学术投稿

双重TaqMan实时PCR检测中国汉族人群HLA-B*27的研究

冯海艳;周实华

关键词:人白细胞抗原B*27, 基因型, TaqMan, 荧光, 聚合酶链反应
摘要:目的:建立一种快速有效的双重TaqMan实时PCR法检测中国汉族人群的人白细胞抗原B*27(HLA-B*27).方法:以156例已定型的基因组DNA标本为标准建立一种双重TaqMan实时PCR方法用于检测HLA-B*27,并对118例强直性脊柱炎(AS)患者和225例健康志愿者的HLA-B*27进行基因分型.结果:156个已定型标本的CtGAPDH为23.19±2.28且呈正态分布.45个已定型阳性标本的CtB27为29.12±2.05,也符合正态分布,而111个已定型阴性标本的CtB27>40.以CtB27≤31.17和20.91≤CtGAPDH≤25.47为阳性判断标准,则AS患者和健康志愿者的阳性率分别为93.22%和4.95%,而且15例标本基因测序结果与TaqMan实时荧光PCR结果完全吻合.结论:TaqMan实时PCR是一种快速有效的检测HLA-B*27的方法,具有传统的PCR所不可比拟的优点,可取代传统的PCR法用于中国汉族人群HLA-B* 27的基因分型.
临床血液学(输血与检验版)杂志相关文献
  • 无偿献血初筛不合格原因分析与对策

    目的:回顾分析南京市无偿献血初筛不合格原因,并提出对策,避免血液资源浪费.方法:对2010-2011年城区采血点和集体献血者共计135 478人次进行献血前初筛发现的15 666人次不合格原因进行分析.结果:无偿献血初筛不合格率为11.56%.ALT不合格多,达7.72%,其中集体献血组不合格率明显低于街头献血组,且ALT和脂肪血等因素季节性变化明显.结论:大力普及献血知识,不同献血方式、不同时间、不同献血人群要采取各自合适的招募方式.

    作者:王飞 刊期: 2012年第05期

  • 造血干细胞捐献者动员采集效果和不良反应的观察

    目的:探讨中华骨髓库(CDMP)造血干细胞捐献者接受重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员后外周血造血干细胞(PBSC)的采集效果及不良反应,关注CDMP志愿者rhG-CSF有关的不良反应.方法:分析108名正常供者接受rhG-CSF动员后的症状、体征、PBSC采集总量、外周血白细胞计数、CD34细胞比例和肝功能等实验室指标变化及其恢复情况.结果:108名供者接受(5~10)μg/kg体重的rhG-CSF动员后,均获得良好的动员效果.104经1次采集,4经2次采集PBSC达到受体需要的移植细胞量的要求.动员、采集期间供者可耐受动员药物引起的不良反应.但外周血白细胞和ALT的恢复正常的时间长者达30 d.结论:rhG-CSF可有效动员正常供者的造血干细胞,但应严格采集前的体检和实验室检查,以保证中华骨髓库志愿者造血干细胞捐献的正常进行.

    作者:周小玉;汪承亚;徐智杰;孙云雨;华岚;熊婷 刊期: 2012年第05期

  • 红细胞H抗原缺陷型及其细胞功能研究现状

    H抗原是Hh血型系统惟一的抗原,人体几乎所有组织的细胞膜上、分泌液、体液和血浆中都存在H抗原,红细胞上H抗原是A和B抗原的基础物质,控制红细胞表面A、B抗原是否正常表达.红细胞膜上的H抗原寡糖前体糖链有Ⅰ型前体糖链和2型前体糖链,后者为主要,前者是从人血清中吸附到红细胞表面的.H抗原受控于19号染色体上2个紧密连锁的位点H(FUT1)和se(FUT2)基因,由其编码的2种基质特异性不同的α(1,2)岩藻糖基转移酶(fucosyltranseferase,α-1,2FT),该酶将岩藻糖基连接到前体核心糖链末端的半乳糖上形成H抗原.FUT1基因编码的L-1,2-岩藻糖基转移酶由365个氨基酸组成,其作用底物为2型糖链,决定H抗原在红细胞膜上表达.

    作者:何子毅;邹文涛 刊期: 2012年第05期

  • 双重TaqMan实时PCR检测中国汉族人群HLA-B*27的研究

    目的:建立一种快速有效的双重TaqMan实时PCR法检测中国汉族人群的人白细胞抗原B*27(HLA-B*27).方法:以156例已定型的基因组DNA标本为标准建立一种双重TaqMan实时PCR方法用于检测HLA-B*27,并对118例强直性脊柱炎(AS)患者和225例健康志愿者的HLA-B*27进行基因分型.结果:156个已定型标本的CtGAPDH为23.19±2.28且呈正态分布.45个已定型阳性标本的CtB27为29.12±2.05,也符合正态分布,而111个已定型阴性标本的CtB27>40.以CtB27≤31.17和20.91≤CtGAPDH≤25.47为阳性判断标准,则AS患者和健康志愿者的阳性率分别为93.22%和4.95%,而且15例标本基因测序结果与TaqMan实时荧光PCR结果完全吻合.结论:TaqMan实时PCR是一种快速有效的检测HLA-B*27的方法,具有传统的PCR所不可比拟的优点,可取代传统的PCR法用于中国汉族人群HLA-B* 27的基因分型.

    作者:冯海艳;周实华 刊期: 2012年第05期

  • 献血员筛查丙氨酸氨基转移酶的重要性分析及评价

    目的:了解丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性与丙型病毒性肝炎的关系,明确ALT检测在献血员筛查中的重要性.方法:对34 801份自愿无偿献血者标本进行统计分析,探讨抗-HCV检测阳性标本的检测值(S/CO)与其ALT活性以及ALT阳性标本与其抗-HCV检测结果的相关性.结果:抗-HCV阳性标本检测的S/CO值与其ALT活性值有直线关系;ALT阳性标本其ALT活性值与其抗-HCV检测的S/CO值没有直线相关关系.采血车初筛ALT阳性淘汰率为8.65%.结论:对献血者做ALT血液筛查仍是减少HCV“窗口期”感染的辅助手段.

    作者:陈善华;王志红 刊期: 2012年第05期

  • 2种不同的血浆置换液治疗系统性红斑狼疮的临床疗效分析

    目的:探讨2种完全不同的血浆置换液进行血浆置换(PE)治疗重型系统性红斑狼疮的临床疗效.方法:按补充置换液的不同成分将患者分成病毒灭活血浆组和白蛋白加林格液加706代血浆组.分析2组重型系统性红斑狼疮患者血浆置换前后血清中IgG、IgA、IgM、ESR、C3、CRP、BUN、Cr指标的变化,临床疗效及血浆置换后不良反应发生率.结果:2组重型系统性红斑狼疮患者经血浆置换后,血清中的各项实验室指标较血浆置换前均发生明显改变,临床症状均有改善;第1组除IgM无明显变化外,其余7项实验室指标与置换前比较,结果明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01);第2组的试验室指标IgM、IgA、CRP、C3与置换前相比,差异无统计学意义(P>0.05),IgG、ESR、BUN、CREA与置换前相比,差异均有计学意义(均P<0.01).第1患者的总有效率(94.7%)与第2患者的总有效率(77.3%)相比较,差异有统计学意义(P<0.01).2患者发生血浆置换不良反应率分别为13.2%和14.6%,差异无统计学意义(P>0.05).结论:用病毒灭活血浆置换液治疗重型系统性红斑狼疮临床疗效优于由白蛋白、林格液、706代血浆组成的血浆置换液,但不良反应差异无统计学意义.

    作者:周晔;陈波;刘银;蒋天舒;葛春红;唐晓峰 刊期: 2012年第05期

  • 血小板输注无效患者配合性输血效果的临床分析

    目的:研究血小板输注无效(PTR)患者的发生率,分析运用配合性输血后的临床效果.方法:采用简易致敏红细胞血小板血清学技术(SEPSA)对265例输血多次且输注血小板3次以上的患者进行调查分析,并检测血小板相关抗体,比较血小板配合性输注与随机输注的效果.结果:265例多次输注血小板患者发生PTR25例(9.43%),其中血小板抗体阳性19例(76%),成功配型12例(63.2%),配型输注患者的CCI值明显高于随机输注的患者.结论:多次输血的患者血小板抗体可直接导致PTR,配合性输注可提高血小板输注效果,提高临床疗效.

    作者:张少华 刊期: 2012年第05期

  • 无偿献血血源紧张的原因分析及招募应急策略

    临床用血季节性紧张,出现季节性和阶段性缺血是全国各家血站面临的一个共同性课题.临床用血得不到充足的供给,就会影响到正常的医疗活动和秩序,影响社会和谐.例如有些手术无法正常开展等等,甚至使患者失去救治的机会.我们血站过去的10多年中虽然采供血工作步履维艰,困难重重,但由于采取措施得力,济南血站从容应对临床用血紧张状态,其工作成绩得到了国家卫生部和国家红十字会的肯定,并且连续10年获无偿献血先进城市奖,连续12年获卫生局全方位目标先进单位.近几年来,随着临床用血需求增长,济南血站也几度出现血源紧张,但由于站领导未雨绸缪,一线职工同心同德,血源紧张局面很快得到缓解.

    作者:崔振红;范艳华;盛霞 刊期: 2012年第05期

  • 2004-2011年南京市无偿献血者血液检测结果分析

    目的:分析2004-2011年南京市无偿献血者血液检测结果,寻求减少血液浪费的对策.方法:对568 293份无偿献血者血液标本的检测结果进行统计分析.结果:南京市无偿献血者血液检测总不合格率1.77%,其中ALT 0.56%,HBsAg 0.42%,抗-HCV 0.28%,抗-HIV/HIV-P 24 0.14%,梅毒抗体0.39%,各项不合格率的差异有统计学意义(P<0.05).结论:建立相对稳固的志愿无偿献血者队伍,对无偿献血者进行梅毒快速筛查,有助于降低血液报废率.

    作者:吴蕾;何成涛;张立波;刘其中;马贵明 刊期: 2012年第05期

  • 参加四川省临床输血相容性检测室间质评体会

    目的:通过参加室间质评来提高实验室质量管理水平,检验实验室每位工作人员的能力,使临床输血更加安全有效.方法:对发放的ABO血型正/反定型和Rh(D)血型定型,受血者和献血者抗体筛检及交叉配血样品进行检测并按时回报结果.结果:ABO血型正/反定型,Rh(D)血型定型,受血者和献血者抗体筛检及交叉配血检测,结果准确率为100%.结论:参加输血相容性检测室间质评,监测常规检测工作的质量,促进临床输血相容性室内质控更加规范,达到了临床输血更加安全有效的目的.

    作者:陈宇宁;陈华根;刘冰;许颖 刊期: 2012年第05期

  • 冰箱温度无线监控管理系统的使用与体会

    在采供血机构,冷链关乎着血液标本和检测试剂的质量,关乎着血液的质量和安全.为了确保血液及标本等始终在正确的条件下保存,应对冷链设备的温度条件实施监控.《血站质量管理规范》17.1.3明确规定了要对血液的保存状态进行监控,包括持续的温度及其他保存条件的监测和记录.为了确保冷链的温度条件及可追溯性,我站从2004年12月份开始使用以通讯总线网络形式的冰箱温度监控系统.经使用了若干年后,因总线信号传输的问题经常出现大面积的通讯中断现象,故障点也很难查找.经过对通讯线路的维护或更新后,但过了一段时间又会出现同样的顽症.这样已严重影响了我站冷链设备的温度监控效果.

    作者:林云明;林金卫;符微 刊期: 2012年第05期

  • 临床输血电子申请系统的设计与应用

    根据《临床输血技术规范》输血安全的要求,申请输血应由经治医师逐项填写输血申请单,由主治医师核准签字,连同受血者血样于预定输血日期前交输血科(血库)备血.但由于多种原因,医生在手工填写输血申请单时会出现各种各样的疏漏,从而使输血治疗造成安全隐患.一个好的临床用血电子申请系统,可提高医生科学合理用血的意识,减少医生在填写临床用血申请的差错或疏漏,从而提高临床输血申请单和临床输血病历的质量,减少因输血产生的医疗纠纷,降低患者输血风险.我院自2010年10月应用由我院输血科和信息科自行开发的临床输血申请电子系统后,输血病历质量和临床输血申请单合格率都有较大的提高.

    作者:叶宏辉;徐凤娟;沙川;金佩;王静;金淑蓉;唐若腾;赵英 刊期: 2012年第05期

  • 探讨重组促红细胞生成素药理作用的评价方法

    目的:探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对小鼠药理作用的评价方法.方法:煌焦油蓝染色法计数网织红细胞的数量;自动血细胞计数仪分析平均血红蛋白(MCH)的含量.结果:小鼠年龄对结果影响较大,90d以上的小鼠测定结果较稳定;通过比较小鼠肝脏、脾脏及血液的网织红细胞的数量发现,脾脏对红细胞生成素敏感;红细胞MCH的含量可以间接反应机体内促红细胞生成素的治疗效果.结论:小鼠体内促红细胞生成素的治疗效果可以通过网织红细胞计数和体外MCH的含量来判断.

    作者:向环英;杨朝令;马增煌;陈云鹏 刊期: 2012年第05期

  • 激活素A对LX-2分泌细胞外基质的影响

    目的:了解激活素A(ACTA)对体外培养的人肝星状细胞(HSC)系LX-2细胞分泌细胞外基质(ECM)的影响.方法:将培养的LX-2细胞分成5组,除正常对照组外,其余4组分别加入浓度为10、20、100、200 μg/L AC-TA,作用24、48和72 h后取培养上清,用化学免疫发光法检测Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-COL)、透明质酸(HA)及层粘连蛋白(LN)的含量.结果:ACTA刺激后的PⅢNP、Ⅳ-COL和HA表达水平均呈上升趋势,表现出与时间和剂量较强的依赖关系(成正比);而LH仅在后期(72 h)将ACTA上调到200 μg/L时,与正常对照组比才出现统计性差异.结论:ACTA能成功诱导HSC分泌ECM;PⅢNP等4项指标均能反映ACTA参与了肝纤维化的发生发展过程以及肝纤维化病理程度;如何阻断ACTA途径,为今后预防和治疗肝纤维化提供了新思路.

    作者:汪涌;方胜英;朱励;祝剑方;曾令兰 刊期: 2012年第05期

  • 不规则抗体筛查在临床输血中的分析应用

    目的:分析不规则抗体筛查在临床输血中的应用,降低和避免溶血性输血反应的发生.方法:采用DiaMed微柱凝胶免疫技术(IgG卡)对20 000例临床住院申请输血患者标本进行不规则抗体筛查,不规则抗体阳性的标本进行抗体鉴定,同时用DiaMed IgG卡进行交叉配血.分析阳性检出者对临床配血的影响.结果:临床住院申请输血患者标本不规则抗体阳性83例,阳性率0.42%.不规则抗体血型系统的鉴定,Rh系统53例,占63.86%;MNSs系统22例,占26.50%;抗-A1 3例,占3.61%;P系统1例,占1.20%;Lewis系统3例,占3.61%;Kell系统1例,占1.20%.83例不规则抗体阳性标本均用DiaMed IgG卡进行交叉配血,患者均输注了无相应抗原的红细胞.结论:不规则抗体的筛查,对不规则抗体阳性标本鉴定红细胞抗体,能有效降低和避免溶血性输血反应的发生,保证临床输血安全.

    作者:高志峰;胡丽华 刊期: 2012年第05期

  • 产生抗D的RhD阴性者D基因及抗体变化的分析

    目的:了解RhD血清学阴性的个体抗体产生的D基因基础及体内抗体的水平.方法:RhD血清学确认采用抗人球蛋白试验;抗D效价检测采用试管凝集法;RHD基因检测采用PCR-SSP法.结果:3名无偿献血者的RhD血清学检测确认均为阴性,RHD基因外显子D1~7、D9/1227G、D10、270A、1227A进行分型,结果均无阳性条带出现;4年的抗D抗体检测均大于1∶8以上.结论:本文中产生抗D的个体均为RhD表型阴性、D基因缺失的个体;抗D-经产生在体内存在是长期的.

    作者:魏鹏;刘衍春;郑凌;马玲;吴敏慧;刘毅 刊期: 2012年第05期

  • 病态造血、MCV、RDW和SF联合检测对难治性贫血诊断的意义

    目的:探讨病态造血、平均红细胞体积(MCV)、红细胞分布宽度(RDW)和血清铁蛋白(SF)联合检测对难治性贫血(MDS-RA)诊断的意义.方法:对确诊的12例MDS-RA患者通过骨髓细胞学观察各系病态造血并计算畸形率,应用雅培BC5800全自动血常规仪测定各项参数并自动计算MCV、RDW值.用全自动化学发光免疫分析仪检测SF.结果:12例MDS-RA有以下特征:一系~三系病态造血12例(100%),畸形率均>10%,粒系病态造血6例(50%),红系病造血12例(100%),以巨幼样变、双核奇数核红细胞为主,巨核系病态造血8例(75%),巨核细胞大小不一,淋巴样小巨核细胞为主;MCV 95.1~110.0 fl,RDW 18.6~35.6,轻度增高;SF495.3~1 061.4 μg/L,明显增高.结论:MDS-RA形态学改变复杂,诊断困难,缺乏特异性,联合检测病态造血、MCV、RDW、SF有助于难治性贫血诊断.

    作者:周玉平;朱传新;刘华 刊期: 2012年第05期

  • 无偿献血者丙氨酸氨基转移酶检测情况分析

    目的:探讨分析无偿献血者血液丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测的可行性.方法:对80 366例无偿献血者ALT检测结果进行调查分析.结果:ALT与HBsAg、抗-HCV检测结果的关联性差异无统计学意义,继往献血单纯ALT不合格者与合格者再次献血时在4项感染指标阳性率方面差异无统计学意义(x2=1.97 P>0.05),但继往献血单纯ALT不合格者、合格者与首次献血者之间的差异均有统计学意义(均P<0.01).结论:加强献血者的健康征询,建立固定献血者队伍,积极开展献血前ALT初筛,是减少血液报废的有效途径.

    作者:王克成;周国芳;王小芹 刊期: 2012年第05期

  • 第4代艾滋病病毒检测试剂在血液筛查中的应用分析

    目的:应用第4代艾滋病病毒(HIV)检测试剂进行血液HIV筛查,并对其进行评价.方法:分别用第3代和第4代HIV检测试剂对血液标本进行检测.从2010年3月开始对所有血液标本增加核酸检测,有反应性标本送疾控中心进行免疫印迹法确认.结果:检测31 257份无偿献血标本及25份室间质评标本.第3代试剂检出26例阳性标本,第4代试剂检出13例阳性标本,经WB确认4例为HIV抗体阳性,2种试剂的灵敏度均为100%,特异性分别99.93%(第3代)和99.97%(第4代).对于25份室间质评标本,2种试剂检测结果均完全符合.有1例HIV感染“窗口期”标本,1周后跟踪检测,第4代试剂检测呈阳性,而第3代试剂仍为阴性.结论:第4代HIV检测试剂的特异性高于第3代试剂,一定程度上可以检出“窗口期”感染的HIV病例.

    作者:何亚琴;谢卫红;何明祯;许晓国 刊期: 2012年第05期

  • CA-50型血凝仪检测冷沉淀Ⅷ因子及Fbg的方法确认

    目的:探讨CA-50型血凝仪是否适用于采供血机构冷沉淀Ⅷ因子、Fbg的质量检测需求,对其方法进行确认.方法:对CA-50型血凝仪检测不同浓度标准品所建立的标准曲线进行回归分析;采用不同水平的质控品对其检测Ⅷ因子、Fbg精密度、正确度进行了测试;同时与CA-6000型全自动血凝仪检测50袋冷沉淀血浆Ⅷ因子、Fbg,比较其与全自动血凝仪检测结果的可比性;采用血红蛋白、游离型胆红素,结合胆红素,乳脂蛋白4种主要干扰物质对其抗干扰功能进行了测试.结果:该仪器检测标准品Ⅷ因子、Fbg标准曲线|r|分别为0.9991、0.9994;Ⅷ因子、Fbg正常水平质控品批内精密度分别为0.92%、0.85%,日间精密度分别为1.12%、0.98%;异常水平批内精密度分别为0.47%、1.14%,日间精密度分别为1.05%、1.57%;正确度试验水平1和水平2偏倚,Ⅷ因子分别为-0.3、0.5,Fbg分别为-0.2、-0.3;与CA-6000型全自动血凝仪检测相关性r值,Ⅷ因子、Fbg分别为0.996,0.999;4种主要干扰物质对其检测的影响度均在±4.95%以内.结论:CA-50型血凝仪检测Ⅷ因子、Fbg标准曲线相关性良好,结果重复性好,精密度和正确度高,具有较高的准确度,与全自动血凝仪有很好的可比性,有较强的抗干扰功能,能够满足采供血机构冷沉淀Ⅷ因子、Fbg的质量检测需求.

    作者:高均翠 刊期: 2012年第05期

临床血液学(输血与检验版)杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:华中科技大学同济医学院附属协和医院 北京大学医学院血研所