学术投稿

人可溶性TRAIL原核表达载体的构建和蛋白表达、纯化及活性鉴定

尤红娟;刘雯;赵金金;徐志辉;党景东;刘转转;郑葵阳;汤仁仙

关键词:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体, 克隆, 原核表达, 凋亡
摘要:目的 建立高效表达可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白的原核表达载体,获得高生物学活性的TRAIL蛋白.方法 取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增TRAIL基因的胞外区片段,克隆入原核表达载体pET30a中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆.重组载体转化感受态细胞BL21,优化蛋白表达条件;亲和层析法纯化重组蛋白;SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot鉴定.重组蛋白与TRAIL蛋白标准品分别作用Huh-7细胞,CCK8、流式细胞术检测蛋白生物学作用.结果 DNA测序结果证实成功构建重组质粒pET30a/TRAIL,SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot显示pET30a/TRAIL诱导的为可溶性的His-rTRAIL.CCK8、流式细胞术检测结果显示,与TRAIL蛋白标准品相比,His-rTRAIL对Huh-7细胞具有良好的促凋亡作用.结论 成功构建高效表达可溶性TRAIL蛋白的原核表达载体pET30a/TRAIL,表达的可溶性蛋白His-rTRAIL具有高度的生物学作用,为肿瘤的生物学治疗提供新的实验依据.
苏州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 2型糖尿病合并脑梗死患者血清脂联素、超敏C反应蛋白的相关性

    目的 探讨2型糖尿病(T2DM)合并急性初发及复发脑梗死患者血清脂联素(ADP)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平的变化,以及两者与T2DM及脑梗死的一些危险因素的相关性.方法 对单纯T2DM患者60例(A组),T2DM合并初发脑梗死患者120例(B组),T2DM合并复发脑梗死患者122例(C组),对照组60例(D组,不伴有脑梗死及T2DM者),分别采用ELISA法及放射免疫比浊法测定血清ADP及hs-CRP水平.结果 (1)A、B、C组血清ADP水平明显低于D组,hs-CRP水平明显高于D组(均P<0.05);(2)B、C组血清ADP水平明显低于A组,hs-CRP水平明显高于A组(均P<0.05);(3)C组血清ADP水平明显低于B组,hs-CRP水平明显高于B组(均P<0.05);(4)ADP与hs-CRP水平成显著负相关(r=0.856,P<0.01).结论 血清ADP水平降低及hs-CRP水平增高均是T2DM合并脑梗死的独立危险因素,两者均可作为预测脑梗死复发的检测指标.

    作者:王一沙;常青;郭婉姝 刊期: 2012年第05期

  • 胰腺肾癌转移1例

    胰腺转移癌少见,笔者在苏州大学附属第三医院实习期间遇见肾癌胰腺转移1例,现报道如下.

    作者:何骏;杨波 刊期: 2012年第05期

  • 复方虫草提取物对实验性肺纤维化大鼠的影响

    目的 探讨复方虫草提取物对实验性肺纤维化大鼠的影响及其相关机制.方法 采取大鼠气管内注入博莱霉素的方法制备肺纤维化模型,分别在给予复方虫草提取物后第7、14、28天处死大鼠后测定肺系数、肺组织羟脯氨酸( HYP)含量、谷胱甘肽(GSH)的活力、总抗氧化能力(T-AOC)水平及α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白和mRNA表达水平;取固定部位肺组织做病理组织学检查.以泼尼松作为阳性药对照观察.结果 复方虫草提取物能明显改善纤维化病变,降低肺系数、肺组织HYP含量及TGF-β1 mRNA、TGF-β1、α-SMA蛋白表达水平,尤其第28天显著(P<0.01或<0.05),且能明显升高GSH活力、T-AOC水平(P<O.01或0.05).结论复方虫草提取物可减轻肺泡炎症和肺纤维化的范围及程度,其作用机制可能与抗氧化作用和降低TGF-β1的表达进而抑制肺肌成纤维细胞的活化有关.

    作者:展瑞;冯一中;顾振纶;赵光明;张永胜;李强;郭次仪 刊期: 2012年第05期

  • Wernicke脑病患者的MRI表现特点分析

    目的 探讨出血性脑灰质炎综合征(Wernicke脑病)的MRI表现,为临床更好地诊治该病提供依据.方法 回顾性分析2008年至2011年该院收治的7例Wernicke脑病患者的临床和影像学资料.所有患者均采用T2WI、T1WI、DWI序列,4例加扫FLAIR序列,4例行MR增强扫描.4例治疗后复查MRI.结果 初诊7例患者中,累及中脑导水管4例,第四脑室周边灰质核团5例,丘脑内侧2例,双侧乳头体1例,主要表现为T2WI、FLAIR高信号,T1WI等低/稍低信号,DWI稍高/等低信号.增强扫描的4例中,2例部分病变区域轻中度强化.强化2例患者中,1例为饮酒患者,且见双侧乳头体强化.复查图像显示病变区域减少,行增强者强化范围减少.临床随访经硫胺素治疗后6例症状得以改善,1例病情较为严重,治疗效果欠佳.结论 Wernicke脑病具有较为典型的发病部位及影像学特点,早期诊断并给予硫胺素治疗有效.

    作者:庞红艳;杨晓春;司安创 刊期: 2012年第05期

  • 体质指数、腰围和腰臀比与糖代谢的相关性研究

    目的 探讨蒙古族居民体质指数(BMI)、腰围(WC)和腰臀比(WHR)与糖代谢的相关性.方法 选择内蒙古科左后旗朝鲁吐乡和奈曼固日班花乡的32个行政村,对20岁以上居民进行调查.采用面对面调查方式,收集人口学特征资料以及吸烟、饮酒等生活方式,测量血压、身高、体质量、腰围和臀围.采集血标本,检测血糖、血脂、C-反应蛋白等指标的水平.采用多因素logistic回归评估3个肥胖指标与糖尿病发生的关系.结果 共调查2 589人,糖尿病和空腹血糖受损的总检出率分别为3.7%(男3.9%,女3.5%)、18.5%(男17.7%,女19.0%).多因素Logistic回归分析显示:在男性中,WHR升高者患糖尿病的OR值为2.120(P <0.05),BMI和WC升高者患空腹血糖受损的OR值分别为1.624和1.472(均P<0.05);在女性中,WC升高者患糖尿病的OR值为2.336(P<0.01).结论 在男性中,WHR升高可能是糖尿病的危险因素;BMI和WC升高可能是空腹血糖受损的危险因素.在女性中,WC升高可能是糖尿病的危险因素.

    作者:叶家楷;佟伟军;张永红;张绍艳 刊期: 2012年第05期

  • 甲状腺激素抵抗综合征患儿及其家庭的基因研究并文献回顾

    目的 研究甲状腺激素抵抗综合征(THRS)患儿的临床表现及其家庭甲状腺激素受体3(TRβ)的基因型.方法 采集THRS患儿及其父母外周血标本,用PCR技术和直接测序法测定TRβ基因.结果 患儿和其父亲检测到TRβ基因有突变,在第3号染色体第3外显子剪切点有一碱基插入,其母亲TRβ基因正常.结论 THRS是甲状腺受体基因突变相关性疾病,基因检测是诊断该病的根本手段.

    作者:杨晨炜;张茜 刊期: 2012年第05期

  • 台盼蓝着染兔晶状体后囊膜的观察

    目的 探索晶状体后囊膜被台盼蓝(TB)染色的可行性.方法 选用健康成年新西兰白兔60只(120只眼)随机分为3组(实验1组,实验2组,对照组),在手术显微镜下,完整取出晶状体,撕下前囊膜和后囊膜,分别置入不同浓度的TB溶液中染色后行光镜和电镜检查,并将所获数据进行统计学处理.结果 各实验小组前后囊膜均见染色,并随染色液浓度的增加,囊膜染色加深;光镜下观察,各实验小组的前后囊膜的组织结构较对照组未见明显改变(P>0.05);电镜下前后囊膜中,台盼蓝染色阳性数实验1组,实验2组分别与对照组比较,差异均有显著性(均P<0.01);台盼蓝染色阳性数实验1组与实验2组比较,两组差异统计学意义(P>0.05).结论 低浓度TB能有效地将晶状体后囊膜染色,起到保护透明晶体的作用.

    作者:曹钰;冯建国;刘瑶 刊期: 2012年第05期

  • 抑制eEF-2激酶对人脑胶质瘤细胞增殖作用的影响

    目的 研究抑制eEF-2激酶对人脑胶质瘤LN229细胞增殖作用的影响,并初步探讨其可能的分子机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测抑制eEF-2激酶后LN229细胞的增殖能力,台盼蓝染色法检测细胞的存活能力,相差显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞仪分析细胞周期的分布,Western blot方法检测细胞phospho-eEF2和Cleaved Caspase-3、PARP蛋白表达水平的变化.结果 抑制eEF-2激酶对人脑胶质瘤LN229细胞的增殖有显著抑制作用(P<0.05或0.01),呈现时间和剂量依赖性趋势;作用24h后,随着给药浓度的增加,LN229细胞的活力逐渐降低(P<0.05或0.01),且细胞形态也逐渐发生明显改变;NH125(0.5 μmol/L)作用24h后,LN229在S期阻滞,且出现小凋亡峰,phospho-eEF2 (Thr56)的表达明显下降,Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP的表达显著增加(P<0.05).结论 抑制eEF-2激酶后,人脑胶质瘤LN229的细胞增殖作用明显被抑制,细胞活力降低,该作用可能与其诱导的细胞周期阻滞以及其诱导的Caspase-3、PARP激活相关细胞凋亡途径有关.

    作者:刘晓媛;张丽;张熠;明志君;杨金铭 刊期: 2012年第05期

  • 精索静脉曲张反流对睾丸容积及睾丸内动脉血流参数的影响

    目的 应用彩色多普勒超声研究育龄期不育患者中精索静脉曲张(VC)伴有静脉血液反流对睾丸容积、睾丸内动脉峰值流速及阻力指数的影响.方法 将54例育龄期不育男性患者的108只睾丸,分为VC伴反流组(A组)、VC无反流组(B组)及无VC组(C组).采用二维超声精确测量每组睾丸径线并计算容积,用多普勒超声测量睾丸内动脉的峰值流速及阻力指数,并将所测结果进行比较.结果 A组的睾丸平均容积小,与B、C组相比差异均有高度统计学意义(均P<0.01);而B组的睾丸容积与C组相比差异无统计学意义(P>0.05).A、B、C三组间的睾丸内动脉峰值流速及阻力指数差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 在VC患者中,精索静脉血流反流会导致该侧睾丸容积缩小,但不会影响睾丸内动脉的峰值流速和阻力指数.

    作者:刘哲婴;董凤林;蔡晓峰;王阿军 刊期: 2012年第05期

  • 64层螺旋CT对壶腹周围癌的诊断价值

    目的 探讨64层螺旋CT对壶腹周围癌的诊断价值.方法 采用64层螺旋CT对61例壶腹周围癌行平扫和动态增强扫描,对图像进行分析.首先判定肿块是否为胰头癌,再做出具体诊断,并与病理、手术对照.结果 30例胰头癌CT诊断29例,无非胰头癌误诊为胰头癌.CT诊断与手术病理结果一致者56例(91.8%),不一致者3例(4.9%),未明确诊断者2例(3.3%).胰头癌、壶腹癌、远端胆管癌及十二指肠癌均有较典型的CT征象,其诊断符合率分别为96.7%、88.9%、85.7%、83.3%.结论 64层螺旋CT及其三维后处理阴性法CT胰胆管造影技术对于壶腹周围癌的诊断有较高的准确性.

    作者:王东;张追阳;于向荣;李新;马建勇;高煜;唐志强 刊期: 2012年第05期

  • 沙门菌质粒对细菌生物膜形式的影响

    目的 研究伤寒沙门菌质粒pRST98对生物膜形成的影响.方法 将携带pRST98的野生型伤寒沙门菌于30℃和37℃培养3d,用半定量法确定生物膜形成的适宜温度.将稀释的菌液于30℃分别培养12 h、1d、2d、3d、4d和5d,用半定量法确定生物膜成熟的时间.分别用携带pRST98的野生型伤寒沙门菌,消除pRST98的突变株及pRST98的回补株建立生物膜模型,用结晶紫染色法,半定量法和扫描电镜观察三种株受试菌形成生物膜的能力.结果 在30℃培养时细菌生物膜形成能力高于37℃,此温度为沙门菌生物膜形成的适宜温度;3d时生物膜趋于成熟;野生株和回补株形成生物膜的能力显著高于突变株.结论 伤寒沙门菌质粒pRST98与该菌生物膜形成密切相关.

    作者:廖莉;吴淑燕;李嫄渊;刘珍;黄瑞 刊期: 2012年第05期

  • 64排螺旋CT动态增强扫描对膀胱移行细胞癌T分期的诊断价值

    目的 探讨64排螺旋CT(MDCT)动态增强扫描对膀胱原发性移行细胞癌(TCC)术前分期的准确性.方法 根据MDCT动态增强扫描肿瘤浸润范围及其强化CT值的动态变化,对42例病理证实为TCC的患者进行术前CT分期,并与术后病理分期进行对照.结果 MDCT动态增强扫描对TCC术前分期的总准确率为94.8%,对膀胱壁内癌灶(≤T2b期)分期的准确率为92.9%,对侵犯壁外结构肿瘤(≥T3)分期的准确率为97.6%;T1/T2期与T3/T4期癌灶CT强化均值比较:动脉期及延迟期差异有统计学意义(均P<0.05),静脉期差异无统计学意义(P>0.05).结论 MDCT动态增强扫描有助于显示肿瘤浸润范围及其强化CT值的动态变化,从而有助于提高TCC术前分期的准确性.

    作者:王启苑;范国华;崔倩 刊期: 2012年第05期

  • 亲水作用色谱法测定猫豆中左旋多巴及其衍生物的含量

    目的 建立测定猫豆中左旋多巴及其衍生物1-甲基-3-羧基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉(MCD)含量的亲水作用高效液相色谱法.方法 采用Cosmosil HILIC色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温30℃,以乙腈-(10 mmol/L)乙酸铵(80∶20)为流动相,体积流量1.0 ml/min,检测波长280 nm.结果 MCD及左旋多巴在0.081 36~2.034 μg和0.126 9 ~3.172 μg范围内线性关系良好,平均回收率(n=6)分别为98.11%和99.86%,相对标准偏差(RSD)分别为3.32%和0.82%.结论 该方法简便、准确,可用于定量分析猫豆中的左旋多巴及MCD.

    作者:谭蓓蓓;俞樱露;李楠;刘江云;李贺然;蔡培烈;杨世林 刊期: 2012年第05期

  • 白及多糖琥珀酸酯的抗氧化活性研究

    目的 研究琥珀酸酯改性白及多糖的抗氧化活性.方法 分别采用Fenton法和邻苯三酚自氧化法测定不同取代度(DS)白及多糖琥珀酸酯BT-2( DS=0.38)、BT-3(DS =0.69)、BT-4( DS=0.85)对OH·和O2-·的抗氧化活性.结果 白及多糖琥珀酸酯对OH·的半数清除率浓度(mg/ml)依次为1.48±0.01( BT-4)、2.65±0.01( BT-3)、2.79±0.02 (BT-2);对O2-·的半数清除率浓度(mg/ml)依次为1.38±0.06(BT-4)、6.44±0.02( BT-3)、21.33±0.13 (BT-2).结果显示,不同取代度白及多糖琥珀酸酯对OH·和O2-·的清除能力大小依次为BT-4> BT-3> BT-2(P<0.05)结论 白及多糖琥珀酸酯的抗OH·和O2-·活性随取代度增大而显著增强.

    作者:王虎成;孙燕;俞樱露;刘江云;蔡培烈;杨世林 刊期: 2012年第05期

  • 损毁炎症大鼠下丘脑弓状核对痛觉过敏的影响

    目的 观察损毁炎症大鼠下丘脑弓状核( ARC)对炎症大鼠痛觉过敏的影响.方法 用完全弗氏佐剂(CFA)建立大鼠外周组织炎症模型;采用新生期大鼠注射谷氨酸单钠(MSG)破坏ARC神经元或电解损毁成年大鼠的ARC;用辐射热-缩腿法测定炎症大鼠热痛阈的变化,用von Frey法测定机械痛阈的变化.结果 (1)大鼠在注射CFA后热痛阈和机械痛阈均明显降低,出现痛觉过敏,3h达到高峰,到第3天有所恢复并且稳定维持痛觉过敏状态,一直维持到本实验观察的第14天;(2)新生期注射MSG的大鼠在注射CFA后3h,热痛阈和机械痛阈也明显降低,出现痛觉过敏,但其痛阈降低的幅度明显小于注射高渗盐水对照的CFA组;(3)CFA炎症大鼠在电解损毁ARC之后,其热痛阈和机械痛阈与假损毁组相比,均明显上升,即痛觉过敏减轻.结论 在外周存在炎症条件下,两种方法损毁ARC都能减轻痛觉过敏.提示ARC参与外周组织炎症引起的痛觉过敏,对痛觉过敏的发生有下行易化作用.

    作者:戴友爱;龚珊;蒋星红 刊期: 2012年第05期

  • TRAF5在大鼠创伤性脑损伤中的表达变化及意义

    目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子5 (TRAF5)在大鼠创伤性脑损伤(TBI)中的表达变化及细胞定位情况.方法 利用大鼠锐器切割伤模型,通过Western blot方法检测脑损伤后TRAF5表达的时空变化,免疫组织化学方法检测TRAF5在脑组织中的细胞定位.结果 Western blot检测结果显示,大鼠脑损伤后,TRAF5的表达逐渐升高,损伤后5d达到高峰,此后逐渐降低恢复至正常水平;免疫组化检测结果与Western blot检测结果基本一致.免疫荧光双标记结果显示,TRAF5与星型胶质细胞(GFAP)、神经元(NeuN)之间存在共定位.结论 大鼠脑损伤可以影响TRAF5的表达,这种改变可能参与脑损伤后星型胶质细胞的活化和增殖过程.

    作者:闻峰;郭春华;徐立;何卫春;施金龙 刊期: 2012年第05期

  • B族维生素治疗对脑梗死患者血清同型半胱氨酸的影响及其临床意义

    目的 观察B族维生素治疗急性脑梗死前后患者血清同型半胱氨酸(Hcy)的变化,评估其对脑梗死患者神经功能恢复的影响.方法 选择急性脑梗死患者90例,根据治疗方法分为2组,对照组:给予抗血小板、改善循环等常规治疗;观察组:在对照组常规治疗基础上,给予B族维生素治疗.4周后比较两组患者治疗前后血清Hcy浓度的变化,进行神经功能缺损评分(NIHSS).结果 观察组治疗后血清Hcy浓度及NIHSS均明显低于治疗前及对照组治疗后(均P <0.05);血清Hcy浓度及NIHSS之间无明显相关性(P>0.05).结论 B族维生素有助于降低血清Hcy,改善急性脑梗死患者的神经功能.

    作者:盛潇磊;雷进;王建林 刊期: 2012年第05期

  • 合并Ⅲ度软组织损伤的踝关节骨折29例治疗分析

    目的 探讨合并Ⅲ度软组织损伤的踝关节骨折的治疗要点.方法 分析29例合并Ⅲ度软组织损伤的踝关节骨折患者的临床资料.结果 29例患者均行一期复位固定,10例出现不同程度的皮肤坏死,感染1例,其余患者伤口均一期愈合.全部患者骨折均一期愈合,骨折愈合时间平均4.5月.随访1~5年,26例患者获得随访.术后1年,跟据Baird-Jackson系统评分:优12例;良9例;可4例;差1例,优良率80.8%.结论 对于合并Ⅲ度软组织损伤的踝关节骨折的治疗,要求早期正确的软组织处理,对所有骨折尽可能解剖复位,妥善处理骨外露及感染,早期正确康复锻炼等.

    作者:朱文峰;刘国华;孙焕建;施凤超 刊期: 2012年第05期

  • 高效分子排阻色谱-蒸发光散射检测法测定右旋糖酐分子量及其分布

    目的 建立高效分子排阻色谱-蒸发光散射检测法,用于测定右旋糖酐40的分子量及其分布.方法 采用TSK-gel G4000PWXL色谱柱(10 μm,7.8 mm× 300 mm),流动相为水,流速0.6 ml/min,柱温30℃,蒸发光散射检测器.结果 右旋糖酐平均重均分子量在4600~133 800u范围内线性关系良好(R2 =0.991),精密度试验相对标准偏差( RSD)为0.252%,重复性试验RSD为0.460%.结论 该方法灵敏度高,重复性好,可作为右旋糖酐40的分子量及其分布测定的分析方法.

    作者:于栋伟;李楠;孙燕;刘江云;蔡培烈;杨世林 刊期: 2012年第05期

  • 超声在注射隆乳术填充物取出术中的应用

    目的 探讨超声在注射隆乳术填充物取出术中的应用价值.方法 应用高频超声探查注射隆乳术后乳房局部情况,确定乳房注射物层次及位置,引导手术抽吸方向,动态监测取出注射物.结果 本组15例患者均在超声引导下行注射隆乳填充物取出术,伤口均I期愈合,术后经3~12个月随访复查,切口愈合佳,无明显瘢痕,超声复查无明显注射物包块残留,效果较满意.结论 超声定位引导能清晰显示注射物分布层次及范围,既能达到手术抽吸准确,又能较彻底取出异物,且对乳房损伤轻,是一种较好的手术方法.

    作者:闫磊;吴健丽;张燕;张玉群 刊期: 2012年第05期

苏州大学学报(医学版)杂志

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主管:江苏省教育厅

主办:苏州大学