桂治府；邓龙颖；王建平；沈历宗；吴文溪
目的:观察腺病毒介导胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)转染小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)的表达情况及Exendin-4/GLP- 1R系统对BM-MSCs细胞增殖及凋亡的影响.方法:利用Ad.Max系统构建含GLP-1R基因的腺病毒表达载体Ad.GLP-1R,感染小鼠BM-MSCs.采用RT-PCR、Western blot和免疫荧光方法检测GLP-1R的表达情况.用Exendin-4刺激感染Ad.GLP- 1R的BM-MSCs,通过细胞计数和流式细胞术检测细胞生长曲线、细胞周期及细胞凋亡的变化.结果:腺病毒对小鼠BM-MSCs有较高的感染效率,病毒感染复数(MOI)为400时,感染率高达89.5％.BM-MSCs不表达GLP-1R,感染Ad.GLP- 1R后有效表达GLP-1R基因和蛋白.Ad.GLP-1R感染BM-MSCs后,Exendin-4刺激组细胞生长曲线显著高于未刺激组(P＜ 0.05).细胞周期检测结果显示,刺激组G0/G1期细胞数显著下降、G2/M期细胞数明显升高,增殖指数(S+G2/M)亦显著增加(P均＜ 0.01).而细胞凋亡率无明显变化.结论:Ad.GLP-1R可以有效感染BM-MSCs,获得高表达GLP-1R的BM-MSCs.Exendin-4可以促进Ad.GLP- 1R感染的BM-MSCs增殖.
作者：张勤凤；朱剑；徐宽枫；陈恒；杨涛；武晓泓 刊期： 2012年第03期
目的:探讨牛磺熊脱氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)对棕榈酸(palmitate)诱导的INS-1细胞凋亡的保护作用.方法:分别用不同浓度棕榈酸(0.25、0.50、1.00 mmol/L)、棕榈酸(0.50 mmol/L)加TUDCA( 100 μmol/L)培养INS-1细胞24h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞早期凋亡,Western blot检测内质网应激相关蛋白GRP78的表达.结果:与对照组相比,棕榈酸组(浓度≥0.5 mmol/L)的INS-1细胞凋亡率显著上升(P＜0.05)；加TUDCA培养24h以后,与棕榈酸组相比,INS-1细胞凋亡率显著下降(P＜0.05).此外,棕榈酸组(0.5 mmol/L)INS-1细胞内质网应激相关蛋白GRP78的表达显著上升(P＜0.05)；加TUDCA培养24h以后,与棕榈酸组相比,INS-1细胞GRP78蛋白表达显著下降(P＜0.05).结论:TUDCA能够减少游离脂肪酸引起的INS-1细胞凋亡,对INS-1细胞发挥保护作用.而减少内质网应激蛋白的表达,缓解内质网应激可能是其作用机制之一.
作者：钟继娟；祝群；缪珩 刊期： 2012年第03期
目的:评估尿沉淀细胞TWIST1基因启动子甲基化状态在膀胱癌诊断中的价值.方法:用实时荧光定量PCR的方法,对50例临床确诊的膀胱癌患者、13例非肿瘤性尿路疾病患者、7例健康志愿者检测了尿沉淀细胞TWIST1基因启动子的甲基化状态;同时行尿脱落细胞学检查.结果:50例膀胱癌患者中尿脱落细胞TWIST1基因启动子甲基化阳性率为64.0％(32/50),对照组均未发现甲基化改变,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).TWIST1基因启动子甲基化率有随组织分期升高的趋势,但在不同分级、分期膀胱癌中的差异无显著性.实时荧光定量PCR法检测尿液中TWIST1基因启动子甲基化的敏感性和特异性分别为64.0％、100.0％.而尿脱落细胞学检查阳性率为48.0％( 24/50),其敏感性和特异性分别为48.0％和100.0％.结论:尿脱落细胞TWIST1基因启动子的甲基化检测诊断膀胱癌敏感性和特异性均较高,且无创、无痛苦,可作为早期诊断膀胱癌的敏感指标.
作者：陆明；钱麟；潘彬；陈建刚；赵枰 刊期： 2012年第03期
目的:立体选择性地合成(s)-2,4,6-三甲基苯丙氨酸.方法:2.4,6-三甲基苯甲酸还原生成2,4,6-三甲基苯甲醇(1),再溴化生成2,4,6-三甲基溴苄(2),所得溴苄和(S)-BPB-Ni-Gly络合物(3)缩合,经分离立体选择性地得到(S)-Tmp-BPB-Ni络合物(4),(4)经酸解得到(S)-2,4,6-三甲基苯丙氨酸(5).结果:以52.8％的总收率立体选择性地合成得到(S)-2,4,6-三甲基苯丙氨酸.结论:本合成方法原料廉价易得、操作简单、反应收率高.
作者：李晓闻；郁蕾蕾；刘金春；陈佳佳；常磊；厉廷有 刊期： 2012年第03期
目的:探讨水通道蛋白4 (aquaporin-4,AQP4)对人结肠腺癌细胞增殖、迁移的影响.方法:以血管内皮生长因子(VEGF)与AQP4-siRNA分别上调或下调人结肠癌细胞株LoVo细胞AQP4表达,Western blot检测AQP4表达变化；以细胞划痕试验及CCK-8增殖试验分别检测细胞迁移及增殖能力.结果:VEGF可上调LoVo细胞中AQP4的表达,且呈浓度和时间依赖性；VEGF促进LoVo细胞迁移.AQP4-siRNA干扰下调AQP4后细胞迁移能力明显下降；与VEGF处理组比较,AQP4-siRNA与VEGF联合处理后LoVo细胞迁移能力下降.单独应用VEGF或AQP4-siRNA对细胞增殖能力无明显影响.结论:AQP4对人结肠腺癌细胞迁移能力具有促进作用,提示AQP4可能是结肠癌侵润、转移的重要因素之一.
作者：桂治府；邓龙颖；王建平；沈历宗；吴文溪 刊期： 2012年第03期
目的:采用经济、可靠的方法合成2,6-二甲基-L-酪氨酸.方法:通过O-乙氧甲酰基-3,5-二甲基-4-氯甲基苯酚和(S)-2-[N-(苄基脯氨酰基)-氨基]-二苯甲酮-Ni-甘氨酸[(S)-BPB-Ni-Gly,手性Ni络合物]络合物缩合的方法立体选择性地合成2.6-二甲基-L-酪氨酸.结果:由3,5-二甲基苯酚出发经4步反应得到2,6-二甲基-L-酪氨酸,总收率34.3％.结论:该法具有原料廉价易得、反应条件温和、可重复的特点.
作者：郁蕾蕾；陈佳佳；刘金春；李晓闻；常磊；厉廷有 刊期： 2012年第03期
目的:研究汉防己甲素(tetrandrine,TET)联合化疗药物紫杉醇(paclitaxel,PTX)对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:MKN-45细胞常规培养于RPMI-1640培养液中,细胞长至亚单层后加TET和(或)PTX,连续培养48 h.四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分析细胞增殖情况,DAPI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:TET和PTX单药或联合均呈剂量依赖性地抑制MKN-45细胞增殖,两药联合时IC50较两药单用时显著降低(P＜0.05).DAPI染色和流式细胞仪显示TET和PTX联合用药组细胞凋亡率显著高于单药组(P＜0.05).结论:TET联合PTX对胃癌细胞的增殖抑制及凋亡诱导有良好的协同效应.
作者：郑锡凤；李晓林；何晓璞；徐伟；唐丹；张皓；孙为豪 刊期： 2012年第03期
目的:对雷帕霉素诱导黑素瘤细胞发生自噬的过程进行观察,并初步探讨其可能的机制.方法:不同浓度雷帕霉素(10、50、100 nmol/L)处理黑素瘤细胞M14,采用MDC荧光染色检测自噬囊泡；免疫细胞化学法检测自噬蛋白LC3B的表达；透射电子显微镜观察黑素瘤细胞超微结构的变化；Western blot检测细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达；采用罗丹明123染色(Rhodamine 123)流式细胞术检测线粒体膜电位的变化；MTT比色法检测雷帕霉素对M14细胞增殖的抑制作用.结果:经不同浓度的雷帕霉素处理后,MDC阳性细胞数增多,M14细胞发生自噬；自噬蛋白LC3B的表达增强；自噬水平随雷帕霉素浓度的升高而逐渐增强.透射电子显微镜观察可见M14细胞质内有大量独立双层膜结构、线粒体肿胀并出现自噬体、自噬溶酶体.Western blot结果显示雷帕霉素可以下调M14细胞中的凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,同时上调凋亡诱导蛋白Bax的表达.雷帕霉素可引起M14细胞的线粒体膜电位下降,与对照组相比差异显著(P＜0.05).10～100 nmol/L的雷帕霉素明显抑制黑素瘤细胞M14的增殖,该作用呈剂量依赖性,随着药物浓度的升高,抑制率增加,与空白对照组比较均有显著性差异(P＜0.0l).结论:10～100 nmol/I的雷帕霉素可诱导黑素瘤细胞发生自噬,抑制细胞的生长.其机制可能与蛋白Bcl-2和Bax表达水平有关.
作者：沈景刚；周梅华；李雪；吴迪；鲁严 刊期： 2012年第03期
目的:构建系统表达S100A16基因型小鼠,为研究S100A16基因的生物学功能提供模型动物.方法:将S100A16cDNA插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射方法建立转基因小鼠.PCR鉴定转基因小鼠的基因型,采用定量PCR(QPCR)方法筛选高表达品系.结果:成功构建S100A16转基因载体,建立了S100A16转基因小鼠,通过PCR及QPCR方法筛选出两个高表达品系(line A,line B).结论:建立了系统表达S100A16的转基因小鼠,转入的S100A16基因在脂肪、肝脏、肌肉、肺等组织高表达,为研究S100A16的生物学功能特别是在肥胖中的作用及机制提供了动物模型.
作者：杜新丽；薛一；张媛媛；张日华；刘云 刊期： 2012年第03期
目的:观察完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)诱导炎症性疼痛的现象,并探究背根神经节(DRG)部位注射神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)抑制剂7-硝基吲唑(7-nitroindazole,7-NI)对于炎症性疼痛是否有镇痛作用并简要探讨其镇痛机制.方法:小鼠足底注射10 μl CFA诱导炎症性疼痛动物模型,使用von Frey纤维丝采用up-and-down的方法测定小鼠的50％足底回缩阈值(50％ paw withdrawal threshold,50％PWT)作为痛觉行为学的评价指标.在小鼠的背根神经节部位微量注射10 μg 7-NI观察50％PWT的变化情况.用免疫印迹的方法观察炎症相关的降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)在CFA诱导模型后、造模后给予7-NI和nNOS基因敲除小鼠造模后的表达情况.结果:与DMSO组相比,7-NI组造模后2～12 h 50％PWT显著升高.观察到CGRP的表达量在CFA诱导后增加,而在给予7-NI和nNOS基因敲除组内CGRP的表达增加可以被逆转.结论:小鼠DRG部位注射7-NI对炎症性疼痛具有镇痛作用,且炎症性疼痛中CGRP表达量的增加可能是一氧化氮(nitric oxide,NO)在DRG内起疼痛敏感性作用的下游机制.
作者：孙伟翔；徐海兵；朱东亚 刊期： 2012年第03期
目的:观察耐吉西他滨胰腺癌细胞株(SW1990/GZ)上皮间质转化的现象.方法:倒置显微镜下观察亲代SW1990细胞与SW1990/GZ细胞的形态差别;流式细胞仪检测细胞周期；免疫印迹法(Western blot)检测上皮间质转化相关蛋白表达；Transwell小室测定细胞侵袭迁移能力；通过表面特异抗原(CD44+、CD24+和CD133+)标记流式细胞仪检测肿瘤干细胞比例.结果:在形态学上,SW1990/GZ表现出明显的间质细胞特征,与亲代SW1990相比处于G1期的细胞无明显差异；SW 1990/GZ细胞低表达上皮细胞标志物E-cadherin,而高表达间质细胞的标记物Vimentin; SW1990/GZ细胞侵袭和迁移能力明显增强(P＜0.01)；与亲代细胞SW1990相比,SW1990/GZ细胞中CD44+CD24+细胞比例以及CD133+细胞比例分别提高了2倍和4倍以上(P＜0.01).结论:SW1990耐吉西他滨细胞株(SW1990/GZ)发生了明显的上皮间质转化过程,肿瘤干细胞比例明显增多.
作者：王辉；张烨；吴峻立；徐泽宽；苗毅 刊期： 2012年第03期
目的:探讨高糖诱导胰岛微血管内皮细胞株MS-1凋亡及其可能机制.方法:体外培养MS-1细胞,用含有不同浓度葡萄糖(5.6、25.0和33.6 mmol/L)的培养液分组培养12、24h.流式细胞术分析各组细胞凋亡率变化；四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖率变化；RT-PCR分析GRP78、CHOP、caspase-3、caspase- 12 mRNA表达变化情况；Western blot分析GRP78、CHOP蛋白表达变化情况.结果:与5.6 mmol/L组相比,培养12 h及24h后,25.0和33.6 mmol/L组MS-1细胞凋亡率显著增加(P＜0.05);而细胞增殖率显著下降(P＜0.05),且呈浓度和时间依赖性.进一步研究表明,在高糖刺激12 h及24h后,caspase-3、caspase-12 mRNA表达显著上调(P＜0.05),CHOP mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P＜0.05)；而GRP78 mRNA和蛋白表达水平在刺激12 h后显著上调,24h后却显著下降(P＜0.05).结论:高糖可以促进胰岛内皮细胞凋亡增加,并呈浓度和时间依赖性升高,其机制可能与启动胰岛内皮细胞内质网应激有关.
作者：刘璇；徐宽枫；陈恒；许馨予；杨涛 刊期： 2012年第03期
目的:合成神经元型一氧化氮合成酶-谷氨酸能突触后致密度蛋白-95 (neuronal nitric oxide synthase with postsynaptic density protein-95,nNOS-PSD-95)解偶联剂2-[(1H-苯并[d][1,2,3]三氮唑-5-胺基)甲基]-4,6-二氯苯酚.方法:以4-硝基-1,2-苯二胺为原料,经重氮化反应和还原反应后得到5-氨基-1H-苯并[d][1,2,3]三氮唑.5-氨基-1H-苯并[d][1,2,3]三氮唑和3,5-二氯水杨醛缩合形成亚胺,经还原制得目标化合物.结果:目标物结构经核磁共振氢谱(1H-NMR)和核磁共振碳谱(13C-NMR)确证,收率20.3％.结论:该合成方案能简便快速地合成2-[(1H-苯并[d][1,2,3]三氮唑-5-胺基)甲基]-4,6-二氯苯酚.
作者：王凤亮；马腾；许贯虹；张宏娟；王秀珍；李飞 刊期： 2012年第03期
目的:探讨64层螺旋CT血管成像(CTA)在肠系膜上动脉(SMA)夹层诊断中的应用价值.方法:回顾性分析15例经64层螺旋CT证实SMA夹层患者的临床及影像资料,结合横断位图像及后处理重建图像,分析总结SMA夹层的影像学特征.结果:64层螺旋CTA的典型表现为:动脉期SMA弧形充缺损影,与主动脉夹层的真假腔类似,真腔变细,呈线样改变,假腔扩大,挤压真腔；9例可清晰显示内膜片,12例患者假腔在动脉期呈低密度影,3例患者假腔呈瘤样扩张,动脉期呈高密度影,1例假腔不规则强化,考虑假腔内伴血栓形成;后处理图像亦可清楚显示夹层累及范围及侧枝情况.结论:64层螺旋CTA及后处理技术能够无创、快速、准确的显示SMA夹层,为SMA夹层的病情评估提供可靠信息,对及时采取相应的治疗措施、降低肠缺血、坏死的发生率具有重要的临床意义.
作者：林林；江泓；谈旭东 刊期： 2012年第03期
目的:研究碳酸锂、强的松应用对甲状腺功能亢进症(甲亢)患者131I治疗剂量和疗效的影响.方法:75例甲亢患者随机分为3组:对照组25例,患者仅接受131I治疗；碳酸锂组25例,患者接受131I治疗的同时口服碳酸锂0.75 g/d(从治疗前3d至治疗后7 d);强的松组25例,患者接受131I治疗的同时口服强的松1 mg/(kg·d),后以每周5 mg逐渐减量至停用.治疗过程中根据甲状腺重量计算治疗需要的131I剂量,6个月后观察患者的治疗效果.结果:与对照组相比,碳酸锂组患者131I剂量明显减少(P＜0.05),但治疗效果无明显改善(P＞0.05)；与对照组相比,强的松组患者131I治疗量有所升高,但无统计学差异(P＞0.05),而疗效却明显增加(P＜0.05).结论:碳酸锂可以减少甲亢患者131I治疗的剂量,但对治疗效果无改善作用；强的松对131I治疗剂量无显著影响,但可以增加131I治疗甲亢的疗效.
作者：胡长军；张红；陆卫平 刊期： 2012年第03期
目的:总结主动脉窦瘤的临床特点和外科手术治疗方法.方法:82例主动脉窦瘤破裂患者均于体外循环下行主动脉窦瘤修补术.其中右冠窦破入右室48例,右冠窦破入右房16例,无冠窦破入右房18例.本组包括室间隔缺损39例,主动脉瓣关闭不全23例.除修补窦瘤外,同时行室间隔缺损修补术39例,主动脉瓣置换术5例,主动脉瓣成形术16例,右心室流出道疏通术5例,二尖瓣置换术1例,三尖瓣成形术8例,肺动脉瓣穿孔修补1例,主动脉瓣下狭窄切除1例.结果:本组患者全部治愈出院.术后1例因残余分流行二次手术矫治,术后主动脉瓣中度反流再次成型术1例,轻度主动脉瓣关闭不全4例,微量残余分流2例.随访患者无死亡,手术治疗效果良好,心功能改善明显.结论:主动脉窦瘤破裂明确诊断即为手术指征.应尽早手术,采取适当、有效的手术方法,疗效满意.
作者：李倩；刘林力；陈立华；于丁；马千里；刘苏 刊期： 2012年第03期
目的:探讨线粒体ATP敏感性钾通道开放剂(mitoKATPCO)尼可地尔(nicorandil)对大鼠低氧性肺动脉高压的影响.方法:将40只大鼠随机分成对照组(C组)、低氧组(H组)、低氧+尼可地尔组(N组)与低氧+尼可地尔+5-羟基葵酸盐组(HD组),后3组置于常压低氧仓内,每周6d,每天8h,持续4周后测定各组大鼠平均肺动脉压(mPAP),右心肥厚指数RV/(V+S),HE染色观察肺小动脉血管壁的病理变化并检测增殖相关抗原(PCNA).结果:慢性缺氧可诱导大鼠mPAP及RV/(LV+S)升高,大鼠肺小血管增厚重构,PCNA表达增加,尼可地尔可显著抑制上述变化,且该效应可被线粒体KATP(mitoKATP)通道特异性阻断剂5-羟基葵酸盐阻断.结论:尼可地尔通过开放mitoKATP通道降低肺动脉压,拮抗右心肥厚,并抑制肺血管增殖重构,治疗低氧性肺高压.
作者：俞砚喆；解卫平；左祥荣；王嫱；王虹 刊期： 2012年第03期
目的:观察D-松醇对慢性哮喘小鼠模型转化生长因子(TGF-β1)的影响.方法:18只BALB/c小鼠按随机原则分成正常对照组、哮喘模型组、D-松醇干预组,每组6只,末次抗原激发24h后,检测各组小鼠的肺功能,HE染色观察气道炎症变化;Masson三色染色观察气道纤维化的改变；real-time PCR观察肺组织TGF-β1 mRNA的表达；采用ELISA观察支气管肺泡灌洗液中TGF-β1的表达.结果:哮喘模型组小鼠气道炎症、气道高反应性和气道重塑明显加重,而D-松醇能显著抑制慢性哮喘模型小鼠的气道炎症和气道高反应性,且D-松醇干预后哮喘模型小鼠肺组织TGF-β1 mRNA和肺泡灌洗液中TGF-β1表达也显著降低.结论:D-松醇能抑制慢性哮喘模型小鼠的气道重塑,其机制可能通过抑制肺组织TGF-β1的表达而实现.
作者：顾晓燕；王毓薇；蒋德升；杜强 刊期： 2012年第03期
目的:观察单次剂量5-氟尿嘧啶(5-Fu)对多器官功能障碍大鼠多脏器功能及其存活时间的影响.方法:应用多发性骨折+烫伤+绿脓杆菌感染方法制造SD大鼠急性多器官功能障碍模型.动物被随机分成多器官功能障碍综合征模型组(MODS模型组,n=36)和模型+5-Fu(50 mg/kg)处理组(5-Fu组,n=26),每组分4个亚组.分别于模型复制成功后24、48、72、96 h处死大鼠,取血进行外周血白细胞计数,检测白细胞功能、肝肾功能、心肌酶谱,同时观察动物的死亡率.结果:与MODS模型组动物比较,实验早中期5 -Fu抑制了动物外周血白细胞计数增加.5-Fu对白细胞的呼吸爆发无影响；但能下调白细胞CD11b表达.实验期间,5-Fu处理组大鼠死亡率明显降低,血清丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶、磷酸肌酸激酶和肌酸激酶同工酶活性、尿素氮等指标改善不显著,但实验组血糖值波动平缓,而对照组血糖进行性上升.结论:单次给予5-Fu能够对多器官功能障碍模型大鼠产生器官保护作用.
作者：卞建民；江强；章世海 刊期： 2012年第03期
目的:研究紫杉醇联合顺铂对人乳腺癌细胞MCF-7增殖抑制作用,探讨药物作用过程中与MAPK通路、Bcl-2基因家族关系及相关机制.方法:采用CCK-8试剂盒检测不同浓度紫杉醇、顺铂单独或联合作用MCF-7细胞48 h后对细胞增殖的50％抑制浓度(IC50),以及紫杉醇、顺铂分别联合ERK通路阻断剂(U0126)、JNK通路阻断剂(sp600125)对细胞增殖的抑制率;采用流式细胞仪检测紫杉醇、顺铂作用细胞48 h后的细胞周期分布情况;应用Western blot分别检测紫杉醇、顺铂及两药联合作用MCF-7细胞48 h后MAPK通路蛋白及Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:紫杉醇(0.025～0.400 μmol/L)、顺铂(1～16 μmol/L)联合作用细胞时呈协同作用(CI＜ 0.95).sp600125对MCF-7细胞增殖具有明显的抑制作用,sp600125联合紫杉醇、顺铂的抑制作用强于紫杉醇、顺铂单独作用细胞时的抑制作用.两药联合时处于G2期的细胞较紫杉醇单独作用时减少,较顺铂单独作用增加.紫杉醇、顺铂联合作用细胞48 h后p-ERK、Bcl-2蛋白表达较两药单独作用时降低,p-JNK/SAPK、p-p38蛋白表达较对照组明显增加.结论:紫杉醇联合顺铂作用MCF-7细胞时具有协同作用,两药与JNK通路阻断剂联用时对细胞的抑制作用强于单独用药时.紫杉醇联合顺铂时可以减少细胞在G2/M期的积聚,同时可以激活JNK、p38通路,抑制ERK通路的激活.
作者：张华；唐金海；季明华；吴建中 刊期： 2012年第03期
南京医科大学学报（自然科学版）杂志
主管:江苏省教育厅
主办：南京医科大学
