学术投稿

人SMRT基因真核和原核表达载体的构建及鉴定

王春美;盛光耀;卢洁;郝庆飞;谢垒;白松婷;许松涛;薛乐勋

关键词:SMRT, 真核表达载体, 原核表达载体
摘要:目的:构建人SMRT基因真核和原核表达载体。方法:体外人工合成SMRT-C645bp对应的基因片段,克隆至pUC57载体,酶切,测序正确后,PCR扩增目的基因片段,酶切后亚克隆至pCMV-myc载体和pGEX-6p-1载体,并酶切和测序鉴定。结果:成功构建了人pCMV-myc-SMRT真核表达载体和pGEX-6p-1-SMRT原核表达载体。结论:成功构建了人SMRT真核和原核表达载体,为下一步蛋白间相互作用的证实提供了基础。
郑州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 小鼠腹水型肝癌多药耐药模型的建立

    目的:建立小鼠腹水型肝癌(Hca)多药耐药(MDR)模型并探讨其产生的分子机制。方法:荷Hca小鼠分为2组,每组10只。化疗组采用临床化疗FAP方案,以剂量递增的方法诱导耐药模型,对照组仅给予等体积的生理盐水。MTT法检测瘤细胞对7种化疗药物的耐药性;流式细胞术检测瘤细胞对Rh123的蓄积与泵出能力,计算平均荧光强度(MFI);RT-PCR检测瘤细胞mdr1和mrp1mRNA的表达及停药后化疗组小鼠瘤细胞mdr1和mrp1mR-NA的表达。结果:化疗组小鼠瘤细胞对7种化疗药物均产生耐药性。与对照组相比,化疗组小鼠瘤细胞内Rh123蓄积量减少,泵出率增加(t=6.067和6.811,P均〈0.05),mdr1和mrp1mRNA的表达水平升高(t=18.807和4.420,P均〈0.05);mdr1和mrp1mRNA的表达水平在停药4周内稳定(P〉0.05),停药8周后下降(P〈0.05)。结论:成功建立了小鼠腹水型肝癌MDR模型,MDR的产生与mdr1和mrp1mRNA过度表达从而影响药物蓄积有关。

    作者:王欣;张艳;王宁;江金花;郑立运;王庆端 刊期: 2010年第06期

  • 七氟醚复合笑气吸入联合气管内表面麻醉用于小儿气道异物取出术25例体会

    小儿气管及支气管异物是临床常见急症,因异物及分泌物阻塞气道,患儿术前多伴有低氧血症,而小儿的呼吸、循环代偿能力较差,置入气管镜的强烈刺激易导致呛咳、屏气、反射性喉痉挛、呼吸停止甚至心跳骤停,且在麻醉诱导后异物取出期间无法行气管内插管辅助或控制呼吸。因此,小儿气管支气管异物取出术麻醉的关键是保持患儿的自主呼吸以保证充分氧供,

    作者:吕慧敏;张卫 刊期: 2010年第06期

  • 骨显像和CT诊断多发性骨髓瘤骨质破坏的比较

    多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)是源于骨髓浆细胞单克隆恶性增殖性肿瘤,约占血液系统恶性肿瘤的10%,随着病情进展,约90%的患者病变累及骨骼[1]。99Tc^m一亚甲基二膦酸盐(MDP)骨显像及CT均能检测MM所伴有的骨质破坏,现将MM患者2种影像检查结果进行对比分析,以期提高MM的诊断效能。

    作者:革化民;崔静;刘保平;韩星敏;谢新立;王瑞华;任振泰 刊期: 2010年第06期

  • 两个亨廷顿舞蹈病家系IT15基因(CAG)n检测

    目的:检测两个亨廷顿舞蹈病(HD)家系的IT15基因CAG重复序列[(CAG)n]。方法:采用PCR和测序分析方法检测两个家系28名成员(A家系为已确诊HD家系,B家系为疑似HD家系)和两名正常对照IT15基因的(CAG)n。结果:两名正常对照IT15基因的CAG拷贝数分别为17、18;A家系中患者CAG拷贝数大于50;B家系中患者CAG拷贝数为40~50。B家系通过基因检测确诊为HD家系,并检出一名症状前患者。结论:IT15基因(CAG)n检测是诊断HD简便、快捷和有效的方法。

    作者:高歌;陈晓蕾;付汪星;张桐;朱揆;邹顺鸿;陈辉 刊期: 2010年第06期

  • 宫颈癌治疗后未控及复发转移121例分析

    宫颈癌复发患者治疗困难,预后差,常规治疗宫颈癌复发患者多在2a内死亡[1]。作者回顾性分析了121例治疗后未控及复发转移的宫颈癌患者的资料,探讨宫颈癌治疗后不良预后因素,为临床治疗提供参考。

    作者:程淑霞;成慧君;王莉 刊期: 2010年第06期

  • 白藜芦醇对BGC-823细胞人程序化死亡分子5表达及凋亡的影响

    目的:探讨白藜芦醇对胃癌BGC-823细胞中凋亡相关基因人程序化死亡分子5(PDCD5)表达的影响,并观察白藜芦醇诱导BGC-823细胞凋亡的效应。方法:分别用25、50、100和200μmol/L的白藜芦醇处理BGC-823细胞24、48和72h后,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测PDCD5表达的变化;运用流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡情况。另设空白对照组和溶剂对照组。结果:同一时间点,6组PDCD5蛋白及mRNA的表达差异均有统计学意义(F蛋白=211.881、242.438和184.866,P均〈0.001;FmRNA=207.366、148.411和158.661,P均〈0.001);同一浓度,24、48和72h时点各组比较,PDCD5蛋白及mRNA的表达差异均无统计学意义(F蛋白=0.950、1.870、2.218和2.232,P均〉0.05;FmRNA=1.267、2.376、1.221和2.292,P均〉0.05)。各组BGC-823细胞凋亡指数比较,差异有统计学意义(F=230.069,P〈0.001)。结论:凋亡相关基因PDCD5可能在白藜芦醇诱导胃癌BGC-823细胞凋亡过程中发挥重要作用。

    作者:李晓芳;柴雅玫;文小岗;周强;王志勇;崔黎;陈奎生 刊期: 2010年第06期

  • 磁共振与磁共振脑静脉成像对23例脑静脉窦血栓形成的诊断

    脑静脉血栓形成(cerebral veDous thrombosis,CVT),尤其是脑静脉窦血栓形成(cerebral venoussi—flUS thrombosis,CVST)为少见的缺血性脑血管病,临床表现多样且特异性不强,易误诊。其诊断特别是早期诊断的价值很大。现对23例CVST患者磁共振与磁共振脑静脉成像结果进行分析,报道如下。

    作者:杜秀明 刊期: 2010年第06期

  • 超声心动图评价室间隔缺损患儿左心收缩性能的价值

    临床上对于有较大室间隔缺损(ventricularsep.taldefect,VSD)患儿的心功能改变情况一直存在争议。该类患儿在临床上确实有不同程度的“心功能不全”症状,但传统的心功能评价指标如左室射血分数(LVEF)由于受前负荷影响,往往高估陔类患儿的左心收缩功能,多提示左心收缩功能仍在正常范围。

    作者:张瑞芳 刊期: 2010年第06期

  • 脊髓胶质肿瘤22例MRI表现

    胶质瘤占脊髓内肿瘤的90%以上,其中95%为室管膜瘤及星形细胞瘤。MRI为目前诊断脊髓内肿瘤重要的手段,尤其是钆喷酸二甲葡胺(Gd-DT—PA)增强扫描对于术前确定诊断有重要意义[1]。由于室管膜瘤边界清楚,手术可完全切除,预后较好,而星形细胞瘤呈浸润生长,与脊髓组织分界不清,肿瘤全切困难,预后相对较差,因此术前对2者的鉴别诊断有重要的临床意义[2-4]。作者回顾性分析13例室管膜瘤和9例星形细胞瘤的MRI表现,探讨对该病的诊断及鉴别诊断。

    作者:王岸飞;张焱;胡瑛;李建灵;荆彦平;王晓艳 刊期: 2010年第06期

  • 肿瘤早期免疫诊断标志物的研究进展和展望

    人体血清中自身抗体的检测可作为自身免疫性疾病诊断的重要指标已在临床研究和实践中广泛应用[1]。自身抗体也被用于筛选cDNA基因表达文库,从而分离靶抗原的cDNA克隆。人体血清中的自身抗体是针对某些亚细胞颗粒的组成成分产生的,而这些亚细胞颗粒的组成成分又涉及DNA复制、DNA转录、RNA合成和细胞分裂等重要的细胞功能。

    作者:张建营 刊期: 2010年第06期

  • 晚期妊娠合并血小板减少207例临床分析

    妊娠合并血小板减少(pregnant women compli-cared with thrombocytopenia,PT)是围生期的一种常见病,约占妊娠总数的3.7%[1]。多数患者预后良好,少数病例会导致产后出血、新生儿颅内出血等严重后果。作者回顾性分析了2004年1月至2007年12月郑州大学第一附属医院收治的207例PT患者的临床资料,报道如下。

    作者:赵先兰;张苗苗;张连琴;孙璐路 刊期: 2010年第06期

  • 大、小鼠空肠、肝及肾组织中P型铜转运ATP酶蛋白的表达

    目的:检测大、小鼠空肠、肝及肾组织中P型铜转运ATP酶(ATP7B)蛋白的表达。方法:分别取6只SD大鼠和7只昆明小鼠,取空肠、肝及肾组织,常规石蜡切片,采用免疫组化法检测ATP7B蛋白的表达。结果:大、小鼠空肠绒毛上皮的纹状缘和近基底部、小肠腺、肾小管和肝细胞中均有不同程度的ATP7B蛋白表达。大鼠空肠、肝及肾组织ATP7B的积分光密度分别为(224474.380±228536.513)、(94116.484±45821.113)和(118128.741±41046.629),小鼠上述3种组织中ATP7B的积分光密度分别为(129023.602±87570.591)、(150614.511±52981.792)和(118403.634±53656.681),大、小鼠同一组织器官ATP7B的积分光密度相比,差异均无统计学意义(t=1.239、1.355、0.009,P均〉0.05)。结论:ATP7B蛋白在大、小鼠空肠、肝及肾组织中均有表达,其表达量的高低与动物种属关系不大。

    作者:王杰玉;杨杰;李勇莉;王国栋;侯锐;高建凯;高福莲 刊期: 2010年第06期

  • 肉桂酰接枝壳糖胺衍生物的合成

    目的:制备肉桂酰接枝壳糖胺衍生物。方法:分别用酰氯中间体法和一步合成法制备目标化合物,测定接枝率。用1HNMR、IR和热分析技术进行结构确认。结果:采用酰氨中间体法制得的4种化合物的接枝率在30%~50%,但操作复杂,污染严重;采用一步合成法制得的上述衍生物的接枝率约为20%,操作简单,无污染。一步合成法制得的4种衍生物经结构表征测定均证实为目标化合物。结论:一步合成法合成肉桂酰接枝壳糖胺衍生物优于酰氯中间体法。

    作者:武雪芬;侯益民;李桂兰;孙德梅 刊期: 2010年第06期

  • COX-2基因沉默对OS-RC-2细胞生长和侵袭能力的影响

    目的:观察RNA干扰沉默肾癌细胞株OS-RC-2的环氧合酶-2(COX-2)基因表达对肾癌细胞生长及体外侵袭能力的影响。方法:构建靶向COX-2的小干扰RNA(siRNA)真核表达质粒pSilencer2.0-U6-COX-2-siRNA。将对数生长期的OS-RC-2细胞分3组,干扰组转染pSilencer2.0-U6-COX-2-siRNA,空转组转染pSliencer2.0-U6,对照组不转染。培养72h后采用半定量RT-PCR、Westernblot检测COX-2mRNA和蛋白表达,CCK8增殖抑制实验观察细胞生长情况,改良Boyden小室法评估细胞体外侵袭能力。结果:酶切和测序证实pSilencer2.0-U6-COX-2-siRNA构建成功。3组细胞COX-2mRNA和蛋白的表达、细胞存活率及穿孔细胞数差异均有统计学意义(F分别为189.800,89.326,188.403和75.349,P均〈0.001)。与其他2组比较,干扰组COX-2mRNA及蛋白表达下调(P〈0.05),细胞存活率、穿孔细胞数降低(P〈0.05)。结论:COX-2有望成为肾癌基因治疗的靶点。

    作者:李金锋;丰贵文;王跃;庞新路;尚文俊;郭亮;朱同玉;王国民 刊期: 2010年第06期

  • 舒芬太尼复合丙泊酚在无痛膀胱镜检查中的应用

    舒芬太尼是一种新型强效麻醉性镇痛药,其理化性质与芬太尼相似,而作用强度为芬太尼的5~10倍,有研究[1]显示等效剂量的舒芬太尼较芬太尼对血流动力学的影响小,应激反应轻。2008年以来,作者在舒芬太尼或芬太尼联合丙泊酚静脉全麻下实行无痛膀胱镜检查,现对其效果与安全性分析报道如下。

    作者:赵璞;张卫 刊期: 2010年第06期

  • 郑州大学学报(医学版)双月刊1957年创刊2010年第45卷总目次

    特约述评预报、预测和预警方法及其应用………………………………… … 赵耐青(1)急性心肌梗死患者应用药物洗脱支架的安全性和有效性评估……马长生,乔岩(173)股骨头坏死的治疗策略与疗效评价…………………………王义生(533)

    作者: 刊期: 2010年第06期

  • 杜氏盐藻叶绿体转化载体pchlN-CAT-BAR的构建

    目的:利用同源重组方法将外源选择标记基因转入杜氏盐藻叶绿体中并表达。方法:以光非依赖性的原叶绿素酸酯还原酶chlN基因为同源片段,以氯霉素乙酰转移酶(cat)基因和除草剂草丁膦(PPT)抗性bar基因为选择标记,构建盐藻叶绿体转化载体pchlN-CAT-BAR,并通过基因枪法转入野生型盐藻细胞,筛选转化藻株。对转化株和野生对照组的细胞计数结果进行统计学分析。结果:在200mg/L氯霉素的选择下,野生型盐藻12d左右死亡,转化藻仍正常生长,再经4mg/LPPT继代筛选3~5代,得到表达氯霉素和PPT抗性的盐藻转化株。盐藻转化株和野生株1个月内藻株生长差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:以chlN基因作为同源片段构建盐藻叶绿体转化载体是可行的。

    作者:曾磊;潘卫东;王翠;薛乐勋 刊期: 2010年第06期

  • 高频超声对类风湿关节炎膝关节病变的诊断价值

    类风湿关节炎是一种以关节病变为主的自身免疫性疾病,多见于中、青年女性,可累及全身所有关节。高频超声可利用软组织与骨皮质之间良好的声阻抗差异,在显示骨关节病变上有一定的优势。作者对30例类风湿关节炎患者的膝关节进行高频超声检查,探讨高频超声对类风湿关节炎膝关节病变的诊断价值。

    作者:徐河山 刊期: 2010年第06期

  • 肿瘤相关抗原MAGE-1体外诱导抗肿瘤免疫应答

    目的:研究肿瘤相关抗原MAGE-1的抗肿瘤生物活性。方法:取健康人外周血,分离树突状细胞和T淋巴细胞。用脂质体介导法分别将质粒pcDNA3.1-MAGE-1和pcDNA3.1转染人肝癌SMMC-7721细胞株,设未转染的SMMC-7721细胞株为空白对照组,应用Real-timePCR检测3组细胞中MAGE-1 mRNA的表达;再分别用以上3种细胞的冻融抗原致敏树突状细胞,使其激活T淋巴细胞成为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。应用乳酸脱氢酶释放法检测CTL对野生型SMMC-7721细胞的杀伤活性。结果:pcDNA3.1-MAGE-1转染组MAGE-1 mRNA的表达量为(1.211±0.586),空质粒转染组及未转染组分别为(0.412±0.021)和(0.452±0.317),3组比较,差异有统计学意义(F=538.652,P〈0.001)。转染pcDNA3.1-MAGE-1重组质粒、pcDNA3.1空质粒的SMMC-7721细胞和未转染的野生型SMMC-7721细胞的冻融抗原所激活的CTL对野生型SMMC-7721细胞的杀伤活性分别为(48.26±2.47)%、(25.84±2.72)%和(26.27±0.81)%,3组比较,差异有统计学意义(F=139.607,P〈0.001)。结论:肿瘤相关抗原MAGE-1能够在体外诱导细胞抗肿瘤免疫反应。

    作者:何炜;刘甲;郭玉琴;刘新郑 刊期: 2010年第06期

  • 不同品系SV40T转基因小鼠血浆胃泌素水平测定

    目的:检测不同品系SV40T转基因小鼠血浆胃泌素水平。方法:取已建立的8个品系SV40T转基因小鼠和B6小鼠空腹血,应用ELISA法检测血浆胃泌素水平。结果:B6小鼠、2#、4#、16#、24#、51#、57#、61#和73#品系转基因小鼠血浆胃泌素水平(μg/L)分别为(2.814±0.209)、(1.135±0.114)、(0.853±0.701)、(2.371±0.335)、(1.371±0.190)、(0.685±0.374)、(2.274±0.251)、(2.471±0.251)和(0.986±0.173),9组相比,差异有统计学意义(F=17.449,P〈0.001);其中2#、4#、24#、51#及73#品系转基因小鼠血浆胃泌素水平较B6小鼠明显降低(P〈0.05)。结论:筛选出了5个稳定表达的SV40T转基因小鼠品系。

    作者:申琦;邵蓓新;郜十伟;陈辉;张钦宪 刊期: 2010年第06期

郑州大学学报(医学版)杂志

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主办:郑州大学