膜微阵列技术的建立及检测细菌条件的优化

刘毅；韩金祥；黄海南；梁浩；黄海燕

关键词：微阵列, 细菌, 杂交

摘要：目的探讨膜微阵列技术检测细菌的可行性.方法在细菌的16S rRNA基因内设计了通用引物和特异性探针,将探针点在膜上制备微阵列,再与地高辛标记的DNA杂交,比较了随机引物标记法和PCR掺入标记法的灵敏度,探讨了硝酸纤维素膜和尼龙膜作基片的可行性,并比较了不同的固定条件和杂交条件下的杂交结果,以标准菌株DNA为样本,建立起微阵列技术.结果随机引物标记法和PCR掺入标记法的灵敏度均为0.1pg;尼龙膜较之硝酸纤维素膜可更好的结合寡核苷酸,经紫外线交联3 min,与杂交液3(5×SSC,5 g/L SDS,1%封闭剂)在55 ℃杂交结果好.标准菌株除结核杆菌、变形杆菌外,均能与其对应的特异探针杂交.结论利用膜微阵列技术检测细菌有快速、敏感、特异、无放射性污染的特点.

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