学术投稿

ret基因真核表达载体的构建及其瞬时表达

郭小兵;张钦宪

关键词:ret基因, 表达载体, 瞬时表达
摘要:目的:构建ret基因真核表达载体pcDNA3.0-RET,为制作转基因动物提供实验基础.方法:利用HandⅢ及NotⅠ限制性核酸内切酶,消化pSK-RET及pcDNA3.0空质粒,获得目的基因及相应载体;通过T4连接酶重组DNA;通过氨苄青霉素(Amp)抗性、酶切鉴定及DNA序列分析,确定阳性克隆.通过脂质体包裹转染NIH3T3细胞,采用Western blot方法检测载体的瞬时表达状况.结果:Amp抗性筛选阳性;酶切片段电泳分析在5 400 bp及3 300 bp处有明显条带;DNA序列分析提示重组基因与实际序列一致;Western blot结果显示175 000处有明显条带.结论:ret基因真核表达载体pcDNA3.0-RET构建成功,并可瞬时表达.
郑州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 罗哌卡因联合芬太尼自控分娩镇痛对第二产程的影响

    硬脊膜外阻滞无痛分娩(LEA)是目前应用广泛的无痛分娩方法之一.由病人自控的硬膜外麻醉(patient controlled epidural analgesia,PCEA)是否会对LEA有负面影响,长期以来一直争论不休,尤其是否会延长第二产程是争论的焦点之一[1].作者观察了罗哌卡因PCEA分娩镇痛对第二产程的影响,报道如下.

    作者:王璐;王锐;贾艳霞 刊期: 2006年第05期

  • 一期手术治疗老年双膝骨性关节炎效果观察

    目的:探讨全膝关节置换结合关节镜术一期手术治疗双膝骨关节炎的效果.方法:双膝骨关节炎患者16例,男5例,女11例,年龄60~78岁.较重侧(HSS评分35~48分)行全膝关节置换术,较轻侧(HSS评分42~60分)行关节镜下松解术并下肢支具康复锻炼.结果:患者术中出血量220~300 ml,恢复快.随访9~26个月,患者关节置换侧HSS评分由(40.9±6.7)分提高至(86.4±7.0)分;关节镜术侧HSS评分由(52.2±7.3)分提高至(78.6±8.2)分.结论:全膝关节置换联合关节镜下松解术一期手术治疗老年双膝骨关节炎是一种有效方法.

    作者:许建中;张晓强;赵甲军;杨恺 刊期: 2006年第05期

  • 经皮介入诊治恶性心包积液15例

    恶性心包积液多系恶性肿瘤心包转移所致,临床上常易导致急性或慢性心包填塞[1,2].1995年1月至2003年12月,作者采用经皮导管介入引流术并在心包腔内注入抗癌药局部化疗治疗恶性心包积液15例,报道如下.

    作者:赵遴;孙予北 刊期: 2006年第05期

  • 抗肿瘤坏死因子-α抗体对慢性结肠炎小鼠肠黏膜组织内淋巴细胞凋亡的影响

    目的:探讨抗肿瘤坏死因子(TNF)-α单抗在阻断小鼠慢性结肠炎发生过程中的作用机制.方法:严重联合免疫缺陷型(SCID)小鼠(n=24)体内植入同基因源性CD45RBhigh CD4+ T细胞,以诱导慢性结肠炎发生.SCID小鼠造模后均分为观察组和对照组,分别采用抗TNF-α单抗和大鼠免疫球蛋白治疗,剂量均为1 mg/只,1次/周,腹腔注射,连续治疗8周.每周记录小鼠的体质量、大便情况和脱肛症状等.SCID小鼠均于造模8周后处死,采集升结肠组织进行组织病理学观察;采用TUNEL染色法检测肠黏膜内淋巴细胞凋亡情况.结果:对照组小鼠均表现为体质量下降,发生腹泻和脱肛,结肠壁增厚,结肠黏膜组织内有大量淋巴细胞浸润,有溃疡发生.观察组小鼠体质量增加,无腹泻和大便稀软现象,结肠黏膜组织结构完整,黏膜和黏膜下层仅有少量的淋巴细胞浸润.观察组小鼠结肠黏膜组织内每高倍视野TUNEL阳性细胞数(56.5±8.2)高于对照组(4.3±0.6)(t=4.521,P<0.001).结论:抗TNF-α单抗可诱导结肠黏膜内淋巴细胞的凋亡,抑制淋巴细胞功能,从而阻断慢性结肠炎发生.

    作者:刘占举;徐刚;崔静;唐芙爱 刊期: 2006年第05期

  • 老年人慢性阻塞肺疾病不动杆菌感染20例临床分析

    不动杆菌是一种机会致病菌,可引起多种临床感染.作者对本院近5 a来收治的老年人慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)368例进行分析,确诊不动杆菌感染20例,占5.4%,现将临床及药敏试验结果报道如下.

    作者:明亮;谭伟丽;王丽华;蒋军广 刊期: 2006年第05期

  • 显微激光薄化人胚胎透明带辅助孵出效果观察

    目的:观察显微激光薄化人胚胎透明带进行辅助孵出的效果.方法:应用1.48μm二极管激光打孔仪对50个胚胎进行透明带薄化辅助孵出,另外51个胚胎作为对照,体外囊胚培养,观察囊胚形成及孵出情况.结果:薄化组囊胚形成率(50.0%)与对照组囊胚形成率(45.1%)间差异无统计学意义(P>0.05);但薄化组囊胚发动孵出率和囊胚完全孵出率(88.0%,59.1%)均高于对照组(34.8%,12.5%)(P均<0.05).结论:显微激光薄化人胚胎透明带辅助孵出能提高囊胚孵出率,是优于传统辅助孵出技术的一个好方法.

    作者:申霞;徐瑜;孙莹璞;苏迎春 刊期: 2006年第05期

  • 白芍总苷、甲氨喋呤及雷公藤治疗类风湿性关节炎150例体会

    类风湿性关节炎(RA)是一类以关节炎为主要临床表现的自身免疫疾病,目前临床治疗以类固醇抗炎药(NSAID)和慢作用抗风湿药为主.近年来研究发现白芍总苷(TGP)不仅具有免疫调节作用[1],同时具有保肝作用[2],对各种自身免疫性疾病有一定的治疗作用,可用于治疗风湿性疾病.作者比较了TGP、甲氨喋呤和雷公藤对RA的疗效,报道如下.

    作者:王轶;吴强;魏佳熙;沈海丽;王丽萍;朱琴 刊期: 2006年第05期

  • 小剂量琥乙红霉素治疗新生儿喂养不耐受32例

    新生儿喂养不耐受常见的临床表现为呕吐、喂哺困难、奶量不足、胃潴留、腹胀等,常影响患儿生长发育,而完全静脉营养价格较贵,且易导致肠黏膜萎缩及乳糖酶缺乏[1].作者应用小剂量琥乙红霉素胃管内注入治疗新生儿喂养不耐受疗效较好,现总结如下.

    作者:袁焕珍;孙君轶;张永军 刊期: 2006年第05期

  • CD40辅助信号诱导对炎症性肠病患者淋巴细胞细胞因子分泌的影响

    目的:探讨CD40辅助信号对炎症性肠病患者外周血和肠黏膜固有层淋巴细胞细胞因子分泌的影响.方法:分离11例克罗恩病(CD)、23例溃疡性结肠炎(UC)患者和14例结肠镜检正常者(对照)的外周血淋巴细胞(PBMC)及肠黏膜固有层淋巴细胞(LPMC),流式细胞仪测B细胞、单核巨噬细胞及树突状细胞CD40表达水平.体外培养,并用CD40转染的P815细胞株刺激,48 h后,收集上清液并用ELISA检测干扰素(IFN)-γ、IL-2、IL-4、IL-5和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平.结果:CD、UC组PBMC及LPMC中CD40+ B细胞、单核巨噬细胞及树突状细胞水平高于对照组(P<0.05);经CD40转染的细胞株刺激后,CD组PBMC IFN-γ分泌水平高于UC及对照组(P<0.05),而其LPMC IL-2、IFN-γ和TNF-α分泌水平高于UC及对照组(P<0.05).结论:CD40辅助信号能直接刺激CD患者外周血和肠黏膜固有层淋巴细胞激活,并产生大量促炎症介质.CD40在炎症性肠病发生过程中起重要作用.

    作者:刘占举;酒金霞 刊期: 2006年第05期

  • 美沙拉秦治疗溃疡性结肠炎的临床疗效及对血清TNF-α和IL-8的影响

    目的:观察美沙拉秦对溃疡性结肠炎(UC)患者的临床疗效及对血清TNF-α和IL-8的影响.方法:收集150例UC患者,随机分为美沙拉秦治疗组(A组,共78例)和柳氮磺胺吡啶治疗组(B组,共72例).治疗6周后,观察临床症状、结肠镜下黏膜改变以及治疗前后血清TNF-α和IL-8水平的变化.结果:A组临床症状改善和结肠镜下黏膜炎症修复情况优于B组,表现为腹痛、腹泻、黏液脓血便,黏膜糜烂、溃疡、充血水肿和血管模糊好转或消失.A组患者血清TNF-α和IL-8水平较B组降低(P<0.05).结论:美沙拉秦治疗UC疗效显著;降低血清TNF-α和IL-8水平,可能是其治疗溃疡性结肠炎的机制之一.

    作者:冯百岁;刘占举;牛正先 刊期: 2006年第05期

  • ret基因真核表达载体的构建及其瞬时表达

    目的:构建ret基因真核表达载体pcDNA3.0-RET,为制作转基因动物提供实验基础.方法:利用HandⅢ及NotⅠ限制性核酸内切酶,消化pSK-RET及pcDNA3.0空质粒,获得目的基因及相应载体;通过T4连接酶重组DNA;通过氨苄青霉素(Amp)抗性、酶切鉴定及DNA序列分析,确定阳性克隆.通过脂质体包裹转染NIH3T3细胞,采用Western blot方法检测载体的瞬时表达状况.结果:Amp抗性筛选阳性;酶切片段电泳分析在5 400 bp及3 300 bp处有明显条带;DNA序列分析提示重组基因与实际序列一致;Western blot结果显示175 000处有明显条带.结论:ret基因真核表达载体pcDNA3.0-RET构建成功,并可瞬时表达.

    作者:郭小兵;张钦宪 刊期: 2006年第05期

  • 聚肌胞治疗眼带状疱疹28例观察

    眼带状疱疹(HZO)是由水痘-带状疱疹病毒(VZV)引起的继发感染,占所有带状疱疹的10%~25%[1].2003年2月至2005年11月,作者在常规药物治疗基础上采用聚肌胞治疗眼带状疱疹28例,效果满意,报道如下.

    作者:尹丽婷;王良玉;葛鹤立 刊期: 2006年第05期

  • 早期异位妊娠患者血清β-HCG、孕酮、VEGF及肌酸激酶测定

    近年来,异位妊娠(ectopic pregnancy,EP)的发病率呈明显上升趋势,EP破裂或流产可导致腹腔内大量出血,严重威胁患者的生命安全[1].

    作者:李先锋;吴瑾;张小娥;段素静;李敏 刊期: 2006年第05期

  • 大肠癌组织中微血管密度、Survivin和P53测定

    目的:探讨大肠癌组织中Survivin和P53基因的表达及其与血管生成的关系.方法:采用免疫组化SP法,检测51例大肠癌(直肠癌22例,结肠癌29例;Dukes分期:A期13例,B期14例,C期15例,D期9例;高分化16例,中分化25例,低分化10例)组织中Survivin、P53的表达及微血管密度(MVD).结果:Survivin、P53的表达与大肠癌的部位无关(P>0.05),而与组织分化程度、Dukes分期相关(P<0.05).Survivin、P53阳性的大肠癌组织MVD(36.56±7.81,35.44±10.42)明显高于阴性者(19.81±9.27,22.17±9.54)(P<0.05).Survivin、P53均为阳性时MVD值高(39.78±7.88),高于其他各组(P<0.05).Survivin与P53的表达呈正相关(r=0.957,P<0.05),MVD与Survivin、P53同时阳性表达呈正相关(r=0.787,P<0.05).结论:Survivin和P53在大肠癌的发生和发展中起重要作用,并与肿瘤血管生成有关.

    作者:郭长青;刘文静;刘国永 刊期: 2006年第05期

  • 蛋白质指纹图谱模型在肝癌诊断中的应用

    目的:建立基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型,并探讨其在肝癌诊断中的应用.方法:应用表面增强激光解析-电离-飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS),测定了52例肝癌和32例健康人血清标本的蛋白质指纹图谱,并结合人工神经网络方法进行数据分析.将84例标本随机分成训练组56例(肝癌35例,健康人21例)和盲法测试组28例(肝癌17例,健康人11例).利用从训练组得出的基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型,对28例未知血清进行检测,并与甲胎蛋白(AFP)判断结果进行比较.结果:应用该方法对肝癌进行诊断的准确率、敏感性和特异性均为100%(17/17,11/11).AFP检测结果准确率为77.4%(65/84),灵敏度和特异性分别为69.2%(36/52)和90.6%(29/32).结论:该方法在肝癌的诊断中较AFP具有更高的敏感性和特异性.

    作者:庞艳丽;张波;王家祥 刊期: 2006年第05期

  • 食物过敏患儿十二指肠黏膜组织内IL-4和IL-5 mRNA的表达

    目的:探讨食物过敏患儿十二指肠黏膜组织内IL-4和IL-5 mRNA的表达.方法:取18例食物过敏患儿和16例胃镜检查正常儿童(对照组)十二指肠黏膜活检组织,进行病理检查,并采用RT-PCR检测其中IL-4和IL-5mRNA的表达.常规生化方法检测血清IgE水平.结果:食物过敏患儿十二指肠黏膜组织内IL-4、IL-5 mRNA水平及血清IgE水平高于对照组(P<0.05);食物过敏患儿十二指肠黏膜组织内IL-4、IL-5 mRNA水平与血清IgE水平呈正相关(r分别为0.674、0.586,P均<0.05),而与肠黏膜组织的炎症程度无相关性.结论:食物过敏反应可诱导肠黏膜内免疫细胞分泌IL-4和IL-5,并协同刺激局部IgE的分泌.

    作者:张春景;靳静;刘占举 刊期: 2006年第05期

  • 子宫内膜癌组织中COX-2、VEGF和MVD测定

    目的:检测子宫内膜癌组织中COX-2、VEGF的表达及MVD,并分析其临床意义.方法:应用免疫组织化学技术检测45例子宫内膜癌组织和9例正常子宫内膜组织中COX-2、VEGF和MVD的表达.结果:与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织中COX-2(1/9 vs 28/45)、VEGF(1/9 vs 23/45)和CD34(2/9 vs 40/45)阳性表达率均增高(P均<0.05).子宫内膜癌组织中COX-2与VEGF表达呈正相关(rs=0.585,P<0.01),且COX-2和VEGF均阳性表达的子宫内膜癌组织MVD(64.0±25.4)高于2者均阴性者(30.7±11.5)(P<0.01).结论:子宫内膜癌组织中COX-2呈高表达,并通过增加VEGF表达而促进肿瘤血管形成.

    作者:王玉萍;徐晓辉;申爱荣 刊期: 2006年第05期

  • 外伤性十二指肠损伤35例治疗体会

    1999年1月至2005年6月,共收治外伤性十二指肠损伤35例,报道如下.

    作者:侯红军;杨聪敏;吴燕莉 刊期: 2006年第05期

  • 门冬胰岛素30与盐酸吡格列酮联合治疗对2型糖尿病患者血糖的影响

    目的:观察门冬胰岛素30(诺和锐30)和盐酸吡格列酮(瑞彤)联合治疗对2型糖尿病(T2DM)患者血糖的影响.方法:选择60例经诺和锐30强化血糖控制达标2周后患者,随机分为诺和锐30联合瑞彤观察组29例和诺和锐30单用对照组31例,比较2组各时段血糖水平、糖化血红蛋白(HbA1C)含量和24 h胰岛素用量.结果:与对照组比较,观察组在早餐前和三餐后30 min、60 min、120 min血糖下降(P<0.05或0.01),HbA1C下降(P=0.042);且24 h胰岛素用量减少(P<0.000 1).结论:T2DM患者早期联合噻唑烷二酮类胰岛素增敏剂治疗,可降低胰岛素抵抗,改善血糖控制.

    作者:董健;代芳;王亚林;于瑞萍;刘波 刊期: 2006年第05期

  • 食管癌组织中胸苷磷酸化酶和微血管密度检测

    目的:探讨食管癌组织中胸苷磷酸化酶(TP)的表达情况及意义.方法:采用免疫组织化学SP法检测经病理证实的48例食管癌组织、24例食管不典型增生组织和24例正常食管黏膜组织中TP的表达情况,并进行微血管计数,计算MVD.结果:食管癌组织中TP阳性表达率为81.25%(39/48),高于正常食管黏膜组织的8.33%(2/24)和不典型增生组织的41.67%(10/24)(x2=35.848,P<0.01).TP表达与食管癌患者的年龄、肿瘤分化程度、浸润深度均无关(P>0.05);但与淋巴转移有关(P<0.01).食管癌组织MVD高于正常组织和不典型增生组织,且TP表达阳性的食管癌组织MVD高于阴性者.结论:TP是食管癌血管形成和维持的重要因子.

    作者:尚育红;李继昌 刊期: 2006年第05期

郑州大学学报(医学版)杂志

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