徐力善；陆朝阳；尹大龙；姚大勇；刘连新
目的 观察脂多糖(LPS)体外作用于大鼠肝星状细胞(HSC)时肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和结缔组织生长因子(CTGF)表达变化,探讨TNF-α对LPS诱导的HSC中CTGF表达的影响.方法 用一步密度梯度离心法分离大鼠HSC,体外培养LPS处理HSC,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测不同LPS浓度处理的HSC CTGF mRNA表达水平,并用ELISA双抗体夹心法测定TNF-α浓度.结果 TNF-α水平随LPS浓度增加而增加,LPS可上调CTGF mRNA的表达,TNF-α浓度及CTGF mRNA表达水平呈一定的平行关系.结论 LPS可上调HSC中CTGF mRNA表达,该过程可能是通过TNF-α介导的.
作者：贾晋斌；谷峰；刘燕；陈尉华；刘梅；王敏；宋华妮；陆伦根 刊期： 2008年第03期
目的 对骨组织工程支架材料多孔碳酸钙陶瓷(PCCC)进行Ames试验以评价其潜在致突变性.方法 采用浸提法制备多孔碳酸钙陶瓷(PCCC)生理盐水浸提液.采用标准平板掺入法,计数TA97、TA98、TA100、TA102在4个不同浓度浸提液下,37℃培养48 h后的回复菌落数,测试其对鼠伤寒沙门菌的致突变比值(MR=实验组回变菌落数Rt/阴性对照组回变菌落数Rc).结果 阳性对照组各菌株回变菌落平均数均超过其相应阴性对照组回变菌落平均数的二倍以上(MRp＞2),多孔碳酸钙陶瓷(PCCC)浸提液各剂量组对鼠伤寒沙门菌的致突变比值MR均小于2.结论 多孔碳酸钙陶瓷(PCCC)不会引起鼠伤寒沙门菌的回复突变数增加,提示其无潜在致突变性.
作者：魏任雄；谭金海；程晋鹏；熊健；徐晶 刊期： 2008年第03期
目的 应用RNA干扰技术,构建靶向bcl-2基因StealthTM RNA,转染入人肝癌细胞株,探讨RNA干扰诱导人肝癌细胞凋亡的机制.方法 确定并合成3对人肝癌bcl-2基因干扰序列;脂质体法转染入肝癌细胞株内;荧光显微镜下观察转染细胞并计算转染率;倒置显微镜下观察转染前后细胞形态学的改变;SP免疫细胞化学技术检测StealthTM RNA处理前后细胞bcl-2蛋白表达变化;流式细胞术检测StealthTM RNA干扰对癌细胞凋亡和周期的影响.结果 各组转染成功,荧光镜下显清晰的绿色荧光;各转染组转染率与时间有关,各组48 h的转染率高(P＜0.01);转染组间StealthTM RNA Ⅰ组的转染效率高(P＜0.01);倒置显微镜下观察见转染后见部分细胞边缘圆,折光度降低,细胞增殖减慢且易脱落;未转染组细胞呈上皮性贴壁生长,生长旺盛.免疫细胞化学显示,StealthTM RNA干扰后各转染组发现细胞的bcl-2表达减弱,与未转染组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).流式细胞术结果示,各转染组细胞凋亡率明显升高,并出现凋亡峰,StealthTM RNA Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的凋亡率分别为(27.87±4.51)%、(24.50±0.89)%和(26.03±0.57)%,与未转染组细胞凋亡率(3.20±1.71)%,差异有统计学意义(P＜0.01).各转染组细胞发生显著的细胞周期阻滞,表现为S期细胞明显减少,G0/G1细胞明显增多.结论 靶向bcl-2基因StealthTM RNA成功的转染人肝癌细胞中,bel-2蛋白表达受抑制,并明显的诱导癌细胞发生凋亡.
作者：李明意；杨永光；赵家明；杨展 刊期： 2008年第03期
干细胞治疗1型糖尿病(type 1 diabetes,T1D)是近年来研究的热点领域之一.利用干细胞来产生胰岛素生成细胞可用于移植,通过基因修饰造血干细胞来防治T1D.
作者：吕平；刘芳；闫雷；彭涛；刘涛；姚忠；王春友 刊期： 2008年第03期
目的 检测结直肠癌突变基因(MCC)单核苷酸多态性(SNP)位点511在散发性结直肠癌患者和非癌对照组中的分布情况,并分析其与散发性结直肠癌发病及病理特征的相关性.方法 从172例肿瘤组织和180例非癌对照组血样中提取DNA,采用Taqman探针技术检测MCC基因511T/C多态性表型,并用统计软件计算和比较各基因型的分布.结果 肿瘤组与对照组就MCC基因511T/C多态性的基因表型分布差异无统计学意义(χ2=2.21,P＞0.05).MCC基因511T/C多态性与患者的淋巴结转移情况相关(χ2=6.39,P＜0.05),但与患者性别、年龄、浸润深度、组织类型以及远处转移的发生均无明显相关(P均＞0.05).结论 MCC基因511T/C多态性可能通过引起其邻近的APC基因的缺失或失活参与散发性结直肠癌的淋巴结转移.
作者：唐华美；任卓；贺光；周崇治；樊军卫；裘国强；贺林；彭志海 刊期： 2008年第03期
目的 通过检测原癌基因Bmi-1在神经母细胞瘤(NB)中的表达以及观察其表达水平对神经母细胞瘤的影响,探讨其在神经母细胞瘤中的作用.方法 用免疫组织化学和免疫印迹法检测方法分别检测人神经母细胞瘤标本和神经母细胞瘤细胞系细胞中Bmi-1的表达情况;采用逆转录病毒转染法将目的基因Bmi-1/si转染至Ⅰ型神经母细胞瘤细胞系BE-2-C细胞,通过Western免疫印迹法监测转染效果,并用软琼脂实验观察转染后的BE-2-C克隆形成能力.结果 在32例人神经母细胞瘤标本中29例有Bmi-1的高表达(90.63%),且Bmi-1的表达程度的高低和NB的临床分期和临床预后密切相关(P＜0.05),Western免疫印迹实验也显示9种不同病理类型的神经母细胞瘤细胞系细胞中均有Bmi-1的高表达,其表达水平和病理类型有密切相关.在软琼脂实验中,与对照组(空白载体转染组)比较,Bmi-1/si转染后的BE-2-C细胞所形成的克隆数目不仅显著减少,克隆也明显变小.结论 Bmi-1在神经母细胞瘤中高表达,其表达水平与肿瘤恶性程度密切相关,它在神经母细胞瘤的形成中起重要作用.
作者：夏远鹏；周昱男；胡波 刊期： 2008年第03期
目的 观察正常成体小鼠肝细胞的增殖能力和分化潜能,分离成体小鼠肝脏内可能存在的干细胞或祖细胞,建立细胞培养模型.方法 应用改良的Seglen二步法灌注和离心分离肝脏细胞,用含血清的改良DMEM培养基进行培养,持续观察超过60 d.应用免疫荧光技术对肝细胞及其形成的克隆进行Albumin、AFP和CKl9染色.结果 部分肝脏细胞培养第2～3天后活化,迅速增殖并形成细胞克隆,培养30 d后克隆内出现类似成熟的肝细胞,细胞克隆持续扩增超过60d.该类细胞培养第1天强阳性表达肝细胞标记物Albumin,培养第5天细胞克隆开始表达肝脏干细胞标记物AFP,第55天表达胆管细胞标记物CKl9.结论 在成体小鼠未损伤肝脏内存在一种成体肝脏祖细胞(adult hepatic progenitor cells,AHPCs),该细胞体外培养具有较强的增殖能力,可分化为肝细胞和胆管细胞,并成功建立了AHPCs的体外培养模型.
作者：王洪山；宋陆军；沈坤堂；刘隽；高晓东；沈睿；牛伟新；秦新裕 刊期： 2008年第03期
我们通过向骨髓间充质干细胞(MSCs)培养体系中加入梗死心肌组织裂解液的方法体外模拟梗死心肌细胞微环境,观察梗死心肌微环境对MSCs向心肌细胞诱导分化的作用.
作者：赵金超；顾春虎；易定华；魏旭峰；王云雅；王云；陈瑜；康晓军；王进 刊期： 2008年第03期
我们利用RNAi技术达到了特异抑制胰腺癌突变K-rasAsn12的目的,现报道如下.一、材料和方法1.材料:AsPC-1和BxPC-3细胞株购自中科院上海细胞库.pSilenCircle试剂盒购自Allele公司.
作者：孟繁杰；曹斌；蔡建辉 刊期： 2008年第03期
目的 观察淋巴结微转移对中下段直肠癌预后的影响.方法 应用CK-20免疫组织化学技术对56例中下段直肠癌患者共计661枚淋巴结检测微转移.结果 20例(35.7%)67枚(10.1%)淋巴结检出微转移.20例检出淋巴结微转移者中10例TNM分期提高:Ⅰ→ⅢA 3例,Ⅰ→ⅢC 2例,ⅡA→ⅢB 3例,ⅢA→ⅢC 2例.Kaplan-Meier生存分析显示,淋巴结微转移阳性患者半数生存期为(36.90±3.37)个月(95%置信区间:30.29～43.51个月),明显短于淋巴结微转移阴性者的(48.72±2.25)个月(95%置信区间:44.30～53.14个月),两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 中下段直肠癌淋巴结微转移检测有助于更准确地进行临床病理分期.淋巴结微转移阳性者预后较差.
作者：吴泽宇；万进；赵刚；杨珏；姚远；杜嘉林 刊期： 2008年第03期
目的 探讨错配修复基因hMLH1、hMSH2、hMSH3在膀胱移行细胞癌中启动子甲基化和蛋白表达的相关性.方法 采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)检测正常膀胱上皮组织(13例)及膀胱移行细胞癌组织(57例)hMLH1、hMSH2、hMSH3启动子甲基化状态,免疫组织化学检测其蛋白表达.结果 在正常膀胱上皮中,hMLH1、hMSH2、hMSH3均未发现启动子甲基化;在肿瘤组织中,hMSH2未发现启动子甲基化,hMLH1、hMSH3启动子甲基化阳性率分别为36.8%、49.1%,与正常组织比较差异均有统计学意义(P＜0.01),但在不同肿瘤分级(G1、G2、G3)间及不同临床分期(浅表性、浸润性)间比较差异无统计学意义(P＞0.05).免疫组织化学显示:hMLH1、hMSH2、hMSH3蛋白表达在正常膀胱上皮组织中,阳性表达率分别为100%、100%、92.3%,与肿瘤组织阳性表达率分别为59.6%、52.6%、40.4%,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01),但在不同临床分期(浅表性、浸润性)间比较差异无统计学意义(P＞0.05),且hMSH2、hMSH3蛋白阳性表达率随肿瘤分级的增加显著降低,G1与G3比较差异有统计学意义(P＜0.05).在肿瘤组织中,hMLH1和hMSH3启动子甲基化与蛋白表达具有极显著相关性(P＜0.01).结论 hMLH1、hMSH3蛋白表达受其启动子甲基化的调控,hMSH2蛋白表达不受其启动子甲基化的调控.错配修复基因hMLH1、hMSH2、hMSH3蛋白表达的缺失可能参与了膀胱移行细胞癌的发生.
作者：郎斌；张旭；傅斌；张军；许凯；艾星；史涛平；朱宏刚；陈军 刊期： 2008年第03期
目的 构建galeetin-9基因不同亚型的真核表达载体,观察galectin-9对结肠癌LoVo细胞体外黏附侵袭能力的影响.方法 构建galectin-9基因不同亚型的真核表达载体后,用脂质体法转染结肠癌LoVo细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法验证转染效果.LoVo细胞分别在转染galectin-9、转染galectin-9+抗体(5 mg/L)和转染galectin-9+β-L糖(30 mmol/L)条件下进行体外细胞-基质黏附实验和体外细胞侵袭实验.结果 测序结果证实载体上插入的galectin-9三种剪接体碱基序列正确,同时载体成功转染LoVo细胞.体外细胞-基质黏附实验中,转染空载体,转染galectin-9L,galectin-9M和galectin-9S组平均吸光度分别为:0.74±0.04、1.14±0.12、1.12±0.10和1.15±0.13,表明galectin-9促进LoVo细胞黏附于细胞外基质(P＜0.05).galectin-9抗体和β-乳糖可抑制该作用,但转染galectin-9L和galectin-9S LoVo细胞的黏附作用受β-乳糖抑制更明显(P＜0.05).体外侵袭实验未发现galectin-9对LoVo细胞侵袭力有影响.结论 galectin-9促进LoVo细胞与细胞外基质的黏附,这可能与结肠癌侵袭转移相关,但其三种亚型发挥作用的机制不全相同.
作者：张丰；郑民华；彭远飞；陆爱国；李健文；王明亮 刊期： 2008年第03期
目的 观察中国人肠道产甲酸草酸杆菌(Ox.F)草酰辅酶A脱羧酶基因(oxc)的分离、克隆及其在293细胞中的表达.方法 提取中国人肠道Ox.F的基因组DNA,PCR扩增oxc基因片段并克隆入真核表达载体pEGFP-C1,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定基因片段.将重组质粒脂质体转染至293细胞,利用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测oxc基因在真核细胞中的表达.结果 中国人肠道产甲酸草酸杆菌oxc基因全长1707 bp,与Gene Bank中的序列比较,碱基序列的同源性为93.61%,氨基酸残基序列的同源性为97.18%.重组质粒转染293细胞后24～48 h,可观察到明亮的绿色荧光,从mRNA和蛋白水平上可以检测到oxc基因在真核细胞中的表达.结论 中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可以分离出oxc基因;中国人肠道产甲酸草酸杆菌oxc基因存在一定的变异;oxc基因可在真核细胞293细胞中表达.
作者：叶章群；孔德波；陈志强；郭辉；杨为民；姚林方；刘冠琳 刊期： 2008年第03期
目的 探讨去甲基化药物5-杂氮脱氧胞苷对膀胱癌WIF-1基因表达的影响及其生物学效应.方法 用5-杂氮脱氧胞苷处理膀胱癌细胞株T24和BIU87,RT-PCR检测WIF-1 mRNA表达情况,免疫细胞化学和Western blot检测WIF-1蛋白表达变化,甲基化特异性PCR检测WIF-1启动子甲基化状态变化,MTT法检测5-杂氮脱氧胞苷对膀胱癌细胞的增殖抑制作用,TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 5-杂氮脱氧胞苷处理72 h后,WIF-1 mRNA及蛋白表达明显增加,而且恢复为启动子未甲基化状态,膀胱癌细胞增殖明显抑制,FCM法检测T24和BIU87的凋亡率分别为(18.2±2.6)%和(17.3±2.7)%.结论 DNA甲基化是导致WIF-1不表达的重要原因,5-杂氮脱氧胞苷可以通过逆转WIF-1甲基化状态而恢复WIF-1表达,从而抑制膀胱癌细胞的生长并诱导细胞凋亡.5-杂氮脱氧胞苷有望成为膀胱癌的有效辅助化疗药.
作者：傅斌；郎斌；徐华；马鑫；张军；许凯；艾星；王保军；周辉霞；张国玺；王超；史涛坪；居正华；张旭 刊期： 2008年第03期
目的 观察诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)对同系原位全小肠移植术后早期移植肠运动功能的影响.方法 分为对照组、移植组、L-NIL治疗组,每组12只大鼠.对照组行十二指肠造瘘术,另两组均行同系原位全小肠移植及十二指肠造瘘术,术后分别给予生理盐水、L-N6-(1-亚氨乙基)-赖氨酸(L-NIL).于术后2 d,各组取6只获取肠段行病理组织学检查,观察炎性损伤程度,并采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测iNOS mRNA及蛋白表达水平.各组另6只行小肠传输实验,观测小肠传输功能.结果 移植组呈明显炎性损伤改变,iNOS mRNA及蛋白表达水平(1.278±0.142)%,(56.33±5.16)%较对照组(0.066±0.016)%,(9.17±3.17%)上调(P＜0.01),较对照组小肠传输延迟(P＜0.01).L-NIL治疗组炎性损伤程度较移植组减轻,iNOS mRNA及蛋白表达水平(0.588±0.096)%,(26.17±4.14)%较移植组下调(P＜0.01),且小肠传输延迟有改善(P＜0.01).结论 iNOS在术后早期移植肠炎症损伤及其引发的肠运动功能障碍中可能起重要作用.
作者：冯舟；朱理玮；王鹏志 刊期： 2008年第03期
目的 观察不同的微环境对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分化成为产胰岛素细胞(IPCs)的影响.方法 采用贴壁法分离纯化大鼠MSCs,用不同的微环境进行诱导,对照组诱导剂为含有角朊细胞生长因子、ITS、尼克酰胺的无血清DMEM/F12培养基、实验组在对照组基础上添加胰腺条件培养液;对诱导后细胞进行光、电镜观察,双硫腙和免疫细胞化学进行鉴定,并进行体外葡萄糖刺激实验,测定细胞分泌胰岛素及C-肽功能.结果 实验组及对照组均可诱导分化为IPCs,但实验组分化而成的IPCs在数量及功能上均高于对照组.结论 大鼠胰腺提取物模拟的微环境能促进大鼠MSCs体外诱导分化为较高质量的IPCs.
作者：黄盛；郑伟；范志勇；张福琴；窦科峰；宋振顺 刊期： 2008年第03期
目的 探讨Stat3/Survivn信号转导通路调控结肠癌细胞凋亡的作用机制.方法 用阳离子脂质体介导Stat3反义寡核苷酸(20 mol/L)转染人结肠癌HT29细胞,噻唑蓝(MTY)法检测细胞增殖状态;流式细胞术检测细胞周期与凋亡;Western blot检测Stat3、p-Stat3、Survivin与bcl-2凋亡家族成员bcl-2、bcl-Xl于bax的表达.结果 Stat3反义寡核苷酸作用HT29细胞72 h后,G1期细胞比率由61.4%上升至75.6%,S期细胞比率由19.4%下降至8.6%,细胞增殖受抑制.凋亡细胞百分比由5.6%增加至22.1%,促进细胞凋亡.Stat3、p-Stag、Cychn D1与Survivin表达下降,bcl-2、bcl-Xl与bax变化不明显.结论 阻断Stat3通路可以抑制靶基因Survivin表达并诱导结肠癌细胞凋亡.
作者：余力伟；马向涛 刊期： 2008年第03期
目的 探讨多药耐药(MDR)基因产物多药耐药相关蛋白1/2(MRP1,MRP2)、谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药相关蛋白(LRP)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)在胆囊癌和胆管癌中的表达及其与耐药的关系.方法 采用免疫组织化学方法(IHC)检测18例胆囊癌和36例胆管癌的上述五个指标的表达情况.结果 在胆囊癌MRPl、MRP2、GST-π、LRP、Topo Ⅱ的表达的阳性率分别72.2%、72.2%、77.8%、61.1%、83.3%,在胆管癌中表达的阳性率为86.1%、80.6%、75.0%、69.4%、91.7%,显著高于对照组的23.1%、15.4%、23.1%、15.4%、30.8%(P＜0.05).LRP的表达在胆管癌年龄＞60岁组显著高于＜60岁组(P＜0.05).之外上述指标与性别、年龄、病理分期、病理类型、分化程度、淋巴结转移无关(P＞0.05);MRP1和GST-π、MRP2在胆囊癌和胆管癌的表达具有相关性(P＜0.05).结论 MRP1、MRP2、LRP、GST-π、TopoⅡ在胆囊癌和胆管癌组织中均有不同程度的高表达,胆囊癌和胆管癌的原发性多药耐药由多个因素共同诱导.
作者：刘厚宝；金赘杰；沈振斌；童赛雄；王炳生；纪元；侯英勇 刊期： 2008年第03期
目的 探讨GRIM-19 mRNA与蛋白的表达在结直肠癌发生、发展中的意义.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法检测40例结直肠癌患者癌组织,正常组织中的GRIM-19 mRNA及蛋白表达情况及测序分析.结果 结直肠癌组织中的GRIM-19 mRNA和蛋白水平明显低于正常组织,GRIM-19蛋白表达在癌组织中明显低于正常组织,且GRIM-19蛋白表达水平与结直肠癌分化程度和临床分期有关(P均＜0.05).结论 GRIM-19作为一种抑癌基因和分子标志物,其表达降低及失活可能与结直肠肿瘤的发生、发展有关.
作者：龚龙波；罗学来；王晶；刘双又；龚建平；胡俊波 刊期： 2008年第03期
目的 制备载碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)甲基丙烯酸缩水甘油酯修饰葡聚糖纳米凝胶微球,观察其对新生血管生成的诱导和促进作用.方法 采用改良乳液聚合法制备载bFGF纳米微球(bFGF-Dex-GMA-NPs),对纳米微球的外形、包封率、体外释药特征进行常规检测,建立兔后肢缺血模型后,分为以下几组(每组6只):安慰剂治疗组(注射磷酸盐缓冲液)(A组);bFGF治疗组(B组);载bFGF纳米微球组(C组),分别于治疗后7、21 d用99mTc标记的sestamibi对后肢血流进行分析,并于21 d将动物处死,取局部肌肉组织切片进行免疫组织化学染色,镜下对毛细血管计数.结果 合成的纳米微球外形圆整,无相互粘连,包封率高达80.9%,并能较好地控制bFGF的释放,持续释放时间超过25 d.后肢缺血模型治疗第7天,B组和C组能量计数分别为(130.95±14.59)、(127.60±11.36),明显高于A组(27.65±6.82)(P＜0.05),但B组和C组间差异无统计学意义(P＞0.05),第21天,C组能量计数增加到(450.69±21.06),明显高于A组(39.89±8.45)和B组(165.34±15.88)(P＜0.05).免疫组织化学染色结果显示C组毛细血管密度是(99.00±5.44)/mm2,明显高于其他两组2.00±0.59(A组)、13.00±1.35(B组)(P＜0.05).结论 载bFGF纳米微球可以控制bFGF长时间释放,对缺血组织新生血管形成有优于单纯bFGF的诱导和促进作用.
作者：邬晓臣；顾春虎；王云雅；吴红；魏旭峰；孙国成；汪静；董小超；易定华 刊期： 2008年第03期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
