闫峰；李宗芳；苏清华；马双余；曹罡；张澍
目的探讨基因重组可溶性补体受体I型(sCR1)对大鼠急性脊髓损伤组织补体固有成分C9及补体调节因子Clusterin表达的影响.方法采用改良Allen重物打击法制成SD大鼠急性脊髓损伤模型,观察sCR1组与生理盐水(NS)组在伤后12 h、1、3、7、14 d时间点脊髓损伤组织中C9和Clusterin表达的部位及时程,并采用斜板实验评定两组大鼠的下肢运动功能,比较组间差异.结果 sCR1组及NS组在伤后各个时间点脊髓损伤组织中C9、Clusterin表达增强,并存在动态变化过程.sCR1组在伤后各个时间点C9表达均明显轻于NS组(P<0.01);sCR1组在伤后12 h、1、3 d时间点Clusterin表达明显轻于NS组(分别为P<0.01、P<0.01、P<0.05),伤后7、14 d两组间差异无统计学意义.sCR1组在伤后3、7、14 d时间点大鼠下肢运动功能明显优于NS组(分别为P<0.05、P<0.01、P<0.01).结论基因重组sCR1可显著抑制大鼠急性脊髓损伤组织C9和Clusterin的表达,可通过抑制补体系统激活机制减轻继发性脊髓损伤.
作者：李良满；朱悦；范广宇 刊期： 2005年第02期
目的探讨三氧化二砷(As2O3)对大鼠肝癌肝移植后肿瘤复发的预防作用.方法选用雄性Wistar大鼠以质量分数为0.05% 2-乙酰氨基芴的颗粒饲料饲喂12周,第21周剖腹取肝脏结节进行组织学检查确认建立大鼠原发性肝癌模型,按不同的组别进行原位肝移植.结果 A组大鼠术后平均生存(19.83±2.89) d.B组大鼠术后平均生存(75.40±5.76) d.C组大鼠术后平均生存(88.00±5.60) d.B组大鼠术后生存时间和A组大鼠术后生存时间比较,差异有统计学意义(P＜0.001),C组大鼠术后生存时间和实验B组大鼠术后生存时间比较,差异有统计学意义(P＜0.001).结论大鼠原位肝移植对大鼠原发性肝癌具有治疗作用.As2O3对大鼠肝癌肝移植后减少肿瘤复发具有一定的预防作用.
作者：曾兆林；韩德恩；韩丽姝；汪鹰扬；王志东；张新宇 刊期： 2005年第02期
目的探讨提取人脾脏巨噬细胞总RNA的方法并测算其产率.方法收集5例门静脉高压症脾亢患者的手术切除脾脏,经贴壁培养法分离纯化出巨噬细胞(Mφ)后,采用TRIzol试剂一步法提取5例脾脏Mφ样本的总RNA.分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的产量和质量.后计算出每108个Mφ总RNA的产率.结果 5例样本Mφ总RNA的A260 nm与A280 nm比值平均为1.83±0.13,提示总RNA纯度较高,电泳结果提示总RNA无降解.每108个Mφ平均可抽提(41.58±23.13) μg总RNA.结论采用TRIzol试剂一步法提取脾脏Mφ总RNA是可行的,收获的人脾脏Mφ总RNA纯度高、完整性好、量较多,可满足后续实验要求.
作者：闫峰；李宗芳；苏清华；马双余；曹罡；张澍 刊期： 2005年第02期
目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)系统对膀胱癌细胞BIU87的杀伤作用及对凋亡基因的影响.方法脂质体将TK基因成功转入BIU87,噻唑蓝(MTT)法、TUNEL法、流式细胞仪(FCM)分别检测GCV对其生长影响及凋亡率和细胞周期变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2、bax、bak、Caspase-3 mRNA表达变化,比色法测定Caspase-3活性变化.结果作用5 d 1 mg/L GCV能杀死67%的细胞,100 mg/L GCV达到大杀伤率杀死97%的细胞;GCV诱导细胞凋亡,细胞周期阻滞在S和G2期;bcl-2表达降低,bax表达升高,Caspase-3表达及活性升高.结论 HSV-TK/GCV系统可有效杀伤膀胱癌细胞并引起细胞凋亡,细胞周期阻滞、bcl-2和bax表达变化、Caspase-3活化是引起凋亡发生的重要因素.
作者：毛晓鹏；丘少鹏；曹开源；袁广卿；陈显景；徐林 刊期： 2005年第02期
目的探讨甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dex-GMA)重组人骨形态发生蛋白(rhBMP -2)凝胶微球 (rhBMP2-dex-HM)对成骨细胞的生物学作用.方法将单纯rhBMP-2(A组)、空白dex-GMA凝胶微球dex-HM(B组)和rhBMP2-dex-HM(C组)加入成骨细胞培养液中,用细胞计数法、噻唑蓝比色法(MTT法)、流式细胞仪观察细胞增殖情况,并检测成骨细胞上清液中骨钙素(BGP)含量.结果培养1～2 d后,3组细胞计数、吸光度(A)值差异无统计学意义(P＞0.05);4～6 d时A、C组细胞计数和A值开始高于B组,但A、C组间差异无统计学意义(P＞0.05);培养6～8 d后,C组明显高于其他组,差异有统计学意义(P<0.01).14 d后,A、B、C 3组细胞数分别为(22.97±0.23)、(13.89±0.57)和(32.46±0.67)×104个细胞/ml,差异有统计学意义(P<0.01).流式细胞仪检测结果显示,培养2 d后,A组的G2/M+S期百分数高;6～8 d后,C组的G2/M+S期百分数高.成骨细胞上清液中BGP含量,C微球组高,其次为A组.结论 rhBMP-2-dex-HM可以较长时间持续释放活性rhBMP-2,作为rhBMP-2的缓释载体,可以明显促进成骨细胞增殖和分化.
作者：陈发明；吴织芬；金岩；杜岩；王国芳 刊期： 2005年第02期
目的以大鼠迟发性脑血管痉挛模型为基础研究诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在迟发性血管痉挛发展中的作用.方法 32只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组枕大池二次注血诱导迟发性脑血管痉挛,对照组枕大池注射生理盐水.第8天行脑血管造影,枕大池抽取脑脊液测一氧化氮(NO)浓度.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学法测定并评价iNOS mRNA和蛋白质在基底动脉、大脑中动脉和皮质中的表达.结果颅内动脉血管减影提示对照组颈内动脉颅内段、大脑中动脉(MCA)明显变细,大脑中动脉中段直径(MD)与镫骨动脉中段直径(SD)之比衡量大脑中动脉的管径显示实验组MCA管径较对照组MCA管径减少30%.对照组脑脊液中NO浓度为(11.70±2.62) μmol/L,实验组脑脊液中NO的浓度为(55.67±12.84) μmol/L.iNOS mRNA和蛋白质表达于基底动脉、大脑中动脉和皮质,其中基底动脉表达强.结论 iNOS作为迟发性脑血管痉挛发展中的关键因素参与血管壁的迟发性损伤.
作者：吴惺；陈彦克；马廉亭；袁先厚 刊期： 2005年第02期
目的建立高低不同转移特性人成骨肉瘤MG-63亚克隆细胞系,为研究成骨肉瘤转移机制提供较好的实验模型.方法通过体外培养和裸鼠体内移植,初步分离并建立了2个亚克隆细胞系A1和A2,并利用细胞电泳、细胞增殖、琼脂克隆形成、体外侵袭实验、裸鼠体内异位和原位移植对两者的生物学特性进行比较、分析和鉴定.结果 A1和A2的电泳率、琼脂克隆形成能力、体外侵袭能力、自发性肺转移率分别为(1.08±0.12) μm,(0.64±0.13)μm;21.0±2.3,9.5±2.9;186.0±16.7,84.0±12.6;100.00%,6.67%,A1均明显高于A2,两者的差异有统计学意义(P＜0.01).结论高低不同转移特性的人成骨肉瘤MG-63亚克隆细胞系的建立,能为成骨肉瘤转移机制的研究提供较理想的实验模型.
作者：石晓兵；陈安民；蔡贤华 刊期： 2005年第02期
目的探讨LRIG1基因抑制恶性胶质瘤细胞侵袭、浸润的分子机制.方法应用脂质体介导的基因转染技术将p3XFLAG-CMV9-LRIG1质粒转染入人神经胶质瘤H4细胞系,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测转染前、后LRIG1和表皮生长因子受体(EGFR)基因mRNA和蛋白表达水平,用Boyden小室体外侵袭试验观察H4细胞通过人工重组基底膜能力的变化.结果转染p3XFLAG-CMV9-LRIG1质粒后,H4神经胶质瘤细胞的LRIG1 mRNA和蛋白表达均较对照组明显增强(P<0.01);而EGFR mRNA和蛋白表达均较对照组明显减弱(P<0.01).LRIG1质粒转染的H4细胞穿过人工重组基底膜的相对百分率为(13.3±1.8)%,明显低于未处理组和转染空载体组的穿膜细胞百分率(24.7±1.8)%,(24.0±1.5)%(P=0.008和P=0.010).结论 EGFR的过表达促进了胶质瘤的侵袭、浸润;LRIG1通过抑制EGFR逆转了恶性胶质瘤侵袭、浸润.
作者：叶飞；郭东升；易伟；牛洪泉；舒凯；万锋；卢运萍；雷霆 刊期： 2005年第02期
目的研究雷帕霉素(RPM)和他汀类药物在大鼠移植心脏慢性血管病变中的作用.方法建立大鼠心脏移植慢性排斥(CR)模型,并分别给予赋形剂、RPM、他汀类药物及环孢素(CsA)等药物处理,应用组织学方法观察不同药物对于移植物慢性血管病变的作用.结果与对照组相比,RPM处理组的移植物慢性血管病变程度显著减轻(P＜0.01),CsA处理组有所减轻(P＜0.01),而他汀类药物组动物未见明显减轻.结论 RPM可以明显抑制血管平滑肌细胞增生,预防新内膜形成和移植物慢性血管病变;本实验未能证实他汀类药物的抑制作用.
作者：赵亮；王长希；陈立中；何晓顺 刊期： 2005年第02期
关节软骨属于透明软骨,组织代谢活性较低,创伤和手术等所致的软骨损伤或缺损难以自我修复或以纤维软骨、纤维组织所填充替代[1].为了重建软骨表面,恢复关节功能,人们通常采用各种动物,模拟临床实际情况进行研究,并取得了一定的进展.但动物实验结果常常难以重复,或难以应用到临床.这些问题的产生是由于不同物种、不同部位间,关节软骨的厚度,细胞密度,基质成分以及力学特征不同[2].因此只有全面了解人和动物关节软骨的生物学和结构特征,才能制造出更为理想的实验模型[3].
作者：高刚；卫小春 刊期： 2005年第02期
目的探讨核因子-κB(NF-κB)和诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)在大鼠肝脏小移植物缺血预处理中的作用.方法雄性SD大鼠随机分成5组:假手术组(A组);小移植物组(B组);应用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的小移植物组(C组);应用缺血预处理(IPC)的小移植物组(D组);应用PDTC+IPC的小移植物组(E组).电泳迁移率改变法(EMSA)检测小移植物植入后5个时间点肝脏组织中NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测iNOS在肝组织中的表达,检测肝脏脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的浓度.结果 A组肝组织中NF-κB的活性很弱.B、C、D、E 4组NF-κB变化趋势相仿,一般在恢复灌注后即活化,峰值出现在3 h(IPC);活化峰值强度B组＞C组＞D组＞E组.再灌注2 h后B、C、D、E组肝组织中iNOS表达水平开始升高,6 h达到峰值,其值B组＞D组＞C组＞E组(P＜0.05),随后逐渐下降;至12 h仍高于对照组的水平.MDA的结果变化和iNOS表达水平变化类似,SOD呈相反变化.结论 NF-κB在大鼠肝脏缺血预处理小移植物中起重要作用.抑制供肝组织中NF-κB的活性可显著降低再灌注早期供肝组织中iNOS表达和氧自由基水平,并有效改善供肝的再灌注损伤.针对NF-κB的靶向治疗可能是供肝保护的一条新途径.
作者：钱建民；张浩；吴晓峰 刊期： 2005年第02期
目的研究DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂喜树碱(CPT)诱导人膀胱癌细胞凋亡的作用.方法体外培养的膀胱癌RT4和MGH细胞用CPT处理,用FACScan流式细胞仪分析细胞凋亡的发生及变化,用Western blotting的方法检测了CPT处理不同时间段,bcl-2与bax表达的变化,以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合物酶(PARP)的活性的改变.结果 CPT处理膀胱癌细胞24 h后,细胞凋亡率明显上升,且CPT诱导的凋亡呈时间依赖性和剂量依赖性.CPT诱导膀胱癌细胞RT4和MGH后均未见bcl-2和bax表达水平的改变,但是可以观察到凋亡执行蛋白Caspase-3和PARP的激活.结论 CPT能够诱导膀胱癌细胞RT4和MGH发生凋亡,其抑制膀胱癌细胞的作用可能与肿瘤细胞发生凋亡有关.
作者：叶章群；余虓；杨为民 刊期： 2005年第02期
我们采用光镜和电镜的方法对门静脉高压症患者的内脏血管进行观察,探讨门静脉高压症和内脏高动力循环以及内脏血管病变之间的相互关系,现将结果报道如下.
作者：李涛；杨镇 刊期： 2005年第02期
甲状腺癌与身体其他部位癌肿相比较,其发病率并不高,约占全身恶性肿瘤的0.2%(男性)～1.0%(女性).随着普遍开展癌瘤普查以及检测手段的改善,其发现率有明显增加的趋势.在国内一些肿瘤医院中,甲状腺癌占头颈部肿瘤的首位.随着分子生物学技术及免疫学技术的迅猛发展和人类对甲状腺癌发病机制认识的不断深入,基因治疗逐渐成为肿瘤生物学治疗中的重要组成部分,在甲状腺癌的治疗中显示出良好的应用价值,并且取得了一定的效果,将日渐成为一项有前景的治疗选择.
作者：张东伟；杨维良 刊期： 2005年第02期
目的建立临床成人骨髓基质干细胞(MSCs)体外培养、定向诱导分化为软骨细胞的途径.方法抽取成人骨髓,Percoll密度梯度离心法进行体外培养,贴壁细胞传代,取第3代细胞在培养基中添加软骨分化诱导剂地塞米松、维生素C和不同剂量转化生长因子-β(TGF-β),培养16 d后,在倒置显微镜观察细胞形态,甲苯胺蓝染色蛋白多糖,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学(SABC法)检测Ⅱ型胶原表达,诱导后MSCs与新型材料聚乳酸和羟基乙醇共聚物(PLGA)复合.结果 Percoll密度梯度离心法培养可获得均一的MSCs;5、10 ng TGF-β诱导分化的MSCs生长迅速,呈典型的软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原表达阳性,MSCs对材料PLGA黏附力强.结论可以从成人骨髓中培养出MSCs,并可定向诱导分化为软骨细胞,5～10 ng TGF-β为佳诱导剂量,成人MSCs可用作临床自体软骨组织工程种子细胞.
作者：滕勇；胡蕴玉；王臻；李旭升；白建萍；彭磊；王军；吕荣 刊期： 2005年第02期
目的探讨凋亡相关基因bcl-2、bax、p53和c-myc在不同形成时期的增生性瘢痕中的基因转录变化.方法提取16例不同发生时期的增生性瘢痕和8例正常皮肤的总RNA后,分离mRNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测bcl-2、bax、p53和c-myc基因在不同组织中的表达.结果在增殖期的瘢痕中,凋亡促进基因bax、c-myc和p53的表达量分别是正常皮肤的(62.8±14.7)%、(78.0±17.0)%和(49.8±4.3)%,基因表达明显降低(P<0.05),而在成熟期的瘢痕中,这3种基因的表达量都明显高于增殖期的瘢痕,恢复到正常皮肤水平.在正常皮肤中,bcl-2基因表达水平较低,而在增殖期和成熟期的增生性瘢痕中表达量都显著升高(P<0.05).结论 bax、c-myc和p53基因表达降低,bcl-2基因表达增强可能是瘢痕中细胞凋亡减少,形成增生性瘢痕的机制之一,而bax、c-myc和p53基因表达增强可能与瘢痕达到成熟状态有关.
作者：陈伟；付小兵；王海滨；周岗；韩冰；李海红；孙同柱；盛志勇 刊期： 2005年第02期
目的探讨Smac基因的表达对于丝裂霉素(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡的影响.方法脂质体介导Smac基因转染膀胱癌T24细胞3 d后,用低剂量丝裂霉素诱导凋亡启动,噻唑蓝(MTT)比色分析检测癌细胞生长活性,吖啶橙-溴化乙锭荧光染色法及流式细胞术法检测细胞凋亡;免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应检测Smac基因的表达.结果 T24细胞在低剂量丝裂霉素的诱导下发生凋亡,两种方法检测细胞凋亡率,用0.05 g/L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为20.50%和18.84%,而经过转染Smac后用0.05 g/L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为36.40%和33.52%,差异有统计学意义(P<0.05).结论促凋亡基因Smac在膀胱癌细胞中的活化表达可以明显增强细胞在刺激信号下的凋亡.
作者：汪良；曾甫清；郑丽端；陈方敏；刘迎 刊期： 2005年第02期
我们以IHC方法检测肝外胆管癌(ECC)中多药耐药基因(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽转移酶π(GST-π)、拓扑异构酶-IIa(Top-IIa)和肺癌耐药蛋白(LRP)表达情况,初步说明ECC的可能耐药机制及特点.
作者：陈筠；王银全；陈孝平 刊期： 2005年第02期
目的观察神经生长因子(NGF)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)引起的大鼠去交感神经保护作用.方法经腹腔为大鼠注射6-OHDA(80 mg/kg体重),制作化学性交感神经末梢损伤模型后,立即肌肉注射NGF 200～1 600 BU/kg体重×10 d,每天1次.采用高效液相色谱-电化学检测器(HPLC-ECD)法测定两侧颌下腺中去甲肾上腺素(NE)的含量.结果 6-OHDA可使大鼠颌下腺中的NE的含量下降36.6%(P<0.05),NGF可防止神经损伤大鼠颌下腺NE的含量下降,并有较好的剂量-效应关系,400 BU/kg体重即可使NE维持至正常水平.结论 NGF肌肉注射对6-OHDA引起的大鼠化学性交感神经末梢损伤有良好的保护作用.
作者：刘振旗；孙辉生；高成杰；贾锐；杨静 刊期： 2005年第02期
目的探索从心室肌组织中纯化心肌细胞的方法.方法用胰蛋白酶消化大鼠乳鼠心室肌组织,获得细胞悬液经Percoll分离,通过光镜和免疫组织化学方法对获得的每层细胞进行分析,采用免疫组织化学和激光共聚焦方法鉴定心肌细胞.结果 Percoll分离后,细胞分为6层,每层细胞培养3 d时,通过光镜和免疫组织化学观察发现心肌细胞富集在第4、5两层.富集的心肌细胞第3天形成细胞簇或细胞单层,收缩明显而有力.心肌细胞可维持良好的形态和活力达2～3个月.结论使用Percoll分离法可以从大鼠乳鼠心室肌组织中纯化心肌细胞.
作者：鄂玲玲；陈新；王常勇；赵云山；郭希民；段翠密；董灵芝；江红；李晶 刊期： 2005年第02期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
