学术投稿

HPV16E6蛋白与hDaxx在HeLa细胞的定位及对凋亡的影响

陈苏芳;朱翠明;唐双阳;余敏君;粟盛梅;阳帆;万艳平

关键词:人乳头瘤病毒16, 乳状瘤病毒E6蛋白质类, 细胞凋亡, Hela细胞
摘要:目的 探讨外源人乳头瘤病毒16型E6蛋白(HPV16 E6)与人Daxx蛋白(hDaxx)在HeLa细胞内的亚细胞定位及诱导HeLa细胞凋亡的影响.方法 Western印迹法检测融合蛋白DsRed-HPV 16 E6和EGFP-hDaxx的表达.激光共聚焦显微镜观察HPV16 E6和hDaxx的亚细胞定位.将HeLa细胞分为对照组、TNF-α处理组、转染空载体组、转染HPV16 E6组、共转染HPV16 E6和hDaxx组.后4组均经TNF-α诱导.用流式细胞仪测定细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-8与Caspase-3的相对活性.结果 融合蛋白DsRed-HPV16E6和EGFP-hDaxx在细胞内表达并分布于胞质与胞核,出现共定位现象,且部分hDaxx从胞核转移至胞质.转染E6组凋亡率(21.4%±1.1%)低于转染空载体组(27.0%±0.9%,P< 0.01);与转染E6组相比较,共转染组凋亡率(32.5%±2.1%)显著升高(P<0.01).转染E6组Caspase-8和Caspase-3相对活性分别为0.057±0.003、0.054±0.006,均低于空载体组(0.092±0.012、0.093±0.005,均P<0.01);与转染E6组相比较,共转染组Caspase-8和Caspase-3相对活性(0.109±0.013、0.110±0.004)均显著升高(P值均< 0.01).结论 HPV16 E6使部分hDaxx从胞核转位至胞质,二者发生共定位.HPV16E6蛋白可抑制TNF-α诱导的HeLa细胞凋亡,bDaxx高表达可下调HPV16 E6蛋白这种作用.
中华皮肤科杂志相关文献
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    作者:焦晓燕;郭在培;陈涛;张宇虹;李萌萌 刊期: 2012年第06期

  • 抗BP180NC16A IgG亚型检测方法的建立以及在大疱性类天疱疮中的意义

    目的 建立抗BP180NC16A IgG亚型的检测方法,并探讨其在大疱性类天疱疮(BP)中的意义.方法 原核表达GST-NC16A融合蛋白,并采用亲和层析法纯化.优化ELISA关键环节,建立抗BP180NC16A IgG各亚型的ELISA检测方法,并对10例未经治疗的BP、5例妊娠疱疹、1例成人线状IgA大疱性皮病、2例天疱疮患者血清分别进行检测.结果 通过方阵测定法确定GST-NC16A融合蛋白的包被浓度为500 μg/L,包被条件为4℃12h,血清稀释倍数为1∶100,酶标二抗为1∶2000,孵育条件为37℃1h,底物反应条件37℃20 min.10例大疱性类天疱疮患者10例IgG1阳性,9例IgG2阳性,5例IgG3阳性,9例IgG4阳性.2例寻常型天疱疮、1例成人线状IgA大疱性皮病均阴性.5例妊娠疱疹所有亚型均阳性,以IgG1和IgG3亚型为主.结论 抗BPI80NCI6A ELISA检测法特异性强、重复性好,是检测BP和妊娠疱疹患者抗BP180NC 16A抗体亚型的半定量方法.

    作者:左亚刚;LIU Zhi 刊期: 2012年第06期

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    作者:展小飞;王树椿;陈昭;李宜儒;刘全忠 刊期: 2012年第06期

  • 氨基肽酶N抑制剂治疗寻常性银屑病的疗效

    研究表明,微血管异常增生与银屑病发病有关,如血管内皮生长因子(VEGF)和促血管新生蛋白因子-2在慢性炎症阶段发挥一定作用.氨基肽酶(APN/CD13)抑制剂能抑制血管生成,可用于银屑病的治疗.现报告CD13抑制剂治疗银屑病疗效和安全性.

    作者:刘太华;王骏;张忠奎 刊期: 2012年第06期

  • 对糖尿病患者出现的皮肤干燥症进行治疗的重要性

    根据Gilgor和Lazarus的描述,皮肤并发症在糖尿病患者中较为常见.大约30%的患者在糖尿病患病过程中可发生皮肤损害.甚至有的时候,皮肤损害可作为糖尿病诊断的早期线索.像其他多种内分泌疾病一样,糖尿病破坏了皮肤内环境的稳态,进而导致皮肤在结构和功能上产生了一些改变.伴有瘙痒和硬皮病样皮肤改变的干燥症是糖尿病为常见的皮肤损害,发生率超过40%.糖尿病可以导致真皮中终末糖化产物的增多.这一现象可能参与了很多高血糖患者皮肤损害的发生,并且可能是并发微血管、神经损害以及蛋白尿的提示线索.

    作者:陈旭甄;雅贤 刊期: 2012年第06期

  • 自体外周血造血干细胞移植治疗重症天疱疮三例

    目的 探讨自体外周血造血干细胞移植治疗天疱疮的疗效及安全性.方法 选择经糖皮质激素、免疫抑制剂等治疗6个月以上病情仍难以控制或病情进展、且出现治疗相关并发症的3例寻常型天疱疮患者进行自体外周血造血干细胞移植治疗,并随访5年以上.3例中男1例,女2例,平均年龄27.3(21~39)岁.造血干细胞的动员方案为环磷酰胺4g/m2、重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、利妥昔单抗375 mg/m2;预处理方案为环磷酰胺50 mg·kg-1·d-1连用4d(移植前第6天到移植前第3天)、抗胸腺细胞球蛋白2.5 mg·kg-1·d-1连用4d(移植前第3天至移植当天)、利妥昔单抗600 mg/d于移植当天和移植后第7天静脉滴注.结果 3例天疱疮患者均获得成功植入,平均植活时间白细胞13.3 d(11 ~ 16d),血小板16.3 d(16~ 17d).监测各项免疫指标及相关抗体未见异常,免疫重建良好.随访期间,所有患者无严重并发症,生活质量较前明显提高.结论 自体外周血造血干细胞移植可能是治疗天疱疮有效且安全的新方法之一.

    作者:曾抗;闫璐;孙竞;孟凡义;孙乐栋;刘启发;徐丹;王茜;赖宽;周再高 刊期: 2012年第06期

  • 斑秃患者皮损丝聚蛋白的表达

    目的 探讨丝聚蛋白表达水平与斑秃患者特应性素质和疾病严重程度的关系.方法 分析37例斑秃患者的临床资料及实验室资料,取斑秃皮损和正常对照的头皮进行免疫组化染色,用荧光半定量RT-PCR检测22例斑秃皮损和正常对照的头皮丝聚蛋白在蛋白质和信使RNA的表达水平.结果 斑秃皮损丝聚蛋白和其mRNA的表达水平较正常对照明显降低(P< 0.05或0.01),而且这种降低在脱发面积较大、病程较长和有指甲改变的斑秃患者中更明显,但降低水平与是否伴发特应性疾病无关.斑秃患者伴特应性疾病组与不伴特应性疾病组之间性别、发病年龄、病程、脱发面积、家族史、甲改变、血清IgE和嗜酸粒细胞升高的发生率等方面差异均无统计学意义.结论 斑秃患者其皮损丝聚蛋白及其mRNA的表达水平均降低,提示丝聚蛋白可能参与斑秃的发病,并和疾病的严重程度有关.

    作者:西兰;张小婷;赵莹;蔡泽明;张斌;巩毓刚;章星琪 刊期: 2012年第06期

  • ABCG2在人皮肤鳞状细胞癌组织及A431侧群细胞中的表达及意义

    目的 探讨干细胞相关因子三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette transporter 2,ABCG2)在人皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)组织及A431侧群细胞中的表达.方法 培养人A431细胞,流式细胞仪分选侧群细胞,噻唑蓝(MTT)实验比较侧群、非侧群细胞生长的增殖能力,逆转录PCR检测ABCG2在两者中的表达.免疫组化MaxVision法检测人鳞癌组织中ABCG2表达情况.结果 A431细胞系中存在侧群细胞,约占总细胞数的1.1%.侧群细胞具有较强的生长能力以及克隆形成能力,侧群组和非侧群组24孔板内每孔克隆形成数分别为114.8±4.95和44.5±3.67(t=27.92,P<0.01),且侧群细胞ABCG2 mRNA表达量明显高于非侧群细胞(t=5.22,P< 0.01).在人鳞癌组织中存在少量ABCG2阳性细胞,ABCG2蛋白主要表达在细胞胞质和胞膜上.结论 人鳞癌细胞A431中存在具有干细胞特性的侧群细胞,高表达ABCG2.ABCG2可作为鳞癌干细胞的表面标志物之一.

    作者:李泓馨;赵勇;管海宏;林麟 刊期: 2012年第06期

  • 甲磺酸伊马替尼对黑素瘤细胞Hs294T生物学活性的影响

    目的 探讨酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼对黑素瘤细胞Hs294T生物学活性及其Wnt/β-连环蛋白通路的的影响.方法 用甲磺酸伊马替尼作用黑素瘤细胞Hs294T后,用MTT实验、Annexin V-PI双染色法、基质胶侵袭实验分别观察细胞增殖活性、凋亡和侵袭能力的变化.用激光共聚焦显微镜观察细胞中Wnt通路关键性蛋白分子β-连环蛋白定位的改变.用Western印迹和荧光定量PCR分别检测β-连环蛋白,靶基因细胞周期蛋白D1蛋白的表达变化,及通路转录因子LEF1、靶基因C-myc的mRNA表达的变化.结果 4~10 μmol/L浓度药物能使细胞增殖活性呈梯度下降(P<0.05);用10μmol/L药物可使细胞增殖能力呈时间梯度下降(P<0.01);与对照组相比,处理组细胞早期及晚期凋亡比例均明显增加,细胞侵袭能力显著降低约48%(P<0.05),同时β-连环蛋白蛋白表达未见明显变化,但其胞核定位相对减少,LEF1、C-myc、细胞周期蛋白D1的表达均下调.结论 甲磺酸伊马替尼可能通过下调Wnt/β-连环蛋白通路而抑制黑素瘤细胞增殖、促进凋亡并降低侵袭力.

    作者:刘启方;周晓燕;徐玉荣;廖文俊;李承新;高天文 刊期: 2012年第06期

  • 以皮肤假性血管炎为突出表现的SLE一例

    患者女,49岁,因四肢关节疼痛12年、脱发12个月、下肢青斑8个月、疼痛1个月于2010年12月来本院就诊.患者12年前无明显诱因出现四肢关节疼痛,对称性分布,累及大关节,有时有近端指间关节和膝关节肿胀,伴晨僵,约半小时可自行缓解,关节肿痛及晨僵持续时间不超过6周.当地医院考虑类风湿性关节炎,治疗情况不详,关节仍时有疼痛.12个月前出现弥漫性脱发,头皮无油屑.

    作者:陈小建;谢立夏;施辛;陈玲玲;吴文雅;季江;苏玉华;刘秀丽;冷红 刊期: 2012年第06期

  • 乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制剂2在恶性黑素瘤的表达

    目的 探讨乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶2(MMP2)和金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP2)蛋白在恶性黑素瘤皮损中的表达及意义.方法 选择恶性黑素瘤30例、黑素细胞痣30例、正常皮肤组织15例,分别采用免疫组化SP法检测皮损中乙酰肝素酶、MMP2和TIMP2蛋白的表达.结果 恶性黑素瘤皮损乙酰肝素酶蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义(x21=21.172,P<0.01;x22=27.805,P<0.01).恶性黑素瘤皮损MMP2蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义(x21=19.817,P< 0.01;x22=19.866,P< 0.01).恶性黑素瘤皮损TIMP2蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义(x2=19.200,P<0.01;x22=15.000,P<0.01).结论 乙酰肝素酶、MMP2和TIMP2蛋白在恶性黑素瘤中的表达水平明显高于其在黑素细胞痣和正常皮肤中的表达水平.

    作者:陈建立;张江安;于建斌;苏蓓蓓;孟静 刊期: 2012年第06期

  • 药物超敏反应综合征后发生白癜风二例

    药物超敏反应综合征( drug induced hypersensitivity syndrome,DIHS),又称伴嗜酸粒细胞增多和系统症状的药疹(drug rash with eosinophilia and systemic symptoms,DRESS),以发热、遍及全身的带有水肿的弥漫性红斑、嗜酸粒细胞升高和内脏受累特别是肝功能异常为特征,目前认为是由病毒感染[人类疱疹病毒6或7型( HHV6/7)、Epstein Barr病毒(EB)、巨细胞病毒(CMV)等]介导的药物性系统性皮炎,是T淋巴细胞介导的迟发型超敏反应[1].已有DRESS治愈后相隔数月至数年发生自身免疫病的报道.现报道2例DRESS后4~9个月发生泛发型白癜风.

    作者:王松;尉晓冬;许爱娥;袁卫如;施若非;郑捷 刊期: 2012年第06期

  • 特应性皮炎患儿外周血Th17细胞与CD4+CD25+T细胞失衡的研究

    目的 探讨Th17细胞和Treg细胞失衡在特应性皮炎(AD)发病机制中的作用.方法 流式细胞仪检测52例AD患者外周血Th17细胞和Treg细胞的频率、酶联免疫吸附方法(ELISA)检测外周血中细胞因子IL-6、TGF-β1的表达水平.同时以30例性别、年龄匹配的健康体检者作为对照.结果 AD组外周血Th17细胞(CD3+CD8-IL17+)占CD33+细胞的百分比为(1.20±0.41)%,高于对照组的(0.54±0.28)%(f=2.58,P<0.05);Treg(CD4+CD25+)细胞的百分比为(2.29±0.67)%,低于对照组(5.95±0.45)%,(t=15.23,P< 0.01).关键调控因子测定结果:IL-6水平,AD组(5.12±0.45)ng/L高于对照组(3.89±0.38) ng/L,差异具有统计学意义(t=2.59,P<0.05);而TGF-β1的表达水平AD组(57.65±10.78) ng/L低于对照组的(81.18±7.78) ng/L,(t=5.41,P< 0.01).结论 特应性皮炎患儿外周血Th17、Treg细胞水平及其关键的调控平衡因子IL-6、TGF-β1发生变化,其比例的失平衡可能参与特应性皮炎的发病.

    作者:高宇;陈仕胜;马新华;金宛宛;黄嫦嫦;应斌宇 刊期: 2012年第06期

  • 青鹏软膏联合窄谱中波紫外线治疗寻常性银屑病的疗效观察

    窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗银屑病具有疗效好,不良反应小的特点,但也不可避免地对患者造成各种不良反应.青鹏软膏是一种藏药,它由9味传统天然高原药材组方而成,经证实其具有抗炎、抑菌、止痒等作用.我们使用青鹏软膏联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗银屑病,疗效较为满意,现报告如下.

    作者:马海丽;肖传顺;孙乔莉 刊期: 2012年第06期

  • 葡萄球菌烫伤样皮肤综合征177例临床分析

    目的 探讨177例葡萄球菌烫伤样皮肤综合征(SSSS)患儿的诊断和治疗.方法 回顾性研究177例SSSS患儿的临床资料.探讨其年龄和地区分布、发病诱因、临床特征、详细的实验室检查、病原菌分离培养和药敏、治疗方法以及预后情况.结果 本组共177例,发病年龄中位数约为1岁3个月23天,多见于婴幼儿期,男女性别比约为8∶9,71.2%于夏秋季节患病.患儿多来自农村,148例(83.6%)无明确的发病诱因,多起病于颜面部(71.6%).129例检查心肌酶谱104例(80.6%)异常,142例中38.7%分离出金黄色葡萄球菌.对近3年金黄色葡萄球菌药敏试验结果分析显示,头孢菌素类和阿莫西林/棒酸的敏感率分别为95.2%和95.0%.72.9%双联抗生素治疗有效,36.2%患儿早期予以丙种球蛋白,对于心肌酶异常患儿早期给予保护心肌药物,所有患儿痊愈且不留瘢痕.结论 对于出现颜面部的急性红斑和表皮脱屑的婴幼儿应高度怀疑为SSSS,且予以及时的抗生素治疗,头孢菌素类和半合成青霉素复合制剂应是首选有效的药物,同时早期合用丙种球蛋白和保护心肌药物有利于疾病恢复.

    作者:李明勇;魏光辉;邱林;傅跃先;田晓菲;吴清华 刊期: 2012年第06期

  • 白癜风患者白介素-17和转化生长因子-β水平的检测

    目的 探讨白介素-17(IL-17)和转化生长因子-B(TGF-β)与白癜风发病之间的关系.方法 双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA)检测120例白癜风患者和60例健康对照血清中IL-17和TGF-β水平.分析两种因子与白癜风患者性别、病期、病程、白斑面积、家族史的关系.结果 进展期白癜风患者血清IL-17水平显著高于健康对照组和稳定期患者(P值均<0.05),随着白癜风患者白斑面积增大,IL-17水平逐渐升高(x2=12.656,P< 0.05);而进展期白癜风患者血清TGF-β水平也高于健康对照组和稳定期患者,但差异无统计学意义(P值均> 0.05).结论 白癜风患者血清IL-17和TGF-β水平与病情有一定关系,两者可能在白癜风发病中发挥作用.

    作者:卢娜;许爱娥;周妙妮;宋秀祖 刊期: 2012年第06期

  • 梅毒螺旋体重组蛋白Tp0136的表达、纯化及免疫活性分析

    目的 克隆并表达梅毒螺旋体Tp0136基因,对其表达产物进行纯化以及免疫活性分析.方法 全基因合成Tp0136基因,构建E,coli表达载体;诱导表达并纯化重组蛋白,用SDS-PAGE和Western 印迹鉴定.用纯化的重组蛋白Tp0136免疫新西兰兔,并以重组Tp0136作为包被抗原建立间接酶联免疫吸附试验( ELISA)以鉴定其免疫原性,Western印迹检测梅毒阳性血清鉴定其免疫反应性.结果 成功构建E.coli表达载体pET28a-Tp0136,并表达和纯化出膜蛋白Tp0136,相对分子质量为50 000,纯度>95%.用重组蛋白Tp0136免疫新西兰兔,能刺激其产生高滴度抗体,具有较强的免疫原性.Western印迹显示其能与梅毒阳性血清发生特异性反应,具有较好的免疫反应性.结论 成功表达具有Tp0136全基因和较强免疫活性的膜蛋白,Tp0136可能在梅毒螺旋体的免疫致病机制中起到重要作用.

    作者:龙福泉;王千秋;张津萍;龚匡隆 刊期: 2012年第06期

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    目的 探讨外源人乳头瘤病毒16型E6蛋白(HPV16 E6)与人Daxx蛋白(hDaxx)在HeLa细胞内的亚细胞定位及诱导HeLa细胞凋亡的影响.方法 Western印迹法检测融合蛋白DsRed-HPV 16 E6和EGFP-hDaxx的表达.激光共聚焦显微镜观察HPV16 E6和hDaxx的亚细胞定位.将HeLa细胞分为对照组、TNF-α处理组、转染空载体组、转染HPV16 E6组、共转染HPV16 E6和hDaxx组.后4组均经TNF-α诱导.用流式细胞仪测定细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-8与Caspase-3的相对活性.结果 融合蛋白DsRed-HPV16E6和EGFP-hDaxx在细胞内表达并分布于胞质与胞核,出现共定位现象,且部分hDaxx从胞核转移至胞质.转染E6组凋亡率(21.4%±1.1%)低于转染空载体组(27.0%±0.9%,P< 0.01);与转染E6组相比较,共转染组凋亡率(32.5%±2.1%)显著升高(P<0.01).转染E6组Caspase-8和Caspase-3相对活性分别为0.057±0.003、0.054±0.006,均低于空载体组(0.092±0.012、0.093±0.005,均P<0.01);与转染E6组相比较,共转染组Caspase-8和Caspase-3相对活性(0.109±0.013、0.110±0.004)均显著升高(P值均< 0.01).结论 HPV16 E6使部分hDaxx从胞核转位至胞质,二者发生共定位.HPV16E6蛋白可抑制TNF-α诱导的HeLa细胞凋亡,bDaxx高表达可下调HPV16 E6蛋白这种作用.

    作者:陈苏芳;朱翠明;唐双阳;余敏君;粟盛梅;阳帆;万艳平 刊期: 2012年第06期

  • 艾滋病合并嗜酸性脓疱性毛囊炎二例

    例1男,37岁,因全身反复起红斑、丘疹伴痒1年,加重1个月于2011年5月18日就诊.2010年5月始无明显诱因于颜面和双上肢出现片状红斑及米粒大小的丘疹,自觉轻微瘙痒.皮疹逐渐增多,累及躯干、四肢,偶有风团样疹出现,瘙痒加剧.在院外曾诊断为湿疹、荨麻疹等,给予抗过敏等治疗后皮疹可暂时缓解,但停药后仍反复发作.自诉与季节和饮食无明显关系.1个月前,皮疹再次复发加重,表现为以颜面、胸背部、四肢为主的红斑、丘疹,经外院脱敏治疗无明显疗效.

    作者:吕静;刘娟娟;李彦希;郝进 刊期: 2012年第06期

  • 组胺及其受体对角质形成细胞功能的调节作用

    通常认为组胺是一种炎症介质,通过与组胺受体结合影响炎症的形成、疼痛、瘙痒、自身免疫及感染等[1-3].越来越多的研究结果显示,角质形成细胞不仅合成组胺,而且组胺通过角质形成细胞上的组胺受体调节角质形成细胞的功能[4-6].干预组胺与其受体的结合已成为防治多种疾病的手段[7-8].现就组胺及其受体对角质形成细胞功能的调节做一简述,旨在为皮肤病的防治提供参考.

    作者:(蕳)茂强;Peter M.Elias 刊期: 2012年第06期

中华皮肤科杂志

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