学术投稿

杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶重组蛋白的纯化及其多克隆抗体制备

张磊;崔柳青;李杰;刘红涛;薛乐勋

关键词:葡萄糖-6-磷酸异构酶, 原核表达, 抗体制备, 杜氏盐藻
摘要:目的:纯化杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)重组蛋白,制备多克隆抗体。方法:PCR扩增得到两端分别添加NdeⅠ和EcoRⅠ酶切位点的GPI基因,双酶切后插入原核表达载体pET28a(+),得到重组载体pET28a-GPI,经鉴定正确后,用该重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后用镍离子柱纯化目的蛋白并免疫新西兰白兔,间接ELISA和Westernblot法检测抗体的效价和特异性。结果:杜氏盐藻GPI基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,占总蛋白的41.6%。以高纯度的目标蛋白作为抗原免疫新西兰白兔,得到抗GPI的抗血清。间接ELISA检测抗血清效价达到1:512000,Westernblot检测证实抗血清能与目的蛋白特异性结合。结论:成功纯化了杜氏盐藻GPI重组蛋白并制备了特异性的GPI多克隆抗体。
郑州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 常染色体短串联重复序列基因座在河南汉族人群亲子鉴定中的应用

    目的:分析24个常染色体短串联重复序列(STR)在河南省汉族群体的遗传多态性及其在亲子鉴定案例中的应用价值。方法:应用多位点复合PCR扩增技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳分型技术,对773例亲子鉴定案例进行分析。结果:D7S3048、D18S51、D8S1179、D8S1132、D11S2368、D2S1338、D4S2639和D12S391的个体识别率≥0.94,观察杂合度≥0.79,多态性信息含量≥0.80,且这些位点参与联合排除父权率均在40%以上。结论:短串联重复序列D7S3048、D18S51、D8S1179、D8S1132、D11S2368、D2S1338、D4S2639和D12S391可作为亲子鉴定的首选基因座,在法医学应用和群体遗传学研究中有较高的价值。

    作者:陈辉;徐朝阳;李晓文;郑红;程晓丽;贺颖;宋国英;刘华 刊期: 2010年第06期

  • 一期双通道微造瘘经皮肾镜治疗肾鹿角状结石24例

    传统开放手术对肾鹿角状结石的处理较为困难,风险较大,尤其是有开放手术取石史者。体外冲击波碎石对鹿角状结石疗效差[1]。随着泌尿腔镜技术的发展,美国泌尿学会尿石症临床治疗指南推荐经皮肾穿刺取石术作为治疗鹿角状结石的首选方案,同时也指出,为清除结石,建立2个或者更多的通道是必要的[2]。作者分析河南省人民医院泌尿外科收治的56例鹿角状结石患者的资料,探讨一期双通道微造瘘经皮肾镜治疗鹿角状结石的疗效。

    作者:孔朝辉;李启忠;丁德刚;张祥生;王晓晖;姬彤宇 刊期: 2010年第06期

  • 不同品系SV40T转基因小鼠血浆胃泌素水平测定

    目的:检测不同品系SV40T转基因小鼠血浆胃泌素水平。方法:取已建立的8个品系SV40T转基因小鼠和B6小鼠空腹血,应用ELISA法检测血浆胃泌素水平。结果:B6小鼠、2#、4#、16#、24#、51#、57#、61#和73#品系转基因小鼠血浆胃泌素水平(μg/L)分别为(2.814±0.209)、(1.135±0.114)、(0.853±0.701)、(2.371±0.335)、(1.371±0.190)、(0.685±0.374)、(2.274±0.251)、(2.471±0.251)和(0.986±0.173),9组相比,差异有统计学意义(F=17.449,P〈0.001);其中2#、4#、24#、51#及73#品系转基因小鼠血浆胃泌素水平较B6小鼠明显降低(P〈0.05)。结论:筛选出了5个稳定表达的SV40T转基因小鼠品系。

    作者:申琦;邵蓓新;郜十伟;陈辉;张钦宪 刊期: 2010年第06期

  • 曲安奈德对糖尿病患者白内障超声乳化人工晶状体植入术后前葡萄膜炎的抑制作用

    随着人们生活水平的提高,糖尿病的患病率越来越高,白内障是糖尿病的主要并发症之一。目前显微技术的发展使得自内障手术目趋成熟,并发症也越来越少。但是糖尿病患者白内障手术后的急性前房炎症反应较重,严重影响患者的术后效果。

    作者:帖红艳;陈彬川;王永成 刊期: 2010年第06期

  • 胃癌及癌前病变组织中环氧合酶-2和诱导型一氧化氮合酶蛋白的表达

    目的:探讨胃癌及癌前病变组织中环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达及意义。方法:采用免疫组化方法检测COX-2和iNOS蛋白在28例慢性浅表性胃炎、23例慢性萎缩性胃炎伴肠化、19例胃黏膜不典型增生及53例胃癌组织中的表达情况。结果:慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎伴肠化、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中COX-2蛋白的阳性表达率分别为17.9%、30.4%、42.1%和62.3%;iNOS蛋白的阳性表达率分别为21.4%、34.8%、52.6%和71.7%,差异均有统计学意义(COX-2:χ2=16.725,P=0.001;iNOS:χ2=21.300,P〈0.001)。胃癌组织中,COX-2和iNOS蛋白在侵及浆膜层组织及有淋巴结转移组织中阳性表达率均高于未侵及浆膜层组织及无淋巴结转移组织(COX-2:χ2=4.154和5.123,P=0.042和0.024;iNOS:χ2=5.539和8.640,P=0.019和0.003);且两者间有关联(rP=0.351,P=0.006)。结论:COX-2和iNOS参与胃癌形成的全过程,且可能为其早期事件。

    作者:李晓丽;林锐 刊期: 2010年第06期

  • 郑州大学学报(医学版)双月刊1957年创刊2010年第45卷总目次

    特约述评预报、预测和预警方法及其应用………………………………… … 赵耐青(1)急性心肌梗死患者应用药物洗脱支架的安全性和有效性评估……马长生,乔岩(173)股骨头坏死的治疗策略与疗效评价…………………………王义生(533)

    作者: 刊期: 2010年第06期

  • 母体铅暴露对仔鼠大脑皮层组织中IL-β1蛋白表达的影响

    目的:探讨母体铅暴露对仔鼠大脑皮层组织中白细胞介素-1β(IL-β1)蛋白表达的影响。方法:采用自由饮水的方式于母鼠孕哺期染毒,染毒剂量分别为0.3、1.0和3.0g/L,每组10只。另设对照组。在仔鼠出生第21天后测其血液和大脑皮层组织中铅的含量,用免疫组织化学法测定大脑皮层组织中IL-β1蛋白的表达,并进行水迷宫实验。结果:各组仔鼠血液和大脑皮层组织中的铅含量比较,差异均有统计学意义(F分别为53.125和10.012,P均〈0.05),且各染毒组均高于对照组(P均〈0.05)。水迷宫实验结果显示各组间错误次数和平均逃避潜伏期比较,差异均有统计学意义(F分别为303.475和26.922,P均〈0.001),且中、高剂量组均高于对照组(P均〈0.05)。各组仔鼠大脑皮层组织中IL-β1蛋白表达水平差异有统计学意义(F=852.913,P〈0.001),且染毒组高于对照组(P均〈0.05)。结论:铅可能通过诱导皮层中IL-β1蛋白的高表达,影响学习记忆,从而造成神经系统损害。

    作者:冯静;李宁;郑艳涛;贾金霞;李静;李文杰 刊期: 2010年第06期

  • 小鼠腹水型肝癌多药耐药模型的建立

    目的:建立小鼠腹水型肝癌(Hca)多药耐药(MDR)模型并探讨其产生的分子机制。方法:荷Hca小鼠分为2组,每组10只。化疗组采用临床化疗FAP方案,以剂量递增的方法诱导耐药模型,对照组仅给予等体积的生理盐水。MTT法检测瘤细胞对7种化疗药物的耐药性;流式细胞术检测瘤细胞对Rh123的蓄积与泵出能力,计算平均荧光强度(MFI);RT-PCR检测瘤细胞mdr1和mrp1mRNA的表达及停药后化疗组小鼠瘤细胞mdr1和mrp1mR-NA的表达。结果:化疗组小鼠瘤细胞对7种化疗药物均产生耐药性。与对照组相比,化疗组小鼠瘤细胞内Rh123蓄积量减少,泵出率增加(t=6.067和6.811,P均〈0.05),mdr1和mrp1mRNA的表达水平升高(t=18.807和4.420,P均〈0.05);mdr1和mrp1mRNA的表达水平在停药4周内稳定(P〉0.05),停药8周后下降(P〈0.05)。结论:成功建立了小鼠腹水型肝癌MDR模型,MDR的产生与mdr1和mrp1mRNA过度表达从而影响药物蓄积有关。

    作者:王欣;张艳;王宁;江金花;郑立运;王庆端 刊期: 2010年第06期

  • 腹膜透析超滤衰竭患者腹膜组织中碱性成纤维生长因子检测

    目的:检测腹膜透析超滤衰竭患者腹膜组织中碱性成纤维生长因子(bFGF)的表达,并探讨其可能的作用机制。方法:取8名正常对照者、12名尿毒症非透析患者以及10名腹透患者的腹膜活检标本,行RT-PCR、免疫组化染色检测bFGFmRNA和蛋白表达,行CD34染色计数腹膜组织微血管密度(MVD)。结果:bFGF在各组腹膜组织均有表达,尿毒症非透析组、腹透组mRNA水平和蛋白表达水平均较正常组升高[mRNA:(0.63±0.02),(0.74±0.02)vs(0.46±0.02);蛋白:(116.4±1.8),(143.0±2.4)vs(96.2±1.4)],且腹透组升高更为明显,差异有统计学意义(F分别为75.526和62.090,P均〈0.001);3组腹膜MVD依次为(3.05±0.45)、(5.98±0.47)vs(9.62±0.49),差异有统计学意义(F=30.452,P〈0.001),与正常组相比,尿毒症非透析组MVD计数增加,腹透组腹膜组织MVD计数多。结论:腹透患者腹膜组织中bFGF表达升高,可能参与长期透析所致腹膜组织新生微血管形成过程。

    作者:高丹;刘章锁;赵占正;梁献慧;李艳 刊期: 2010年第06期

  • 深低温停循环选择性脑灌注12例观察

    随着心脏手术中各个相关专业对深低温停循环(deep hypothermic circulatory arrest,DHCA)围术期神经系统及其他重要脏器保护认识的提高,各个相关专业技术改进,使得DHCA手术的安全性及成功率大大提升,显示出较好的临床效果。郑州大学第一附属医院2006年1月至2009年10月共行DHCA选择性脑灌注(selective cerebral perfusion,SCP)12例,报道如下。

    作者:李军;赵文增;乔晨晖;徐敬;司晓敏;樊瑞芬;邱全胜;史昌平;付国伟 刊期: 2010年第06期

  • 利用常染色体STR多态性进行同胞鉴定5例

    目前可应用于亲缘关系鉴定的检测技术手段有染色体短串联重复序列(STR)、单核苷酸多态性(SNP)分析及线粒体测序等。Y-STR呈父系连锁遗传,仅适用于男性间的鉴别;SNP检测技术方法复杂,费用昂贵;线粒体DNA存在高突变率和异质性[1],因此,实际应用受限。常染色体STR具有多态性高、分型简便、检出灵敏度高及特异性好等特点,且可进行多位点复合扩增,目前已成为国内外DNA亲子鉴定的主要检测手段。

    作者:宋丽君;郭嘉林;陈辉;周军卫;李晓文 刊期: 2010年第06期

  • 黄体酮对局灶性脑缺血大鼠脑组织MMP-9和Ⅳ型胶原表达的影响

    目的:观察黄体酮对脑梗死大鼠脑组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)和Ⅳ型胶原(collagenⅣ)表达水平的影响。方法:用线栓法制作大脑中动脉局灶性脑缺血模型(pMCAO),将成模大鼠随机分成模型组、环糊精(HBC)溶剂治疗组和黄体酮治疗组,每组设12、24、48及72h4个时间点,每个时间点6只大鼠,另选6只大鼠作为假手术组。用免疫组织化学技术检测各组大鼠脑组织MMP-9蛋白和collagenⅣ的表达情况。结果:脑梗死发生后大鼠脑组织MMP-9蛋白的表达水平均明显升高,经黄体酮治疗后其表达水平有所下降;4组间在不同时间点比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。collagenⅣ的表达随着缺血时间的延长而逐渐减少,经黄体酮治疗后其丢失程度有所减轻;4组间在不同时间点比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论:黄体酮可通过抑制MMP-9的表达、减少collagenⅣ的降解来减轻脑水肿。

    作者:王建平;郝玉金;蒋超;陈宁宁 刊期: 2010年第06期

  • 微囊藻毒素-LR致小鼠蛋白质氧化损伤的作用

    目的:探讨微囊藻毒素-LR对小鼠肝、肾和睾丸组织蛋白质的氧化损伤程度。方法:用3.0、6.0和12.0μg/kg3种不同浓度的微囊藻毒素-LR对小鼠进行腹腔注射染毒(n=5),染毒时间为7d,每天1次,并设阴性对照组。用2,4-二硝基苯肼比色法测定3种组织的蛋白质羰基含量。结果:随着微囊藻毒素-LR剂量的升高,小鼠肝、肾和睾丸的蛋白质羰基含量升高(F分别为44.631、21.975和23.962,P均〈0.001)。3.0μg/kg染毒组肝、肾蛋白质羰基含量[(3.72±0.23)和(3.99±0.48)mmol/kg]高于阴性对照组[(2.90±0.22)和(3.27±0.23)mmol/kg](P均〈0.05)。3.0μg/kg染毒组睾丸蛋白质羰基含量[(1.91±0.25)mmol/kg]与阴性对照组[(1.69±0.27)mmol/kg]相比,差异无统计学意义(P〉0.05)。6.0μg/kg染毒组肝、肾和睾丸蛋白质羰基含量[(4.55±0.45)、(4.44±0.53)和(2.53±0.24)mmol/kg]和12.0μg/kg染毒组肝、肾和睾丸蛋白质羰基含量[(5.62±0.55)、(5.67±0.60)和(3.15±0.41)mmol/kg]均高于阴性对照组(P均〈0.01)。结论:微囊藻毒素-LR对小鼠肝、肾和睾丸组织的蛋白质有氧化损伤作用。

    作者:段丽菊;张慧珍;李博;冯亚静;程学敏;杉浦则夫;张振亚;崔留欣 刊期: 2010年第06期

  • 肿瘤早期免疫诊断标志物的研究进展和展望

    人体血清中自身抗体的检测可作为自身免疫性疾病诊断的重要指标已在临床研究和实践中广泛应用[1]。自身抗体也被用于筛选cDNA基因表达文库,从而分离靶抗原的cDNA克隆。人体血清中的自身抗体是针对某些亚细胞颗粒的组成成分产生的,而这些亚细胞颗粒的组成成分又涉及DNA复制、DNA转录、RNA合成和细胞分裂等重要的细胞功能。

    作者:张建营 刊期: 2010年第06期

  • 磁共振与磁共振脑静脉成像对23例脑静脉窦血栓形成的诊断

    脑静脉血栓形成(cerebral veDous thrombosis,CVT),尤其是脑静脉窦血栓形成(cerebral venoussi—flUS thrombosis,CVST)为少见的缺血性脑血管病,临床表现多样且特异性不强,易误诊。其诊断特别是早期诊断的价值很大。现对23例CVST患者磁共振与磁共振脑静脉成像结果进行分析,报道如下。

    作者:杜秀明 刊期: 2010年第06期

  • 低出生体质量儿营养支持50例

    随着新生儿医学的不断进步,低出生体质量儿日渐增多,低出生体质量儿由于宫内营养储存不足和不能立刻适应宫外生存条件,如不能及时供给合理而足够的营养,会发生严重的营养缺乏。营养缺乏早期可增加低体质量儿的死亡率,远期则会导致身材矮小、智力下降及神经发育不良等,因此应注意加强低出生体质量儿的营养支持。福建医科大学第二临床医学院儿科自2003年起加强对低出生体质量儿的管理,采用早期静脉高营养、早期微量喂养及非营养性吸吮等方法治疗低出生体质量儿,取得较好的效果,报道如下。

    作者:汪勇芬;王玉芳 刊期: 2010年第06期

  • SGC7901和SGC7901/ADR细胞中S100A6蛋白及mRNA的表达

    目的:探讨S100A6与胃癌多药耐药的关系。方法:常规培养人胃癌细胞SGC7901及其耐药细胞株SGC7901/ADR,在SGC7901/ADR细胞培养基中加入阿霉素(0.375mg/L)维持耐药。取对数生长期的SGC7901和SGC7901/ADR细胞,分别采用免疫细胞化学方法、Westernblot方法和RT-PCR检测S100A6蛋白及mRNA的表达情况。结果:免疫细胞化学染色结果显示S100A6在SGC7901细胞中的阳性染色强度高于SGC7901/ADR细胞;Westernblot结果显示SGC7901细胞中S100A6蛋白的相对表达量(4.356±0.759)高于SGC7901/ADR细胞的(2.243±0.089)(t=4.788,P=0.039);RT-PCR结果显示SGC7901细胞中S100A6mRNA的相对表达量(0.659±0.017)与SGC7901/ADR的(0.582±0.060)相比,差异无统计学意义(t=2.125,P=0.150)。结论:S100A6蛋白在SGC7901和SGC7901/ADR细胞中的差异性表达可能与细胞多药耐药有关;这种差异表达是翻译后事件。

    作者:李晖;陈丹;唐颖;王丽芬;关宏伟 刊期: 2010年第06期

  • 体外受精反复失败患者移植周期内搔刮子宫内膜对妊娠率的影响

    子宫内膜容受性指子宫内膜对胚胎的接受能力,即允许胚胎黏附其上直至植入完成的特定阶段,它受严格的时间和空间限制。临床促排卵和实验室胚胎体外培养技术日益提高,而体外受精.胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF—ET)的临床妊娠率仍停留在40%~50%,其中一个重要原因就是部分不孕症患者的子宫内膜容受性存在缺陷,影响了胚胎的成功着床,尤其是妊娠失败而无其他明确原因的患者,再次助孕时如何改善子宫内膜容受性以提高妊娠率,成为生殖医学界研究的焦点。

    作者:张轶乐;孙莹璞;苏迎春;郭艺红 刊期: 2010年第06期

  • 两个亨廷顿舞蹈病家系IT15基因(CAG)n检测

    目的:检测两个亨廷顿舞蹈病(HD)家系的IT15基因CAG重复序列[(CAG)n]。方法:采用PCR和测序分析方法检测两个家系28名成员(A家系为已确诊HD家系,B家系为疑似HD家系)和两名正常对照IT15基因的(CAG)n。结果:两名正常对照IT15基因的CAG拷贝数分别为17、18;A家系中患者CAG拷贝数大于50;B家系中患者CAG拷贝数为40~50。B家系通过基因检测确诊为HD家系,并检出一名症状前患者。结论:IT15基因(CAG)n检测是诊断HD简便、快捷和有效的方法。

    作者:高歌;陈晓蕾;付汪星;张桐;朱揆;邹顺鸿;陈辉 刊期: 2010年第06期

  • 上消化道黏膜下肿瘤65例超声胃镜诊断及套扎治疗

    上消化道黏膜下肿瘤是指生长于黏膜层以下、被黏膜覆盖而生长发育的肿瘤[1,2]。,包括平滑肌瘤、间质瘤、血管瘤和脂肪瘤等,多数患者因进食梗噎感或上腹部不适等上消化道症状就诊,行普通胃镜检查发现黏膜隆起,后经超声胃镜明确病变的组织起源、层次、性质及大小,从而明确诊断。上消化道黏膜下肿瘤的传统治疗是以外科手术切除为主口。,但手术创伤大,费用高,术后生活质量下降。近年来,

    作者:郭长青;胡艳艳;邵经浩;褚燕君;张连峰;徐峰;乔瑞敏;卢瑞利 刊期: 2010年第06期

郑州大学学报(医学版)杂志

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主办:郑州大学