汪治宇；李幸；郭晓金；邢联萍；刘雅；单保恩
目的 评价槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞热休克蛋白27(HSP27) mRNA表达和凋亡的影响,初步探讨槲皮素抗前列腺癌的可能作用机制.方法 体外培养人前列腺癌PC-3细胞株,随机分为4组:空白对照组;阴性对照组:给予二甲亚砜(DMSO);高剂量组:给予0.6 mg/mL槲皮素150μL;低剂量组:给予0.3 mg/mL槲皮素150 μL.采用RT-PCR和免疫荧光染色检测PC-3细胞HSP27 mRNA的表达情况;采用TUNEL检测给予槲皮素后PC-3细胞凋亡情况.结果 RT-PCR检测各实验组PC-3细胞的HSP27mRNA表达水平分别为128％、110％、50％和60％,2给药组与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),且呈剂量依赖性.免疫荧光染色结果显示,槲皮素可明显降低HSP27阳性细胞染色强度;TUNEL结果显示,给药组可见大量PC-3细胞凋亡,且呈剂量依赖性,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 槲皮素可抑制HSP27 mRNA的表达和诱导PC-3细胞凋亡,这可能是其抗前列腺癌的机制之一.
作者：于峰；邸彦橙；姜丽丽 刊期： 2014年第08期
目的 建立三乙酰更昔洛韦的高效液相色谱定量分析方法,为企业决定是否回收三乙酰更昔洛韦提供依据.方法 三乙酰更昔洛韦稀释后进高效液相色谱.色谱柱为COSMOSIL 5C18-PAQ Packed Column(4.6 mm×250 mm);流动相为甲醇-水(10∶90);检测波长:255 nm;柱温:25℃.结果 该方法测得回归方程为ΔA=1156C(μg/mL)-262,相关系数r为0.9999.线性范围为1～40 μg/mL,定量限为1μg/mL,精密度RSD为0.6％,重复性RSD为0.2％.母液中浓度为23.2 μg/mL.结论 所建立的HPLC法,简单、准确、灵敏、重复性好.
作者：郝六平；魏转；薛娜；黄文杰；马丽锋 刊期： 2014年第08期
寡核苷酸(oligonucleotides,ONs)是一类大小不超过20个碱基的短链核苷酸,它已用于家族遗传病及癌症的治疗,显示出巨大的应用前景.但寡核苷酸入胞效率低下,严重影响其治疗效果,成为其临床使用的大障碍.细胞膜穿透肽(cell-penetrating peptides,CPPs)是一种能够以既不影响生物活性分子的活性也不会损伤细胞的方式携带货物入胞的运载工具,是非常理想的ONs运载工具.但CPPs的入胞能力参差不齐,需要具体考量选择何种CPPs作为ONs的载体.目前已有各种定性、定量评估CPPs细胞转导能力的策略,其中经典的评价手段是荧光分析法.但鉴于其容易出现假阳性结果的现实情况,特别推荐将其与链接校正ONs相结合进行应用,以更准确的分析CPPs-ONs入胞情况.
作者：李海涛；周华军；田书梅；张晓磷；赵云云 刊期： 2014年第08期
目的 检测前列腺癌PC3细胞中泛素连接酶NEDD4-1 (neural precursor cell expressed developmentally downregulated 4-1,NEDD4-1)对酪氨酸蛋白激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)泛素化作用的研究,探讨NEDD4-1调节前列腺癌PC3细胞侵袭及迁移的机制.方法 采用脂质体瞬时转染法将NEDD4-1质粒转染入前列腺癌PC3细胞中,应用蛋白免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)结合免疫印迹(immunoblotting,IB)法,观察外源的NEDD4-1和TrkA的相互作用;共表达NEDD4-1和ubiquitin,用Co-IP结合IB法检测NEDD4-1对TrkA的泛素化作用;共表达NEDD4-1和ubiquitin的同时,用蛋白酶体抑制剂MG132处理,观察TrkA水平的改变.结果 转染NEDD4-1质粒后,外源性表达的NEDD4-1可与TrkA共沉淀;共表达NEDD4-1和ubiquitin后,NEDD4-1对内源的TrkA有泛素化作用,TrkA能与泛素共沉淀;共表达NEDD4-1和ubiquitin,用蛋白酶体抑制剂MGl32处理后,TrkA的泛素化降解被抑制.结论 在前列腺癌PC3细胞中,TrkA是NEDD4-1的底物之一;NEDD4-1可调节TrkA的泛素化作用,促进其在蛋白酶体降解.
作者：汪治宇；李幸；郭晓金；邢联萍；刘雅；单保恩 刊期： 2014年第08期
目的 针对67 LR设计高效的shRNA干扰质粒研究其对胶质瘤细胞增殖的影响以及对MAPK信号通路的作用,深入探讨67LR蛋白在胶质瘤细胞中的作用.方法 首先对脑胶质瘤细胞系U251进行培养与转染,再进行细胞增殖检测实验,并使用Quantitative real-time PCR测定mRNA的表达量;使用Western blot检测67LR对MAPK信号通路中蛋白的影响.结果 当转染下调67LR蛋白的干扰质粒48 h后,恶性胶质瘤细胞系U251增殖能力显著减弱,与对照组细胞的增殖能力存在显著差异.qRT-PCR结果显示,下调67LR的表达,导致U251细胞中MKPs变化,并且不同类MKPs的变化情况不一致.Western blot实验结果表明在脑胶质瘤细胞U251中,下调67LR的表达,导致磷酸化ERK1/2的表达下降;67LR对PI3 K-mTOR信号通路没有影响.MMP-2是67LR的一个靶基因,在U251细胞系中,MMP-2参与了由67LR介导的信号转导通路.结论 在脑胶质瘤细胞系U251中,下调67LR的表达会引起MMP-2表达的下降,表明MMP-2是67LR的一个靶基因,在U251细胞系中,MMP-2参与了由67LR介导的信号转导通路.
作者：师丽娜；臧峰；尤永平 刊期： 2014年第08期
目的 比较常压蒸制和高压蒸制对酒黄精化学成分的影响,为优选酒黄精的简易炮制方法提供参考依据.方法 采用高效液相色谱法建立黄精及其炮制品的特征图谱,比较黄精生品以及炮制前后化学成分的变化.结果 与黄精生品相比,常压蒸制和高压蒸制酒黄精后,化学成分均发生改变,既有新成分产生,也存在已有成分的消失;常压蒸制与高压蒸制酒黄精品间的化学成分差异明显.结论 酒黄精经蒸制后化学成分发生明显变化;高压酒蒸黄精可达到传统蒸制的要求,且节省时间,操作简单.
作者：王永禄；王丽瑶；朱欣佚；王栋 刊期： 2014年第08期
目的 以介孔硅包覆磁颗粒M-MS 50与SHU-555A对比,标记永生化神经干细胞C17.2.方法 采用了核磁共振,普鲁士蓝染色,流式细胞仪,原子发射光谱,弛豫仪等一系列检测手段,测定细胞对磁颗粒的吞腹量,磁颗粒对细胞毒性的影响,及其在细胞内的代谢情况,选择细胞标记的优条件.结果 在神经干细胞对荧光介孔硅包覆铁氧化物的吞噬行为实验结果来看,随着孵育时间增长,SHU-555A和M-MS 50都更多的被C17.2神经干细胞所吞噬,这表现出细胞标记的时间依赖性.而M-MS 50在较短时间内便可以对细胞有一定的标记率.在标记神经干细胞的MRI和ICP-OES定量分析中可以得出,C17.2神经干细胞对SHU-555A和M-MS 50均表现出浓度依赖性和时间依赖性,SHU-555A和M-MS 50与C17.2细胞孵育,都存在标记率随时间梯度和浓度梯度的增加而提高,直到平衡这一现象.而通过荧光介孔硅包覆铁氧化物细胞内分布和代谢研究,发现随着标记时间的增长和标记浓度的增加,C17.2神经干细胞的标记率逐渐增加;磁颗粒有没有从细胞中代谢出来,并且在培养多长时间之后,细胞对M-MS 50的代谢达到平衡.结论 介孔硅包覆氧化铁纳米颗粒M-MS 50在标记神经干细胞C17.2上相对SHU-555A有较明显的优势,而其多功能,特殊的介孔结构,又为以后进一步利用提供了更广阔的空间.M-MS 50能够有效地缩短周围质子的弛豫时间,提高弛豫信号强度,是一种非常优越的造影剂.
作者：张波；戚利坤；李立新 刊期： 2014年第08期
目的 检测4HPR对膀胱上皮细胞T24细胞表面分子E-Cad表达的影响,研究其是否能通过调节该分子表达从而降低肿瘤细胞的浸润性.方法 培养膀胱上皮细胞T24细胞,利用MTT方法确定合理的药物处理浓度,提取细胞全蛋白、mRNA,分别采用Western blot和RT-PCR检测E-Cad表达.采用免疫荧光试验检测药物处理前后E-Cad表达量的变化及β-Cat表达位置变化.结果 采用10μM的4HPR处理T24细胞48 h后,E-Cad基因mRNA和蛋白较对照组均明显增加;同时β-Cat表达位置也由细胞核转向细胞质,位于细胞膜内侧.结论 4HPR可使T24细胞E-Cad基因表达增加,其可能通过调节E-Cad的表达,实现其降低肿瘤细胞的浸润性,而起到预防、治疗癌症的目的.
作者：严璞；吕强 刊期： 2014年第08期
目的 本文拟采用体外实验,探讨脑细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP 2E1)在尼古丁致神经细胞氧化损伤中的可能作用.方法 实验选用IMR-32人神经母细胞瘤细胞系,设置对照组,尼古丁小剂量组(0.1 nM)、中剂量组(1 nM)和大剂量组(10 nM),并选用中剂量尼古丁加入不同剂量CYP2E1特异性抑制剂二丙烯基硫醚(diallyl sulfide,DAS)(0.025、0.05、0.075 nM).尼古丁或尼古丁与二丙烯基硫醚处理细胞48 h.取处理后细胞,分别检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、CYP2E1mRNA和蛋白水平的变化,并对CYP2E1蛋白表达水平与LDH活力、SOD活力、ROS含量进行相关性分析.结果 与对照组相比,经低、中、高剂量尼古丁处理后,IMR-32细胞增殖受抑制,抑制率分别为39％、47％、52％(均P＜0.05);细胞受到损伤,培养基LDH活力分别升高14％、50％、70％(均P＜0.05);SOD活力下降至对照组的76％、58％、44％(均P＜0.05);细胞CYP2E1蛋白表达水平显著升高至2.19、2.65及2.76倍(均P＜0.05),未见CYP2E1 mRNA水平改变;ROS生成量升高48％、65％、136％(均P＜0.05).与尼古丁(1nm)组相比,加入低、中、高剂量抑制剂后,SOD活力升高24％、47％、52％(均P＜0.05);ROS含量下降至77.8％、57.8％、44.3％(均P＜0.05).相关性分析显示,CYP2E1含量与LDH活力呈正相关,与SOD活力呈负相关,相关系数分别为0.740和-0.584,与ROS含量呈正相关,相关系数为0.695(均P＜0.01).结论 尼古丁处理可抑制IMR-32细胞增殖,诱导脑CYP2E1表达,明显诱导ROS生成,致神经细胞损伤.
作者：党帅；张红梅 刊期： 2014年第08期
目的 研究NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对Jurkat细胞凋亡及基质金属蛋白酶-9(matrx metallo preteinases-9,MMP-9)基因表达的影响,探讨转录因子NF-κB与MMP-9在白血病发生发展及浸润转移过程中的作用及2者之间的关系.方法 取处于对数生长期的Jurkat细胞随机分为6组,包括对照组(培养基中不含PDTC),试验组(培养基中分别含有50、100、150 μmol/L PDTC、1 μg/mL VCR、1μg/mL VCR+ 150μmol/L PDTC);MTT法测定PDTC对Jurkat细胞增殖的抑制作用;使用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测PDTC联合长春新碱(vincristine oncovin,VCR)诱导Jurkat细胞凋亡的情况;使用半定量RT-PCR检测Jurkat细胞中MMP-9基因的表达.结果 不同浓度的PDTC(50、100、150 μmol/L)作用不同时间(12 ～48 h)后对Jurkat细胞的增殖抑制率随PDTC浓度的增高及作用时间的延长而逐渐增加(P＜0.05),但在PDTC处理48 h后,细胞增殖抑制率无明显增加.在不同浓度的PDTC分别处理细胞48 h后,随着PDTC浓度增高,Jurkat细胞凋亡率逐渐增加,各实验组凋亡率显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与单纯VCR组相比,VCR+ PDTC组Jurkat细胞凋亡率显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05),显示PDTC可以增强VCR诱导的Jurkat细胞凋亡作用.不同浓度的PDTC分别处理各组细胞48 h,RT-PCR结果显示各实验组细胞MMP-9基因表达水平与对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 白血病细胞中存在MMP-9基因高表达,导致细胞基底膜及细胞外基质降解,促进了白血病的浸润和转移,并引起化疗耐药,而这一过程可被NF-κB抑制剂PDTC所抑制,为临床上白血病的治疗探索了一条新的途径.
作者：付利；李业成；苏毅；孙浩平；帅燕容；夏焱 刊期： 2014年第08期
目的 探讨基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)在大鼠下颌骨中牵张成骨(distraction osteogenesis,DO)区的表达情况及其作用机制.方法 40只SD大鼠随机分为8组,每组各5只,全部将右侧下颌骨表面皮肤切开,放置下颌骨牵张器,调整塑形并固定.而后将大鼠左侧下颌骨骨折行钛板内固定手术以作对照.随后分别于不同的时间点(0、3、6、9、12、15、18、21 d)将大鼠麻醉处死,解剖大鼠双侧下颌骨后,小心刮取右侧牵张间隙骨痂及左侧骨折处骨痂进行免疫组织化学检测和酶联免疫吸附测定.结果 40只大鼠伤口均愈合正常,手术耐受性良好.免疫组化染色结果显示:SDF-1在成骨细胞和微血管周围表达较多,且在DO的新生骨痂中的表达较骨折处骨痂中的表达明显升高.酶联免疫吸附检测结果显示:无论在DO区或是骨折区,SDF-1术后3d的表达量增加了3倍,术后1周后,SDF-1在骨折区的表达情况呈逐渐下降趋势,在DO区的表达在进入牵张期内其再次上升,高达原有水平的5倍,牵张结束后缓缓下降,SDF-1在2区的表达情况比较分别在9、12、15d天有统计学差异(P＜0.05).结论 SDF-1在牵张成骨区和骨折区的表达差异明显,为日后研究SDF-1在牵张成骨中的表达及作用机制奠定了理论基础.
作者：周恩瑜；李天泉；李保康；邬玉林；刘亮；屈依丽 刊期： 2014年第08期
目的 研究蛋白激酶Cα相互作用蛋白1(protein interacting with Cαkinase 1,PICK1)抑制剂FSC231的镇痛作用,为开发可用于临床疼痛治疗的PICK1抑制剂提供依据.方法 选用40只昆明种小鼠分别于右后掌皮下注射1.4％醋酸溶液、腹腔注射0.6％醋酸溶液制备醋酸致痛模型、左侧足趾注射20 μL完全弗氏佐剂(CFA)溶液制备炎症性疼痛模型,左后足趾注射辣椒素溶液制备神经源性疼痛模型.将以上实验动物随机分为4组:对照组和FSC231 3个剂量给药组,每组10只.FSC231 3个剂量给药组分别于造模成功后腹腔注射FSC231 7.83、39.20、78.40 μg/kg,给药1次.对照组动物注射等体积的生理盐水.给药1h后,分别测定小鼠后掌抬腿次数、抑制率、小鼠扭体反应次数、潜伏期、小鼠热痛阈值、脚爪肿胀体积,热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)和机械痛阈值.结果 与对照组比较,FSC231可剂量依赖性(7.83 ～78.40)μg/kg减少小鼠5 min内抬腿次数和6～ 10 min内抬腿次数,6～10 min内抑制率分别为18.74％、32.59％和45.52％;与对照组比,不同剂量FSC231均可一定程度延长小鼠的致痛潜伏期,但仅高剂量组小鼠的镇痛潜伏期有显著增加(P＜0.05);FSC231可剂量依赖性(7.83～78.40) μg/kg减少小鼠的扭体反应次数,其中以高剂量组的作用为显著(P＜0.01).左侧足趾注射完全弗氏佐剂(CFA)溶液后,小鼠出现舔患足,且患足出现红、肿等现象,表明成功制备了小鼠慢性炎性疼痛模型.给予不同剂量的FSC231后,给药组基础痛阈值较对照组显著升高(P＜0.05),但后肢足肿胀体积显著增加(P＜0.05).小鼠左后足趾注射辣椒素后其热缩足反射潜伏期(TWL)和机械痛阈值明显降低,表明成功制备神经病理性疼痛模型.FSC231可剂量依赖性(7.83～78.40μg/kg)升高TWL及机械痛阈值(P＜0.05,P＜0.01).结论 PICK1抑制剂FSC231对化学刺激性疼痛、炎症性疼痛以及神经源性疼痛均具有明显镇痛作用,表明PICK1可作为镇痛作用的新靶点,而PICK1抑制剂FSC231可作为镇痛作用的候选药物.
作者：李铁军；郭小文 刊期： 2014年第08期
目的 本论文以多核螯合Pt(Ⅱ)抗肿瘤金属配合物为中心,重点开展了三氮螯合单功能三核铂(Ⅱ)配合物的DNA结合及其抗肿瘤活性的研究工作.方法 将30 μM配合物[Pt3L1 Cl3] Cl3(Ⅰ)与0.09 mM的5'-GMP溶解在水中,37℃条件下孵化24h,当反应进行到2h和24h时,取出反应液,利用电喷雾质谱方法检测反应产物;配制不同浓度比rb(drug-to-nucleotide ratio)的配合物[Pt3 L2Cl3] Cl3 (Ⅰ)和配合物[Pt3L103] 03(Ⅱ)与pUC19质粒DNA(200 ng)的反应液,37℃下避光孵化12 h,然后在1×TAE buffer(40 mMTris acetate,1 mM EDTA)中,用1％琼脂糖凝胶电泳分析其在电泳中的迁移情况;配合物[Ph L1 Cl3] Cl3 (Ⅰ)和Ⅱ的体外细胞毒活性用白血病细胞株(HL-60)、肺癌细胞株(A-549)和肝癌细胞株(BEL-7402)进行测试.结果 电喷雾质谱方法检测反应产物时配合物[Pt3L1Cl3] Cl3(Ⅰ)极易与5'-GMP快速反应,形成单加合物、双加合物以及三加合物,表明Ⅰ与5'-GMP较强的结合能力;凝胶电泳实验中测定的配合物[Pt3L1Cl3] Cl3 (Ⅰ)、Ⅱ的rb值分别为0.099和0.66,配合物[Pt3L1 Cl3]Cl3(Ⅰ)使DNA完全解旋所需浓度大大低于配合物[Pt3L2Cl3]Cl3(Ⅱ);体外细胞毒活性测试,从测试结果来看,配合物[Pt3L2Cl3] Cl3(Ⅱ)在浓度10-4 M保持了较高的抗肿瘤活性,但是在10-5～10-8 M范围内,Ⅰ、Ⅱ和顺铂对此细胞株几乎全无毒性,抑制率全部低于40％.结论 三氮螯合单功能三核铂(Ⅱ)配合物的DNA结合对提高药物在生物内的稳定性和降低不良反应有利.
作者：黄晶；洪鸣 刊期： 2014年第08期
目的 观察经Tat多肽,适配体TTA1,聚乙二醇(PEG)联合修饰的新型纳米载体明胶硅氧烷纳米粒子(gelatin-siloxane nanoparticles,GS NPs)跨血脑屏障及靶向到达胶质瘤的能力.方法 通过两步溶胶-凝胶法合成GS NPs,然后在其表面依次修饰上PEG、TTA1、Tat,并以荧光染料Cy5.5-NHS标记.建立胶质瘤裸鼠原位模型20～25只,分为空白对照组,GS NPs组,PEG-GS NPs组,TTA1-PEG-GS NPs组,Tat-TTAl-PEG-GS NPs组.尾静脉注射各种修饰的纳米粒子,观察其在大鼠体内分布情况;将裸鼠处死后取脑、肝、脾,观察纳米粒子在各器官的分布.结果 活体成像及统计分析结果显示TTA1-Tat-PEG-GS NPs在脑部的荧光强于Tat-PEG-GSNPs、PEG-GS NPs、GS NPs组,且在肿瘤部位的荧光强于脑内其他部位,而在肝脏脾脏的荧光弱于其他3组.结论 TTA1-Tat-PEG-GSNPs能够逃逸内皮网状吞噬系统(reticuloe endothelin system,RES)的吞噬,还能跨过血脑屏障,而且对胶质瘤具有靶向性,是一种潜在的胶质瘤治疗基因及药物的靶向载体.
作者：张龙；胡洋；林晓宁；魏峰；丰伟；田新华 刊期： 2014年第08期
目的 观察顺铂对子宫内膜异位症大鼠模型血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)以及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响.方法 采用自体子宫移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型,将行假手术的大鼠作为正常对照标准,将建模成功的大鼠随机分为模型组、治疗组与对照组,观察异位病灶的形态特点,在光镜下分析治疗组治疗前后的病理特点,检测不同方法处理后异位病灶腹腔液中VEGF、TNF-α的浓度变化.结果 治疗组治疗后异位病灶的上皮细胞明显变薄,间质细胞和腺体明显减少,腺体样结构增大;模型组异位病灶腹腔液VEGF、TNF-α的浓度显著高于假手术组,且具有显著性差异(P＜0.05);治疗组异位病灶腹腔液VEGF、TNF-α的浓度显著低于模型组,且有显著性差异(P＜0.05).结论 子宫内膜异位症大鼠注射顺铂后,异位病灶腹腔液中VEGF、TNF-α的浓度明显降低,异位病灶中炎症细胞被抑制生长,异位病灶腹腔的微环境得到改善.
作者：肖丽；李坤 刊期： 2014年第08期
目的 研究香菇多糖对5-FU抑制胃癌细胞增殖的影响及可能机制.方法 体外培养AGS胃癌细胞,分为CON组(未加入香菇多糖和5-FU)、LEN组(仅香菇多糖培养)、FNM组(仅5-FU培养)和L+F组(香菇多糖和5-FU培养),比较4组细胞增殖、细胞周期、增殖指数(proliferation index,PI)、凋亡率、多重耐药基因(multidrug resistance 1,MDR1)和多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated proteins,MRP)表达的差异.结果 LEN组和CON组D1～D7吸光值的差异无统计学意义,但均显著高于FNM组和L+F组吸光值(P＜0.05),且L+F组细胞D1 ～D7的吸光值均显著低于FNM组(P＜0.05).CON组和LEN组AGS胃癌细胞G0/G1期和凋亡率均显著低于FMN组和L+F组(P＜0.05),S期和G2/M期均显著高于FMN组和L+F组(P＜0.05);L+F组AGS胃癌细胞G0/G1期和凋亡率均显著高于FNM组(均P＜0.05),S期和G2/M期低于FNM组(均P＜0.05).CON组和FNM组AGS胃癌细胞MDR1和MRP表达均显著高于LEN组和L+F组(P＜0.05);L+F组MDR1和MRP表达均显著低于LEN组(P＜0.05).结论 香菇多糖可显著增强5-FU对AGS细胞增殖的抑制作用,其作用机制可能与降低耐药基因MDR1和MRP表达有关.
作者：关秀文；韦炳邓；杨军；杜寒松；张万里；牛彦锋 刊期： 2014年第08期
目的 探究干扰素-λ(interferon-λ,INF-λ)对肥大细胞Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)表达和细胞因子分泌的调节作用.方法 采用干扰素-λ激发肥大细胞P815,收集激发后2、6、16h不同时间点的细胞及其上清液.采用MTT方法检测不同时间点干扰素-λ对肥大细胞P815的细胞活力的影响;采用酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞因子IL-4和IL-13的释放量;通过Western blot方法检测干扰素-λ对肥大细胞Toll样受体TLR2和TLR4蛋白表达的影响.结果 MTT实验结果表明,不同时间的干扰素-λ对肥大细胞P815的细胞活力均无显著性差异;ELISA结果表明,干扰素-λ能刺激肥大细胞P815释放IL-4和IL-13细胞因子,并且其释放量与空白对照组具有显著性差异(P＜0.01);Western blot实验表明,与空白对照组相比,干扰素-λ激发肥大细胞P815后,不同时间点的给药组均可上调TLR2和TLR4蛋白的表达.当给药时间为16h时,其TLR2和TLR4蛋白的表达具有显著性上调(P＜0.01).结论 干扰素-λ刺激肥大细胞P815释放IL-4和IL-13细胞因子可能是通过上调Toll样受体TLR2和TLR4蛋白的表达.
作者：兰亚明；何韶衡 刊期： 2014年第08期
目的 将EPO dimer分别连接牛血清蛋白(bovine serum alumin,BSA)、匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)、卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)几个不同的载体蛋白构成抗原,免疫BALB/c小鼠,并结合特定的ELISA检测系统,来优化选择抗EPO dimer单克隆抗体.方法 采用单克隆抗体制备技术筛选获得杂交瘤细胞;EHSA法鉴定杂交瘤细胞的特性;分析比较不同载体蛋白构建单克隆抗体的差异与效果.结果 共筛选获得了5株杂交瘤细胞,5株杂交瘤细胞均能分泌EPO dimer抗体.经过进一步的特异性鉴定、亚型鉴定以及效价鉴定后,有4株杂交瘤细胞被挑选进行大量抗体制备,为后期临床基础实验提供材料.4株杂交瘤分别为克隆S-18-2,其亚型为IgG2b,κ;克隆S-369-7,其亚型为IgG1,κ;克隆S-410-3,其亚型为IgG1,κ;克隆S-514-7,其亚型为IgG2b,κ;其中克隆S-18-2、S-514-7分泌抗体EPO dimer的能力稳定,其抗体对载体蛋白OVA、KLH、BSA均无效价,且它们抗原抗体反应只针对EPO dimer;克隆S-369-7、S-410-3分泌抗体EPO dimer的能力也很稳定,对载体蛋白OVA、KLH、BSA也均无效价,尤其其抗原抗体反应可以同时针对EPO dimer以及EPO dimer-PEG,即本实验获得的这2株杂交瘤细胞分泌的抗体既可检测EPO dimer又可检测EPO dimer-PEG.比较连接BSA、OVA、KLH这几个不同载体蛋白构建单克隆抗体的差异与效果,发现以EPO dimer连接载体蛋白OVA获得的单克隆抗体效果佳.结论 本实验用偶联载体的方法增强了小分子EPO dimer的免疫原性,得到了稳定分泌EPOdimer抗体的杂交瘤细胞.
作者：邱贞琴；邰秀珍 刊期： 2014年第08期
目的 建立高效阳离子色谱法测定盐酸考来维仑片中有机胺杂质含量的方法.方法 采用高效阳离子交换色谱对盐酸考来维仑片中有机胺杂质进行定量研究,对该方法进行线性范围、检测限的确定以及准确度、精密度验证,并进行初步应用.结果 该方法可以在33 min内,同时定量测定癸胺(decylamine)、杂质A(aminoquat)、杂质B(aminodihexylquat)和杂质C(decylaminoquat)4种有机胺类杂质.各个杂质在6.32～ 58.52 μg/mL范围内线性关系良好,回归方程的线性相关系数均大于0.9978.盐酸考来维仑片中测定有机胺杂质的回收率为102.9％ ～114.6％,RSD为1.8％～2.4％(n=9).结论 该方法简单、快速、准确,可用于盐酸考来维仑片中有机胺杂质的测定.
作者：张伟；任连杰；周长明；吕雯；韩春霞 刊期： 2014年第08期
目的 研究大麻素受体2(type 2 cannabinoid receptor,CB2受体)对肥胖小鼠体质量、血甘油三酯(triglyceride,TG)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)的影响.方法 20只雄性小鼠随机分为正常组(N组,n=4)、肥胖组(n=16),分别给予普通饲料和高脂饲料喂养6周,成功制作肥胖小鼠模型.再将肥胖组小鼠随机分为4组:模型组(S组,n=4)、CB2激动剂JWH-133干预组(J组,n=4)、CB2拮抗剂AM-630干预组(A组,n=4)、JWH-133+ AM-630干预组(AJ组,n=4).N组、S组腹腔内注射生理盐水,10 mg/kg,1次/天,共28 d;J、A、AJ组分别腹腔内注射JWH-133、AM-630、JWH-133+AM-630,10 mg/kg,1次/天,共28 d.药物干预前后测定小鼠的体质量、血TG、TNF-α、MCP-1水平.结果 给药第4周J组小鼠体质量、血TG、TNF-α、MCP-1水平均显著高于S组,A组上述指标均显著低于S组(P＜0.05),AJ组指标与S组对比差异无统计学意义.结论 CB2受体在肥胖发病机制中起重要作用.激活CB2受体会增加肥胖小鼠体质量、血TG、TNF-α、MCP-1水平,抑制CB2受体会减低肥胖小鼠体质量、血TG、TNF-α、MCP-1水平.
作者：陈彦；陈刚；余惠珍；吴冰；许桂平 刊期： 2014年第08期
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