龚选举；李妹；王岩；袁素；符志龙；董玉英；陈春吉
目的研究转人α-1,2岩藻糖苷转移酶基因(HT)在克服超急性排斥反应(HAR)中的作用.方法通过脂质体转染将人HT基因转入猪血管内皮细胞(PIECs)中,利用显微注射建立转HT基因小鼠模型,经流式细胞仪检测转HT基因阳性的PIECs表面抗原及小鼠外周血单核细胞表面抗原的变化.结果转HT基因的PIECs表面的α-1,3半乳糖(α-Gal)比阴性对照下降了50%～60%,H抗原由无表达到44%～78%表达阳性;转HT基因小鼠白细胞表面的α-Gal比阴性对照下降了63%左右,H抗原阳性表达率为95%以上.结论 HT基因在细胞和小鼠体内均有较好的表达,可减少异种抗原与异种抗体的反应,在克服超急性排斥反应中能发挥一定的作用.
作者：李胜芝；刘秉乾；马志方；张玥；王广有；马腾骧 刊期： 2005年第08期
Barrett食管是形成食管腺癌的主要危险因素,因而对Barrett食管的研究成为上消化道疾病研究的重点之一.目前在Barrett食管的发病机制、与食管腺癌的关系以及诊断、预防和治疗等多方面都取得了很大的进展.
作者：张逊；卢喜科；徐医军 刊期： 2005年第08期
Tsai等[1]近发现多种癌细胞中均存在Nucleostemin(NS)蛋白,其对癌细胞维持增殖状态是必须的.我们应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学技术检测前列腺癌(PCa)及前列腺增生(BPH)组织中NS基因的表达,探讨其在PCa中的作用及其与患者血清中前列腺特异抗原(PSA)的关系.
作者：刘秉乾；李沛寰；张彤；范志强；王广有；马腾骧 刊期： 2005年第08期
目的利用组织工程方法和原理初步构建血管化肝小块组织.方法肝细胞和肝窦内皮细胞取自小鼠肝脏.采用内管网高分子聚酯类聚合物(PLGA)材料作为支架.肝窦内皮细胞接种在内管网PLGA支架管道的内壁使之在体外预内皮化.肝细胞与纤维蛋白原混合制成肝细胞/纤维蛋白原混合液,接种在喷洒有凝血酶的预内皮化的内管网支架上.构建的复合物分别植于小鼠肠系膜部位(A组)和肝组织表面(B组),2周后将支架取出观察,比较不同部位的植入效果.结果支架体外预血管化后,其管道内可见内皮细胞均匀贴壁;体内植入后内皮细胞优势生长;A组小鼠肠系膜间支架中有血管长入,但未见有肝细胞留存;B组可见支架内有少量肝细胞团,并有血管长入.结论简易PLGA内管网多孔支架可以用于肝组织小块的构建,而肝组织表面更适合组织工程肝小块的体内植入.
作者：徐迎新；吴仕和；杨洪义；宋旭华；王金晶；刘巨超；李荣；颜永年 刊期： 2005年第08期
人Survivin 基因是经效应细胞蛋白酶受体(EPR-1)cDNA在人类基因组库的杂交筛选中分离出来的,因其具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重生物学特性受到关注[1,2].我们以Survivin SAO转染C6胶质瘤细胞,进一步观察对其bcl-2和bax 的影响及其相关性.
作者：赵启忠；王运杰 刊期： 2005年第08期
目的研究肝细胞生长因子(HGF)基因治疗对小鼠急性肝衰模型的治疗作用.方法构建人肝细胞生长因子(hHGF)表达载体,利用脂质体介导法在活体内转染肝细胞生长因子基因,利用荧光显微镜检测肝组织内绿色荧光蛋白(GFP)表达了解目的基因的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中人肝细胞生长因子的含量,通过观察小鼠急性肝衰模型的生存率、肝功能变化、肝组织病理改变来检测肝细胞生长因子基因对急性肝衰的治疗作用,通过检测肝组织中PCNA指数的变化了解肝脏的增殖能力的变化.结果荧光显微镜下可见肝组织内有绿色荧光蛋白的表达,转染人肝细胞生长因子基因后在血清中可检测到hHGF的表达,而且可持续1周以上,与对照组相比,转染hHGF基因组的生存率明显提高(40.0% vs 11.5%,P<0.05),血清ALT、TBi明显降低,肝组织中PCNA指数也明显升高.结论活体转染肝细胞生长因子基因可获得表达,而且肝细胞生长因子基因对急性肝衰小鼠有治疗作用.
作者：何勇；周峻；陈勇；李海民；赵青川；窦科峰 刊期： 2005年第08期
目的探讨人胚神经干细胞(hNSC)移植治疗脊髓损伤(SCI)的可行性.方法分离、培养和鉴定hNSC;用5溴-2脱氧尿苷嘧啶(BrdU)标记hNSC,并将其移植到14只T10半横断的Wistar大鼠损伤脊髓内(另外14只T10半横断损伤的大鼠作为对照组,仅损伤脊髓内注射DMEM/F12培养液),用BrdU的FITC免疫荧光染色检测移植细胞的存活和迁徙,用NF-200、GFAP免疫组织化学鉴定移植细胞的分化,BBB评分评定大鼠功能恢复情况.结果 (1)获得了大量的hNSC;(2)用免疫组织化学可以检测到移植的hNSC能在体内长时间存活(达2个月)并向远处迁徙,并分化为神经元和胶质细胞;(3)检测到实验组大鼠BBB得分明显高于对照组大鼠(P＜0.01),在SCI后第10周时实验组和对照组BBB得分大差距达到2.1分.结论 hNSC移植能促进SCI大鼠后肢功能恢复,它是SCI移植治疗较有价值的细胞资源.
作者：蔡培强；汤逊；林月秋；徐林；阳运康；周田华 刊期： 2005年第08期
目的观察肝癌细胞系的基因表达概况,寻找在肝癌细胞系及正常肝组织中差异表达基因.方法以肝癌细胞系及正常肝组织的总RNA反转录合成含有α-32P dATP的cDNA为探针,与Atlas微阵列表达分析膜进行差异杂交,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Northern杂交验证.结果放射自显影结果经AtlasImageTM软件分析显示:在所分析的588种已知基因中,TFDP2、Akt1、E2F-3等26个在肝癌细胞系中表达上调,TDGF1、BAK、Caspase-3等22个表达下调,参与细胞增殖、凋亡、分化、细胞间相互作用、与细胞侵袭相关的基因表达水平发生了明显改变.结论通过Atlas微阵列系统分析发现的这些基因的表达改变组成了一个肝癌特异的基因表达谱,系统地研究肝癌细胞系的基因表达改变,可为肿瘤早期诊断和治疗提供线索.
作者：刘连新；武林枫；谢向晨；姜洪池；刘芝华；吴旻 刊期： 2005年第08期
目的观察bax和bax mRNA在猪全层皮肤缺损创面中心和新生上皮下的表达.方法在6头小型猪的背部各造成8个直径为4 cm的圆形全层皮肤缺损创面.在创面形成后当日及3、6、9、12、15、20、25和40 d,取创面中心及创面边缘的组织,采用免疫组织化学染色和原位杂交检测bax和bax mRNA的表达.结果伤后15 d和伤后20 d可以在创面中心观察到bax mRNA的表达,bax mRNA阳性细胞数分别为(65.83±9.35)和(10.33±5.57)个/400×视野;伤后20 d可以在创面中心观察到bax的表达,bax阳性细胞数为(62.30±17.78)个/400×视野;新生上皮下观测不到bax和bax mRNA的表达.结论在猪全层皮肤缺损创面愈合后期,创面中心的肉芽组织中bax和bax mRNA的表达增高,且该部位的细胞凋亡可能与bax有关;新生上皮下的细胞凋亡与创面中心的细胞凋亡机制不同.
作者：李金清；付小兵；都义日；孙同柱；程飙 刊期： 2005年第08期
目的评价反义转化生长因子(TGF)-βⅡ型受体-腺病毒表达系统对支气管成形动物模型吻合口胶原合成的影响.方法将行左上肺支气管成形术的试验犬分为3组,A组雾化吸入蒸馏水,B组吸入腺病毒空白载体,C组吸入反义TGF-βⅡ型受体-腺病毒各1周,4周后取吻合口组织检测TGF-βⅡR mRNA和I型胶原的合成量.结果 C组的TGF-βⅡR mRNA合成量(0.75±0.13)和I型胶原的合成量(829.50±78.30)较A(1.96±0.20和1 167.20±94.10)B(1.89±0.17和1 291.30±103.50)两组均减少,差异有统计学意义(P＜0.05);AB两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论应用反义TGF-βⅡ型受体-腺病毒表达系统阻断TGF-β的作用可以减少细胞外胶原的合成,从而发挥抑制吻合口瘢痕增生的作用.
作者：付向宁；张霓；孙威；黄畦 刊期： 2005年第08期
目的观察大鼠肝卵圆细胞的活化,为进一步研究肝卵圆细胞特征建立简单的分离培养方法.方法利用2-乙酰氨基芴/部分肝切除建立肝卵圆细胞活化的大鼠模型,采用选择性消化法从该模型中分离纯化肝卵圆细胞,并做免疫细胞荧光鉴定.用丁酸钠诱导其分化.结果成功地建立了肝卵圆细胞活化模型,并从中分离培养了表达OV6、CK19、AFP、白蛋白、c-kit、Thy1、CD45和CD34的卵圆细胞.在丁酸钠刺激下它可向肝细胞分化.结论利用选择性消化法可以分离到肝卵圆细胞,并且其具有肝干细胞的特征.
作者：单云峰；周伟平；杨文；刘淑琴；曹惠芳；邱秀华；吴孟超；王红阳 刊期： 2005年第08期
我们通过小鼠模型注射超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),观察SEA对小鼠体内肿瘤的抑瘤效果,并探讨其作用机制.
作者：舒晓燕；冯邦胜；袁明；肖新立；满冬梅；徐利珍；张木莲；张亚莉；张惠敏；熊俊 刊期： 2005年第08期
目的探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)基因改变与脊索瘤发生的关系.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学(SP)方法对18例脊索瘤和瘤旁正常组织FHIT基因RNA转录本和蛋白表达进行检测.结果 RT-PCR检测可见11例(61.1%)存在FHIT基因RNA转录本缺失,1例还同时含有正常和异常转录本.对其中2例进行测序,证实1例转录本缺失全部E5～E7外显子及部分E8外显子和部分E10外显子等2个片段;另1例转录本缺失全部E5～E9外显子及绝大部分E10外显子.脊索瘤中FHIT蛋白表达阳性百分比为55.6%(10/18),瘤周正常组织为100.0%(18/18),差异有统计学意义(P<0.05),FHIT蛋白在脊索瘤中表达减低.结论 FHIT基因表达缺失是脊索瘤发生的重要事件之一,可能与脊索瘤的发生机制有关.
作者：韩壮；王敏；吕刚；王太一；金春莲；富伟能 刊期： 2005年第08期
本研究旨在观察100例肺癌实体瘤组织中肿瘤浸润树突状细胞(TIDC)浸润情况,探讨影响肺癌患者生存与预后的内在因素.
作者：龚选举；李妹；王岩；袁素；符志龙；董玉英；陈春吉 刊期： 2005年第08期
目的探讨大鼠胰腺移植后细胞凋亡的变化、Fas/Fas配体(FasL)的表达及其与急性排斥反应的关系.方法实验分为同基因移植组和异基因移植组.分别于术后第3、5、7天处死受体,取移植胰腺,应用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,计算凋亡指数(AI),应用免疫组织化学及Western blot检测Fas/FasL的表达.结果细胞凋亡主要发生在胰腺腺泡细胞,同基因移植组有散在的腺泡细胞凋亡,AI在术后无明显变化,Fas/FasL表达阴性;异基因移植组在术后第3、5、7天胰腺腺泡细胞凋亡发生率逐渐增加(28.40±3.75,39.40±5.59,57.30±8.53,P<0.01),Fas/FasL表达逐渐增强,AI与急性排斥反应程度呈显著正相关(rs=0.932,P<0.01).结论胰腺腺泡细胞凋亡和Fas/FasL表达在胰腺移植急性排斥反应中发挥重要作用,凋亡指数对胰腺移植急性排斥反应的诊断有一定的参考价值.
作者：刘忠；关凤林；胡祥 刊期： 2005年第08期
目的探讨葛根素对离体兔肺缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法应用离体肺缺血再灌注模型,将20只健康家兔随机分为2组,实验组将葛根素(100 mg/L)加入含前列腺素E1(PGE1)的低钾右旋糖酐(LPD)液进行肺灌注及保存,对照组则以含PGE1的LPD液灌注及保存,4 ℃保存12 h再灌注1 h后测定肺组织湿/干重比(W/D)及超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)活性;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测肺凋亡细胞并观察肺组织结构变化.结果实验组肺组织W/D及MPO活性分别为(4.90±0.86)、(3.21±0.48) U/100 mg蛋白,明显低于对照组的(5.52±1.05)、(4.02±0.69) U/100 mg蛋白(P＜0.05),SOD活性为(61.37±10.08) U/100 mg蛋白,则明显高于对照组的(50.85±11.40) U/100 mg蛋白(P＜0.05),其细胞凋亡指数(AI)为6.25±0.72亦较对照组的7.96±0.61显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05),肺组织病理变化较对照组轻.结论葛根素能减轻肺缺血再灌注损伤,其作用机制与抑制中性粒细胞聚集、清除氧自由基、抗氧化及抗细胞凋亡有关.
作者：耿庆；高尚志；乌达；张本固 刊期： 2005年第08期
目的探讨抑制枯否细胞对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法制作部分肝脏缺血再灌注大鼠模型80只,实验组注射氯化钆,对照组注射生理盐水,检测两组大鼠缺血前、再灌注后5 min、1和6 h血压、心率的变化,血清转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)的水平及肝组织超微结构的改变.结果实验组再灌注6 h血清TNF-α和IL-1为(0.475±0.069) μg/L和(0.221±0.056) μg/L,显著低于对照组的(0.831±0.167) μg/L和(0.335±0.127) μg/L(P<0.05),两组血压、心率和AST变化的差异也有统计学意义(P<0.05),实验组大鼠肝脏超微结构的损伤程度轻于对照组.结论抑制枯否细胞活化可减轻肝脏缺血再灌注损伤,枯否细胞在肝脏缺血再灌注损伤中的作用很重要.
作者：王东；朱继业；冷希圣 刊期： 2005年第08期
目的建立对肝癌细胞具有靶向调控的高感染性和高分泌性产病毒细胞系.方法将重组反义甲胎蛋白增强子/单纯疱疹病毒胸苷激酶基因逆转录病毒载体(pL/TK/AFE/SN)转染至PA317包装细胞,经G418(400 mg/L)筛选、病毒滴度测定.以病毒上清感染培养的Hep3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞,并抽提细胞基因组DNA作Southern blot分析;观察GCV(100 mg/L)对细胞生长的影响.结果转染pL/TK/AFE/SN的PA317细胞经G418筛选2周获阳性克隆;病毒滴度为5.4×104～3.8×105 CFU/ml.Southern杂交证实前病毒已完整整合于PA317细胞,并稳定整合于Hep3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞中.导入AFE/TK基因的Hep3B肝癌细胞经GCV作用后的存活率在2、4、6 d时分别降低35%、87%、95%,生长明显受抑制(F=7.23,P<0.01).结论携带AFE/TK基因的产病毒细胞系能够成功地将AFE/TK基因转移到感染细胞中.
作者：茅幼霞；陈迟；刘景丰 刊期： 2005年第08期
目的探讨人组织激肽释放酶对离体动物阴茎海绵体平滑肌的舒张效应,以初步探讨其对阴茎勃起的调节作用.方法通过离体阴茎海绵体平滑肌肌条实验方法,利用PowerLab 4SP微弱生物信号采集系统记录人组织激肽释放酶对离体家兔和大鼠阴茎海绵体平滑肌的舒张效应.结果 100 mU人组织激肽释放酶可分别使去氧肾上腺素诱导的家兔和大鼠阴茎海绵体平滑肌舒张(65.98±6.98)%和(54.86±9.65)%.结论人组织激肽释放酶可强力地舒张离体家兔和大鼠阴茎海绵体平滑肌,推测其对人阴茎海绵体平滑肌也会有较强的舒张效应,可能是勃起功能障碍药物开发的一个新靶点.
作者：王涛；刘继红；尹春萍；肖恒军；陈俊；叶章群 刊期： 2005年第08期
目的构建重组人早幼粒白血病基因(PML)的逆转录病毒载体及稳定表达PML的膀胱肿瘤细胞株.方法应用DNA重组技术,将PML基因亚克隆后连接在逆转录病毒载体pLXSN上,经酶切鉴定正确后,磷酸钙沉淀法转染到PA317包装细胞包装病毒,并计算重组病毒的滴度.聚合酶链反应(PCR)鉴定重组PML逆转录病毒能够成功感染靶细胞.激光共聚焦和Western blot鉴定PML蛋白的表达.结果经酶切分析证实有大约2.1 kb大小的片段插入到逆转录病毒载体中.PCR结果显示感染重组PML逆转录病毒的细胞可以扩增出304 bp大小的片段.激光共聚焦显微镜显示,感染重组PML病毒的膀胱肿瘤细胞胞核内有散在的斑点样的绿色荧光亮点.Western blot也发现感染PML组有大约90×103的特异性的蛋白条带.结论我们成功构建重组人PML基因的逆转录病毒载体并且建立了稳定表达PML的膀胱肿瘤细胞株.
作者：李磊；贺大林；何辉；王新阳；南勋义 刊期： 2005年第08期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
