学术投稿

人穿孔素氨基端肽段的原核表达与纯化

秦卫松;李芳秋;武建国

关键词:穿孔素, 基因重组, 表达, 纯化
摘要:目的:用基因工程方法表达人穿孔素(PFP)氨基端肽段,并加以纯化。 方法:构建表达人PFP蛋白N端118个氨基酸肽段(hPFP-N)的重组质粒,转化E. coli BL21菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。在十二烷基肌氨酸钠存在下以超声处理,使得到的融合蛋白包涵体溶解。通过谷胱甘肽琼脂糖柱亲和层析获得纯化的GST/hPFP-N融合蛋白,经凝血酶酶切去除GST部分。 结果与结论:pGEX-KG质粒能够高效表达GST/hPFP-N融合蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析和凝血酶酶切后得到纯化的hPFP-N蛋白。
医学研究生学报杂志相关文献
  • 哌拉西林/他唑巴坦对革兰阴性杆菌药敏试验

    0 引言  哌拉西林属酰脲类广谱青霉素,对细菌产生的β-内酰胺酶不稳定。近年来,随着哌拉西林在临床上的广泛应用,和其他抗生素一样产生许多耐药菌株。他唑巴坦是一种青霉烷砜类β-内酰胺酶抑制剂,能抑制质粒介导的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和染色体介导的诱导酶(IB)。他唑巴坦与哌拉西林的联合应用,通过他唑巴坦的抑酶作用,可使哌拉西林很好地发挥其抗菌作用,所以哌拉西林/他唑巴坦(PIP/TAZ)联合制剂具有抗菌作用强、抗菌谱广等特点[1]。现将我院1999年7月至12月,从临床标本分离的328株革兰阴性杆菌,用K-B纸片扩散法测定哌拉西林/他唑巴坦的药敏试验,并与其他六种抗菌药物作比较,报告如下。

    作者:杨静;石晓春;李珍大;张小卫;邵海枫 刊期: 2001年第01期

  • 人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体的初步鉴定

    目的:制备高效价的人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体(GPA McAb),为研制快速全血凝集试剂提供关键的双功能抗体成分。 方法: 首先用MNGP亚型GPA,经SPDP与小鼠血清白蛋白连接后,常规免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备GPA McAb;用ELISA和血凝方法对克隆进行筛选和鉴定。 结果: 4次融合共获3个可分泌高效价GPA McAb细胞株(3F6、5C7和5G3)。分泌的单克隆抗体均与GPA发生特异性反应,但均不引起人A、B、AB和O型红细胞凝集,属于人红细胞GPA的特异性非凝集抗体。在3株抗体中,2株为IgG1亚型,1株为IgG2亚型。 结论: 小分子GPA经与同种动物(免疫用动物)血清白蛋白连接后用作免疫抗原,研制的2株IgG1亚型抗体可用于全血凝集试剂中双功能抗体的制备。

    作者:吴向东;李保仝;邵海枫;宗永兰;齐名;武建国 刊期: 2001年第01期

  • 43例涎腺粘液表皮样癌的临床分析

    目的:探讨涎腺粘液表皮样癌(MEC)的组织学分型和临床分期与手术预后的关系,为临床确定理想的治疗方案提供参考和依据。 方法:对43例得到病理学证实的涎腺MEC的发病部位、临床表现及其组织学分型、TNM分类和临床分期与手术治疗预后的相关性进行分析。 结果:在得到长期随访的36例中,6例出现局部复发或区域淋巴结转移,其中在组织学上属高分化型4例,低分化型2例;属临床Ⅰ、Ⅱ期1例,Ⅲ、Ⅳ期5例;现生存23例,死亡13例,其中死于MEC 4例,死于其他疾病9例;死于MEC的4例均属临床Ⅲ、Ⅳ期。这表明MEC术后的复发转移率和病死率与其组织学分型无明显相关(P>0.05),而与临床分期关系密切(P<0.01),临床Ⅰ、Ⅱ期MEC的手术预后明显优于Ⅲ、Ⅳ期。  结论:对于临床Ⅲ、Ⅳ期的MEC应高度重视原发灶手术切除的彻底性及相应区域的淋巴结清扫。对手术切除不彻底的病例,可考虑术后放疗。

    作者:张森林;孟昭业;寿柏泉;杨震 刊期: 2001年第01期

  • 人体弓形虫病人体弓形虫病

    弓形虫病是全球广泛分布、对人类造成严重危害的人兽共患病。近年来,由于与宠物接触增多,我国弓形虫病发病率有增高趋势。鉴于本病临床表现缺乏特异性,一旦确诊,治疗效果显著。本文从发病机制、病理改变、临床表现、实验室诊断、治疗等几个方面对本病进行了简要的评述,以期引起广大临床医务人员的重视。

    作者:林军;武建国 刊期: 2001年第01期

  • 骨膜游离移植在非负重关节成形术中的应用(附3例报告)

    0 引言  关节软骨缺损的重建及愈合问题至今仍然是重建外科学的难题。以往的研究表明,浅表的关节软骨缺损不能由透明软骨再生来修复。我们在自体骨膜游离移植诱导关节软骨再生的动物实验研究获得成功的基础上[1~3],将这一新手术方法应用于临床获得良好效果,现介绍如下。1 临床资料1.1 病例1 患者男性,36岁。1989年10月车祸致全身多发伤,左手3~5指缺如,左食指掌指关节、指间关节均僵硬,屈伸受限,且于掌指关节处有尺偏畸形。左拇、食指对指动作不能完成。X线片示:左食指掌指关节、指间关节均存在创伤性关节炎,以掌指关节为重。1990年4月,我们对其实施左食指掌指关节成形术。术中发现:患者左食指掌指关节腔内充满纤维瘢痕组织,掌骨头变形,关节软骨面基本被破坏消失,近节指骨关节面软骨亦有退变,行锐性修整,使之光滑。

    作者:王与荣;赵建宁;韩发五 刊期: 2001年第01期

  • 重度肺动脉高压的手术时机和肺血管TGF-β1的表达

    目的:探讨先天性心脏病(简称先心病)重度肺动脉高压的手术治疗效果和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的关系以及后者对手术时机选择的指导意义。 方法:对29例先心病重度肺动脉高压患者行终止分流手术的随访资料进行分析,用免疫组化染色观察肺活检组织TGF-β1的表达。 结果:TGF-β1在血管壁内皮细胞的阳性表达率为89.65%,在基质的阳性表达率为55.17%,且在病理分级Ⅰ~Ⅱ与Ⅲ级以上的基质中阳性表达率差异显著(P<0.05)。 结论:TGF-β1在先心病肺动脉高压的形成过程中起重要作用,且其表达对指导临床患者选择手术时机有一定的参考价值。

    作者:马增山;鲍继森;巩性军;李守先;宋惠民;庞昕炎 刊期: 2001年第01期

  • SD大鼠二氧化氮吸入性肺损伤实验研究

    目的:探讨二氧化氮(NO2) 吸入性肺损伤的机制。 方法:采用实验-对照设计方法,对30只SD大鼠肺组织内丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、总抗氧化能力(T-AOC)进行比较。 结果:NO2 吸入组SD大鼠肺组织内MDA值显著高于对照组,而T-AOC值则低于对照组,均有显著意义。只有长期NO2 吸入组的SD大鼠GSH值显著低于对照组。 结论: SD大鼠吸入NO2 后,氧化物质与抗氧化物质失衡所导致的氧化性肺损伤,是肺损伤的重要机制。

    作者:肖永营;夏锡荣;施毅;童茂荣;张希龙 刊期: 2001年第01期

  • 纵隔病变405例临床病理分析

    目的:探讨纵隔病变的临床病理特征。 方法: 对1967~1997年外科切除的405例纵隔病变组织进行分析。 结果:男216例,女189例,中位年龄26岁;肿瘤及瘤样病变230例(56.8%),重症肌无力(MG)172例(42.5%);在肿瘤性病变中,胸腺肿瘤113例(49.1%)居首位,平均年龄40岁;生殖细胞瘤36例(15.7%),神经源性肿瘤30例(13%),淋巴瘤仅6例(2.6%),囊肿29例(12.6%)。前纵隔肿瘤165例(71.7%),主要为胸腺肿瘤;中纵隔肿瘤6例;后纵隔肿瘤30例,主要系神经源性肿瘤。非肿瘤性病变中,MG胸腺淋巴滤泡性增生145例(84.3%),无增生者27例(15.7%);MG伴胸腺肿瘤38例(22.1%),其中微小胸腺瘤12例(6.9%)。 结论:MG胸腺伴有淋巴滤泡性增生者,预后好于胸腺非增生和胸腺瘤者,MG胸腺病理诊断对于发现微小胸腺瘤具有一定重要性。 纵隔内胸腺肿瘤几乎占肿瘤病变的半数,国人淋巴瘤发病率较低,多数(84.3%)MG患者胸腺表现淋巴滤泡性增生。

    作者:印洪林;周晓军;张石江 刊期: 2001年第01期

  • 肺炎衣原体肺炎的实验鼠模型

    目的:评价以小鼠作为肺炎衣原体感染实验动物模型的价值。 方法: 以肺炎衣原体鼻内接种Icr小鼠,通过不同时点(60天内)处死动物,观察其肺部的病理改变。 结果: 鼻内接种肺炎衣原体后,Icr小鼠产生肺部感染,特征性病理改变是斑片状间质性肺炎,早期(7天以内)病变较重,以中性粒细胞浸润为主,并伴有泡沫细胞堆积;后期(14天以后)病变开始减轻,以中性粒细胞和淋巴细胞混合浸润为主,并逐渐转为以淋巴细胞浸润为主。 结论:给Icr小鼠鼻内接种肺炎衣原体可引发肺部感染,该模型有助于对肺炎衣原体感染发病机制的研究。

    作者:施毅;印洁;詹化文;苏欣;夏锡荣;周晓军;申萍 刊期: 2001年第01期

  • 胰源性脑病的诊断及其治疗

    0 引  言  急性重症胰腺炎(acute severe pancreatitis,ASP)是累及全身多个脏器系统的严重疾病,其病程中所并发的神经精神症状、体征日益受到重视,亦是导致此类患者死亡的主要原因之一。作者通过分析15例ASP患者并发胰源性脑病(pancreatic encephalopathy,PE)的临床资料,以探讨对PE的诊断和治疗。1 临床资料  本组15例并发PE的ASP中,男7例,女8例,年龄为24~63岁,平均年龄(38.1±12.6)岁。原发病为急性胆源性胰腺炎者6例,酒精性胰腺炎者9例。按Ranson判定严重程度的11项指标,具有3~5项指标者10例,6项指标以上者5例,表明本组患者病情均较重。患者PE症状、体征出现的时间平均为ASP起病后的2~27天,平均(5.5±2.5)天,其中早期(2周以内)出现症状者12例,晚期(1个月左右)出现者3例。PE症状持续的时间从17~53天,平均为(28.0±10.4)天。本组除1例既往曾有癫病史外,其余患者均无明确精神分裂症和神经系统疾病史。凡由局部脓肿和全身严重感染所致中毒性脑病、重要脏器(肝、肾及肺等)功能不全引起的脑病综合征、胰腺炎继发糖尿病性代谢性昏迷(如低或高血糖昏迷、酸中毒性昏迷)以及其他原因引起的神经精神障碍者均未列入。

    作者:张铭 刊期: 2001年第01期

  • 乳头凹陷隆起器的研制与应用

    引  言   先天性乳头凹陷畸形是女性的常见病,严重影响女性的心理健康和正常哺乳。严重凹陷的乳头易积存污垢,招致湿疹、感染等,以往采用手术治疗,既不易恢复乳房的正常形态,又常破坏乳头、乳晕部泌乳导管,故临床上用手术治疗常慎之又慎。我们已成功研制出“乳头凹陷隆起器”,解决了困扰整形外科多年的难题。经临床251例应用,收到了良好的效果,并已获国家专利(专利号“ZL99324839.X”,“ZL99228562.3”)。1 结构和工作原理  该产品根据负压吸引原理由乳头帽、微型单向阀、负压抽吸器组成(图1)。1.1 乳头帽用于维持乳头的隆起 该结构为一与女性乳头相吻合的圆柱形帽状体,其下缘为一与乳晕相一致的柔性圆形帽檐,乳头帽侧壁通过接管与微型单向阀管道相连。乳头帽内壁对应接管口的位置设有一个与间隙配合的内套圈,内套圈的上沿将帽体的接管口遮住,并与帽体内壁之间有通气间隙,用以防止负压抽吸时对乳头的损害。考虑到治疗时,乳头在负压作用下被移进乳头帽内时,有时会产生一些分泌物或少量血迹,污染乳头帽,影响乳头卫生,甚至会引起继发性感染。为此,我们将乳头帽内部设计成可拆卸组合。当使用中乳头分泌物和血迹残留在乳头帽内时,只需将乳头帽帽檐部分与圆柱形帽体旋开,拆卸下来冲洗干净,凉干后再与乳头帽圆柱体旋紧即可。乳头帽圆柱体上部为-仿乳头弧形形状,使患者在配戴乳头凹陷隆起器治疗时可用胸罩罩住,既保证治疗效果,又保证在治疗过程中女性乳房外形美观。

    作者:汤黎明;姜会庆 刊期: 2001年第01期

  • 创新 严谨 求实

    《医学研究生学报》改刊至今已一周年了。作为面向全国公开发行并进入国家科技部中国科技论文统计源的国内唯一一份医学研究生的学报,它的作者主要是拥有或正在攻读硕士、博士学位的医学菁英。他(她)们在本刊所发表的论文,一般来说,也都处于相关研究领域的前沿,对同行应能有所启迪或可供借鉴。为了使本刊办得更好,在改刊一周年和新世纪来临之时,我代表编委会对本刊作者们提出以下几点建议。1 创 新  医学科学研究的主要方向是在生命科学领域探索未知世界。创新是它的灵魂和生命。江泽民主席在1995年8月的全国科技大会上说:“创新是一个民族的灵魂,是一个国家兴旺发达的不竭动力”,“一个没有创新能力的民族,难以屹立于世界先进民族之林”。所谓创新,既包括新的学术观点的建立、新的研究手段的突破,以及在交叉学科拓展新的研究领域等的原始性创新,也包括对现有观念、方法等的补充、改良的跟踪性创新。无论是基础医学还是临床医学,都需要有创新性的研究和创新性的论文。一篇没有创新的论文是毫无价值的。

    作者:武建国 刊期: 2001年第01期

  • 细胞间粘附分子在缺血再灌注损伤中的作用和意义

    在缺血再灌注(I/R)损伤中,中性粒细胞的聚集和对组织的炎性浸润是加快细胞凋亡和死亡的关键因素,而粘附分子在其滚动、粘附、浸润过程中起着重要的桥梁作用。本文着重探讨细胞间粘附分子(ICAM-1)在I/R中的作用和意义。

    作者:曹建平;徐建国 刊期: 2001年第01期

  • 膝关节骨关节炎的治疗进展

    膝关节骨关节炎是困扰老年人的慢性进行性疾病。目前治疗方法较多,但缺乏很有效的方法。本文就近年来国内外对本病的临床研究及治疗,特别是药物非甾体抗炎药(NSAID)的治疗作用和全膝关节置换术等热点问题进行了综述。

    作者:叶益进;赵建宁 刊期: 2001年第01期

  • 逆转录病毒介导HyTK基因对肾癌细胞株GRC-1的杀伤作用

    目的:了解逆转录病毒介导的HyTK基因转移联合更昔洛韦(GCV)对肾癌细胞的杀伤作用。 方法:利用逆转录病毒介导将HyTK基因导入人肾癌细胞株GRC-1,经用潮霉素筛选,获得稳定表达HyTK基因的GRC-1/HyTK细胞;应用PCR、RNA、Dot blot分子杂交及MTT等方法检测,在DNA、RNA水平的表达以及HyTK联合GCV对GRC-1/HyTK细胞的杀伤作用。 结果:PCR、Dot blot检测证明,HyTK基因的整合及mRNA水平的表达;MTT法测定示GCV对GRC-1/HyTK细胞有明显的杀伤作用。其IC50值为3.49 μg/ml,而对其亲代GRC-1细胞无明显杀伤作用。 结论:逆转录病毒介导的HyTK基因转移联合GCV可作为肾癌基因治疗的一种有效方法。

    作者:周丹秋;YE Chuan-zhong;叶传忠 刊期: 2001年第01期

  • 老年人心房纤颤的研究现状

    心房纤颤(AF)是老年人常见的心律失常,其发病率随着年龄增大而增高。AF可以导致严重的心功能不全及血栓栓塞,特别是脑卒中的发病率很高,使病死率增加。因而很有必要将AF作为当前老年心血管疾病的一个重点加以研究。

    作者:齐玉琴;万文辉;GE Cai-rong 刊期: 2001年第01期

  • GDNF与甲泼尼龙对脊髓损伤后细胞内游离钙含量的影响

    目的:比较胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)与甲泼尼龙(MP)对脊髓损伤组织细胞内游离钙及水含量的影响。 方法:SD大鼠分成对照组、GDNF组、MP组及GDNF+MP组,改良Allen法撞击致伤脊髓T13节段,蛛网膜下腔给予GDNF 20 μl,尾静脉给予MP 30 mg/kg,不同时间取伤段脊髓以Fura-2法测定细胞内钙[Ca2+]i及组织中水含量。 结果:治疗组[Ca2+]i及组织中水含量明显低于对照组(P<0.01);伤后24 h[Ca2+]i及组织中水含量GDNF组>MP组及GDNF+MP组(P<0.01),MP组与GDNF+MP组无差异(P>0.05);伤后72 h的[Ca2+]i水平,GDNF组>MP组>GDNF+MP组(P<0.05);组织中水含量GDNF组>MP组及MP+GDNF组(P<0.01);伤后7天[Ca2+]i的水平,GDNF组>MP组>GDNF+MP组(P<0.01);组织中水含量各治疗组无显著差异(P>0.05)。 结论:GDNF、MP及其联合应用均能降低脊髓组织[Ca2+]i水平,减轻组织水肿,作用效果MP超过GDNF,MP联合GDNF治疗脊髓损伤能增强MP的疗效。

    作者:宋海涛;贾连顺;陈哲宇;田万成;何成 刊期: 2001年第01期

  • 经纤维支气管镜去除气管内异物

    0 引  言  成人气管内吸入异物并不罕见,只要注意询问患者有无进食呛咳史,并且及时进行纤维支气管镜(以下简称纤支镜)检查便不难诊断。近来,我科连续诊治3例气管内异物患者,现报道如下。1 病例报告1.1 病例1 患者男,64岁,持续咳嗽2个月就诊。2个月前患者喝排骨汤时出现呛咳,当即咳出碎骨数块,此后便持续咳嗽、咳痰,胸片阴性。口服多种抗生素疗效不佳。予以纤支镜检查,见右肺中间段支气管腔内一白色异物,呈不规则形,周围支气管粘膜充血、水肿,见少量肉芽肿形成。将异物用活检钳及刮钳引至气管腔后,拔出纤支镜,嘱患者俯身咳嗽,咳出1块猪碎骨,大小为1.5 cm×1.1 cm×0.3 cm (图1) 。术中见异物周围支气管粘膜明显出血,经纤支镜注入0.001%肾上腺素20 ml后,出血停止。

    作者:苏欣;童茂荣;朱美英 刊期: 2001年第01期

  • AⅢE型环氧乙烷灭菌器的使用体会

    0 引言  环氧乙烷气体灭菌器的使用,为许多不能耐受高、湿热的精密仪器、介入性操作的导管等的彻底灭菌提供了可靠的保证。 我院于1993年购进日本樱花AⅢE型环氧乙烷灭菌器1台,1994年正式启用。使用不易燃的混合气体(20%环氧乙烷、80%二氧化碳),现将我们的使用体会报告如下:1 选择合适的工作环境  环氧乙烷对人体有一定的毒性,人能嗅出环氧乙烷气味的阈值为700/106。空气中浓度为300~600/106时,经30~60 min可使实验动物死亡。工作间空气中允许限量值为50/106。因此,我们工作间装配了通风设备来更换房间里的空气,安装了专用管道,将管道通到户外通风好、无火、无人的地方,引出灭菌器内的气和水。钢瓶存放室中通风良好,需避免阳光直射及高温源,室温保持40℃以下,钢瓶存放时固定站立,避免猛放、平躺或震动。

    作者:郁红菊;张春玉 刊期: 2001年第01期

  • 肺气肿的外科治疗

    肺气肿是一种慢性的呼吸系疾病,在20世纪80年代后期用肺减容术治疗这一疾病的方法重新兴起。本文仅就肺减容术的历史、手术指征、手术方法、术后处理、疗效评估、目前的现状和有争议的问题加以综述。

    作者:王虹;张石江;高声甫 刊期: 2001年第01期

医学研究生学报杂志

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主管:南京军区联勤部卫生部

主办:南京军区南京总医院