舒晓燕；冯邦胜；袁明；肖新立；满冬梅；徐利珍；张木莲；张亚莉；张惠敏；熊俊
目的探讨手术减压对慢性脊髓损伤的治疗分子机制.方法采用大鼠后路渐进性脊髓压迫模型,然后行手术减压.经观察行为评分(BBB),常规病理及胆碱乙酰转移酶(ChAT)和脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB的免疫组织化学检测.结果脊髓损伤后ChAT免疫组织化学阳性细胞数减少,BDNF和TrkB表达增加,BBB下降;减压后,ChAT阳性细胞数增多,BDNF和TrkB表达恢复,BBB改善,减压组与压迫组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论手术减压作用的分子机制可能是其促进了慢性压迫性损伤脊髓运动神经元合成ChAT和运动神经递质-乙酰胆碱,且减压可加速BDNF和TrkB的转运,从而加速实验动物行为功能的恢复.
作者：王新家；孔抗美；吴珊鹏；齐伟力 刊期： 2005年第08期
目的观察体外诱导骨髓间充质干细胞分化及肝纤维化形成环境中移植情况.方法首先行骨髓间充质干细胞提取、分离和培养,加入肝细胞生长因子(HGF,20 μg/L)和表皮生长因子(EGF,1.5 mg/L)诱导定向分化.肝纤维化形成的大鼠随机分成2组,每组10只.使用5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记诱导的骨髓间充质干细胞,经门静脉向肝纤维化形成的SD大鼠肝脏移植,对照组用BrdU标记未经诱导的骨髓间充质干细胞.2周后通过免疫组织化学方法检测大鼠肝脏标记细胞的分布及BrdU+/ALB+细胞数量.结果体外诱导骨髓间充质干细胞定向分化的细胞CK8及ALB表达阳性.移植2周后大鼠肝脏均可检测到BrdU标记细胞,与对照组相比诱导后骨髓间充质干细胞组BrdU+/ALB+细胞数较多,差异有统计学意义(P＜0.05).结论经体外诱导骨髓间充质干细胞能分化为肝细胞,移植在大鼠肝纤维化形成环境中,白蛋白表达细胞数更多.
作者：安伟德；胡祥；曹亮；王金晶；刘巨超；李力；宋旭华；徐迎新 刊期： 2005年第08期
目的探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)基因改变与脊索瘤发生的关系.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学(SP)方法对18例脊索瘤和瘤旁正常组织FHIT基因RNA转录本和蛋白表达进行检测.结果 RT-PCR检测可见11例(61.1%)存在FHIT基因RNA转录本缺失,1例还同时含有正常和异常转录本.对其中2例进行测序,证实1例转录本缺失全部E5～E7外显子及部分E8外显子和部分E10外显子等2个片段;另1例转录本缺失全部E5～E9外显子及绝大部分E10外显子.脊索瘤中FHIT蛋白表达阳性百分比为55.6%(10/18),瘤周正常组织为100.0%(18/18),差异有统计学意义(P<0.05),FHIT蛋白在脊索瘤中表达减低.结论 FHIT基因表达缺失是脊索瘤发生的重要事件之一,可能与脊索瘤的发生机制有关.
作者：韩壮；王敏；吕刚；王太一；金春莲；富伟能 刊期： 2005年第08期
目的观察肝癌细胞系的基因表达概况,寻找在肝癌细胞系及正常肝组织中差异表达基因.方法以肝癌细胞系及正常肝组织的总RNA反转录合成含有α-32P dATP的cDNA为探针,与Atlas微阵列表达分析膜进行差异杂交,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Northern杂交验证.结果放射自显影结果经AtlasImageTM软件分析显示:在所分析的588种已知基因中,TFDP2、Akt1、E2F-3等26个在肝癌细胞系中表达上调,TDGF1、BAK、Caspase-3等22个表达下调,参与细胞增殖、凋亡、分化、细胞间相互作用、与细胞侵袭相关的基因表达水平发生了明显改变.结论通过Atlas微阵列系统分析发现的这些基因的表达改变组成了一个肝癌特异的基因表达谱,系统地研究肝癌细胞系的基因表达改变,可为肿瘤早期诊断和治疗提供线索.
作者：刘连新；武林枫；谢向晨；姜洪池；刘芝华；吴旻 刊期： 2005年第08期
目的探讨前腹壁悬吊(免气腹)腹腔镜辅助下婴儿先天性巨结肠(HD)根治术的特点.方法用气囊导尿管充生理盐水1.5～2.0 ml前腹壁悬吊行13例前腹壁悬吊腹腔镜辅助下婴儿HD根治术,比较了13例免气腹组和17例CO2气腹组手术中血流动力学参数和量化手术效果参数.结果气腹组在术中因腹内压增高可以致血流动力学参数平均动脉压(MAP)、PaCO2、心脏指数(CI)、HCO3-发生显著性变化,前腹壁悬吊组则保持稳定的参数值.两组在手术效果上差异无统计学意义.结论前腹壁悬吊腹腔镜辅助下HD根治术其前腹壁提拉装置构思新颖,实用性强,具有安全性,可行性,大大减少了由于腹内高压对血流动力学参数的影响,该手术方法值得在临床上推广.
作者：王国斌；杜寒松；周欣；陶凯雄 刊期： 2005年第08期
我们通过小鼠模型注射超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),观察SEA对小鼠体内肿瘤的抑瘤效果,并探讨其作用机制.
作者：舒晓燕；冯邦胜；袁明；肖新立；满冬梅；徐利珍；张木莲；张亚莉；张惠敏；熊俊 刊期： 2005年第08期
目的探讨反义基因治疗与化疗联合应用提高骨肉瘤疗效的可行性及其机制.方法构建荷骨肉瘤裸鼠模型,采用瘤内注射和腹腔给药方式,以Survivin反义寡核苷酸(ASODN,5 mg/kg体重)配合顺铂(DDP,3 mg/kg体重)对瘤鼠进行联合干预治疗,观测裸鼠肿瘤生长情况及瘤体病理形态,免疫组织化学法检测肿瘤Survivin蛋白表达,DNA末端原位标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡指数(AI).结果联合治疗组裸鼠瘤重(0.36±0.01) g仅为对照组(1.08±0.05) g 33%,抑瘤率IR(66.9±1.4)%显著高于ASODN组(38.9±0.8)%和DDP组(49.8±9.6)%,χ2=5.14,P＜0.05,Survivin蛋白表达明显减弱,AI(45.1±3.7)%显著高于对照组(5.8±1.2)%及各单药组(23.9±3.1)%、(24.1±4.8)%,χ2=146.03,P＜0.01.结论 ASODN对DDP具有明显增效作用,可弥补DDP耐药缺陷,两者联合可望发挥协同抗瘤效应.
作者：高大新；张海燕；吕刚；李永军；黄涛；王岩峰 刊期： 2005年第08期
目的建立对肝癌细胞具有靶向调控的高感染性和高分泌性产病毒细胞系.方法将重组反义甲胎蛋白增强子/单纯疱疹病毒胸苷激酶基因逆转录病毒载体(pL/TK/AFE/SN)转染至PA317包装细胞,经G418(400 mg/L)筛选、病毒滴度测定.以病毒上清感染培养的Hep3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞,并抽提细胞基因组DNA作Southern blot分析;观察GCV(100 mg/L)对细胞生长的影响.结果转染pL/TK/AFE/SN的PA317细胞经G418筛选2周获阳性克隆;病毒滴度为5.4×104～3.8×105 CFU/ml.Southern杂交证实前病毒已完整整合于PA317细胞,并稳定整合于Hep3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞中.导入AFE/TK基因的Hep3B肝癌细胞经GCV作用后的存活率在2、4、6 d时分别降低35%、87%、95%,生长明显受抑制(F=7.23,P<0.01).结论携带AFE/TK基因的产病毒细胞系能够成功地将AFE/TK基因转移到感染细胞中.
作者：茅幼霞；陈迟；刘景丰 刊期： 2005年第08期
目的探讨大鼠胰腺移植后细胞凋亡的变化、Fas/Fas配体(FasL)的表达及其与急性排斥反应的关系.方法实验分为同基因移植组和异基因移植组.分别于术后第3、5、7天处死受体,取移植胰腺,应用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,计算凋亡指数(AI),应用免疫组织化学及Western blot检测Fas/FasL的表达.结果细胞凋亡主要发生在胰腺腺泡细胞,同基因移植组有散在的腺泡细胞凋亡,AI在术后无明显变化,Fas/FasL表达阴性;异基因移植组在术后第3、5、7天胰腺腺泡细胞凋亡发生率逐渐增加(28.40±3.75,39.40±5.59,57.30±8.53,P<0.01),Fas/FasL表达逐渐增强,AI与急性排斥反应程度呈显著正相关(rs=0.932,P<0.01).结论胰腺腺泡细胞凋亡和Fas/FasL表达在胰腺移植急性排斥反应中发挥重要作用,凋亡指数对胰腺移植急性排斥反应的诊断有一定的参考价值.
作者：刘忠；关凤林；胡祥 刊期： 2005年第08期
目的探讨人胚神经干细胞(hNSC)移植治疗脊髓损伤(SCI)的可行性.方法分离、培养和鉴定hNSC;用5溴-2脱氧尿苷嘧啶(BrdU)标记hNSC,并将其移植到14只T10半横断的Wistar大鼠损伤脊髓内(另外14只T10半横断损伤的大鼠作为对照组,仅损伤脊髓内注射DMEM/F12培养液),用BrdU的FITC免疫荧光染色检测移植细胞的存活和迁徙,用NF-200、GFAP免疫组织化学鉴定移植细胞的分化,BBB评分评定大鼠功能恢复情况.结果 (1)获得了大量的hNSC;(2)用免疫组织化学可以检测到移植的hNSC能在体内长时间存活(达2个月)并向远处迁徙,并分化为神经元和胶质细胞;(3)检测到实验组大鼠BBB得分明显高于对照组大鼠(P＜0.01),在SCI后第10周时实验组和对照组BBB得分大差距达到2.1分.结论 hNSC移植能促进SCI大鼠后肢功能恢复,它是SCI移植治疗较有价值的细胞资源.
作者：蔡培强；汤逊；林月秋；徐林；阳运康；周田华 刊期： 2005年第08期
目的探讨T-cadherin分子表达对胶质母细胞瘤C6细胞增殖的影响.方法利用脂质体将pcDNA3和pcDNA3.T-cadherin表达质粒转染C6细胞,以克隆形成试验和细胞增殖试验研究T-cadherin表达对C6细胞增殖的影响.结果转pcDNA3.T-cadherin质粒的C6细胞形成的细胞克隆数显著少于转染pcDNA3载体质粒的C6细胞形成的克隆数,两者差异有统计学意义(P＜0.01).转染后表达T-cadherin分子C6细胞的生长速度明显慢于转染空载体不表达T-cadherin的C6克隆(P＜0.01),且T-cadherin表达水平与C6细胞增殖速度呈负要关.结论 T-cadherin分子表达显著抑制胶质母细胞瘤C6细胞的增殖.
作者：黄志勇；王克琼；陈孝平；吴在德 刊期： 2005年第08期
目的研究硫化砷对骨肉瘤细胞生长和凋亡的影响,并探讨其可能的机制.方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制率、倒置显微镜观察细胞形态、AnnexinⅤ法检测细胞凋亡、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测bcl-2及bax基因的表达,观察硫化砷对骨肉瘤细胞株MG-63诱导凋亡的作用.结果硫化砷可明显抑制MG-63细胞的增殖,1.0 mg/L浓度的硫化砷作用24 h后,MG-63细胞的抑制率可达26.43%.倒置显微镜观察被硫化砷抑制的MG-63细胞呈典型的凋亡改变,流式细胞仪检测凋亡率与硫化砷处理时间、处理浓度呈正相关.在硫化砷的作用下,MG-63细胞的bcl-2表达下调,而bax表达无明显改变.结论硫化砷可有效地诱导骨肉瘤细胞凋亡,bcl-2表达下调是诱导细胞凋亡的重要机制.
作者：刘勇；郑启新；杜靖远；杨述华；邵增务；段德宇 刊期： 2005年第08期
目的探讨肾静脉平面以上结扎大鼠下腔静脉(IVC)及应用川芎嗪后的肾功能及肾脏病理改变.方法分别在肾静脉平面以上结扎大鼠下腔静脉、肾静脉平面以上结扎下腔静脉并川芎嗪治疗,术后6、12、24 h、2、3、4、5、7 d检测血肌酐、尿素氮、24 h尿量及NAG酶并观察肾脏病理改变.结果肾静脉平面以上结扎大鼠下腔静脉后血肌酐、尿素氮、尿NAG酶升高,肾脏瘀血并见大量管型.术后第3天,肾脏恢复正常结构;术后第4天,血肌酐、尿素氮恢复正常;术后第5天,尿NAG酶恢复正常.肾静脉平面以上结扎下腔静脉并川芎嗪治疗术后第4天,血肌酐、尿素氮、尿NAG酶恢复正常,肾脏瘀血较轻.结论肾静脉平面以上结扎大鼠下腔静脉,可因双肾瘀血而影响肾功能,若同时加用川芎嗪则可保护肾脏功能.
作者：邱新光；郭学利；黄秀珍；范正军；赵春临；张谢夫；李红；吴阳；王子凡 刊期： 2005年第08期
腹腔镜能否应用于肿瘤外科一直存在争议,焦点之一是二氧化碳(CO2)气腹是否会促进肿瘤的生长和转移扩散.我们应用经直肠黏膜下接种建立直肠恶性肿瘤淋巴结转移动物模型对此进行观察,现将结果报道如下.
作者：付斌；赵宏 刊期： 2005年第08期
目的利用组织工程方法和原理初步构建血管化肝小块组织.方法肝细胞和肝窦内皮细胞取自小鼠肝脏.采用内管网高分子聚酯类聚合物(PLGA)材料作为支架.肝窦内皮细胞接种在内管网PLGA支架管道的内壁使之在体外预内皮化.肝细胞与纤维蛋白原混合制成肝细胞/纤维蛋白原混合液,接种在喷洒有凝血酶的预内皮化的内管网支架上.构建的复合物分别植于小鼠肠系膜部位(A组)和肝组织表面(B组),2周后将支架取出观察,比较不同部位的植入效果.结果支架体外预血管化后,其管道内可见内皮细胞均匀贴壁;体内植入后内皮细胞优势生长;A组小鼠肠系膜间支架中有血管长入,但未见有肝细胞留存;B组可见支架内有少量肝细胞团,并有血管长入.结论简易PLGA内管网多孔支架可以用于肝组织小块的构建,而肝组织表面更适合组织工程肝小块的体内植入.
作者：徐迎新；吴仕和；杨洪义；宋旭华；王金晶；刘巨超；李荣；颜永年 刊期： 2005年第08期
目的通过基因反义封闭技术抑制细胞周期素D1(Cyclin D1)的表达,研究其对肝癌细胞增殖以及成瘤性的影响.方法以肝癌HepG2细胞株为研究对象,通过转染可表达Cyclin D1反义互补脱氧核苷酸(AScDNA) 的质粒后,观察Cyclin D1反义cDNA对肝癌细胞Cyclin D1基因表达、体外增殖活性及裸鼠体内成瘤性的影响.结果噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性显示转染表达反义Cyclin D1的质粒后,HepG2细胞的增殖受到抑制,抑制作用在48 h左右强;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测显示Cyclin D1 mRNA基因的表达明显被抑制;间接免疫荧光检测结果显示Cyclin D1蛋白表达显著降低;流式细胞仪检测结果显示G0/G1期的细胞比例增高,G2+M和S期的细胞比例下降,HepG2细胞周期在G1期被阻滞;裸鼠成瘤试验显示肝癌HepG2细胞的成瘤性受到明显抑制.结论 Cyclin D1反义cDNA 可以特异性的抑制肝癌HepG2细胞株Cyclin D1蛋白的表达,从而调控细胞周期,抑制肝癌细胞增殖及体内成瘤性.Cyclin D1反义cDNA对于肝细胞癌的生物治疗具有一定的应用前景.
作者：肖震宇；陈孝平；黄志勇；杨镇 刊期： 2005年第08期
目的观察含有微血管样结构的凝胶块植入体内后与体内血液循环的连通情况,以及血管内皮细胞生长因子(VEGF165)对凝胶血管化的影响.方法在纤维蛋白凝胶中以VEGF165诱导小鼠微血管内皮细胞(MVEC)形成微血管样结构,设无VEGF165为对照,将制作的凝胶块用有微孔的塑料薄膜包裹后植入小鼠肠系膜间,2周后取样进行组织学切片,苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色,图像分析并测量血管化面积.结果凝胶植入2周见实验组凝胶周围有丰富的新生血管网经过塑料薄膜的小孔与凝胶内血管相连,对照组表面新生血管较少.组织学切片(HE染色)见VEGF组血管化总面积约为对照的50倍(P<0.01).实验组新生血管直径10～100 μm,分布于凝胶中心和周边部位;而对照组新生血管大直径＜20 μm,主要分布于凝胶的周边.结论含微血管样结构的预制凝胶植入后能形成具有血流灌注的微血管网.纤维蛋白凝胶在此过程中充当了一种较为合适的细胞外基质的作用,而VEGF在这一过程中起到一种诱导、刺激和强化作用.
作者：徐迎新；吴仕和；阎锡蕴；宋旭华；尹太；王金晶；李荣 刊期： 2005年第08期
目的探讨bcl-xL基因转染对大鼠脊髓损伤Caspase-3表达的影响和对神经细胞的保护作用.方法制备大鼠胸段脊髓T8,9压迫损伤模型,随机分为2组:对照组,bcl-xL组,将阳离子脂质体质粒混合后直接注入大鼠损伤脊髓,伤后1、3和7 d利用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学检测bcl-xL和Caspase-3表达情况;TUNEL法检测细胞凋亡,观察对神经细胞的保护作用.结果与对照组相比,bcl-xL组各时间段Caspase-3表达明显降低(P<0.05),TUNEL阳性凋亡的神经细胞明显减少(P<0.05).结论外源性bcl-xL基因体内转染在损伤脊髓的过度表达可减少脊髓不完全性损伤后凋亡,可能与其下调Caspase-3的有关.
作者：易成腊；陈安民；白祥军；宋先舟；徐卫国 刊期： 2005年第08期
目的探讨葛根素对离体兔肺缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法应用离体肺缺血再灌注模型,将20只健康家兔随机分为2组,实验组将葛根素(100 mg/L)加入含前列腺素E1(PGE1)的低钾右旋糖酐(LPD)液进行肺灌注及保存,对照组则以含PGE1的LPD液灌注及保存,4 ℃保存12 h再灌注1 h后测定肺组织湿/干重比(W/D)及超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)活性;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测肺凋亡细胞并观察肺组织结构变化.结果实验组肺组织W/D及MPO活性分别为(4.90±0.86)、(3.21±0.48) U/100 mg蛋白,明显低于对照组的(5.52±1.05)、(4.02±0.69) U/100 mg蛋白(P＜0.05),SOD活性为(61.37±10.08) U/100 mg蛋白,则明显高于对照组的(50.85±11.40) U/100 mg蛋白(P＜0.05),其细胞凋亡指数(AI)为6.25±0.72亦较对照组的7.96±0.61显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05),肺组织病理变化较对照组轻.结论葛根素能减轻肺缺血再灌注损伤,其作用机制与抑制中性粒细胞聚集、清除氧自由基、抗氧化及抗细胞凋亡有关.
作者：耿庆；高尚志；乌达；张本固 刊期： 2005年第08期
目的采用体外细胞培养,免疫组织化学染色和放射免疫测定方法,研究α-干扰素(α-IFN)对体外培养人垂体功能性腺瘤细胞激素分泌的影响.方法对11例垂体生长激素(GH)及GH/催乳素(PRL)腺瘤和15例垂体PRL腺瘤进行体外细胞培养,观察细胞形态的改变和生长特点.采用免疫组织化学染色技术研究α-IFN和αR-IFN在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤、功能性和非功能性垂体腺瘤之间阳性表达率差异.结果大多数垂体腺瘤细胞有α-IFN和αR-IFN表达,尤其在侵袭性垂体腺瘤细胞中呈高表达;α-IFN对垂体腺瘤细胞激素分泌有较强的抑制作用;α-IFN对大多数溴隐亭(BC)或奥曲肽(SMS)耐药的腺瘤细胞仍有抑制激素分泌效应;α-IFN能增强BC对垂体PRL腺瘤分泌的抑制作用.结论α-IFN具有用于临床治疗功能性垂体腺瘤的可能性.
作者：李杰；张华楸；万锋；舒凯；雷霆；李龄 刊期： 2005年第08期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
