单云峰；周伟平；杨文；刘淑琴；曹惠芳；邱秀华；吴孟超；王红阳
目的观察体外诱导骨髓间充质干细胞分化及肝纤维化形成环境中移植情况.方法首先行骨髓间充质干细胞提取、分离和培养,加入肝细胞生长因子(HGF,20 μg/L)和表皮生长因子(EGF,1.5 mg/L)诱导定向分化.肝纤维化形成的大鼠随机分成2组,每组10只.使用5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记诱导的骨髓间充质干细胞,经门静脉向肝纤维化形成的SD大鼠肝脏移植,对照组用BrdU标记未经诱导的骨髓间充质干细胞.2周后通过免疫组织化学方法检测大鼠肝脏标记细胞的分布及BrdU+/ALB+细胞数量.结果体外诱导骨髓间充质干细胞定向分化的细胞CK8及ALB表达阳性.移植2周后大鼠肝脏均可检测到BrdU标记细胞,与对照组相比诱导后骨髓间充质干细胞组BrdU+/ALB+细胞数较多,差异有统计学意义(P＜0.05).结论经体外诱导骨髓间充质干细胞能分化为肝细胞,移植在大鼠肝纤维化形成环境中,白蛋白表达细胞数更多.
作者：安伟德；胡祥；曹亮；王金晶；刘巨超；李力；宋旭华；徐迎新 刊期： 2005年第08期
目的优化α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸(ASODN)转染人增生性瘢痕成纤维细胞的条件.方法 ASODN经FITC标记,以阳离子脂质体Oligofectamine为载体转染体外培养的第2～6代人增生性瘢痕成纤维细胞,转染后24 h激光共聚焦显微镜下记录荧光素的细胞内分布;流式细胞术计数荧光细胞百分率、作细胞凋亡分析,以荧光细胞百分率高者为佳转染效率,依次筛选细胞接种数量、ASODN浓度和脂质体量.结果 (1)脂质体转染ASODN,所用各转染条件未引起成纤维细胞凋亡;转染后细胞浆和细胞核内均有荧光素聚集.(2)接种细胞数量为14.25×104个/孔的荧光细胞百分率为74.0%,接种数量为30.00×104个/孔的为73.3%,接种数量为32.25×104个/孔的为94.3%,接种数量为39.00×104个/孔的为64.2%.(3)转染液中ASODN浓度100 nmol/L,荧光细胞百分率为38.1%;150 nmol/L时,为62.6%;200 nmol/L时49.5%;250 nmol/L时35.8%.(4)转染所用的脂质体量2 μl时,荧光细胞百分率为77.01%,3 μl时85.05%,4 μl为71.64%.结论α1(I)型前胶原基因ASODN脂质体转染人增生性瘢痕成纤维细胞的佳转染条件为:接种细胞数量32.25×104个/孔,反义核酸浓度150 nmol/L,脂质体3 μl/孔.通过优化转染条件可提高转染效率,为下一步设计药物开发研究提供基础.
作者：袁即山；利天增；祁少海；谢举临；徐盈斌；潘姝；张珑娟；孔庆瑜 刊期： 2005年第08期
目的探讨手术减压对慢性脊髓损伤的治疗分子机制.方法采用大鼠后路渐进性脊髓压迫模型,然后行手术减压.经观察行为评分(BBB),常规病理及胆碱乙酰转移酶(ChAT)和脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB的免疫组织化学检测.结果脊髓损伤后ChAT免疫组织化学阳性细胞数减少,BDNF和TrkB表达增加,BBB下降;减压后,ChAT阳性细胞数增多,BDNF和TrkB表达恢复,BBB改善,减压组与压迫组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论手术减压作用的分子机制可能是其促进了慢性压迫性损伤脊髓运动神经元合成ChAT和运动神经递质-乙酰胆碱,且减压可加速BDNF和TrkB的转运,从而加速实验动物行为功能的恢复.
作者：王新家；孔抗美；吴珊鹏；齐伟力 刊期： 2005年第08期
近年来肝脏移植已在我国广泛开展起来,并取得了令人瞩目的进展.然而供体器官的严重短缺却一直在困绕着我们.近年来干细胞生物学和组织工程学的发展为人工再造组织器官开辟了新的途径.在结构类组织工程研究取得很大发展的今天,肝组织工程研究已成为该研究领域的一个新的重要方面.
作者：徐迎新；黄志强 刊期： 2005年第08期
目的观察反应停对人肝细胞癌(HCC)血管生成和肿瘤生长侵袭的干预作用.方法建立高转移潜能人肝癌裸鼠肝原位移植模型,随机分成4组.各组模型自建立次日起分别经腹腔注射0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)、反应停(200 mg/kg体重)、紫杉醇(13 mg/kg体重)、反应停(200 mg/kg体重)+紫杉醇(13 mg/d).给药第30天处死裸小鼠,观察肿瘤生长、转移情况,分别用免疫组织化学和半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测癌组织CD34和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达并记录微血管密度(MVD).结果反应停组肿瘤重量、体积均与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05).各药物处理组肺转移灶计数、MVD和VEGF均低于对照组,以联合用药组为显著.结论反应停对HCC生长无明显抑制作用,但能抑制肿瘤血管生成并降低肺转移.
作者：张中林；刘志苏；孙权 刊期： 2005年第08期
胰腺癌是一种恶性程度极高,早期难以诊断,预后极差的恶性肿瘤,临床确诊者大多属于晚期癌,5年生存率总体低于5%.我们采用突变体富集聚合酶链反应(PCR)检测胰腺癌细胞系K-ras基因点突变,以期为早期诊断胰腺癌提供一种简便、灵敏而有效的检验方法.
作者：张峰；刘三光；刘晔；李冬斌；李荣琴；谢绍建；蔡建辉 刊期： 2005年第08期
目的构建重组人早幼粒白血病基因(PML)的逆转录病毒载体及稳定表达PML的膀胱肿瘤细胞株.方法应用DNA重组技术,将PML基因亚克隆后连接在逆转录病毒载体pLXSN上,经酶切鉴定正确后,磷酸钙沉淀法转染到PA317包装细胞包装病毒,并计算重组病毒的滴度.聚合酶链反应(PCR)鉴定重组PML逆转录病毒能够成功感染靶细胞.激光共聚焦和Western blot鉴定PML蛋白的表达.结果经酶切分析证实有大约2.1 kb大小的片段插入到逆转录病毒载体中.PCR结果显示感染重组PML逆转录病毒的细胞可以扩增出304 bp大小的片段.激光共聚焦显微镜显示,感染重组PML病毒的膀胱肿瘤细胞胞核内有散在的斑点样的绿色荧光亮点.Western blot也发现感染PML组有大约90×103的特异性的蛋白条带.结论我们成功构建重组人PML基因的逆转录病毒载体并且建立了稳定表达PML的膀胱肿瘤细胞株.
作者：李磊；贺大林；何辉；王新阳；南勋义 刊期： 2005年第08期
目的探讨乙酰肝素酶(HPSE)mRNA在膀胱癌中的表达及其与肿瘤临床病理特征和血管生成的关系.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测42例膀胱癌及16例癌旁组织中HPSE mRNA的表达,应用免疫组织化学法检测膀胱癌组织的微血管密度(MVD),结合患者临床病理指标及预后进行分析.结果 42例膀胱癌中,HPSE mRNA阳性23例(54.8%),16例癌旁组织中表达阳性者2例(12.5%),两组差异有统计学意义(P<0.01);HPSE mRNA的表达与膀胱癌的病理分级、临床分期、肿瘤大小及淋巴结转移有相关性(P<0.05);术后生存3年以下者HPSE mRNA的表达阳性率87.5%,明显高于生存3年以上者之46.9%(P<0.05);HPSE mRNA表达阳性者MVD值为90.8±13.6,表达阴性者肿瘤MVD计数均值为65.8±6.6,两组差异有统计学意义(P<0.01).结论 HPSE在膀胱癌的生长浸润、侵袭转移和血管生成中发挥重要作用,可作为判断膀胱癌生物学行为和预后的客观指标.
作者：赵勇；金讯波；吕家驹；孙鹏；王慕文；蒋绍博 刊期： 2005年第08期
目的研究肝细胞生长因子(HGF)基因治疗对小鼠急性肝衰模型的治疗作用.方法构建人肝细胞生长因子(hHGF)表达载体,利用脂质体介导法在活体内转染肝细胞生长因子基因,利用荧光显微镜检测肝组织内绿色荧光蛋白(GFP)表达了解目的基因的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中人肝细胞生长因子的含量,通过观察小鼠急性肝衰模型的生存率、肝功能变化、肝组织病理改变来检测肝细胞生长因子基因对急性肝衰的治疗作用,通过检测肝组织中PCNA指数的变化了解肝脏的增殖能力的变化.结果荧光显微镜下可见肝组织内有绿色荧光蛋白的表达,转染人肝细胞生长因子基因后在血清中可检测到hHGF的表达,而且可持续1周以上,与对照组相比,转染hHGF基因组的生存率明显提高(40.0% vs 11.5%,P<0.05),血清ALT、TBi明显降低,肝组织中PCNA指数也明显升高.结论活体转染肝细胞生长因子基因可获得表达,而且肝细胞生长因子基因对急性肝衰小鼠有治疗作用.
作者：何勇；周峻；陈勇；李海民；赵青川；窦科峰 刊期： 2005年第08期
目的探讨肾静脉平面以上结扎大鼠下腔静脉(IVC)及应用川芎嗪后的肾功能及肾脏病理改变.方法分别在肾静脉平面以上结扎大鼠下腔静脉、肾静脉平面以上结扎下腔静脉并川芎嗪治疗,术后6、12、24 h、2、3、4、5、7 d检测血肌酐、尿素氮、24 h尿量及NAG酶并观察肾脏病理改变.结果肾静脉平面以上结扎大鼠下腔静脉后血肌酐、尿素氮、尿NAG酶升高,肾脏瘀血并见大量管型.术后第3天,肾脏恢复正常结构;术后第4天,血肌酐、尿素氮恢复正常;术后第5天,尿NAG酶恢复正常.肾静脉平面以上结扎下腔静脉并川芎嗪治疗术后第4天,血肌酐、尿素氮、尿NAG酶恢复正常,肾脏瘀血较轻.结论肾静脉平面以上结扎大鼠下腔静脉,可因双肾瘀血而影响肾功能,若同时加用川芎嗪则可保护肾脏功能.
作者：邱新光；郭学利；黄秀珍；范正军；赵春临；张谢夫；李红；吴阳；王子凡 刊期： 2005年第08期
目的探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)基因改变与脊索瘤发生的关系.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学(SP)方法对18例脊索瘤和瘤旁正常组织FHIT基因RNA转录本和蛋白表达进行检测.结果 RT-PCR检测可见11例(61.1%)存在FHIT基因RNA转录本缺失,1例还同时含有正常和异常转录本.对其中2例进行测序,证实1例转录本缺失全部E5～E7外显子及部分E8外显子和部分E10外显子等2个片段;另1例转录本缺失全部E5～E9外显子及绝大部分E10外显子.脊索瘤中FHIT蛋白表达阳性百分比为55.6%(10/18),瘤周正常组织为100.0%(18/18),差异有统计学意义(P<0.05),FHIT蛋白在脊索瘤中表达减低.结论 FHIT基因表达缺失是脊索瘤发生的重要事件之一,可能与脊索瘤的发生机制有关.
作者：韩壮；王敏；吕刚；王太一；金春莲；富伟能 刊期： 2005年第08期
目的评价微创张力带固定法治疗横断型髌骨骨折的生物力学稳定性及牢固性.方法保留胫骨、股骨及完整膝关节新鲜成人尸体膝关节标本.制作髌骨横断骨折模型,采用微创或开放手术的张力带固定.膝关节屈曲36°位固定胫骨及股骨端将标本安装在MTS实验机上,通过牵拉股四头肌来拉伸和疲劳循环载荷来测试固定的稳定性.用线性传感器测量骨折分离距离,大于1 mm为固定失败.结果所有固定在500 N外加拉力作用下骨折分离距离均小于1 mm,大于固定后即可活动所需小294 N的限度.微创和开放手术在即时和疲劳后的生物力学差异无统计学意义(p＞0.05).空心钉张力带的稳定性好(P＜0.05).结论根据生物力学原则,微创张力带固定法治疗髌骨骨折能够满足骨折愈合所需的稳定性,允许骨折固定后即可活动和功能锻炼.
作者：李健；颜登鲁；张在恒；谭平先；赵卫东 刊期： 2005年第08期
目的观察大鼠肝卵圆细胞的活化,为进一步研究肝卵圆细胞特征建立简单的分离培养方法.方法利用2-乙酰氨基芴/部分肝切除建立肝卵圆细胞活化的大鼠模型,采用选择性消化法从该模型中分离纯化肝卵圆细胞,并做免疫细胞荧光鉴定.用丁酸钠诱导其分化.结果成功地建立了肝卵圆细胞活化模型,并从中分离培养了表达OV6、CK19、AFP、白蛋白、c-kit、Thy1、CD45和CD34的卵圆细胞.在丁酸钠刺激下它可向肝细胞分化.结论利用选择性消化法可以分离到肝卵圆细胞,并且其具有肝干细胞的特征.
作者：单云峰；周伟平；杨文；刘淑琴；曹惠芳；邱秀华；吴孟超；王红阳 刊期： 2005年第08期
目的了解赫赛汀联合干扰能(IFNα-2b)对肾癌细胞在体外的杀伤抑制作用,同时检测肾癌细胞在药物作用前后表皮生长因子受体2(HER2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达情况.方法肾癌细胞系通过细胞培养技术进行培养,用噻唑蓝(MTT)法观察赫赛汀联合IFNα-2b对该细胞系的抑制杀伤效果,过河实验检测癌细胞的侵袭能力,进而运用链霉抗生物素-过氧化物酶免疫组织化学(SP)法对HER2、MRP1表达情况进行测定.结果赫赛汀联合IFNα-2b对肾癌细胞的生长抑制及耐药性呈时间和剂量依赖性.经药物处理后,HER2、MRP1表达明显下降,由用药前的62.82%、69.42%降到用药后的24.35%、16.87%(P<0.05).结论联合用药能有效抑制肾癌细胞的生长,对瘤细胞的耐药性也有一定的逆转作用.
作者：胡志全；王家菁；叶章群 刊期： 2005年第08期
目的利用组织工程方法和原理初步构建血管化肝小块组织.方法肝细胞和肝窦内皮细胞取自小鼠肝脏.采用内管网高分子聚酯类聚合物(PLGA)材料作为支架.肝窦内皮细胞接种在内管网PLGA支架管道的内壁使之在体外预内皮化.肝细胞与纤维蛋白原混合制成肝细胞/纤维蛋白原混合液,接种在喷洒有凝血酶的预内皮化的内管网支架上.构建的复合物分别植于小鼠肠系膜部位(A组)和肝组织表面(B组),2周后将支架取出观察,比较不同部位的植入效果.结果支架体外预血管化后,其管道内可见内皮细胞均匀贴壁;体内植入后内皮细胞优势生长;A组小鼠肠系膜间支架中有血管长入,但未见有肝细胞留存;B组可见支架内有少量肝细胞团,并有血管长入.结论简易PLGA内管网多孔支架可以用于肝组织小块的构建,而肝组织表面更适合组织工程肝小块的体内植入.
作者：徐迎新；吴仕和；杨洪义；宋旭华；王金晶；刘巨超；李荣；颜永年 刊期： 2005年第08期
目的研究转人α-1,2岩藻糖苷转移酶基因(HT)在克服超急性排斥反应(HAR)中的作用.方法通过脂质体转染将人HT基因转入猪血管内皮细胞(PIECs)中,利用显微注射建立转HT基因小鼠模型,经流式细胞仪检测转HT基因阳性的PIECs表面抗原及小鼠外周血单核细胞表面抗原的变化.结果转HT基因的PIECs表面的α-1,3半乳糖(α-Gal)比阴性对照下降了50%～60%,H抗原由无表达到44%～78%表达阳性;转HT基因小鼠白细胞表面的α-Gal比阴性对照下降了63%左右,H抗原阳性表达率为95%以上.结论 HT基因在细胞和小鼠体内均有较好的表达,可减少异种抗原与异种抗体的反应,在克服超急性排斥反应中能发挥一定的作用.
作者：李胜芝；刘秉乾；马志方；张玥；王广有；马腾骧 刊期： 2005年第08期
目的探讨人胚神经干细胞(hNSC)移植治疗脊髓损伤(SCI)的可行性.方法分离、培养和鉴定hNSC;用5溴-2脱氧尿苷嘧啶(BrdU)标记hNSC,并将其移植到14只T10半横断的Wistar大鼠损伤脊髓内(另外14只T10半横断损伤的大鼠作为对照组,仅损伤脊髓内注射DMEM/F12培养液),用BrdU的FITC免疫荧光染色检测移植细胞的存活和迁徙,用NF-200、GFAP免疫组织化学鉴定移植细胞的分化,BBB评分评定大鼠功能恢复情况.结果 (1)获得了大量的hNSC;(2)用免疫组织化学可以检测到移植的hNSC能在体内长时间存活(达2个月)并向远处迁徙,并分化为神经元和胶质细胞;(3)检测到实验组大鼠BBB得分明显高于对照组大鼠(P＜0.01),在SCI后第10周时实验组和对照组BBB得分大差距达到2.1分.结论 hNSC移植能促进SCI大鼠后肢功能恢复,它是SCI移植治疗较有价值的细胞资源.
作者：蔡培强；汤逊；林月秋；徐林；阳运康；周田华 刊期： 2005年第08期
腹腔镜脾切除术目前取得了较好的效果.但对于巨脾患者则多进行手助腹腔镜脾切除术[1],完全腹腔镜脾切除术较少见.我们自2003年7月至2004年11月对7例巨脾患者进行了腹腔镜脾切除术.
作者：刘建华；吕海涛；刘三光；路文彦；刘润田；石运明 刊期： 2005年第08期
目的探讨bcl-xL基因转染对大鼠脊髓损伤Caspase-3表达的影响和对神经细胞的保护作用.方法制备大鼠胸段脊髓T8,9压迫损伤模型,随机分为2组:对照组,bcl-xL组,将阳离子脂质体质粒混合后直接注入大鼠损伤脊髓,伤后1、3和7 d利用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学检测bcl-xL和Caspase-3表达情况;TUNEL法检测细胞凋亡,观察对神经细胞的保护作用.结果与对照组相比,bcl-xL组各时间段Caspase-3表达明显降低(P<0.05),TUNEL阳性凋亡的神经细胞明显减少(P<0.05).结论外源性bcl-xL基因体内转染在损伤脊髓的过度表达可减少脊髓不完全性损伤后凋亡,可能与其下调Caspase-3的有关.
作者：易成腊；陈安民；白祥军；宋先舟；徐卫国 刊期： 2005年第08期
目的探讨奥曲肽对胰腺炎相关性腹水(PAAF)诱导的大鼠肝细胞凋亡的保护作用及其相关机制.方法以PAAF诱导的大鼠肝损伤模型(B组)为研究对象,监测4、7 h血清肝功能酶学指标(ALT、AST)、总胆红素(TBiL)、淀粉酶(AmYL)及转化生长因子(TGF)-β1浓度.同时对胰腺、肝组织进行组织学观察;TUNEL法流式细胞术定量检测肝细胞凋亡情况,以及应用奥曲肽后(C组)对上述指标的变化.对比评估B组与急性坏死性胰腺炎模型(ANP组)胰腺损伤程度.结果 B组各血清学指标均比空白对照组(A组)显著升高(P＜0.01);C组上述各指标显著下降(P＜0.01);ANP组与B组相比,7 h时间点AmYL浓度明显升高(P＜0.01).PAAF诱导7 h后(20.13±3.84)%的肝细胞发生凋亡,其中(49.04±1.44)%细胞生长停滞在G2/M期.电镜(TEM)下可见典型的晚期凋亡肝细胞;ANP组胰腺损伤程度明显重于B组.结论 (1)TGF-β1在肝细胞增殖(G2/M)期诱导其凋亡损伤;(2)奥曲肽通过抑制TGF-β1在肝脏的表达而对PAAF诱导的大鼠肝细胞凋亡具有良好的保护作用;(3)PAAF诱导的大鼠肝损伤模型中的胰腺病变明显轻于ANP时的胰腺病变.
作者：程若川；王建忠；马万里；刁畅；罗华友 刊期： 2005年第08期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
