裴迎新；赵焕焕；李金萍；郑乃刚；雪璀璀；吴景兰
目的：构建同时表达VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因的shRNA真核表达质粒,研究其对人鼻咽癌细胞系CNE-2Z的干扰作用。方法：根据VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因序列,各设计2条寡核苷酸序列,合成互补DNA链,插入真核表达质粒pGenesil-1中,同时构建单基因（VEGF）质粒pGenesil-2。分别转染CNE-2Z细胞,分为多基因质粒（P-1）组和单基因质粒（P-2）组,并设空白对照（BC）组和阴性对照（NC）组。采用MTT法检测细胞增殖活性。采用实时定量PCR和Western-blot检测4种基因在人鼻咽癌细胞系CNE-2Z中的表达。体内裸鼠成瘤实验观察单基因和多基因质粒干预对肿瘤的抑制作用。结果：通过酶切和测序证实重组真核表达载体构建正确。MTT显示细胞增殖受到抑制,且多基因质粒对细胞增殖的抑制作用明显强于单基因质粒。目的基因在mRNA和蛋白水平上表达均下降。裸鼠实验显示P-1组抑制肿瘤细胞增长的作用要强于P-2组。结论：成功构建一个载体编码4个不同基因的shRNA质粒载体系统。转染鼻咽癌细胞后,与单独沉默VEGF相比,同时干扰VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因可以更好地抑制细胞增殖。
作者：宋英；董明敏；杨海峰 刊期： 2010年第06期
目的：构建人SMRT基因真核和原核表达载体。方法：体外人工合成SMRT-C645bp对应的基因片段,克隆至pUC57载体,酶切,测序正确后,PCR扩增目的基因片段,酶切后亚克隆至pCMV-myc载体和pGEX-6p-1载体,并酶切和测序鉴定。结果：成功构建了人pCMV-myc-SMRT真核表达载体和pGEX-6p-1-SMRT原核表达载体。结论：成功构建了人SMRT真核和原核表达载体,为下一步蛋白间相互作用的证实提供了基础。
作者：王春美；盛光耀；卢洁；郝庆飞；谢垒；白松婷；许松涛；薛乐勋 刊期： 2010年第06期
自1997年以来，郑州市第一人民医院神经外科共收治Chiari畸形合并寰枢椎脱位患者15例，均采用后颅凹减压及植骨融合固定术治疗，手术效果满意，报道如下。
作者：任建伟 刊期： 2010年第06期
目的：建立小鼠腹水型肝癌（Hca）多药耐药（MDR）模型并探讨其产生的分子机制。方法：荷Hca小鼠分为2组,每组10只。化疗组采用临床化疗FAP方案,以剂量递增的方法诱导耐药模型,对照组仅给予等体积的生理盐水。MTT法检测瘤细胞对7种化疗药物的耐药性;流式细胞术检测瘤细胞对Rh123的蓄积与泵出能力,计算平均荧光强度（MFI）;RT-PCR检测瘤细胞mdr1和mrp1mRNA的表达及停药后化疗组小鼠瘤细胞mdr1和mrp1mR-NA的表达。结果：化疗组小鼠瘤细胞对7种化疗药物均产生耐药性。与对照组相比,化疗组小鼠瘤细胞内Rh123蓄积量减少,泵出率增加（t=6.067和6.811,P均〈0.05）,mdr1和mrp1mRNA的表达水平升高（t=18.807和4.420,P均〈0.05）;mdr1和mrp1mRNA的表达水平在停药4周内稳定（P〉0.05）,停药8周后下降（P〈0.05）。结论：成功建立了小鼠腹水型肝癌MDR模型,MDR的产生与mdr1和mrp1mRNA过度表达从而影响药物蓄积有关。
作者：王欣；张艳；王宁；江金花；郑立运；王庆端 刊期： 2010年第06期
目的：评价PCR短串联重复序列（PCR-STR）在异基因外周血干细胞移植（Allo-PBSCT）后监测中的应用价值。方法：采集13例造血干细胞移植（HSCT）患者首次术后10、20和30d的口腔颊黏膜上皮细胞及外周静脉血,提取基因组DNA,采用PCR-STR法比较其外周血与口腔黏膜细胞中D7S3048、D4S2639、D14S306、D18S535、F13A01、FESFPS、vWA、CSF1PO、TPOX和THO1等STR位点联合基因型改变。结果：13例HSCT患者的外周血中均发现外源STR基因型。10、20和30d13例患者口腔黏膜细胞与外周血检测的10个STR基因位点均至少有5个不同。结论：对受者外周血与口腔黏膜多个STR基因位点的基因型进行对比,可随时监测HSCT患者植入效果。
作者：孟晓峰；徐朝阳；陈辉；李晓文 刊期： 2010年第06期
为掌握河南省克山病病情现状和消长趋势，科学评估防控效果，作者按照2008年中央补助地方公共卫生专项资金河南省地方病防治项目实施方案和技术方案的内容与要求，于2009年4月至2009年5月在三门峡市卢氏县开展了克山病监测工作，现将监测结果分析报道如下。
作者：崔才磊；于红阳；岳义田 刊期： 2010年第06期
目的：观察RNA干扰沉默肾癌细胞株OS-RC-2的环氧合酶-2（COX-2）基因表达对肾癌细胞生长及体外侵袭能力的影响。方法：构建靶向COX-2的小干扰RNA（siRNA）真核表达质粒pSilencer2.0-U6-COX-2-siRNA。将对数生长期的OS-RC-2细胞分3组,干扰组转染pSilencer2.0-U6-COX-2-siRNA,空转组转染pSliencer2.0-U6,对照组不转染。培养72h后采用半定量RT-PCR、Westernblot检测COX-2mRNA和蛋白表达,CCK8增殖抑制实验观察细胞生长情况,改良Boyden小室法评估细胞体外侵袭能力。结果：酶切和测序证实pSilencer2.0-U6-COX-2-siRNA构建成功。3组细胞COX-2mRNA和蛋白的表达、细胞存活率及穿孔细胞数差异均有统计学意义（F分别为189.800,89.326,188.403和75.349,P均〈0.001）。与其他2组比较,干扰组COX-2mRNA及蛋白表达下调（P〈0.05）,细胞存活率、穿孔细胞数降低（P〈0.05）。结论：COX-2有望成为肾癌基因治疗的靶点。
作者：李金锋；丰贵文；王跃；庞新路；尚文俊；郭亮；朱同玉；王国民 刊期： 2010年第06期
阿霍烯（ajoene），又名大蒜烯，化学名为4，5，9-三硫代-9-氧-1，6，11-烯十二烷（4，5，9．thiene-9-OX-ide），是大蒜中没有辛辣味和蒜臭味、性质较为稳定的有机硫化物，具有抗血栓形成、抗肿瘤及抗菌消炎等多种功效，但其对高脂血症的独立作用研究较少，在体动物实验的报道也不多［1］。作者利用大鼠高脂血症动物模型，
作者：张晓林；翁闪凡；杨安平；刘爱平；张相年；赵树进 刊期： 2010年第06期
目的：探讨微囊藻毒素-LR对小鼠肝、肾和睾丸组织蛋白质的氧化损伤程度。方法：用3.0、6.0和12.0μg/kg3种不同浓度的微囊藻毒素-LR对小鼠进行腹腔注射染毒（n=5）,染毒时间为7d,每天1次,并设阴性对照组。用2,4-二硝基苯肼比色法测定3种组织的蛋白质羰基含量。结果：随着微囊藻毒素-LR剂量的升高,小鼠肝、肾和睾丸的蛋白质羰基含量升高（F分别为44.631、21.975和23.962,P均〈0.001）。3.0μg/kg染毒组肝、肾蛋白质羰基含量[（3.72±0.23）和（3.99±0.48）mmol/kg]高于阴性对照组[（2.90±0.22）和（3.27±0.23）mmol/kg]（P均〈0.05）。3.0μg/kg染毒组睾丸蛋白质羰基含量[（1.91±0.25）mmol/kg]与阴性对照组[（1.69±0.27）mmol/kg]相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。6.0μg/kg染毒组肝、肾和睾丸蛋白质羰基含量[（4.55±0.45）、（4.44±0.53）和（2.53±0.24）mmol/kg]和12.0μg/kg染毒组肝、肾和睾丸蛋白质羰基含量[（5.62±0.55）、（5.67±0.60）和（3.15±0.41）mmol/kg]均高于阴性对照组（P均〈0.01）。结论：微囊藻毒素-LR对小鼠肝、肾和睾丸组织的蛋白质有氧化损伤作用。
作者：段丽菊；张慧珍；李博；冯亚静；程学敏；杉浦则夫；张振亚；崔留欣 刊期： 2010年第06期
宫颈癌复发患者治疗困难，预后差，常规治疗宫颈癌复发患者多在2a内死亡［1］。作者回顾性分析了121例治疗后未控及复发转移的宫颈癌患者的资料，探讨宫颈癌治疗后不良预后因素，为临床治疗提供参考。
作者：程淑霞；成慧君；王莉 刊期： 2010年第06期
脑静脉血栓形成（cerebral veDous thrombosis，CVT），尤其是脑静脉窦血栓形成（cerebral venoussi—flUS thrombosis，CVST）为少见的缺血性脑血管病，临床表现多样且特异性不强，易误诊。其诊断特别是早期诊断的价值很大。现对23例CVST患者磁共振与磁共振脑静脉成像结果进行分析，报道如下。
作者：杜秀明 刊期： 2010年第06期
目的：纯化杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶（GPI）重组蛋白,制备多克隆抗体。方法：PCR扩增得到两端分别添加NdeⅠ和EcoRⅠ酶切位点的GPI基因,双酶切后插入原核表达载体pET28a（＋）,得到重组载体pET28a-GPI,经鉴定正确后,用该重组载体转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达后用镍离子柱纯化目的蛋白并免疫新西兰白兔,间接ELISA和Westernblot法检测抗体的效价和特异性。结果：杜氏盐藻GPI基因在大肠杆菌BL21（DE3）中得到高效表达,占总蛋白的41.6%。以高纯度的目标蛋白作为抗原免疫新西兰白兔,得到抗GPI的抗血清。间接ELISA检测抗血清效价达到1：512000,Westernblot检测证实抗血清能与目的蛋白特异性结合。结论：成功纯化了杜氏盐藻GPI重组蛋白并制备了特异性的GPI多克隆抗体。
作者：张磊；崔柳青；李杰；刘红涛；薛乐勋 刊期： 2010年第06期
目的：探讨DOC-2和c-Fos在大肠癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化SP法检测132例大肠癌组织及48例正常肠黏膜组织中DOC-2和c-Fos蛋白的表达情况。结果：大肠癌组织与正常肠黏膜组织中DOC-2的阳性表达率分别为31.1%（41/132）和81.2%（39/48）,c-Fos的阳性表达率分别为56.1%（74/132）和12.5%（6/48）,2组间差异均有统计学意义（χ2分别为35.911,27.051,P〈0.001）。大肠癌组织中DOC-2的表达与患者年龄、性别、组织学类型、分化程度和临床分期无关（P〉0.05）,但与淋巴结及肝转移有关（P〈0.05）;c-Fos蛋白的表达与患者年龄、性别、组织学类型、临床分期、淋巴结及肝转移无关（P〉0.05）,但与分化程度有关（P〈0.05）。大肠癌组织中DOC-2与c-Fos蛋白的表达呈负关联（rP=-0.368,P=0.001）。结论：DOC-2和c-Fos蛋白的异常表达可能在大肠癌的发生发展中起重要作用。
作者：王贵吉；段方方；裴迎新；宋丽杰；段晓光；李林 刊期： 2010年第06期
临床上对于有较大室间隔缺损（ventricularsep．taldefect，VSD）患儿的心功能改变情况一直存在争议。该类患儿在临床上确实有不同程度的“心功能不全”症状，但传统的心功能评价指标如左室射血分数（LVEF）由于受前负荷影响，往往高估陔类患儿的左心收缩功能，多提示左心收缩功能仍在正常范围。
作者：张瑞芳 刊期： 2010年第06期
目的：检测不同品系SV40T转基因小鼠血浆胃泌素水平。方法：取已建立的8个品系SV40T转基因小鼠和B6小鼠空腹血,应用ELISA法检测血浆胃泌素水平。结果：B6小鼠、2#、4#、16#、24#、51#、57#、61#和73#品系转基因小鼠血浆胃泌素水平（μg/L）分别为（2.814±0.209）、（1.135±0.114）、（0.853±0.701）、（2.371±0.335）、（1.371±0.190）、（0.685±0.374）、（2.274±0.251）、（2.471±0.251）和（0.986±0.173）,9组相比,差异有统计学意义（F=17.449,P〈0.001）;其中2#、4#、24#、51#及73#品系转基因小鼠血浆胃泌素水平较B6小鼠明显降低（P〈0.05）。结论：筛选出了5个稳定表达的SV40T转基因小鼠品系。
作者：申琦；邵蓓新；郜十伟；陈辉；张钦宪 刊期： 2010年第06期
目的：检测河南地区汉族人群中Y染色体两个多拷贝短串联重复序列（STR）基因座DYS464和DYS527单体型的遗传多态性。方法：对110例河南汉族男性无关个体血样本基因组DNA采用荧光标记引物进行PCR扩增,PCR产物在ABI3100遗传分析仪上毛细管电泳分析,并对不同重复序列分别测序。结果：DYS464基因座为四拷贝,核心序列重复数目变异在11～18次;DYS527基因座为双拷贝,核心序列重复数目变异在17～25次。110例河南汉族男性无关个体中,两个基因座所组成的单体型有104种,其中99种单体型仅出现1次,频率为0.0091,单体型基因多样性为0.9988,个体识别力为0.9897。结论：DY464和DYS527基因座具有高度多态性,适用于法医学实践和人类进化的研究。
作者：胡灏；赵美乐；齐守文；黄艳梅；陈琼 刊期： 2010年第06期
目的：探讨白藜芦醇对胃癌BGC-823细胞中凋亡相关基因人程序化死亡分子5（PDCD5）表达的影响,并观察白藜芦醇诱导BGC-823细胞凋亡的效应。方法：分别用25、50、100和200μmol/L的白藜芦醇处理BGC-823细胞24、48和72h后,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测PDCD5表达的变化;运用流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡情况。另设空白对照组和溶剂对照组。结果：同一时间点,6组PDCD5蛋白及mRNA的表达差异均有统计学意义（F蛋白=211.881、242.438和184.866,P均〈0.001;FmRNA=207.366、148.411和158.661,P均〈0.001）;同一浓度,24、48和72h时点各组比较,PDCD5蛋白及mRNA的表达差异均无统计学意义（F蛋白=0.950、1.870、2.218和2.232,P均〉0.05;FmRNA=1.267、2.376、1.221和2.292,P均〉0.05）。各组BGC-823细胞凋亡指数比较,差异有统计学意义（F=230.069,P〈0.001）。结论：凋亡相关基因PDCD5可能在白藜芦醇诱导胃癌BGC-823细胞凋亡过程中发挥重要作用。
作者：李晓芳；柴雅玫；文小岗；周强；王志勇；崔黎；陈奎生 刊期： 2010年第06期
64层螺旋CT为冠心病筛查提供了一种准确而有效的诊断方法，但该检查易受心率的影响而使冠状动脉图像质量下降，严重时部分冠状动脉节段无法评价，从而导致检查的失败。该研究探讨心率对64层螺旋CT冠状动脉成像质量的影响及采取的相应对策，报道如下。
作者：陈燕浩；金朝林；张树桐 刊期： 2010年第06期
目的：探讨HPV感染及k-ras基因突变与直肠腺癌的关系。方法：应用PCR/SSCP银染法检测75例直肠腺癌患者癌及相应正常大肠黏膜组织中HPV DNA和k-ars基因第12、13密码子。结果：直肠腺癌组织中HPVDNA阳性检出率为73.3%（55/75）,而正常黏膜未检测到HPV DNA。HPV感染与患者年龄、Duke’s分期及淋巴结转移有关,而与患者的族别、性别、肿瘤直径、大体类型、组织学类型及浸润深度无关。75例直肠腺癌组织中检测到k-ras基因突变34例（45.3%）,均与患者年龄、肿瘤的大体类型、组织学类型、侵袭深度、淋巴结转移及Duke’s分期无关,且与HPV感染亦无关联（χ2=0.240,P=0.624,rP=0.056）。结论：HPV感染可能是导致直肠腺癌恶性表型的重要因素;而k-ras基因突变与HPV感染无关。
作者：杨新辉；赵泽亮；库热西；王海江；范川文；赵为民；孙振强 刊期： 2010年第06期
多发性骨髓瘤（multiplemyeloma，MM）是源于骨髓浆细胞单克隆恶性增殖性肿瘤，约占血液系统恶性肿瘤的10％，随着病情进展，约90％的患者病变累及骨骼［1］。99Tc^m一亚甲基二膦酸盐（MDP）骨显像及CT均能检测MM所伴有的骨质破坏，现将MM患者2种影像检查结果进行对比分析，以期提高MM的诊断效能。
作者：革化民；崔静；刘保平；韩星敏；谢新立；王瑞华；任振泰 刊期： 2010年第06期
郑州大学学报（医学版）杂志
主管:河南省教育厅
主办：郑州大学
