陈邦飞；吴秀玲
目的 观察增殖细胞核抗原(PCNA)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌CaCO2细胞抑制作用.方法 WST-8法和克隆形成抑制研究No.2和No.4 PCNA siRNA对CaCO2细胞的作用;碘化丙锭(PI)单染检测细胞周期,Hochest33258染色观察凋亡形态,膜联蛋白(Annexin)V和PI双染测定凋亡百分率.结果 No.2和No.4 PCNA siRNA与CaCO2细胞作用,增殖抑制率分别为(72.24±1.01)%和(74.67±3.35)%;克隆形成抑制率均达90%;两种药物转染细胞均出现明显亚二倍体峰,Sub-G1+G0/G1期减少,S+G2/M期增多;siRNA处理组细胞有较多凋亡形态变化;凋亡率随浓度增加而增加,且早期凋亡率持续高于晚期凋亡/坏死率.结论 PCNA siRNA显著抑制人结肠癌CaCO2细胞增殖及克隆形成;细胞停留于G2/M期,明显诱导细胞凋亡.
作者：陈洁；史金桃；蒋建伟；陈涛 刊期： 2007年第04期
球囊扩张椎体后凸成形术在老年骨质疏松性脊柱压缩性骨折的治疗上开辟了新的道路[1].我们对该技术治疗非病理性胸腰椎压缩性骨折进行研究.一、材料与方法1.材料:新鲜小牛胸腰椎,聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥(PMMA),椎体后凸成形术器械等,椎体骨密度测定提示骨密度正常.
作者：顾晓晖；杨惠林；张喆 刊期： 2007年第04期
目的 在人工尿液中,观察不同浓度及不同性质的Tamm-Horsfall蛋白对草酸钙的成核,生长,聚集的影响.方法 通过分光光度计在620 μm时的A值的测定可在过饱和溶液中观察草酸钙晶体的成核和积聚.观察参数包括诱导时间(induce time),简写为TI,即形成可观察微粒所需的时间;成核曲线(slope of nucleation)的速率,简写为SN,即分光光度计A620所观察的曲线上升支;聚积曲线(slope of aggregation)的速率,简写为SA,即下降支,以及加入不同浓度的NTHP(正常人尿液中所提取的TH蛋白),SF-THP(结石患者尿液中所提取的TH蛋白)后对参数的影响.结果 草酸钙结晶实验的诱导时间为(60.0±2.0)s,成核速率(SN)(1.058±0.036)×10-3/s,聚集速率(SA)为(0.074±0.006)×10-3/s.NTHP浓度20 mg/L时,诱导时间(59±8)s;NTHP 30 mg/L时,诱导时间(63±11)s;NTHP40mg/L时,诱导时间(57±6)s,NTHP既可抑制晶体成核,又可抑制晶体的聚集.SF-THP 20 mg/L时,诱导时间(37±2)s;SF-THP 30 mg/L时,诱导时间(34±3)s;SF-THP 40 mg/L时,诱导时间(31±5)s,ST-THP降低TI并且促进聚集.结论 NTHP和ST-THP对草酸钙晶体的结晶动力学的影响是不同的.
作者：李伟；张旭；王少刚；施宗伟；居正华；赵声龙；陈晓竹 刊期： 2007年第04期
目的 探讨人端粒酶逆转录(hTERT)启动子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因治疗裸鼠胰腺癌的安全性.方法 应用细菌内同源重组法构建hTERT启动子和常规巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的HSV-TK基因真核表达载体PDC312-TP-TK,PSU-CMV-TK.制备腺病毒液,检测病毒滴度为1.9×1010 pfu/ml和1.4×1010 pfu/ml.建立裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,分别以两种方法治疗后观察皮下移植瘤消退、HSV-TK基因表达情况、肝脏苏木素-伊红(HE)染色切片、肝功能.结果 PDC312-TP-TK组与PSU-CMV-TK组对肿瘤的抑瘤率分别为58.3%和65.6%,治疗组间差异无统计学意义(P＞0.05),杀伤方面具有一样的高效性;但其对肝脏的毒副作用远小于PSU-CMV-TK组,PDC312-TP-TK组血清中ALT,AST,ALP分别为(54.00±1.97)、(147.00±12.67)、(33.00±2.59)U/L而PSU-CMV-TK组中为(334.00±9.81)、(511.00±11.24)、(98.00±3.12).差异有统计学意义(P＜0.01).裸鼠肝脏苏木素-伊红(HE)染色中,仅PSU-CMV-TK组有肝脏坏死改变.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)中也仅PSU-CMV-TK组检测到1143 bp的TK基因片段.结论 hTERT启动子驱动的HSV-TK基因是一种新的靶向治疗方法,在具有治疗高效性的同时,更具有安全性.
作者：谢于；李德春；张子详；朱兴国；王凤力 刊期： 2007年第04期
我们在前期研究[1]的基础上,选择c-kit、CK7及两者的组合对原代肝细胞癌(HCC)细胞进行流式细胞分选,从肝癌细胞中分离与鉴定干细胞亚群.
作者：刘胜军；方驰华 刊期： 2007年第04期
目的 建立一种循环肿瘤细胞的检测方法,探讨肝癌患者外周血中循环肿瘤细胞在肿瘤进展中的意义.方法 肝癌细胞株HCC97-L经滤过富集后测定肿瘤细胞的检出率以检测该方法的敏感性,采用该方法滤过富集32例肝细胞癌(HCC)患者、15例肝良性病变患者和10例正常健康对照的外周血中循环肿瘤细胞,用细胞角蛋白8/18(CK8/18)行免疫荧光检测结合显微镜下形态学观察,判断并计数肿瘤细胞.结果 HCC97-L细胞检出率在40%～100%之间,平均为68%;Ⅰ～Ⅱ期患者,循环肿瘤细胞的阳性率为28.6%;Ⅲ～Ⅳ时,为88.9%.两组差异有统计学意义(P＜0.01).健康志愿者10例和肝良性病变患者15例外周血均未见CK8/18阳性肿瘤细胞.结论 全血滤过富集法能简单、快速、有效的检出肝癌患者外周血中循环肿瘤细胞,部分早期肿瘤已有肿瘤细胞的血源性播散;随着肿瘤进展血中肿瘤细胞也增加.
作者：刘道永；孙冰生；武金才；李国才；任宁；高冬梅；钦伦秀 刊期： 2007年第04期
目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对两种不同p53表型胶质瘤细胞U87MG、T98G作用后细胞程序性死亡相关基因表达的影响.方法 应用基因芯片技术筛选出As2O3作用于两种胶质瘤细胞U87MG、T98G前、后与细胞程序性死亡有关的表达差异有统计学意义的基因;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率;用电镜和原位凋亡检测(TUNEL)法及及吖啶噔/溴乙啶双荧光染色进行细胞形态观察、流式细胞仪等方法检测细胞程序性死亡改变.结果 两种胶质瘤细胞应用As2O3后,透射电镜下T98G中频繁地观察到细胞自噬现象;筛选出U87MG细胞在As2O3作用前后差异表达且与程序性死亡相关基因共46条(上调33条,下调13条).T98G细胞在As2O,作用前后差异表达且与程序性死亡相关基因共54条(上调34条,下调20条).结论 As2O3以剂量依赖的方式通过细胞程序性死亡来抑制U87MG和T98 G细胞的增殖;As2O,诱导下的两种不同P53表型的细胞系中还存在非凋亡调控的细胞程序性死亡(自噬);P53/ATM通路的基因、Bcl-2家族、TNF配体家族、TNF受体家族基因参与As2O3诱导胶质瘤细胞程序性死亡的发生机制.
作者：张健；赵世光 刊期： 2007年第04期
目的 探讨经皮椎体成形术(PVP)联合125I粒子植入治疗脊柱转移瘤患者的临床疗效.方法 将80例脊椎转移瘤患者,随机分为单纯PVP组40例,PVP联合125I粒子植入组(联合治疗组)40例.单纯PVP组是在DSA机引导下经皮穿刺,将骨水泥注射到患椎内.联合治疗组是PVP术中联合125I粒子植入.结果 联合治疗组和单纯PVP组术后KPS评分分别为(92.5±7.1)分及(87.7±7.3)分,较术前(68.9±7.9)分及(69.4±8.3)分明显增高,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).联合治疗组肿瘤进展时间(TTP)为9.0个月,单纯PVP组TTP为8.9个月.结论 PVP具有创伤小,操作较简单,并发症少的特点,可有效缓解脊柱转移瘤患者疼痛,PVP术中联合125I粒子植入能增强抗肿瘤作用,从而达到提高疗效的目的 .
作者：杨祚璋；黄云超；许建波；孙洪瀑；刘鹏杰；吴中雄；袁涛；张晋煜 刊期： 2007年第04期
目的 探讨榄香烯体外增强人脑胶质瘤U251细胞对γ射线敏感性的机制研究.方法 人脑胶质瘤U251细胞分为4组:空白组、加药组(榄香烯治疗)、放射组(单独γ射线照射)和联合组(榄香烯联合γ射线照射),应用克隆形成计数法,绘制细胞放射生存曲线,计算增敏比,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期,电镜观察不同方法处理的U251细胞超微结构的改变,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测c-myc和bcl-2基因的表达.结果 榄香烯增强γ射线对U251细胞株抑制率,呈剂量的依赖性,榄香烯增强U251细胞对γ射线敏感的比值为1.38,FCM检测榄香烯增强γ射线对U251细胞的阻滞作用,导致G2/M期细胞比例明显升高,联合组细胞电镜下见细胞核分裂;RT-PCR证实榄香烯增强γ射线对U251细胞c-myc和bcl-2基因表达的抑制作用.结论 榄香烯对U251细胞有放射增敏作用,其作用机制可能与下调bcl-2和c-myc基因表达有关,诱导U251细胞凋亡和对细胞G2/M期阻滞有关.
作者：杨卫忠；陈春美；石松生；王春华；宋施委；倪天瑞 刊期： 2007年第04期
目的 探讨缺血后处理对猪心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn Ⅰ)及肌酸激酶同功酶(CKMB)的影响.方法 24只小型约克猪(体重35～40 kg)被随机分为4组.A组:于体外循环(CPB)开始后并行循环45 min,心肌缺血90 min,再灌注120 min;B组:升主动脉阻断前进行心脏缺血预处理(阻断升主动脉5 min、开放10 min,重复3次),余处理与A组相同;C组:并行循环45 min,心肌缺血90min,再灌注120 min;再灌注开始进行缺血后处理(阻断升主动脉30 s后开放30 s,重复3次,共3min);D组:缺血预处理+缺血后处理.在CPB前、缺血90分、再灌注30、60、90、120 min采静脉血检测血cTn Ⅰ、CKMB水平.结果 在再灌注30、60、90、120 min,A组cTn Ⅰ和CKMB分别为5.41、6.63、8.84、13.25 μg/L和18.61、21.53、25.54、29.73 μg/L,B组分别为2.61、2.97、4.60、5.97 μg/L和12.45、13.68、15.50、14.18 μg/L,C组分别为3.01、3.21、4.68、5.92 μg/L和14.01、14.51、16.48、16.71 μg/L,D组分别为2.63、3.06、4.68、6.04 μg/L和13.08、14.20、15.18、15.86 μg/L;血浆cTn Ⅰ和CKMB水平在B组、C组及D组显著低于A组(P＜0.05),而B组和C组与D组无统计学意义(P＞0.05).结论 缺血后处理可以抑制cTn Ⅰ的释放和CKMB漏出,减轻心肌缺血再灌注损伤而发挥心肌保护作用.
作者：石凤梧；张文立；陈子英；刘苏；蔡文清 刊期： 2007年第04期
目的 探讨血管生成素-2(Ang-2)及其受体Tie-2在骨肉瘤血管生成中作用及其对骨肉瘤恶性演进的影响.方法 采用原位杂交和免疫组织化学技术,检测46例骨肉瘤、15例骨软骨瘤、5例正常骨组织中Ang-2、Tie-2 mRNA表达及骨肉瘤中VEGF、CD34蛋白表达,计数微血管密度(MVD);并与骨肉瘤主要病理学参数进行比较.结果 Ang-2、Tie-2 mRNA在正常骨组织无表达,少量表达于骨软骨瘤及骨肉瘤瘤旁组织,明显表达于骨肉瘤中(69.6%、73.9%);Ang-2、Tie-2表达水平与骨肉瘤组织学分级分型无关,转移组显著高于无转移组(P＜0.01);高MVD组高于低MVD组(P＜0.01),Ang-2与VEGF表达相关,Ang-2与Tie-2表达正相关(r=0.445,P＜0.01).结论 Ang-2及其受体Tie-2参与了骨肉瘤血管生成调控,与骨肉瘤浸润性生长和转移密切相关.
作者：高大新；姜永冲；冯继；刘志新；温晓燕；李会民；王岩峰 刊期： 2007年第04期
上尿路梗阻在临床上较为常见,以往诊断主要依赖B超、排泄性尿路造影(IVU)、逆行肾盂输尿管造影(GRP)、普通CT、MR等检查,但随着CT技术的不断进步,CT尿路成像技术对上尿路梗阻性疾病的诊断具有重要的临床价值[1].我们自2002年2月采用多层螺旋CT三维尿路成像(MSCTU)检查上尿路梗阻性疾病89例进行分析,探讨其在上尿路梗阻中的诊断价值.
作者：薛学义；郑清水；魏勇；周辉良；罗义麒；曹林升 刊期： 2007年第04期
移植胰岛长期存活率不高,主要原因是移植术后排斥反应[1,2],共刺激信号在排斥反应的发生中起重要作用.本实验旨在观察共同刺激分子-可诱导其刺激分子(ICOS)是否参与了小鼠同种异体胰岛移植排斥反应的发生,并用ICOS单克隆抗体(ICOSmAb)阻断ICOS,研究其对排斥反应的抑制作用.
作者：赵国华；刘永锋；许国岩；张金祥；杨蕾；程颖；张佳林 刊期： 2007年第04期
目的 探讨可诱导性共刺激分子(ICOS)单抗、细胞毒T淋巴细胞4Ig(CTLA4Ig)阻断共刺激通路对于异基因大鼠胰腺移植的作用及其机制.方法 建立胰腺移植模型,分A组(对照组),B组(CTLA4Ig组),C组(抗ICOS单抗组),D组(联合CTLA4Ig和抗ICOS单抗组).术后1、4、7 d监测血糖,第7天取胰腺做苏木素-伊红染色,脾脏做流式细胞检测CD3+CD8+T细胞、CD4+T细胞、CD4+CD25+T细胞.结果 与A组比较:B、C、D组排斥反应较A组明显减弱,显著延长了移植物的存活时间.CD3+CD8+T细胞计数B、C、D与A组比较均有减少,差异有统计学意义(P＜0.01).CD4+T细胞B、D与A组的差异有统计学意义(P＜0.05).CD4+CD25+T细胞各组间逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 抗ICOS单抗和CTLA4Ig能有效地抑制大鼠胰腺移植排斥反应,延长移植物存活时间,且联合应用比单一应用更有效.其可能机制为诱导了CD4+CD25+T细胞的产生.
作者：韩曙光；徐泽宽；张轩；苗毅 刊期： 2007年第04期
目的 探讨体外转录法合成的小干扰RNA(siENA)对大鼠淋巴细胞白细胞介素(IL)-2基因的表达和功能的影响.方法 设计并合成3条siENA(siENA-1、siRNA-2、siRNA-3)在阳离子脂质体的介导下转染淋巴细胞.于转染后0、24、48 h收集细胞,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测IL-2 mRNA的变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测IL-2表达的变化.结果 体外合成的3条siRNA通过脂质体转染淋巴细胞后,均能不同程度地抑制IL-2的表达.转染后24 h的ELISA方法检测显示siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3组的抑制率分别为(79.20 ±1.83)%、(66.50±1.42)%、(43.90±1.22)%,以siENA-1的IL-2抑制作用强.半定量RTPCE方法检测显示siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3转染后的IL-2 mRNA均受到不同程度的抑制,其中siENA-2组的抑制作用明显(82.10±1.85)%.结论 siRNA可特异性的抑制淋巴细胞IL-2基因的转录和表达,为研究siRNA在移植免疫耐受及防移植物抗宿主病(GVHD)方面的应用提供了依据.
作者：鄢涛；王森；龚建平；彭勇；刘作金；石毓君；刘鸿翔 刊期： 2007年第04期
我们通过对21例因有消化道症状而行胃、结肠镜检查发现明显黏膜异常而内镜活检仅示一般病变者短期内重复内镜活检病理检查,并和手术切除整体病检比较相符合情况,从而判断重复活检病理和切除病理的实用价值.
作者：李小刚；任重；朱风尚；王天才 刊期： 2007年第04期
目的 探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α与血管内皮生长因子(VEGF)在不同级别胶质瘤中的表达特点及其生物学特性.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学法分别检测20例新鲜冷冻标本及117例多聚甲醛固定的不同级别胶质瘤标本中HIF-1α与VEGF的表达情况,并对实验结果 进行半定量计算和统计学分析.结果 RT-PCR结果 示正常脑组织和Ⅰ-Ⅳ级胶质瘤中HIF-1αmRNA平均吸光度值分别为11.99、12.18、48.31、80.96、112.77,正常脑组织和Ⅰ级胶质瘤间差异无统计学意义,其余各组间差异均有统计学意义(F＝969.45,P＜0.01);而VEGF mRNA平均吸光度值分别为29.50、37.97、60.33、84.61、112.97,各组间差异均有统计学意义(F=312.91,P＜0.01).免疫组织化学结果示HIF-1α在正常脑组织和Ⅰ-Ⅳ级胶质瘤中的阳性表达率分别为10%、13.3%、53.5%、80.6%、100%,正常脑组织和Ⅰ级胶质瘤间差异无统计学意义,其余各组间差异均有统计学意义(χ2=38.19,P＜0.05);同样,VEGF在各组中的阳性表达率分别为0%、33.3%、62.8%、83.3%、100%,各组间差异均有统计学意义(χ2=45.78,P＜0.05).结论 HIF-1α与VEGF在胶质瘤中的表达与胶质瘤的病理分级密切相关,随着病理级别的升高,HIF-1α与VEGF无论是在mRNA水平还是在蛋白水平的表达均上调,并且两者间的表达也具有相关性.
作者：吴建梁；孔世奇；李鹏；范振增；史学芳；扈玉华 刊期： 2007年第04期
目的 观察巢蛋白(Nestin)、神经元素(Ngn)3在不同纯度大鼠胰岛中的表达.方法 将30只成年雄性SD大鼠随机分为3组,采用胰管内注入胶原酶消化法分离成年大鼠胰腺,Ⅰ组(n=10):胰岛沉淀物不进行纯化;Ⅱ组(n=10):胰岛沉淀物加入25%Ficoll-400纯化,Ⅲ组(n=10):胰岛沉淀物依次加入25%、11%的Ficoll-400纯化.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Nestin和Ngn3 mRNA在不同纯度胰岛细胞中的表达.结果 Ⅰ组获得胰岛纯度为(43,60±6.29)%,Ⅱ组获得胰岛纯度为(65.30±4.40)%,Ⅲ组获得胰岛纯度为(77.60±6.36)%,各组差异均有统计学意义(P＜0.05).Ⅰ组中Nestin和Ngn3的mRNA表达明显高于Ⅱ组、Ⅲ组,Ⅲ组中表达弱.结论 Nestin、Ngn3在不同纯度胰岛细胞中均有表达,但是在低纯度胰岛中表达明显,提示低纯度胰岛中可能携带较多的干细胞.
作者：薛栋；杜成友；杨闯；尹昌生 刊期： 2007年第04期
目的 探讨猪肝移植时供肝耐受无心跳热缺血损伤的安全时限.方法 对24头小型家猪根据供肝热缺血时间0、15、30、45 min,随机分为4组,而后行原位肝移植,分析移植后肝脏丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、三磷酸腺苷(ATP)的含量以及病理变化.结果 WI-45组胆管吻合前无胆汁流出.WI-15、30、45组血清ALT、LDH、肝细胞ATP的含量与WI-0组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),WI-15、30组间差异无统计学意义(P＞0.05),但WI-45组与WI-15、30组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).电镜下观察WI-15、30组肝组织呈可复性改变,WI-45组则呈不可逆性改变.结论 猪肝移植时,供肝耐受无心跳热缺血损伤的的安全时限为30 min.
作者：王世明；王海涛；徐钧；杨镇 刊期： 2007年第04期
目的 构建双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53,并研究其对骨肉瘤细胞增殖生长的抑制作用.方法 利用基因工程技术,将从培养的正常人肝细胞系L02细胞中扩增出的p14cDNA(0.5 kb)亚克隆至pIRES载体中,通过聚合酶链反应(PCR)、限制性内切酶酶切鉴定重组质粒pIRES-p14ARF-p53.通过脂质体介导转染入骨肉瘤MG-63细胞中,并筛选出阳性克隆,流式细胞仪测定瘤细胞DNA含量和细胞周期;逆转录(RT)-PCR和Western bolt对稳定转染后的瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达进行定性和半定量检测.噻唑蓝(MTT)比色法与细胞生长曲线观察细胞增殖情况.结果 成功构建出双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53.转染后瘤细胞形态由转染前密集排列的多角形、星形转变为排列稀疏的长梭形细胞,瘤细胞生长速度较前缓慢,群体倍增时间比转染前增加了2.3倍,且易出现脱壁并见散在瘤细胞凋亡;流式细胞仪检测发现转染后的瘤细胞多停滞于G1期;RT-PCR与Western blot检测证实p14ARF、p53基因在靶细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达,转染MG-63后24、48、72、96 h瘤细胞生长抑制率分别为:33.43%、69.37%、66.19%、75.26%,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 野生型p53和p14ARF协同抑制骨肉瘤细胞的增殖促进瘤细胞的凋亡,为进一步研究p14ARF与p53在骨肉瘤基因治疗的体内实验奠定了基础.
作者：李进；杨述华；邹利军；邵增务；廖翔 刊期： 2007年第04期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
