刘勇；郑启新；杜靖远；杨述华；邵增务；段德宇
为探讨肥大细胞对胃癌生长的影响机制,我们采用组织化学、免疫组织化学及显微图像分析系统,同步检测分析胃癌组织中肥大细胞的数量与其邻近癌组织增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2基因表达的关系,以期阐明肥大细胞对胃癌发生发展的影响及可能的分子生物学机制.
作者：柳雅玲；唐华美；王琳；李亚鲁；赵苗青 刊期： 2005年第08期
目的了解赫赛汀联合干扰能(IFNα-2b)对肾癌细胞在体外的杀伤抑制作用,同时检测肾癌细胞在药物作用前后表皮生长因子受体2(HER2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达情况.方法肾癌细胞系通过细胞培养技术进行培养,用噻唑蓝(MTT)法观察赫赛汀联合IFNα-2b对该细胞系的抑制杀伤效果,过河实验检测癌细胞的侵袭能力,进而运用链霉抗生物素-过氧化物酶免疫组织化学(SP)法对HER2、MRP1表达情况进行测定.结果赫赛汀联合IFNα-2b对肾癌细胞的生长抑制及耐药性呈时间和剂量依赖性.经药物处理后,HER2、MRP1表达明显下降,由用药前的62.82%、69.42%降到用药后的24.35%、16.87%(P<0.05).结论联合用药能有效抑制肾癌细胞的生长,对瘤细胞的耐药性也有一定的逆转作用.
作者：胡志全；王家菁；叶章群 刊期： 2005年第08期
目的转染小鼠pSG5-过氧化物酶体增殖物激活受体α(pSG5-mPPARα)质粒对小鼠原代肝细胞细胞周期调节基因表达的影响.方法在小鼠原代肝细胞培养中转染pSG5-mPPARα质粒及加入PPARα配体(WY-14643)后,检测即时反应基因(IEG)如fos癌基因 (c-fos)、jun癌基因(c-jun)和早期生长反应因-1(EGR-1),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的变化.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)方法.结果 EGR-1基因表达在小鼠原代肝细胞培养中转染pSG5-mPPARα质粒及加入PPARα配体WY-14643组与未转染加药组差异无统计学意义,而c-jun、c-fos和Cyclin D1基因表达,较未转染加药组明显增强.结论 EGR-1、c-jun、c-fos和Cyclin D1基因在肿瘤发生前阶段肝脏中的异常表达,对肿瘤形成可能具有一定的重要性.
作者：陈德烽；张万广；陈孝平 刊期： 2005年第08期
目的研究肝细胞生长因子(HGF)基因治疗对小鼠急性肝衰模型的治疗作用.方法构建人肝细胞生长因子(hHGF)表达载体,利用脂质体介导法在活体内转染肝细胞生长因子基因,利用荧光显微镜检测肝组织内绿色荧光蛋白(GFP)表达了解目的基因的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中人肝细胞生长因子的含量,通过观察小鼠急性肝衰模型的生存率、肝功能变化、肝组织病理改变来检测肝细胞生长因子基因对急性肝衰的治疗作用,通过检测肝组织中PCNA指数的变化了解肝脏的增殖能力的变化.结果荧光显微镜下可见肝组织内有绿色荧光蛋白的表达,转染人肝细胞生长因子基因后在血清中可检测到hHGF的表达,而且可持续1周以上,与对照组相比,转染hHGF基因组的生存率明显提高(40.0% vs 11.5%,P<0.05),血清ALT、TBi明显降低,肝组织中PCNA指数也明显升高.结论活体转染肝细胞生长因子基因可获得表达,而且肝细胞生长因子基因对急性肝衰小鼠有治疗作用.
作者：何勇；周峻；陈勇；李海民；赵青川；窦科峰 刊期： 2005年第08期
腹腔镜能否应用于肿瘤外科一直存在争议,焦点之一是二氧化碳(CO2)气腹是否会促进肿瘤的生长和转移扩散.我们应用经直肠黏膜下接种建立直肠恶性肿瘤淋巴结转移动物模型对此进行观察,现将结果报道如下.
作者：付斌；赵宏 刊期： 2005年第08期
目的探讨人胚神经干细胞(hNSC)移植治疗脊髓损伤(SCI)的可行性.方法分离、培养和鉴定hNSC;用5溴-2脱氧尿苷嘧啶(BrdU)标记hNSC,并将其移植到14只T10半横断的Wistar大鼠损伤脊髓内(另外14只T10半横断损伤的大鼠作为对照组,仅损伤脊髓内注射DMEM/F12培养液),用BrdU的FITC免疫荧光染色检测移植细胞的存活和迁徙,用NF-200、GFAP免疫组织化学鉴定移植细胞的分化,BBB评分评定大鼠功能恢复情况.结果 (1)获得了大量的hNSC;(2)用免疫组织化学可以检测到移植的hNSC能在体内长时间存活(达2个月)并向远处迁徙,并分化为神经元和胶质细胞;(3)检测到实验组大鼠BBB得分明显高于对照组大鼠(P＜0.01),在SCI后第10周时实验组和对照组BBB得分大差距达到2.1分.结论 hNSC移植能促进SCI大鼠后肢功能恢复,它是SCI移植治疗较有价值的细胞资源.
作者：蔡培强；汤逊；林月秋；徐林；阳运康；周田华 刊期： 2005年第08期
目的观察大鼠肝卵圆细胞的活化,为进一步研究肝卵圆细胞特征建立简单的分离培养方法.方法利用2-乙酰氨基芴/部分肝切除建立肝卵圆细胞活化的大鼠模型,采用选择性消化法从该模型中分离纯化肝卵圆细胞,并做免疫细胞荧光鉴定.用丁酸钠诱导其分化.结果成功地建立了肝卵圆细胞活化模型,并从中分离培养了表达OV6、CK19、AFP、白蛋白、c-kit、Thy1、CD45和CD34的卵圆细胞.在丁酸钠刺激下它可向肝细胞分化.结论利用选择性消化法可以分离到肝卵圆细胞,并且其具有肝干细胞的特征.
作者：单云峰；周伟平；杨文；刘淑琴；曹惠芳；邱秀华；吴孟超；王红阳 刊期： 2005年第08期
目的观察含有微血管样结构的凝胶块植入体内后与体内血液循环的连通情况,以及血管内皮细胞生长因子(VEGF165)对凝胶血管化的影响.方法在纤维蛋白凝胶中以VEGF165诱导小鼠微血管内皮细胞(MVEC)形成微血管样结构,设无VEGF165为对照,将制作的凝胶块用有微孔的塑料薄膜包裹后植入小鼠肠系膜间,2周后取样进行组织学切片,苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色,图像分析并测量血管化面积.结果凝胶植入2周见实验组凝胶周围有丰富的新生血管网经过塑料薄膜的小孔与凝胶内血管相连,对照组表面新生血管较少.组织学切片(HE染色)见VEGF组血管化总面积约为对照的50倍(P<0.01).实验组新生血管直径10～100 μm,分布于凝胶中心和周边部位;而对照组新生血管大直径＜20 μm,主要分布于凝胶的周边.结论含微血管样结构的预制凝胶植入后能形成具有血流灌注的微血管网.纤维蛋白凝胶在此过程中充当了一种较为合适的细胞外基质的作用,而VEGF在这一过程中起到一种诱导、刺激和强化作用.
作者：徐迎新；吴仕和；阎锡蕴；宋旭华；尹太；王金晶；李荣 刊期： 2005年第08期
目的对大鼠体神经-内脏神经(副交感神经)吻合后再生神经的物质转运功能和递质性质进行定性研究.方法在建立了人工体神经-内脏神经膀胱反射弧的5只大鼠的左侧盆神经节(MPG)、尿道外括约肌(EUS)分别注射荧光金(FG)和快蓝(FB),通过逆行追踪检测再生神经的物质转运功能,酶组织化学方法检测再生神经中的乙酰胆碱酯酶(AChE).结果逆行追踪结果显示FG、FB单标神经元及FG和FB双标神经元主要分布于脊髓L3尾部至L5头侧左侧前角.神经吻合口远心端和近心端,以及支配膀胱的节前有髓神经纤维,支配EUS的有髓神经纤维多为AChE反应阳性.结论人工体神经-内脏神经膀胱反射弧建立后,再生的传出神经有物质转运功能,体神经-内脏神经(副交感神经)吻合后再生神经纤维多为胆碱能.
作者：李兵；肖传国 刊期： 2005年第08期
目的尝试利用质谱技术对肝癌细胞表面自然呈递的MAGE-3表位进行检测和分析.方法肝癌细胞和肝细胞取自同1名男性肝癌患者,弱酸洗涤法分离肝癌细胞和癌旁无瘤肝细胞表面所有肽段;利用表位预测法挑选出HLA-A2限制的MAGE-3理论侯选肽;检测MAGE-3 mRNA的表达;肽混合物进行高压液相纯化分离和差异比较;筛选出含有肿瘤特异肽的组分进行串联质谱检定和定量分析;后检测患者体内是否有针对该表位的T细胞反应.结果 MAGE-3在肝癌细胞样品中表达阳性,在肝细胞中阴性;随后从肝癌细胞样品中检测出自然呈递的MAGE-3271-279表位抗原肽:FLWGPRALV(38-39拷贝/细胞),并从患者外周血中检测出针对该表位的特异性T细胞反应.结论本实验从肿瘤组织中检测出自然呈递的MAGE-3271-279表位,并揭示了该表位的潜在应用价值,同时也初步展示了质谱在肿瘤相关表位检测中快捷、准确的特点,而这些特点对于肿瘤相关表位的鉴定和肽疫苗的设计是非常重要的.
作者：周迈；彭吉润；张华刚；钟朝辉；郭晏同；冷希圣 刊期： 2005年第08期
目的研究在肝门部胆管癌(HCCA)中雌激素受体(ER)表达水平和微血管密度(MVD)的改变,探讨它们在HCCA中可能发挥的作用.方法使用免疫组织化学的方法检测HCCA组织中ER和CD34的表达情况.结果 ER的阳性率为66.7%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).肿瘤组的MVD计数明显高于对照组(P<0.01).结论 ER可能通过影响血管的生成在HCCA的发生、发展中起重要作用,为诊断和治疗HCCA提供新途径.
作者：范正军；吴阳；张志永；李德旭；王陆林；谢志徵 刊期： 2005年第08期
目的探讨大鼠胰腺移植后细胞凋亡的变化、Fas/Fas配体(FasL)的表达及其与急性排斥反应的关系.方法实验分为同基因移植组和异基因移植组.分别于术后第3、5、7天处死受体,取移植胰腺,应用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,计算凋亡指数(AI),应用免疫组织化学及Western blot检测Fas/FasL的表达.结果细胞凋亡主要发生在胰腺腺泡细胞,同基因移植组有散在的腺泡细胞凋亡,AI在术后无明显变化,Fas/FasL表达阴性;异基因移植组在术后第3、5、7天胰腺腺泡细胞凋亡发生率逐渐增加(28.40±3.75,39.40±5.59,57.30±8.53,P<0.01),Fas/FasL表达逐渐增强,AI与急性排斥反应程度呈显著正相关(rs=0.932,P<0.01).结论胰腺腺泡细胞凋亡和Fas/FasL表达在胰腺移植急性排斥反应中发挥重要作用,凋亡指数对胰腺移植急性排斥反应的诊断有一定的参考价值.
作者：刘忠；关凤林；胡祥 刊期： 2005年第08期
本研究旨在观察100例肺癌实体瘤组织中肿瘤浸润树突状细胞(TIDC)浸润情况,探讨影响肺癌患者生存与预后的内在因素.
作者：龚选举；李妹；王岩；袁素；符志龙；董玉英；陈春吉 刊期： 2005年第08期
目的探讨乙酰肝素酶(HPA)mRNA在肝细胞癌(HCC)中的表达及点突变的意义.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测33例HCC中HPA的表达,用T-A克隆测序法检测其扩增产物有无突变,并与HCC临床病理学指标分析.结果有16例癌组织HPA表达阳性,阳性率(48.5%)显著高于癌周肝组织(P<0.01).术后转移复发组HPA阳性率显著高于无转移复发组(P＜0.01).7例PCR产物测序发现有4例均存在2处点突变,其中一处为有义突变,突变率为57.1%.结论 HCC中HPA mRNA表达率增高,可作为HCC术后预测转移复发的一个重要指标.HPA基因点突变可能是其表达率增高的原因之一.
作者：陈晓鹏；刘颖斌；彭淑牖；史良会 刊期： 2005年第08期
目的探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响.方法噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线及检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞凋亡.结果 MTT法显示NDGA对MCF-7细胞生长增殖有明显的抑制作用(P<0.05),呈剂量和时间依赖效应;流式细胞仪结果显示NDGA阻滞细胞周期于S期,诱导细胞凋亡;在光镜和扫描电镜下,NDGA诱导细胞发生凋亡形态学变化,导致细胞表面超微结构的改变和凋亡小体的形成.结论 NDGA能够抑制MCF-7细胞的增殖,诱导细胞凋亡,为脂氧合酶抑制剂临床应用于乳腺癌提供了科学依据.
作者：刘焕涛；孙靖中；马榕；唐鲁兵 刊期： 2005年第08期
目的优化α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸(ASODN)转染人增生性瘢痕成纤维细胞的条件.方法 ASODN经FITC标记,以阳离子脂质体Oligofectamine为载体转染体外培养的第2～6代人增生性瘢痕成纤维细胞,转染后24 h激光共聚焦显微镜下记录荧光素的细胞内分布;流式细胞术计数荧光细胞百分率、作细胞凋亡分析,以荧光细胞百分率高者为佳转染效率,依次筛选细胞接种数量、ASODN浓度和脂质体量.结果 (1)脂质体转染ASODN,所用各转染条件未引起成纤维细胞凋亡;转染后细胞浆和细胞核内均有荧光素聚集.(2)接种细胞数量为14.25×104个/孔的荧光细胞百分率为74.0%,接种数量为30.00×104个/孔的为73.3%,接种数量为32.25×104个/孔的为94.3%,接种数量为39.00×104个/孔的为64.2%.(3)转染液中ASODN浓度100 nmol/L,荧光细胞百分率为38.1%;150 nmol/L时,为62.6%;200 nmol/L时49.5%;250 nmol/L时35.8%.(4)转染所用的脂质体量2 μl时,荧光细胞百分率为77.01%,3 μl时85.05%,4 μl为71.64%.结论α1(I)型前胶原基因ASODN脂质体转染人增生性瘢痕成纤维细胞的佳转染条件为:接种细胞数量32.25×104个/孔,反义核酸浓度150 nmol/L,脂质体3 μl/孔.通过优化转染条件可提高转染效率,为下一步设计药物开发研究提供基础.
作者：袁即山；利天增；祁少海；谢举临；徐盈斌；潘姝；张珑娟；孔庆瑜 刊期： 2005年第08期
目的探讨反义基因治疗与化疗联合应用提高骨肉瘤疗效的可行性及其机制.方法构建荷骨肉瘤裸鼠模型,采用瘤内注射和腹腔给药方式,以Survivin反义寡核苷酸(ASODN,5 mg/kg体重)配合顺铂(DDP,3 mg/kg体重)对瘤鼠进行联合干预治疗,观测裸鼠肿瘤生长情况及瘤体病理形态,免疫组织化学法检测肿瘤Survivin蛋白表达,DNA末端原位标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡指数(AI).结果联合治疗组裸鼠瘤重(0.36±0.01) g仅为对照组(1.08±0.05) g 33%,抑瘤率IR(66.9±1.4)%显著高于ASODN组(38.9±0.8)%和DDP组(49.8±9.6)%,χ2=5.14,P＜0.05,Survivin蛋白表达明显减弱,AI(45.1±3.7)%显著高于对照组(5.8±1.2)%及各单药组(23.9±3.1)%、(24.1±4.8)%,χ2=146.03,P＜0.01.结论 ASODN对DDP具有明显增效作用,可弥补DDP耐药缺陷,两者联合可望发挥协同抗瘤效应.
作者：高大新；张海燕；吕刚；李永军；黄涛；王岩峰 刊期： 2005年第08期
Barrett食管是形成食管腺癌的主要危险因素,因而对Barrett食管的研究成为上消化道疾病研究的重点之一.目前在Barrett食管的发病机制、与食管腺癌的关系以及诊断、预防和治疗等多方面都取得了很大的进展.
作者：张逊；卢喜科；徐医军 刊期： 2005年第08期
目的探讨T-cadherin分子表达对胶质母细胞瘤C6细胞增殖的影响.方法利用脂质体将pcDNA3和pcDNA3.T-cadherin表达质粒转染C6细胞,以克隆形成试验和细胞增殖试验研究T-cadherin表达对C6细胞增殖的影响.结果转pcDNA3.T-cadherin质粒的C6细胞形成的细胞克隆数显著少于转染pcDNA3载体质粒的C6细胞形成的克隆数,两者差异有统计学意义(P＜0.01).转染后表达T-cadherin分子C6细胞的生长速度明显慢于转染空载体不表达T-cadherin的C6克隆(P＜0.01),且T-cadherin表达水平与C6细胞增殖速度呈负要关.结论 T-cadherin分子表达显著抑制胶质母细胞瘤C6细胞的增殖.
作者：黄志勇；王克琼；陈孝平；吴在德 刊期： 2005年第08期
目的研究转人α-1,2岩藻糖苷转移酶基因(HT)在克服超急性排斥反应(HAR)中的作用.方法通过脂质体转染将人HT基因转入猪血管内皮细胞(PIECs)中,利用显微注射建立转HT基因小鼠模型,经流式细胞仪检测转HT基因阳性的PIECs表面抗原及小鼠外周血单核细胞表面抗原的变化.结果转HT基因的PIECs表面的α-1,3半乳糖(α-Gal)比阴性对照下降了50%～60%,H抗原由无表达到44%～78%表达阳性;转HT基因小鼠白细胞表面的α-Gal比阴性对照下降了63%左右,H抗原阳性表达率为95%以上.结论 HT基因在细胞和小鼠体内均有较好的表达,可减少异种抗原与异种抗体的反应,在克服超急性排斥反应中能发挥一定的作用.
作者：李胜芝；刘秉乾；马志方；张玥；王广有；马腾骧 刊期： 2005年第08期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
