Abbott公司);TBA试剂(批号10-0413P,北京九强生物公司),LPS(批号60067113/1,德国德赛公司).
作者：吴丽娜；秦晓松 刊期： 2011年第05期
多发性骨髓瘤(MM)细胞和浆细胞包涵体的名称和形态学描述尚不一致,给初学者和临床诊断带来一定困难,为此我们结合临床实践及国内外文献对浆细胞包涵体名称和形态学特点作一阐述.1包涵体的形成与名称Kanoh等[1]将包涵体的形成分为4类:(1)来源于免疫球蛋白;(2)属于淀粉样蛋白;(3)由溶酶体颗粒组成;(4)不属于以上3种类型.Tkachuk[2]认为,骨髓瘤细胞或浆细胞胞质中如存在多个小空泡称为Mott细胞;含有的体积大的同质性球状包涵体为Russel小体;胞核中包涵体称为Dutcher小体.
作者：史敏；李顺义 刊期： 2011年第05期
交叉配血不合的原因主要是不规则抗体或自身抗体,即抗IgG类抗体的干扰;另外,某些物质过高引起或破坏了红细胞(RBC)表面的电位差,使RBC的相对平衡状态被破坏而产生非特异性凝集时也可导致血型鉴定困难、交叉配血不合等现象.本文报告对4例交叉配血不合的原因分析.
作者：孔亚红 刊期： 2011年第05期
目的 建立检测血浆中微量亚甲蓝的增敏荧光分光光度法.方法 利用β-环糊精对亚甲蓝荧光信号的增敏作用,以665 nm为激发波长,685 nm为发射波长,用荧光分光光度法直接测定血浆中的微量亚甲蓝.结果 亚甲蓝浓度在0.089～3.57 μmol/L范围内,该增敏荧光光度法呈现良好的线性关系,r=0.998 8,日内变异系数(CV)为5.7％,日间CV为6.3％,回收率为94％～105％.结论 该法简便、准确,可直接用于血浆中微量亚甲蓝的测定.
作者：周群刚；唐建华；谢莲；邱婷；谢洪平 刊期： 2011年第05期
目的 建立一种快速准确的检测结核分枝杆菌(MTB)核酸的环介导等温扩增(LAMP)方法.方法 以重复插入序列IS6110为目的基因,设计LAMP引物,特异检测MTB核酸.用本法与痰涂片抗酸染色镜检法、实时荧光PCR法对100例可疑患者痰标本进行对比检查.结果 LAMP法特异性强,仅扩增MTB复合群核酸；灵敏度高,检测限达100 fg；而实时荧光PCR检测限为1 pg.对100例疑似结核病患者痰液标本检测,涂片抗酸染色法、LAMP法、实时荧光PCR法的阳性率分别为28％、39％和38％.结论 本研究建立的LAMP方法检测MTB核酸特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为临床快速检测MTB的新方法.
作者：沈会平；张耀祺；杨坚；石磊；陈涛；李国周；赵红波；莫自耀 刊期： 2011年第05期
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种慢性自身免疫性疾病,患者体内往往存在多种自身抗体,病因未明.研究表明,遗传因素在SLE发病机制、临床症状及相关自身抗体的产生等方面都起重要作用.疾病分布和临床表现存在种族差异[1],与白种人比,亚洲人SLE发病率(每10万名女性中约有100名患者)高[2].
作者：李萍；李永哲 刊期： 2011年第05期
目的 建立一种五重荧光定量RT-PCR检测并鉴别流感病毒A( Flu A)、流感病毒B( Flu B)、呼吸道合胞病毒(RSV)以及新甲型H1N1流感病毒(nH1N1)的方法.方法 以人细胞RNA酶P基因为内参,用Primer Express 3.0设计PCR引物和探针.用一系列不同滴度的病毒培养物和不同来源的呼吸道病毒分别进行灵敏度和特异性分析.结果 该法灵敏度较好,可测半数组织培养感染剂量(TCID50/mL)为0.02 ～0.2的病毒量,特异性达100％,每对引物和探针只检测出相应的病毒,无交叉反应.已确诊的nH1N1、Flu B、RSV感染患者的样本用该法均成功地测出.结论 建立的五重荧光定量RT-PCR法灵敏度和特异性都较高,可检测出多种呼吸道病毒,对临床呼吸道病毒感染的诊断有一定的价值.
作者：崔大伟；郑书发；范剑；楼滨；余斐；秦志梅；邹伟华；吴英萍；陈凌晓；陈瑜 刊期： 2011年第05期
目的 用PCR检测体外诱导的万古霉素耐药金黄色葡萄球菌(VRSA)的耐药基因vanA,探讨体外诱导VRSA对万古霉素耐药机制.方法 用万古霉素体外诱导将1株异质性VRSA逐步诱导为VRSA;检测金黄色葡萄球菌特异性nuc基因和万古霉素耐药基因vanA.结果 基因检测发现VRSA菌株均不含vanA基因.结论 VRSA不含vanA基因,故细胞壁增厚是导致金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药的主要机制.
作者：张涛；马筱玲；戴媛媛；鲁怀伟；陈多炎 刊期： 2011年第05期
髓样细胞触发受体(triggering receptors expressed on myeloid cells,TREM)是免疫球蛋白超家族的一个受体家族,包括3个激活型受体( TREM-1,TREM-2,TREM-3)和1个抑制型受体(TREM like transcript-1,TLT-1).TREM-1主要表达于血液中性粒细胞、单核细胞表面,选择性地表达于肺泡液、肠液及其他体液的巨噬细胞表面[1-2],能够增强Toll样受体(Toll like receptor,TLR)介导的炎症反应,放大急、慢性炎症反应.随着对TREM-1研究的不断深入,TREM-1在疾病诊断和治疗方面的作用日益受到关注.
作者：姚瀚鑫；续薇；许建成 刊期： 2011年第05期
目的 评价7种室间质量评价(EQA)材料和4种市售材料在9个检测系统上测定血清ALT和AST的基质效应.方法 参照美国临床实验室标准化协会( CLSI) EP14-A2指南,根据ALT和AST的参考方法建立不含磷酸吡哆醛的比对方法.9个检测系统的常规方法为待评方法.用比对方法和待评方法同时测定新鲜人血清、EQA材料及市售材料的ALT和AST水平,评价非血清样品的基质效应.结果 ALT测定中1种EQA材料对所有检测系统均表现基质效应,AST测定中2种EQA材料对所有检测系统无基质效应,其他材料视系统的不同而表现出不同的情况.结论 基质效应影响血清ALT和AST测定的准确性和可比性,应充分重视基质效应对临床检验量值溯源的影响.
作者：郑松柏；王建兵；黄宪章；马艳；庄俊华；徐宁；周华友；陈茶 刊期： 2011年第05期
目的 以血清γ-谷氨酰基转移酶(GGT)催化活性参考方法测量不确定度评定为例,建立临床酶学催化活性测量参考方法的不确定度评定模型.方法 依据GGT参考方法测量流程,以GGT催化活性浓度为核心评价指标,确立影响GGT催化活性浓度测量的主要因素.采用实验和理论评估相结合的方法对已确认的各因素对GGT催化活性测量的影响量进行评定.以波长和温度对GGT催化活性参考方法测量影响量的评估为例,介绍基于“实验设计”的各因素对GGT参考方法测量灵敏系数的评定方法,在此基础上按GUM理论评定每一因素的相对标准不确定度并将其作为一个独立的不确定度分量按GUM理论合成到GGT测量的标准不确定度中,以标准不确定度×2得到扩展不确定度,建立GGT参考方法测量不确定度评定模型.结果 建立的GGT催化活性参考方法测量不确定度评定模型为:Cenzyme =1/ει·vreaction+vsample+vstarter/vsample·ΔA/Δt·f0·fcv.结论该不确定度评定模型适用于酶催化活性参考方法测量不确定度的评定.
作者：陈宝荣；孙慧颖；邵燕；胡滨；李月玲 刊期： 2011年第05期
目的 了解新疆地区结缔组织病(CTD)患者血清中抗核抗体(ANA)荧光核型、靶抗原与CTD之间的相关性.方法 采用间接免疫荧光法(IIF)检测ANA荧光核型；采用免疫印迹法和酶免疫法检测抗核抗体谱和自身抗体.结果 新疆地区564例ANA阳性CTD患者中,ANA荧光核型有单一及复合核型.单一核型中核颗粒型多见(靶抗原依次为SSA、nRNP、Sm),其次核均质型(靶抗原依次为dsDNA、核小体和组蛋白).复合核型中,双核型以核颗粒型+核均质型,核颗粒型+胞浆颗粒型组合为主.三核型以核颗粒型+核均质型+胞浆颗粒型常见.在荧光核型、靶抗原及疾病关系分析结果中发现:SLE患者单核型以核均质和核颗粒常见,双核型以核颗粒+核均质、核颗粒+胞浆颗粒组合常见,三核型为核颗粒、核均质、胞浆颗粒同时出现.另外抗核糖体P蛋白以往引起胞浆颗粒荧光,而本研究中核颗粒型检出率为27.03％.抗着丝点抗体在SLE、原发性胆汁性肝硬化( PBC)、硬皮病及重叠综合征中均能检出.结论 新疆地区CTD患者血清ANA荧光核型呈现多样性.以核颗粒为优势核型；靶抗原SSA不仅可以引起经典的核颗粒荧光,还可呈现核均质、核仁型、胞浆颗粒型荧光.核糖体p蛋白呈现核颗粒型荧光.抗着丝点抗体具有较宽的疾病谱；SLE患者荧光核型呈现多样性,自身抗体谱广于其他自身免疫性疾病(AID).
作者：王晓东；董潇阳；刘旭；哈地丽亚；哈斯木；邓淑文 刊期： 2011年第05期
目的 研究我院烧伤科2010年4～6月分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株耐药性及分子流行病学特点,找出流行菌株,为指导临床经验用药提供参考.方法 采用纸片扩散法(K-B法)及葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型技术对分离的24株MRSA进行药物敏感性试验和同源性分析.结果 分离的菌株对青霉素、苯唑西林、阿莫西林/克拉维酸、亚胺培南、美罗培南全部耐药,其余抗菌药物除万古霉素外耐药率均在50％以上,未发现万古霉素耐药株.spa基因分型发现3个spa型,t030型共22株,t3226和t632型各1株,提示分离菌株具有高度的同源性.结论 我院烧伤科MRSA菌株具有多重耐药的特征,spa t030型菌株是其主要型别.
作者：师志云；赵志军；贾伟；李刚；张楠；纵帅；魏军 刊期： 2011年第05期
细菌性阴道病( bacterial vaginosis,BV)是育龄妇女常见的阴道感染性疾病之一.虽已有一些快速检测方法[1],但目前诊断BV仍常按Amsel标准[2].该标准操作较为繁琐,易受多种因素干扰,湿片下线索细胞不易识别,易漏检、误检,标本不易保存,不便于质量控制.Nugent计分法[3]各形态菌数量判断标准较低:每油镜视野0(-)≤1个(1+),2～5个(2+),6～30个(3+),＞30个(4+),而且未提及线索细胞.《全国临床检验操作规程》[4]中提到阴道分泌物涂片革兰染色后的细菌名称和线索细胞,但无细菌数量判断标准.本研究拟结合线索细胞对Nugent计分法进行改良(简称改良法),用于BV的临床诊断,现报道如下.
作者：黄莉；彭晓枫；谢婷婷；陈美芬；夏曙华 刊期： 2011年第05期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
