王国斌；杜寒松；周欣；陶凯雄
目的观察大鼠肝卵圆细胞的活化,为进一步研究肝卵圆细胞特征建立简单的分离培养方法.方法利用2-乙酰氨基芴/部分肝切除建立肝卵圆细胞活化的大鼠模型,采用选择性消化法从该模型中分离纯化肝卵圆细胞,并做免疫细胞荧光鉴定.用丁酸钠诱导其分化.结果成功地建立了肝卵圆细胞活化模型,并从中分离培养了表达OV6、CK19、AFP、白蛋白、c-kit、Thy1、CD45和CD34的卵圆细胞.在丁酸钠刺激下它可向肝细胞分化.结论利用选择性消化法可以分离到肝卵圆细胞,并且其具有肝干细胞的特征.
作者：单云峰；周伟平；杨文；刘淑琴；曹惠芳；邱秀华；吴孟超；王红阳 刊期： 2005年第08期
目的探讨乙酰肝素酶(HPA)mRNA在肝细胞癌(HCC)中的表达及点突变的意义.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测33例HCC中HPA的表达,用T-A克隆测序法检测其扩增产物有无突变,并与HCC临床病理学指标分析.结果有16例癌组织HPA表达阳性,阳性率(48.5%)显著高于癌周肝组织(P<0.01).术后转移复发组HPA阳性率显著高于无转移复发组(P＜0.01).7例PCR产物测序发现有4例均存在2处点突变,其中一处为有义突变,突变率为57.1%.结论 HCC中HPA mRNA表达率增高,可作为HCC术后预测转移复发的一个重要指标.HPA基因点突变可能是其表达率增高的原因之一.
作者：陈晓鹏；刘颖斌；彭淑牖；史良会 刊期： 2005年第08期
本研究旨在观察100例肺癌实体瘤组织中肿瘤浸润树突状细胞(TIDC)浸润情况,探讨影响肺癌患者生存与预后的内在因素.
作者：龚选举；李妹；王岩；袁素；符志龙；董玉英；陈春吉 刊期： 2005年第08期
目的探讨乙酰肝素酶(HPSE)mRNA在膀胱癌中的表达及其与肿瘤临床病理特征和血管生成的关系.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测42例膀胱癌及16例癌旁组织中HPSE mRNA的表达,应用免疫组织化学法检测膀胱癌组织的微血管密度(MVD),结合患者临床病理指标及预后进行分析.结果 42例膀胱癌中,HPSE mRNA阳性23例(54.8%),16例癌旁组织中表达阳性者2例(12.5%),两组差异有统计学意义(P<0.01);HPSE mRNA的表达与膀胱癌的病理分级、临床分期、肿瘤大小及淋巴结转移有相关性(P<0.05);术后生存3年以下者HPSE mRNA的表达阳性率87.5%,明显高于生存3年以上者之46.9%(P<0.05);HPSE mRNA表达阳性者MVD值为90.8±13.6,表达阴性者肿瘤MVD计数均值为65.8±6.6,两组差异有统计学意义(P<0.01).结论 HPSE在膀胱癌的生长浸润、侵袭转移和血管生成中发挥重要作用,可作为判断膀胱癌生物学行为和预后的客观指标.
作者：赵勇；金讯波；吕家驹；孙鹏；王慕文；蒋绍博 刊期： 2005年第08期
目的观察肝癌细胞系的基因表达概况,寻找在肝癌细胞系及正常肝组织中差异表达基因.方法以肝癌细胞系及正常肝组织的总RNA反转录合成含有α-32P dATP的cDNA为探针,与Atlas微阵列表达分析膜进行差异杂交,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Northern杂交验证.结果放射自显影结果经AtlasImageTM软件分析显示:在所分析的588种已知基因中,TFDP2、Akt1、E2F-3等26个在肝癌细胞系中表达上调,TDGF1、BAK、Caspase-3等22个表达下调,参与细胞增殖、凋亡、分化、细胞间相互作用、与细胞侵袭相关的基因表达水平发生了明显改变.结论通过Atlas微阵列系统分析发现的这些基因的表达改变组成了一个肝癌特异的基因表达谱,系统地研究肝癌细胞系的基因表达改变,可为肿瘤早期诊断和治疗提供线索.
作者：刘连新；武林枫；谢向晨；姜洪池；刘芝华；吴旻 刊期： 2005年第08期
目的了解赫赛汀联合干扰能(IFNα-2b)对肾癌细胞在体外的杀伤抑制作用,同时检测肾癌细胞在药物作用前后表皮生长因子受体2(HER2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达情况.方法肾癌细胞系通过细胞培养技术进行培养,用噻唑蓝(MTT)法观察赫赛汀联合IFNα-2b对该细胞系的抑制杀伤效果,过河实验检测癌细胞的侵袭能力,进而运用链霉抗生物素-过氧化物酶免疫组织化学(SP)法对HER2、MRP1表达情况进行测定.结果赫赛汀联合IFNα-2b对肾癌细胞的生长抑制及耐药性呈时间和剂量依赖性.经药物处理后,HER2、MRP1表达明显下降,由用药前的62.82%、69.42%降到用药后的24.35%、16.87%(P<0.05).结论联合用药能有效抑制肾癌细胞的生长,对瘤细胞的耐药性也有一定的逆转作用.
作者：胡志全；王家菁；叶章群 刊期： 2005年第08期
目的通过基因反义封闭技术抑制细胞周期素D1(Cyclin D1)的表达,研究其对肝癌细胞增殖以及成瘤性的影响.方法以肝癌HepG2细胞株为研究对象,通过转染可表达Cyclin D1反义互补脱氧核苷酸(AScDNA) 的质粒后,观察Cyclin D1反义cDNA对肝癌细胞Cyclin D1基因表达、体外增殖活性及裸鼠体内成瘤性的影响.结果噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性显示转染表达反义Cyclin D1的质粒后,HepG2细胞的增殖受到抑制,抑制作用在48 h左右强;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测显示Cyclin D1 mRNA基因的表达明显被抑制;间接免疫荧光检测结果显示Cyclin D1蛋白表达显著降低;流式细胞仪检测结果显示G0/G1期的细胞比例增高,G2+M和S期的细胞比例下降,HepG2细胞周期在G1期被阻滞;裸鼠成瘤试验显示肝癌HepG2细胞的成瘤性受到明显抑制.结论 Cyclin D1反义cDNA 可以特异性的抑制肝癌HepG2细胞株Cyclin D1蛋白的表达,从而调控细胞周期,抑制肝癌细胞增殖及体内成瘤性.Cyclin D1反义cDNA对于肝细胞癌的生物治疗具有一定的应用前景.
作者：肖震宇；陈孝平；黄志勇；杨镇 刊期： 2005年第08期
目的探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响.方法噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线及检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞凋亡.结果 MTT法显示NDGA对MCF-7细胞生长增殖有明显的抑制作用(P<0.05),呈剂量和时间依赖效应;流式细胞仪结果显示NDGA阻滞细胞周期于S期,诱导细胞凋亡;在光镜和扫描电镜下,NDGA诱导细胞发生凋亡形态学变化,导致细胞表面超微结构的改变和凋亡小体的形成.结论 NDGA能够抑制MCF-7细胞的增殖,诱导细胞凋亡,为脂氧合酶抑制剂临床应用于乳腺癌提供了科学依据.
作者：刘焕涛；孙靖中；马榕；唐鲁兵 刊期： 2005年第08期
目的观察反应停对人肝细胞癌(HCC)血管生成和肿瘤生长侵袭的干预作用.方法建立高转移潜能人肝癌裸鼠肝原位移植模型,随机分成4组.各组模型自建立次日起分别经腹腔注射0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)、反应停(200 mg/kg体重)、紫杉醇(13 mg/kg体重)、反应停(200 mg/kg体重)+紫杉醇(13 mg/d).给药第30天处死裸小鼠,观察肿瘤生长、转移情况,分别用免疫组织化学和半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测癌组织CD34和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达并记录微血管密度(MVD).结果反应停组肿瘤重量、体积均与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05).各药物处理组肺转移灶计数、MVD和VEGF均低于对照组,以联合用药组为显著.结论反应停对HCC生长无明显抑制作用,但能抑制肿瘤血管生成并降低肺转移.
作者：张中林；刘志苏；孙权 刊期： 2005年第08期
目的采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症模型,探讨脓毒症时大鼠肺、肝组织内毒素受体Tlr4及CD14 mRNA的改变及其意义.方法 50只SD大鼠,随机分为正常对照组(10只)、CLP组(40只),CLP后24、48、72和96 h处死动物,留取肺、肝、肾及空肠组织,分别检测Tlr4、CD14 mRNA的表达.CLP组24、48、72和96 h肺、肝组织Tlr4及CD14 mRNA的表达升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),而肾、空肠组织Tlr4及CD14 mRNA的表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论提示肺、肝组织中Tlr4及CD14基因的表达改变与脓毒症的发生发展过程有密切的关系.
作者：乔安意；钱以德；杨星；黎介寿 刊期： 2005年第08期
为探讨Survivin 基因与原发性胆囊癌(PGC)发生、发展的关系,我们应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测PGC组织中Survivin基因的表达情况,并将结果进行了相关分析,为原发性胆囊癌的综合治疗及基因治疗提供依据.
作者：陈德志；王永安 刊期： 2005年第08期
为探讨肥大细胞对胃癌生长的影响机制,我们采用组织化学、免疫组织化学及显微图像分析系统,同步检测分析胃癌组织中肥大细胞的数量与其邻近癌组织增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2基因表达的关系,以期阐明肥大细胞对胃癌发生发展的影响及可能的分子生物学机制.
作者：柳雅玲；唐华美；王琳；李亚鲁；赵苗青 刊期： 2005年第08期
目的研究肝细胞生长因子(HGF)基因治疗对小鼠急性肝衰模型的治疗作用.方法构建人肝细胞生长因子(hHGF)表达载体,利用脂质体介导法在活体内转染肝细胞生长因子基因,利用荧光显微镜检测肝组织内绿色荧光蛋白(GFP)表达了解目的基因的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中人肝细胞生长因子的含量,通过观察小鼠急性肝衰模型的生存率、肝功能变化、肝组织病理改变来检测肝细胞生长因子基因对急性肝衰的治疗作用,通过检测肝组织中PCNA指数的变化了解肝脏的增殖能力的变化.结果荧光显微镜下可见肝组织内有绿色荧光蛋白的表达,转染人肝细胞生长因子基因后在血清中可检测到hHGF的表达,而且可持续1周以上,与对照组相比,转染hHGF基因组的生存率明显提高(40.0% vs 11.5%,P<0.05),血清ALT、TBi明显降低,肝组织中PCNA指数也明显升高.结论活体转染肝细胞生长因子基因可获得表达,而且肝细胞生长因子基因对急性肝衰小鼠有治疗作用.
作者：何勇；周峻；陈勇；李海民；赵青川；窦科峰 刊期： 2005年第08期
目的探讨纳络酮治疗急性重型颅脑损伤患者血浆内皮素(ET)含量变化及其临床意义,评价纳络酮治疗急性重型颅脑损伤的意义.方法观察了52例纳洛酮治疗急性重型颅脑损伤患者血浆ET含量在治疗前1 d、治疗后3、8 d及2周的变化,并且以46例颅脑损伤患者按常规治疗作对照组.结果颅脑损伤24 h内两组患者血浆内皮素较正常人均明显升高(P<0.05),伤后第3天、第8天两治疗组血浆内皮素较治疗前均明显下降(P<0.05),但纳络酮治疗组低于常规治疗组(P<0.05),治疗2周后两组ET水平基本恢复到正常水平.结论急性重型颅脑损伤患者血浆内皮素含量明显升高,与病情轻重相关,纳络酮治疗较常规治疗能更迅速地降低血浆ET水平.
作者：孙志香；黄志雄 刊期： 2005年第08期
目的评价反义转化生长因子(TGF)-βⅡ型受体-腺病毒表达系统对支气管成形动物模型吻合口胶原合成的影响.方法将行左上肺支气管成形术的试验犬分为3组,A组雾化吸入蒸馏水,B组吸入腺病毒空白载体,C组吸入反义TGF-βⅡ型受体-腺病毒各1周,4周后取吻合口组织检测TGF-βⅡR mRNA和I型胶原的合成量.结果 C组的TGF-βⅡR mRNA合成量(0.75±0.13)和I型胶原的合成量(829.50±78.30)较A(1.96±0.20和1 167.20±94.10)B(1.89±0.17和1 291.30±103.50)两组均减少,差异有统计学意义(P＜0.05);AB两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论应用反义TGF-βⅡ型受体-腺病毒表达系统阻断TGF-β的作用可以减少细胞外胶原的合成,从而发挥抑制吻合口瘢痕增生的作用.
作者：付向宁；张霓；孙威；黄畦 刊期： 2005年第08期
目的观察3种半离体体外肝手术方式对肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 SD大鼠随机分为对照组(A组)、单纯离断肝下下腔静脉手术组(B组)、单纯离断肝上下腔静脉手术组(C组)和联合离断肝上、肝下下腔静脉手术组(D组),每组各10只,手术后4、24 h分组收集血清和肝组织,分别进行血清谷丙转氨酶(ALT)监测、病理切片、免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测.结果 ALT随各组手术复杂程度和再灌注时间的增加而升高;病理切片见各手术组肝脏炎症反应随手术复杂程度和再灌注时间的增加而有所加重;B组术后4和24 h肝组织中过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR)α的表达无明显变化,但术后24 h原癌基因B淋巴瘤-xL(bcl-xL)的表达强;C、D组肝组织术后4 h PPARα和bcl-xL的表达增加,术后24 h PPARα的表达明显强于4 h组,而bcl-xL的表达较4 h明显下降.结论 PPARα和bcl-xL参与体外肝手术后肝组织缺血再灌注损伤,两者的表达在一定程度上反应了肝细胞受损的程度.B组手术方式简单、对肝脏的损伤较小;C、D两组手术复杂,对肝组织的再灌注损伤较重.
作者：汪谦；李湘竑；侯景辉；陈俊任 刊期： 2005年第08期
目的探讨奥曲肽对胰腺炎相关性腹水(PAAF)诱导的大鼠肝细胞凋亡的保护作用及其相关机制.方法以PAAF诱导的大鼠肝损伤模型(B组)为研究对象,监测4、7 h血清肝功能酶学指标(ALT、AST)、总胆红素(TBiL)、淀粉酶(AmYL)及转化生长因子(TGF)-β1浓度.同时对胰腺、肝组织进行组织学观察;TUNEL法流式细胞术定量检测肝细胞凋亡情况,以及应用奥曲肽后(C组)对上述指标的变化.对比评估B组与急性坏死性胰腺炎模型(ANP组)胰腺损伤程度.结果 B组各血清学指标均比空白对照组(A组)显著升高(P＜0.01);C组上述各指标显著下降(P＜0.01);ANP组与B组相比,7 h时间点AmYL浓度明显升高(P＜0.01).PAAF诱导7 h后(20.13±3.84)%的肝细胞发生凋亡,其中(49.04±1.44)%细胞生长停滞在G2/M期.电镜(TEM)下可见典型的晚期凋亡肝细胞;ANP组胰腺损伤程度明显重于B组.结论 (1)TGF-β1在肝细胞增殖(G2/M)期诱导其凋亡损伤;(2)奥曲肽通过抑制TGF-β1在肝脏的表达而对PAAF诱导的大鼠肝细胞凋亡具有良好的保护作用;(3)PAAF诱导的大鼠肝损伤模型中的胰腺病变明显轻于ANP时的胰腺病变.
作者：程若川；王建忠；马万里；刁畅；罗华友 刊期： 2005年第08期
目的探讨大鼠胰腺移植后细胞凋亡的变化、Fas/Fas配体(FasL)的表达及其与急性排斥反应的关系.方法实验分为同基因移植组和异基因移植组.分别于术后第3、5、7天处死受体,取移植胰腺,应用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,计算凋亡指数(AI),应用免疫组织化学及Western blot检测Fas/FasL的表达.结果细胞凋亡主要发生在胰腺腺泡细胞,同基因移植组有散在的腺泡细胞凋亡,AI在术后无明显变化,Fas/FasL表达阴性;异基因移植组在术后第3、5、7天胰腺腺泡细胞凋亡发生率逐渐增加(28.40±3.75,39.40±5.59,57.30±8.53,P<0.01),Fas/FasL表达逐渐增强,AI与急性排斥反应程度呈显著正相关(rs=0.932,P<0.01).结论胰腺腺泡细胞凋亡和Fas/FasL表达在胰腺移植急性排斥反应中发挥重要作用,凋亡指数对胰腺移植急性排斥反应的诊断有一定的参考价值.
作者：刘忠；关凤林；胡祥 刊期： 2005年第08期
目的建立对肝癌细胞具有靶向调控的高感染性和高分泌性产病毒细胞系.方法将重组反义甲胎蛋白增强子/单纯疱疹病毒胸苷激酶基因逆转录病毒载体(pL/TK/AFE/SN)转染至PA317包装细胞,经G418(400 mg/L)筛选、病毒滴度测定.以病毒上清感染培养的Hep3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞,并抽提细胞基因组DNA作Southern blot分析;观察GCV(100 mg/L)对细胞生长的影响.结果转染pL/TK/AFE/SN的PA317细胞经G418筛选2周获阳性克隆;病毒滴度为5.4×104～3.8×105 CFU/ml.Southern杂交证实前病毒已完整整合于PA317细胞,并稳定整合于Hep3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞中.导入AFE/TK基因的Hep3B肝癌细胞经GCV作用后的存活率在2、4、6 d时分别降低35%、87%、95%,生长明显受抑制(F=7.23,P<0.01).结论携带AFE/TK基因的产病毒细胞系能够成功地将AFE/TK基因转移到感染细胞中.
作者：茅幼霞；陈迟；刘景丰 刊期： 2005年第08期
腹腔镜脾切除术目前取得了较好的效果.但对于巨脾患者则多进行手助腹腔镜脾切除术[1],完全腹腔镜脾切除术较少见.我们自2003年7月至2004年11月对7例巨脾患者进行了腹腔镜脾切除术.
作者：刘建华；吕海涛；刘三光；路文彦；刘润田；石运明 刊期： 2005年第08期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
