茅幼霞；陈迟；刘景丰
目的对大鼠体神经-内脏神经(副交感神经)吻合后再生神经的物质转运功能和递质性质进行定性研究.方法在建立了人工体神经-内脏神经膀胱反射弧的5只大鼠的左侧盆神经节(MPG)、尿道外括约肌(EUS)分别注射荧光金(FG)和快蓝(FB),通过逆行追踪检测再生神经的物质转运功能,酶组织化学方法检测再生神经中的乙酰胆碱酯酶(AChE).结果逆行追踪结果显示FG、FB单标神经元及FG和FB双标神经元主要分布于脊髓L3尾部至L5头侧左侧前角.神经吻合口远心端和近心端,以及支配膀胱的节前有髓神经纤维,支配EUS的有髓神经纤维多为AChE反应阳性.结论人工体神经-内脏神经膀胱反射弧建立后,再生的传出神经有物质转运功能,体神经-内脏神经(副交感神经)吻合后再生神经纤维多为胆碱能.
作者：李兵；肖传国 刊期： 2005年第08期
目的探讨反义基因治疗与化疗联合应用提高骨肉瘤疗效的可行性及其机制.方法构建荷骨肉瘤裸鼠模型,采用瘤内注射和腹腔给药方式,以Survivin反义寡核苷酸(ASODN,5 mg/kg体重)配合顺铂(DDP,3 mg/kg体重)对瘤鼠进行联合干预治疗,观测裸鼠肿瘤生长情况及瘤体病理形态,免疫组织化学法检测肿瘤Survivin蛋白表达,DNA末端原位标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡指数(AI).结果联合治疗组裸鼠瘤重(0.36±0.01) g仅为对照组(1.08±0.05) g 33%,抑瘤率IR(66.9±1.4)%显著高于ASODN组(38.9±0.8)%和DDP组(49.8±9.6)%,χ2=5.14,P＜0.05,Survivin蛋白表达明显减弱,AI(45.1±3.7)%显著高于对照组(5.8±1.2)%及各单药组(23.9±3.1)%、(24.1±4.8)%,χ2=146.03,P＜0.01.结论 ASODN对DDP具有明显增效作用,可弥补DDP耐药缺陷,两者联合可望发挥协同抗瘤效应.
作者：高大新；张海燕；吕刚；李永军；黄涛；王岩峰 刊期： 2005年第08期
我们通过小鼠模型注射超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),观察SEA对小鼠体内肿瘤的抑瘤效果,并探讨其作用机制.
作者：舒晓燕；冯邦胜；袁明；肖新立；满冬梅；徐利珍；张木莲；张亚莉；张惠敏；熊俊 刊期： 2005年第08期
目的观察体外诱导骨髓间充质干细胞分化及肝纤维化形成环境中移植情况.方法首先行骨髓间充质干细胞提取、分离和培养,加入肝细胞生长因子(HGF,20 μg/L)和表皮生长因子(EGF,1.5 mg/L)诱导定向分化.肝纤维化形成的大鼠随机分成2组,每组10只.使用5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记诱导的骨髓间充质干细胞,经门静脉向肝纤维化形成的SD大鼠肝脏移植,对照组用BrdU标记未经诱导的骨髓间充质干细胞.2周后通过免疫组织化学方法检测大鼠肝脏标记细胞的分布及BrdU+/ALB+细胞数量.结果体外诱导骨髓间充质干细胞定向分化的细胞CK8及ALB表达阳性.移植2周后大鼠肝脏均可检测到BrdU标记细胞,与对照组相比诱导后骨髓间充质干细胞组BrdU+/ALB+细胞数较多,差异有统计学意义(P＜0.05).结论经体外诱导骨髓间充质干细胞能分化为肝细胞,移植在大鼠肝纤维化形成环境中,白蛋白表达细胞数更多.
作者：安伟德；胡祥；曹亮；王金晶；刘巨超；李力；宋旭华；徐迎新 刊期： 2005年第08期
目的研究硫化砷对骨肉瘤细胞生长和凋亡的影响,并探讨其可能的机制.方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制率、倒置显微镜观察细胞形态、AnnexinⅤ法检测细胞凋亡、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测bcl-2及bax基因的表达,观察硫化砷对骨肉瘤细胞株MG-63诱导凋亡的作用.结果硫化砷可明显抑制MG-63细胞的增殖,1.0 mg/L浓度的硫化砷作用24 h后,MG-63细胞的抑制率可达26.43%.倒置显微镜观察被硫化砷抑制的MG-63细胞呈典型的凋亡改变,流式细胞仪检测凋亡率与硫化砷处理时间、处理浓度呈正相关.在硫化砷的作用下,MG-63细胞的bcl-2表达下调,而bax表达无明显改变.结论硫化砷可有效地诱导骨肉瘤细胞凋亡,bcl-2表达下调是诱导细胞凋亡的重要机制.
作者：刘勇；郑启新；杜靖远；杨述华；邵增务；段德宇 刊期： 2005年第08期
目的尝试利用质谱技术对肝癌细胞表面自然呈递的MAGE-3表位进行检测和分析.方法肝癌细胞和肝细胞取自同1名男性肝癌患者,弱酸洗涤法分离肝癌细胞和癌旁无瘤肝细胞表面所有肽段;利用表位预测法挑选出HLA-A2限制的MAGE-3理论侯选肽;检测MAGE-3 mRNA的表达;肽混合物进行高压液相纯化分离和差异比较;筛选出含有肿瘤特异肽的组分进行串联质谱检定和定量分析;后检测患者体内是否有针对该表位的T细胞反应.结果 MAGE-3在肝癌细胞样品中表达阳性,在肝细胞中阴性;随后从肝癌细胞样品中检测出自然呈递的MAGE-3271-279表位抗原肽:FLWGPRALV(38-39拷贝/细胞),并从患者外周血中检测出针对该表位的特异性T细胞反应.结论本实验从肿瘤组织中检测出自然呈递的MAGE-3271-279表位,并揭示了该表位的潜在应用价值,同时也初步展示了质谱在肿瘤相关表位检测中快捷、准确的特点,而这些特点对于肿瘤相关表位的鉴定和肽疫苗的设计是非常重要的.
作者：周迈；彭吉润；张华刚；钟朝辉；郭晏同；冷希圣 刊期： 2005年第08期
目的探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响.方法噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线及检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞凋亡.结果 MTT法显示NDGA对MCF-7细胞生长增殖有明显的抑制作用(P<0.05),呈剂量和时间依赖效应;流式细胞仪结果显示NDGA阻滞细胞周期于S期,诱导细胞凋亡;在光镜和扫描电镜下,NDGA诱导细胞发生凋亡形态学变化,导致细胞表面超微结构的改变和凋亡小体的形成.结论 NDGA能够抑制MCF-7细胞的增殖,诱导细胞凋亡,为脂氧合酶抑制剂临床应用于乳腺癌提供了科学依据.
作者：刘焕涛；孙靖中；马榕；唐鲁兵 刊期： 2005年第08期
目的探讨乙酰肝素酶(HPA)mRNA在肝细胞癌(HCC)中的表达及点突变的意义.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测33例HCC中HPA的表达,用T-A克隆测序法检测其扩增产物有无突变,并与HCC临床病理学指标分析.结果有16例癌组织HPA表达阳性,阳性率(48.5%)显著高于癌周肝组织(P<0.01).术后转移复发组HPA阳性率显著高于无转移复发组(P＜0.01).7例PCR产物测序发现有4例均存在2处点突变,其中一处为有义突变,突变率为57.1%.结论 HCC中HPA mRNA表达率增高,可作为HCC术后预测转移复发的一个重要指标.HPA基因点突变可能是其表达率增高的原因之一.
作者：陈晓鹏；刘颖斌；彭淑牖；史良会 刊期： 2005年第08期
目的探讨大鼠胰腺移植后细胞凋亡的变化、Fas/Fas配体(FasL)的表达及其与急性排斥反应的关系.方法实验分为同基因移植组和异基因移植组.分别于术后第3、5、7天处死受体,取移植胰腺,应用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,计算凋亡指数(AI),应用免疫组织化学及Western blot检测Fas/FasL的表达.结果细胞凋亡主要发生在胰腺腺泡细胞,同基因移植组有散在的腺泡细胞凋亡,AI在术后无明显变化,Fas/FasL表达阴性;异基因移植组在术后第3、5、7天胰腺腺泡细胞凋亡发生率逐渐增加(28.40±3.75,39.40±5.59,57.30±8.53,P<0.01),Fas/FasL表达逐渐增强,AI与急性排斥反应程度呈显著正相关(rs=0.932,P<0.01).结论胰腺腺泡细胞凋亡和Fas/FasL表达在胰腺移植急性排斥反应中发挥重要作用,凋亡指数对胰腺移植急性排斥反应的诊断有一定的参考价值.
作者：刘忠；关凤林；胡祥 刊期： 2005年第08期
目的构建重组人早幼粒白血病基因(PML)的逆转录病毒载体及稳定表达PML的膀胱肿瘤细胞株.方法应用DNA重组技术,将PML基因亚克隆后连接在逆转录病毒载体pLXSN上,经酶切鉴定正确后,磷酸钙沉淀法转染到PA317包装细胞包装病毒,并计算重组病毒的滴度.聚合酶链反应(PCR)鉴定重组PML逆转录病毒能够成功感染靶细胞.激光共聚焦和Western blot鉴定PML蛋白的表达.结果经酶切分析证实有大约2.1 kb大小的片段插入到逆转录病毒载体中.PCR结果显示感染重组PML逆转录病毒的细胞可以扩增出304 bp大小的片段.激光共聚焦显微镜显示,感染重组PML病毒的膀胱肿瘤细胞胞核内有散在的斑点样的绿色荧光亮点.Western blot也发现感染PML组有大约90×103的特异性的蛋白条带.结论我们成功构建重组人PML基因的逆转录病毒载体并且建立了稳定表达PML的膀胱肿瘤细胞株.
作者：李磊；贺大林；何辉；王新阳；南勋义 刊期： 2005年第08期
目的转染小鼠pSG5-过氧化物酶体增殖物激活受体α(pSG5-mPPARα)质粒对小鼠原代肝细胞细胞周期调节基因表达的影响.方法在小鼠原代肝细胞培养中转染pSG5-mPPARα质粒及加入PPARα配体(WY-14643)后,检测即时反应基因(IEG)如fos癌基因 (c-fos)、jun癌基因(c-jun)和早期生长反应因-1(EGR-1),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的变化.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)方法.结果 EGR-1基因表达在小鼠原代肝细胞培养中转染pSG5-mPPARα质粒及加入PPARα配体WY-14643组与未转染加药组差异无统计学意义,而c-jun、c-fos和Cyclin D1基因表达,较未转染加药组明显增强.结论 EGR-1、c-jun、c-fos和Cyclin D1基因在肿瘤发生前阶段肝脏中的异常表达,对肿瘤形成可能具有一定的重要性.
作者：陈德烽；张万广；陈孝平 刊期： 2005年第08期
目的采用体外细胞培养,免疫组织化学染色和放射免疫测定方法,研究α-干扰素(α-IFN)对体外培养人垂体功能性腺瘤细胞激素分泌的影响.方法对11例垂体生长激素(GH)及GH/催乳素(PRL)腺瘤和15例垂体PRL腺瘤进行体外细胞培养,观察细胞形态的改变和生长特点.采用免疫组织化学染色技术研究α-IFN和αR-IFN在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤、功能性和非功能性垂体腺瘤之间阳性表达率差异.结果大多数垂体腺瘤细胞有α-IFN和αR-IFN表达,尤其在侵袭性垂体腺瘤细胞中呈高表达;α-IFN对垂体腺瘤细胞激素分泌有较强的抑制作用;α-IFN对大多数溴隐亭(BC)或奥曲肽(SMS)耐药的腺瘤细胞仍有抑制激素分泌效应;α-IFN能增强BC对垂体PRL腺瘤分泌的抑制作用.结论α-IFN具有用于临床治疗功能性垂体腺瘤的可能性.
作者：李杰；张华楸；万锋；舒凯；雷霆；李龄 刊期： 2005年第08期
为探讨Survivin 基因与原发性胆囊癌(PGC)发生、发展的关系,我们应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测PGC组织中Survivin基因的表达情况,并将结果进行了相关分析,为原发性胆囊癌的综合治疗及基因治疗提供依据.
作者：陈德志；王永安 刊期： 2005年第08期
目的通过基因反义封闭技术抑制细胞周期素D1(Cyclin D1)的表达,研究其对肝癌细胞增殖以及成瘤性的影响.方法以肝癌HepG2细胞株为研究对象,通过转染可表达Cyclin D1反义互补脱氧核苷酸(AScDNA) 的质粒后,观察Cyclin D1反义cDNA对肝癌细胞Cyclin D1基因表达、体外增殖活性及裸鼠体内成瘤性的影响.结果噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性显示转染表达反义Cyclin D1的质粒后,HepG2细胞的增殖受到抑制,抑制作用在48 h左右强;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测显示Cyclin D1 mRNA基因的表达明显被抑制;间接免疫荧光检测结果显示Cyclin D1蛋白表达显著降低;流式细胞仪检测结果显示G0/G1期的细胞比例增高,G2+M和S期的细胞比例下降,HepG2细胞周期在G1期被阻滞;裸鼠成瘤试验显示肝癌HepG2细胞的成瘤性受到明显抑制.结论 Cyclin D1反义cDNA 可以特异性的抑制肝癌HepG2细胞株Cyclin D1蛋白的表达,从而调控细胞周期,抑制肝癌细胞增殖及体内成瘤性.Cyclin D1反义cDNA对于肝细胞癌的生物治疗具有一定的应用前景.
作者：肖震宇；陈孝平；黄志勇；杨镇 刊期： 2005年第08期
目的利用组织工程方法和原理初步构建血管化肝小块组织.方法肝细胞和肝窦内皮细胞取自小鼠肝脏.采用内管网高分子聚酯类聚合物(PLGA)材料作为支架.肝窦内皮细胞接种在内管网PLGA支架管道的内壁使之在体外预内皮化.肝细胞与纤维蛋白原混合制成肝细胞/纤维蛋白原混合液,接种在喷洒有凝血酶的预内皮化的内管网支架上.构建的复合物分别植于小鼠肠系膜部位(A组)和肝组织表面(B组),2周后将支架取出观察,比较不同部位的植入效果.结果支架体外预血管化后,其管道内可见内皮细胞均匀贴壁;体内植入后内皮细胞优势生长;A组小鼠肠系膜间支架中有血管长入,但未见有肝细胞留存;B组可见支架内有少量肝细胞团,并有血管长入.结论简易PLGA内管网多孔支架可以用于肝组织小块的构建,而肝组织表面更适合组织工程肝小块的体内植入.
作者：徐迎新；吴仕和；杨洪义；宋旭华；王金晶；刘巨超；李荣；颜永年 刊期： 2005年第08期
人Survivin 基因是经效应细胞蛋白酶受体(EPR-1)cDNA在人类基因组库的杂交筛选中分离出来的,因其具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重生物学特性受到关注[1,2].我们以Survivin SAO转染C6胶质瘤细胞,进一步观察对其bcl-2和bax 的影响及其相关性.
作者：赵启忠；王运杰 刊期： 2005年第08期
目的观察3种半离体体外肝手术方式对肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 SD大鼠随机分为对照组(A组)、单纯离断肝下下腔静脉手术组(B组)、单纯离断肝上下腔静脉手术组(C组)和联合离断肝上、肝下下腔静脉手术组(D组),每组各10只,手术后4、24 h分组收集血清和肝组织,分别进行血清谷丙转氨酶(ALT)监测、病理切片、免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测.结果 ALT随各组手术复杂程度和再灌注时间的增加而升高;病理切片见各手术组肝脏炎症反应随手术复杂程度和再灌注时间的增加而有所加重;B组术后4和24 h肝组织中过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR)α的表达无明显变化,但术后24 h原癌基因B淋巴瘤-xL(bcl-xL)的表达强;C、D组肝组织术后4 h PPARα和bcl-xL的表达增加,术后24 h PPARα的表达明显强于4 h组,而bcl-xL的表达较4 h明显下降.结论 PPARα和bcl-xL参与体外肝手术后肝组织缺血再灌注损伤,两者的表达在一定程度上反应了肝细胞受损的程度.B组手术方式简单、对肝脏的损伤较小;C、D两组手术复杂,对肝组织的再灌注损伤较重.
作者：汪谦；李湘竑；侯景辉；陈俊任 刊期： 2005年第08期
目的探讨手术减压对慢性脊髓损伤的治疗分子机制.方法采用大鼠后路渐进性脊髓压迫模型,然后行手术减压.经观察行为评分(BBB),常规病理及胆碱乙酰转移酶(ChAT)和脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB的免疫组织化学检测.结果脊髓损伤后ChAT免疫组织化学阳性细胞数减少,BDNF和TrkB表达增加,BBB下降;减压后,ChAT阳性细胞数增多,BDNF和TrkB表达恢复,BBB改善,减压组与压迫组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论手术减压作用的分子机制可能是其促进了慢性压迫性损伤脊髓运动神经元合成ChAT和运动神经递质-乙酰胆碱,且减压可加速BDNF和TrkB的转运,从而加速实验动物行为功能的恢复.
作者：王新家；孔抗美；吴珊鹏；齐伟力 刊期： 2005年第08期
腹腔镜脾切除术目前取得了较好的效果.但对于巨脾患者则多进行手助腹腔镜脾切除术[1],完全腹腔镜脾切除术较少见.我们自2003年7月至2004年11月对7例巨脾患者进行了腹腔镜脾切除术.
作者：刘建华；吕海涛；刘三光；路文彦；刘润田；石运明 刊期： 2005年第08期
目的探讨人胚神经干细胞(hNSC)移植治疗脊髓损伤(SCI)的可行性.方法分离、培养和鉴定hNSC;用5溴-2脱氧尿苷嘧啶(BrdU)标记hNSC,并将其移植到14只T10半横断的Wistar大鼠损伤脊髓内(另外14只T10半横断损伤的大鼠作为对照组,仅损伤脊髓内注射DMEM/F12培养液),用BrdU的FITC免疫荧光染色检测移植细胞的存活和迁徙,用NF-200、GFAP免疫组织化学鉴定移植细胞的分化,BBB评分评定大鼠功能恢复情况.结果 (1)获得了大量的hNSC;(2)用免疫组织化学可以检测到移植的hNSC能在体内长时间存活(达2个月)并向远处迁徙,并分化为神经元和胶质细胞;(3)检测到实验组大鼠BBB得分明显高于对照组大鼠(P＜0.01),在SCI后第10周时实验组和对照组BBB得分大差距达到2.1分.结论 hNSC移植能促进SCI大鼠后肢功能恢复,它是SCI移植治疗较有价值的细胞资源.
作者：蔡培强；汤逊；林月秋；徐林；阳运康；周田华 刊期： 2005年第08期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
