学术投稿

新疆O139群霍乱弧菌93006菌株基因组文库的构建

谢婧;段广才;郗园林;范清堂

关键词:基因组文库, 霍乱弧菌, 粘粒载体
摘要:目的:构建我国新疆分离O139群霍乱弧菌菌株(93006菌株)的基因组文库,为研究我国O139群霍乱弧菌的来源及其基因组特征提供资料.方法:制备霍乱弧菌高相对分子质量的基因组DNA,用Sau3AI酶将基因组DNA部分酶切成平均大小为32~40kb的片段,将部分酶切并经碱性磷酸酶(CIAP)处理的DNA片段与经XbaI、CIAP、BamHI处理的粘粒载体SuperCos1的载体臂相连接,连接产物经体外包装并转染大肠杆菌XL-Blue1 MR,经氨苄抗性筛选得到阳性克隆,构建霍乱弧菌的基因组文库.结果:该文库共获得了1 200个单克隆,平均插入片段的大小为32kb,空载率为0.05%,相当于9个库容量,从本文库中筛选到任一霍乱弧菌的DNA单拷贝序列的机率为99.98%,该文库能承受7次反复冻溶.结论:成功构建了我国新疆分离O139群霍乱弧菌菌株93006的基因组文库,为进一步克隆霍乱弧菌的基因和研究我国O139群霍乱弧菌的来源奠定了基础.
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    泌尿系结石是常见的泌尿外科疾病,易引起感染和肾功能损害.该病在我国的发病率较高,多见于20~40岁[1].治疗结石的方法主要有药物排石、碎石和手术治疗.

    作者:何伶 刊期: 2004年第03期

  • 微重力对鸡胚前庭神经节神经元形态发育的影响

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    作者:陈向东;Cesar D.Fermin;Dale Martin;Hirotaka Hara;Jun Hara 刊期: 2004年第03期

  • hTERT片段真核表达质粒的构建

    目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的真核表达质粒,方法:从肿瘤组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增hTERT基因并克隆入PGEM-T Easy载体中,然后再亚克隆于pcDNA3.1真核表达载体,用PCR扩增及限制性酶切法筛选重组真核表达质粒,并以DNA测序鉴定.结果:PCR扩增及限制性酶切法证实重组真核表达质粒的构建成功.测序表明,hTERT基因片段与GenBank公布的相应基因同源性比较,核苷酸序列的同源性为98.73%,氨基酸序列的同源性为99.68%.结论:成功构建了hTERT真核表达质粒,为进一步研究与hTERT相关的抗肿瘤免疫治疗奠定了基础.

    作者:刘红梅;赵国强;杨胜利 刊期: 2004年第03期

  • 食管癌发生发展过程中P33/ING1、Survivin蛋白的表达

    目的:探讨食管癌发生发展过程中P33/ING1、Survivin蛋白的表达及其与食管癌病理特征的关系.方法:采用免疫组化SP法检测P33/ING1、Survivin蛋白在60例食管癌手术后大体标本中食管正常黏膜、单纯增生、不典型增生、原位癌及浸润癌组织的表达.结果:P33/ING1蛋白从正常黏膜→单纯增生→不典型增生→原位癌→浸润癌呈渐进性低表达,而Survivin蛋白则呈渐进性高表达.正常黏膜与不典型增生、原位癌及浸润癌中P33/ING1、Survivin蛋白的表达差异有统计学意义(P<0.05);P33/ING1蛋白表达情况与食管癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05).食管浸润癌组织中P33/ING1蛋白的低表达与Survivin蛋白的高表达呈负相关(r=-0.480,P<0.01).结论:P33/ING1、Survivin 2种蛋白与食管癌的发生发展密切相关,可作为肿瘤诊断的标志物.

    作者:任秀花;李珊珊;阎爱华;张红燕 刊期: 2004年第03期

  • 手术减肥治疗对肥胖患者血清C反应蛋白水平的影响

    目的:研究手术减肥配合低热量饮食治疗对肥胖患者血清C反应蛋白(CRP)水平的影响.方法:测定42例手术治疗的单纯性肥胖患者在治疗0周和25周时的体重、腰臀围、血压,同时测定空腹血糖、脂代谢参数、胰岛素、CRP值.结果:治疗25周后患者平均血压、空腹血糖、胆固醇及胰岛素抵抗指数均较治疗前明显降低(P<0.05),体重下降>5%者,CRP水平较治疗前明显下降(P<0.01).结论:外科手术减肥配合低热量饮食治疗能够有效降低单纯性肥胖患者的体重及CRP水平,不同程度地改善代谢水平,从而降低心血管疾病的患病率及危险性.

    作者:姜南;陈玉浩;陈言汤;孟宪星;李媛;王丽娟;许亚红 刊期: 2004年第03期

  • 巴曲酶治疗重症脑梗死92例疗效观察

    重症脑梗死因梗死面积大、临床症状严重,预后较差,2000年10月至2003年4月,作者应用巴曲酶治疗重症脑梗死92例,效果较好,现报道如下.

    作者:张素玲;魏立平 刊期: 2004年第03期

  • 食管鳞癌标本中C-MYC、Rb、P16和EGFR表达的定位分析

    目的:研究C-MYC、Rb、P16及EGFR蛋白在食管鳞癌标本中的定位表达.方法:采用免疫组化方法定位分析45例原发性食管鳞癌大体标本中C-MYC、Rb、P16及EGFR蛋白的表达.将食管标本固定并沿食管长轴取成大小为2.0 cm×0.5 cm的若干段组织.根据组织学检查结果,绘图显示每例食管标本不同病变及各种蛋白在不同区域(正常黏膜、单纯增生、不典型增生、原位癌及浸润癌)中的分布情况.结果:C-MYC、EGFR在食管癌自然病史中呈现渐进性高表达,而Rb则在其中呈现渐进性低表达,P16表达则无渐进性.EGFR、P16表达在单纯增生和不典型增生中差异有统计学意义;而C-MYC、Rb则在原位癌与浸润癌中差异有统计学意义.此外,Rb与C-MYC在食管癌组织中的表达呈负相关(P<0.05).绘图显示出每一例食管癌大体标本中同一区域不同肿瘤标记物表达的差异、同一种肿瘤标记物在不同区域表达的差异及同一种肿瘤标记物在同一种黏膜病变中表达的差异.结论:EGFR、p16基因的改变可能是食管癌发生发展过程中的早期事件;而c-myc、Rb基因的改变可能是其中的中晚期事件,并赋予肿瘤细胞更多的恶性生物学行为;上述基因在食管癌发生发展中存在相互协调作用.对肿瘤标记物表达情况绘图可直观展现不同病变中肿瘤标记物的分布及相互关系,揭示食管癌形成的内在信息.

    作者:郭坤;李珊珊;任秀花;阎爱华;常福聚 刊期: 2004年第03期

  • 婴儿期室间隔缺损合并肺动脉高压56例治疗体会

    婴儿期室间隔缺损(ventricular septal defect,VSD)常因大量的左向右分流而反复出现肺炎、心衰,继发肺动脉高压,需早期手术.2000年11月至2003年3月,作者共施行1岁以下婴幼儿VSD并肺动脉高压纠治术56例,疗效满意.

    作者:范太兵;李群;徐红亮;石磊;范顺阳 刊期: 2004年第03期

  • 乙型肝炎病毒核心基因转基因小鼠的建立

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    作者:刘红;张钦宪;胡以平 刊期: 2004年第03期

  • MCF-7细胞中组织型纤溶酶原激活剂乳腺特异性表达载体的瞬时表达

    目的:验证所构建的组织型纤溶酶原激活剂(tPA)乳腺特异性表达载体pWTA在乳癌细胞系MCF-7中的瞬时表达.方法:用脂质转染胺试剂:opofectamineTM2000将pWTA DNA转染入乳癌细胞系MCF-7和食管癌细胞系Eca-109.应用原位杂交技术,以地高辛标记的tPA cDNA为探针,观察PWTA的瞬时表达.结果:不同浓度Lipo-fectamineTM2000MCF-7细胞原位杂交均为阳性;Eca-109细胞及未加转染液者未见阳性信号.结论:载体pWTA为tPA乳腺特异性表达载体.

    作者:丁一;张娓;王萍;刘书漫;张钦宪 刊期: 2004年第03期

  • 诺氟沙星与联苯乙酸联用致痫大鼠脑内iNOS mRNA的变化

    目的:探讨NO与氟喹诺酮类药物(FQs)致痫的关系.方法:将大鼠分为生理盐水-生理盐水组、生理盐水-诺氟沙星组、联苯乙酸(BPAA)-生理盐水组及BPAA-诺氟沙星组,分别灌胃BPAA 100mg/kg或生理盐水30min后腹腔注射诺氟沙星25 mg/kg或生理盐水.连续记录各组大鼠的EEG,分析痫样放电,用Racine's标准观察行为学改变,RT-PCR测定给药后大鼠额前区、海马不同时间iNOS mRNA的表达.结果:诺氟沙星-BPAA组大鼠EEG示痫样放电,并伴有局部抽搐和全身强直痉挛发作等行为学改变;给药后30 min和60 min在额叶皮层和海马iNOSmRNA的表达明显高于其他3组(P<0.01),而其他时间点与对照组相比差异无统计学意义.其他3组大鼠行为学、EEG及iNOS mRNA均无改变(P>0.05).结论:NO可能参与诺氟沙星合用联苯乙酸所致的痫样发作,其参与了痫性发作的始动机制,但对癫痫的维持作用不重要.

    作者:张莉蓉;郜娜;贾琳静;田鑫;赵永星 刊期: 2004年第03期

  • 组织型纤溶酶原激活剂cDNA克隆及其乳腺特异性表达载体的构建

    目的:克隆组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,tPA)基因及构建其乳腺特异性表达载体.方法:以PCR技术克隆2.1kb tPA cDNA片段;应用体外连接技术,连接乳腺特异性表达载体pWA和2.1kb tPA cDNA片段;转化连接产物,以内切酶酶切、琼脂糖电泳及插入片段序列分析鉴定阳性克隆.结果:琼脂糖电泳显示,2.1kb tPA cDNA片段克隆成功;内切酶酶切片段与预期片段长度一致;插入片段序列与文献报道一致.结论:tPA基因克隆及其乳腺特异性表达载体构建成功.

    作者:丁一;刘书漫;王萍;朱晓燕;张钦宪 刊期: 2004年第03期

  • 胸腰椎骨折脱位内固定术中手法复位185例

    经椎弓根钉内固定系统治疗脊柱骨折和脱位后,常遗留椎体高度恢复不全、后凸畸形矫正不理想、前脱位和侧方移位校正不全等后遗症[1,2].1997年7月至2003年10月,作者治疗胸腰段脊柱骨折脱位185例,术中首先进行脊柱过伸牵引等手法复位,然后通过内固定器械进行进一步矫形复位,骨折脱位矫正效果良好,现报道如下.

    作者:陈书连;刘志成;高延征;刘涛;赵永强 刊期: 2004年第03期

  • 左旋精氨酸对无心跳大鼠供肝缺血再灌注损伤防护作用研究

    目的:探讨左旋精氨酸(L-Arg)对无心跳大鼠供肝缺血再灌注损伤的防护作用.方法:Wistar大鼠104只,随机取8只为正常对照组(N组),另96只随机分为供、受体组,两两随机配对后再分为6组.C1、C2、C3组为实验对照组,E1、E2、E3组为实验组.C1与E1、C2与E2、C3与E3分别行活体供肝肝移植和心跳停搏后30 min、45 min供肝肝移植;N组仅于开腹后抽取下腔静脉血及切取肝组织备检.其中各实验组供肝保存液中加入L-Arg(1mmol/L),受体鼠在移植后门静脉(PV)复流前10 min从尾静脉注射L-Arg(100mg/kg);各实验对照组则用等量生理盐水作对照.移植完成后,于PV复流后1 h、3 h、24 h检测血清一氧化氮(NO)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及血浆内皮素(ET)水平,观察肝组织超微结构.结果:与N组相比,各实验组与实验对照组大鼠PV复流后1 h血清NO水平明显降低(P<0.05),血浆ET水平、血清ALT、AST水平明显升高(P<0.05);与对应实验对照组相比,各实验组在PV复流后1 h、3 h、24 h血清NO水平明显升高(P<0.05),血清ALT、AST、血浆ET水平明显降低(P<0.05);各实验对照组之间相比,C3、C2组血清NO水平明显低于C1组(P<0.05),C3组明显低于C2组(P<0.05);C3、C2组血清ALT、AST水平、血浆ET水平明显低于C1组(P<0.05),C3组明显低于C2组(P<0.05);电镜下,实验对照组及实验组肝组织病理损害较N组为重,实验组病理损害较实验对照组明显减轻.结论:NO/ET失衡是造成无心跳供肝缺血再灌注损伤的主要原因之一;L-Arg预处理能够改善NO/ET的平衡关系,从而减轻无心跳供肝在移植过程中的损伤.

    作者:张水军;龚瑾;朱长举;宋燕;吴阳 刊期: 2004年第03期

  • 人工耳蜗植入术患儿围手术期护理

    人工耳蜗植入术是极重度聋和全聋患者听力语言康复有效的方法.2001年6月至2003年3月本科引进奥地利24导和澳大利亚22导人工耳蜗,成功为8例听力损失在90dB以上的双耳极重度感音神经性聋患儿进行了人工耳蜗植入术,现将围手术期有关护理总结报道如下.

    作者:闵双凤 刊期: 2004年第03期

  • 食管癌组织p53基因杂合性缺失的检测

    目的:探讨食管癌p53基因杂合性缺失(LOH)与食管癌发生和发展的关系.方法:应用荧光原位杂交技术对食管鳞状细胞癌、癌旁不典型增生组织及正常食管上皮各30例进行p53基因LOH检测.结果:p53基因LOH检出率在正常食管上皮、不典型增生组织及鳞癌组织中分别为0,16.7%(5/30)和63.3%(19/30),逐渐增高(P<0.05).结论:p53基因杂合性缺失是食管癌发生、发展过程中的重要分子学事件.

    作者:李卫江;段金霞 刊期: 2004年第03期

  • 大鼠脊髓中神经生长因子受体TrkA的表达与分布

    目的:检测神经生长因子受体TrkA在大鼠脊髓中的表达与分布.方法:通过Western blot检测TrkA在脊髓中的表达;通过免疫荧光组织化学,利用激光共聚焦显微镜检测TrkA在神经元中的定位.结果与结论:TrkA广泛分于脊髓各层神经元及灰质内,并且在神经元的胞体和树突中均有表达.

    作者:王永刚;张勇;张骐;吴爱群;何成 刊期: 2004年第03期

  • 经皮穿刺注射无水乙醇硬化治疗肾囊肿36例

    1992年5月至2002年12月,作者用B超引导下经皮穿刺注射无水乙醇硬化治疗肾囊肿36例,效果良好,报道如下.

    作者:程四国;王存丰;李启忠 刊期: 2004年第03期

  • 辛伐他汀预防激素性股骨头坏死的实验研究

    目的:探讨辛伐他汀预防糖皮质激素性股骨头缺血坏死的可行性和机制.方法:将36只新西兰兔随机分为空白对照组(A组),模型组(B组)、激素加辛伐他汀组(C组),每组12只.8周后检测血清中胆固醇、甘油三酯及一氧化氮(NO)含量,并对股骨头组织行HE及脂肪染色.结果:①B组的血清胆固醇及甘油三酯含量显著高于其他2组,而NO含量显著低于其他2组(P<0.05).②B组股骨头骨小梁空骨陷窝百分比显著高于另外2组,骨小梁面积分数均显著低于另外2组(P<0.05).③B组骨髓腔中脂肪组织增多,脂肪细胞直径和面积显著大于A、C组.④A、C组间上述指标差异无统计学意义(P<0.05).结论:辛伐他汀可减轻激素所致的脂肪代谢紊乱和骨质疏松,提高血清中NO含量,从而起预防糖皮质激素性股骨头缺血坏死的作用.

    作者:王卫东;廖文胜;王义生 刊期: 2004年第03期

  • 不孕症合并卵巢囊肿136例临床分析

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    作者:张翠莲;高航云;贾萍 刊期: 2004年第03期

郑州大学学报(医学版)杂志

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