赵峰；周清华；陆燕蓉；张洁；王建军
细胞内钙稳态的维持对生命活动至关重要.病理状态下细胞内钙超负荷将造成一系列代谢紊乱,致细胞坏死和凋亡[1,2].目前有关肠上皮细胞(IEC)缺血缺氧损伤导致IEC细胞内钙超载是否确切,钙离子阻断剂是否有防治作用,目前尚无这方面的研究报道.激光共聚焦扫描显微镜(LCSM)可定量分析活细胞内不同部位的[Ca2+]i及其动态变化,还可提供高分辨率的钙离子动态变化图像,是记录钙荧光信号的有效技术手段[3].我们采用LSCM技术,用钙敏荧光探针Fluo-3/AM标记培养的IEC,实时动态观察在缺血缺氧损伤及加用钙离子阻断剂后细胞内钙超载的影响.
作者：秦环龙；陈前；贾震易 刊期： 2005年第10期
目的构建含有CEA启动子(CEA promoter,Cp)启动的双自杀基因CD与TK的复制缺陷型腺病毒.方法设计带有限制性内切酶酶切序列的PCR引物.在2μl T4 DNA ligase作用下,Cp插入pAdTrack(pAT)的MCS,形成pAT.Cp;CD插入pAT.Cp的MCS,形成pAT.Cp.C;TK插入pAT.Cp.C的MCS,形成pAT.Cp.C.T.5 μg pAT.Cp.C.T经4 μl Pme Ⅰ线化后,转化BJ5183-AD-1,1μl PacⅠ酶切鉴定.重组AdEasy质粒转化XL10-Gold细胞,大量扩增提取纯化,转染5 × 105 AD-293细胞,荧光显微镜观察,制备带有Cp.C.T重组腺病毒(recombinant adenovirus with Cp.C.T,RA-Cp.C.T),测定病毒滴度.结果pAT.Cp,pAT.Cp.C,pAT.Cp.C.T双酶切以及PCR均见长约500 bp的Cp,1 300 bp的CD,1 100 bp的TK.对照质粒DNA转化BJ5183-AD-1效率为7.36×106 cfu/μg.线化pAT.Cp.C.T转化BJ5183-AD-1,形成重组AdEasy质粒DNA,Pac Ⅰ酶切见典型长约3.0或4.5kb与30.0kbDNA片断.重组质粒转染AD-293出现绿色荧光.RA-Cp.C.T滴度为5.67×107 pfu/ml.结论RA-Cp.C.T构建正确;AdEasy XL腺病毒载体系统转导Cp.C.T具有高效性,易于观察转染效果.
作者：王天宝；汪建平；董文广；钟女奇；周军 刊期： 2005年第10期
目的探讨小干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞端粒酶基因表达、活性的抑制作用及对肾癌细胞增殖、凋亡的影响.方法将针对人端粒酶RNA(hTR)模板区的siRNA(100 nmol/L)转染肾癌786-0细胞,采用RT-PCR检测786-0细胞端粒酶mRNA表达,端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法检测端粒酶活性,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学TUNEL法检测细胞凋亡.结果hTR-siRNA处理组786-0细胞端粒酶mRNA表达(40.7±1 5)%降低,端粒酶活性(32.7±2.3)%降低,细胞增殖抑制率(63.6±1.6)%增加,调亡细胞阳性率(39.4±0.6)%增加.分别与阴性siRNA对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论siRNA能抑制人肾癌细胞端粒酶mR-NA表达及活性,进而抑制其增殖、促进其凋亡,有望成为肾癌基因治疗的有效工具.
作者：李望；郑骏年；孙晓青；陈家存；曹敬毅；杨文发 刊期： 2005年第10期
目的探讨金属硫蛋白(MT)在未成熟心肌中的表达对未成熟心肌的影响.方法采用Langendorff兔离体心脏灌注模型,分为4组:对照组(C),腹腔注射蒸馏水0.3 ml,注射后24 h取离体心脏,灌注KH液15 min转为工作心15 min,全心停灌45 min,恢复灌注15 min改为工作心30 min;E12 h组、E24 h组、E48 h组分别腹腔注射3.6%ZnSO4 12、24和48 h后取离体心脏,常规建立Langendorff灌注模型,方法同C组.检测心肌细胞中MT含量、血流动力学指标、生化指标和心肌超微结构.结果MT含量在E24 h(49.42±2.63)、E48 h组(47.86±2.54)与C(25.76±1.20)、E12 h组(28.77±1.45)比较明显增高(P＜0.01);E24 h、E48 h组血流动力学指标恢复优于C组和E12 h组(P＜0.05),生化指标优于C组和E12 h组(P＜0 01),心肌超微结构损伤较C组和E12 h组明显减轻.结论MT的表达可减轻未成熟心肌的缺血再灌注损伤.
作者：孙忠东；高尚志；池一凡；毛志福；王志维；吴智勇 刊期： 2005年第10期
目的探讨bcl-2和bax基因与细胞凋亡的关系及在脊髓损伤中的作用.方法采用Allen法挫伤大鼠T10节段脊髓,随机分为7组,其中6组为实验组,1组为对照组,每组在SCI后2、4、8、24 h、3、7 d取材,每一时间点4只.免疫组织化学法检测bax和bcl-2基因表达,采用原位末端标记法检测凋亡细胞.结果正常组大鼠脊髓中未见凋亡细胞.实验组在损伤2 h出现阳性细胞,伤后8 h阳性细胞数目达高峰为84.53±8.00,以后逐渐减少.bax基因表达的高峰也在伤后8 h为0.311±0.012,说明bax基因促进了细胞的凋亡,而此时bcl-2基因开始出现表达增多,至伤后24 h表达达高峰,之后缓慢降低,而与此相对应的是细胞凋亡开始逐渐减少(P＜0.01).结论凋亡相关基因bax与bcl-2可能参与了脊髓继发性损伤,细胞凋亡在脊髓继发性损伤过程中起着关键性作用.
作者：段有文；吕刚；吴海龙；唐颖；黄涛 刊期： 2005年第10期
目的探讨多孔碳酸钙陶瓷(PCCC)的细胞相容性.方法采用浸提法制备多孔碳酸钙陶瓷(PCCC)生理盐水和培养液浸提液,浸提液体外培养L929小鼠成纤维细胞,进行细胞形态学观察,采用MTT法测定细胞增殖率并进行细胞毒性分级;采用分光光度法进行溶血试验.结果培养期细胞大量增殖,形态良好,多孔碳酸钙陶瓷(PCCC)的细胞毒性分级为Ⅰ级,对健康人血的溶血率＜5%,存在轻微的细胞毒性和溶血作用.结论多孔碳酸钙陶瓷(PCCC)细胞相容性好,符合植入人体生物材料的相关要求.
作者：谭金海；陈振光；魏任雄；王会学；熊健 刊期： 2005年第10期
目的探讨建立一种主动脉瓣异位移植动物模型,用于研究同种心脏瓣膜的保存.方法受体供体均采用雌性Wisar大鼠,各40只.整块切取受体心脏.保留完整的主动脉瓣、少量心室肌和部分二尖瓣前叶,构建移植物.将移植物与受体腹主动脉端-侧吻合.结果术后28d,80%受体存活,无下肢瘫痪,移植物搏动良好,切开移植物肉眼观未见血栓,主动脉瓣位于正常位置且活动良好.受体死亡原因有血栓栓塞(12.5%)、术中出血(5.0%)和麻醉意外(2.5%).结论此模型可广泛应用于同种心脏瓣膜保存方法等研究,是较理想的模型.
作者：刘泉；臧旺福；田海 刊期： 2005年第10期
结缔组织生长因子(CTGF)和NOV均属生长因子类CCN基因家族,分别命名为CCN2和CCN3,均为转化生长因子-β(TGF-β)的下游介质.近年研究发现CTGF、NOV和TGF-β1表达水平与肿瘤发生、进展、转移及预后密切相关[1-4].我们应用免疫组织化学方法研究人类胰腺导管腺癌(PC)和慢性胰腺炎(CP)组织中CTGF、NOV和TGF-β1表达水平,探讨三者临床病理意义及在PC中表达的相互关系.
作者：杨竹林；黄生福；苗雄鹰；钟德玝；梁珊 刊期： 2005年第10期
目的通过在4号染色体寻找杂合缺失区域,为定位、筛选高频杂合缺失区存在的散发性结直肠癌相关肿瘤抑制基因提供依据.方法20个荧光标记的微卫星引物与83例结、直肠癌的肿瘤和正常组织进行聚合酶链反应.微卫星的平均遗传距离是10.4里摩(cmol).产物进行电泳、扫描及杂合缺失分析,并与临床、病理因素进行相关性检验.结果短臂(4p)、长臂(4q)的平均杂合缺失率为24.25%、28.56%,可见3个小的高频缺失区域(Region):R1:在D4S405和D4S3013(4p14-15.2)之间;R2:在D4S3000和D4S2915位点之间(4q12-21.1);R3:在D4S407和D4S2939位点之间(4q25-31.1).D4S1534位点与肝脏转移有关(P＜0.05),其余位点与临床病理因素均无显著相关(P＞0.05).结论4号染色体的3个高频杂合缺失区域4p14-15.2、4q12-21.1、4q25-31.1存在散发性结直肠癌发生、发展相关的肿瘤抑制基因.
作者：郑海涛；唐华美；彭志海；李大鹏；周崇治；裘国强；贺林 刊期： 2005年第10期
目的通过检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在人腹主动脉瘤(AAAs)组织中的定位表达,探讨MMP-9在腹主动脉瘤发病机制中的作用及临床意义.方法应用免疫组织化学技术,检测了MMP-9在20例AAAs瘤体组织中的定位表达,并与15例动脉硬化闭塞性疾病(AODs)的病变管壁及10例正常动脉管壁组织中的MMP-9组织学表达进行对照研究.结果AAAs动脉壁中富含大量MMP-9颗粒,MMP-9阳性表达率达95.0%(19/20);正常动脉管壁组织未检测到MMP-9的表达;AODs病变血管壁内可见散在分布的MMP-9阳性颗粒,MMP-9阳性表达率为26.7%(4/15).与AODs和正常动脉管壁相比较,MMP-9在AAAs瘤体组织中的表达差异具有意义(P＜0.01).结论腹主动脉瘤体组织中MMP-9的高表达,促进主动脉中层细胞外基质崩解进而导致动脉弹性下降、动脉扩张及进一步的瘤体形成,在AAAs的发病机制中具有重要作用.
作者：马中；王岭；边杰芳；宁莫凡；Joerg.Heckenkamp 刊期： 2005年第10期
目的探讨肺癌患者血清中可溶性CD44V6(sCD44V6)蛋白含量及活检癌组织中CD44V6蛋白表达的临床意义.方法应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测130例肺癌手术前后、32例健康人和116例随访病例血清中sCD44V6;应用生物素-抗生物素免疫组织化学法(ABC法),检测所有肺癌患者经内镜活检癌组织内CD44V6蛋白表达状况.结果肺癌患者血清中CD44V6含量(3.58±0.56)明显高于健康对照组(1.59±0.44),术前(3.58±0.56)高于术后(1.78±0.52),复发转移组(3.16±0.54)高于无复发转移组(1.29±0.61);肺癌活检组织CD44V6蛋白表达率69.23%,与肺癌T分期无关,N0期CD44V6蛋白阳性表达率57.65%,N1期CD44V6蛋白阳性表达率92.93%,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论血清中CD44V6含量及经内镜活检的肺癌组织中CD44V6蛋白表达与肺癌的转移复发有关,可作为一种可靠的判断手术疗效、预后及复发转移的临床检测指标.
作者：黄兰卿；梁红卫；容永璋；张惠忠；李海刚 刊期： 2005年第10期
Matrix可脱弹簧圈(Matrix)是覆盖生物可吸收聚合物(BPM)并保留电解可脱弹簧圈(GDC)物理性质的具有生物活性的新型弹簧圈[1].本研究旨在评价Matrix栓塞犬颈动脉瘤的造影和组织学特征.
作者：李兴；石忠松；郭少雷；向欣；陈晓雷；齐铁伟；黄正松 刊期： 2005年第10期
目的探讨乌头类生物碱在体外循环心内直视手术中抗心肌缺血再灌注损伤作用及其机制.方法将患者随机分成对照组和乌头类生物碱组.于开放主动脉时、体外循环结束时、手术结束时、术后1 d等各个时间点测两组患者血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(cTnI)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;于停机时测心肌组织SOD、MDA含量.结果乌头类生物碱组CK-MB水平分别为21.63±4.54,29.73±6.53,37.78±6.55,28.74±7.16,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);cTnI值分别为0.337±0.141,0.497±0.271,0.758±0.399,0.542±0.244,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);SOD值分别为75.56±20.09,77.01±20.36,91.39±19.56,108.44±24.23,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);MDA水平分别为4.14±1.88,7.48±2.97,7.86±3.44,6.79±3.21,6.16±3.30,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).术后乌头类生物碱组心肌组织MDA值明显低于对照组(P＜0.05),而SOD值则明显高于对照组(P＜0.05).结论乌头类生物碱对体外循环心肌缺血再灌注损伤具有保护作用.
作者：殷胜利；刘子由；张希；蔡冬梅；罗汉川；吴伟康 刊期： 2005年第10期
目的探讨一氧化氮(NO)对犬胰腺低温灌注及保存中缺血再灌注损伤的影响.方法在EC(Euro Collin)液中分别加用L-精氨酸(L-Arg,200 mg/kg体重)、N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME,10mg/kg体重)和生理盐水,分别对犬离体胰腺节段进行低温灌注保存(灌注量为30～50ml,温度为0～4℃,时间为24 h),应用犬胰节段移植模型,测定移植后犬血清中脂肪酶、淀粉酶含量,测定移植胰腺组织中髓过氧化酶(MPO)活性、一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达情况.并进行组织学观察.结果血清脂肪酶,L-Arg处理组＜对照组＜L-NAME处理组,差异有统计学意义(P＜0.05).移植后12 h,胰腺组织中NO含量:L-Arg处理组(0.51±0.11)μmol/L＞对照组(0.31±0.06)μmol/L＞L-NAME处理组(0.17±0.04)μmol/L;NOS活性:L-Arg处理组(3.13±0.19)U/ml＞对照组(2.37±0.20)U/ml＞L-NAME处理组(1.68±0.20)U/ml;iNOS mRNA的表达:L-Arg处理组(0.89±0.22)μmol/L＞对照组(0.63±0.18)μmol/L＞L-NAME处理组(0.49±0.20)μmol/L,差异有统计学意义(P＜0.05);L-Arg处理组胰小叶间质水肿和胰小叶内中性粒细胞浸润较轻.结论NO对犬胰腺低温灌注及保存中缺血再灌注损伤具有保护作用.
作者：原春辉；刘永锋；李桂臣；梁健；何三光 刊期： 2005年第10期
腹主动脉瘤(AAA)是一种可危及生命的大动脉疾病,目前具体发病机制不明确.现在研究发现尿激酶原型纤溶酶原激活剂(u-PA)、纤溶酶原激活剂抑制剂Ⅰ(PAI-Ⅰ)在AAA发病中有一定作用,但其作用机制尚不清楚[1,2].我们采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学技术研究瘤壁组织中u-PA和PAI-1的mRNA和蛋白变化,探讨它们与AAA的相关性.
作者：王卓青；王深明；殷恒讳；黄雪玲 刊期： 2005年第10期
目的探讨幽门螺旋杆菌(Hp)感染胃癌变过程中不同病理组织类型的环氧合酶-2(COX-2)和p27kip1蛋白表达及其分子生物学机制.方法经胃镜和病理诊断明确的Hp感染患者的不同胃黏膜组织标本共200例.包括慢性浅表性胃炎(CSG)、肠上皮化生(IM)、不典型增生(AH)、胃癌(GCA)各50例,分别以ABC法和SP法测定COX-2和p27kip1蛋白表达情况.结果COX-2随癌变过程中阳性率和表达强度不断提高,分别为12%、42%、52%、74%,GCA组与其他组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).而p27kip1随癌变过程,表达率逐步下降,分别为86%、46%、34%、26%.与其他组比较差异有统计学意义(P＜0.05).COX-2和p27kip1表达呈显著负相关(r=-0.87,P＜0.01).结论COX-2是Hp感染胃癌变过程的早期事件,并参与了胃癌变的全过程.COX-2抑制了p27kip1的蛋白表达,两者负性相关.
作者：刘登洋；陈百芳；曹华祥；孟东；狄长华 刊期： 2005年第10期
目的探讨转录信号转导子与激活子5b(Stat5b)反义寡核苷酸诱导结肠癌细胞凋亡的作用及其机制.方法用阳离子脂质体介导Stat5b反义寡核苷酸(20 μmol/L)转染人结肠癌HCT116细胞,MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞术检测细胞周期与凋亡;Western blot检测Stat5、p-Stat5及凋亡家族成员bcl-2、bcl-xL、Mcl-1、Caspase-3的表达.结果转染Stat5b反义寡核苷酸72 h后HCT116细胞增殖受抑制,G1期细胞比率由68.9%上升至85.6%,S期细胞比率由15.4%下降至7.6%,凋亡细胞比率由5.6%增加至27.5%,Stat5,p-Stat5与bcl-2家族成员表达水平下降.结论Stat5信号转导通路活性增高可能与结肠癌发生发展有关,阻断Stat5通路可以诱导结肠癌细胞凋亡.
作者：马向涛；余力伟；王杉；杜如昱；崔志荣 刊期： 2005年第10期
目的探讨胃癌5p15.33区微卫星标记杂合性缺失(LOH)与临床病理学表型的相关性.方法抽提80例胃癌标本及其配对正常胃黏膜中基因组DNA,应用4个微卫星标记对5p15.33区进行LOH检测并与Lauren分型等临床病理学指标分析.结果有76例临床信息齐全病例纳入统计分析.5p15.33区4个微卫星标记平均信息性病例比例为71.05%.其中31.58%(24/76)病例至少一个位点检测到LOH,以D5S2849位点LOH频率高(37.25%).5p15.33位点LOH以肠型胃癌多见(P＜0.01),与年龄、性别、部位、肿瘤大小、TNM分期及有无淋巴结转移无明显关系.结论5p15.33区可能存在控制胃癌形态学表型的候选抑癌基因,但该基因可能不是决定其他临床表型的主要基因.
作者：于颖彦；计骏；陆云；步磊；刘炳亚；朱正纲；林言箴 刊期： 2005年第10期
目的探讨重组大鼠转化生长因子-β1基因(pcDNA3+TGF-β1)单独转染及其与重组大鼠胰岛素样生长因子-1基因(pAT153+IGF-1)共转染兔软骨细胞后细胞增殖及所分泌的TGF-β1因子、IGF-1因子、Ⅱ型胶原的变化.方法兔软骨细胞体外分别用pcDNA3+TGF-β1单转染、pcDNA3+TGF-β1和pAT153+IGF-1共转染,筛选阳性克隆后,进行原位杂交、免疫组织化学、免疫荧光检测、流式细胞仪检测、3H-TdR(3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷)检测.结果基因转染组与空白组相比,TGF-β1、IGF-1、Ⅱ型胶原的含量均明显提高,空白组、基因单转染组、基因双转染组软骨细胞位于S期的比例分别为5.6%、33.4%、40.1%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论基因pcDNA3+TGF-β1、pAT153+IGF-1转染软骨细胞后,细胞分泌的TGF-β1、IGF-1及Ⅱ型胶原显著增多,细胞增殖明显增强,上述基因转染有助于软骨细胞活力的提高;pcDNA3+TGF-β1和pAT153+IGF-1双基因共转染软骨细胞后,细胞分裂增生活跃程度及分泌的TGF-β1、IGF-1和Ⅱ型胶原含量高于pcDNA3+TGF-β1单基因转染,多基因共转染作为将来骨性关节炎基因治疗的方法,其治疗效果可能会优于单基因转染.
作者：向川；卫小春；杜靖远 刊期： 2005年第10期
目的研究T-cadherin分子表达抑制胶质母细胞瘤C6细胞增殖的机制.方法利用脂质体转染pcDNA3和pcDNA3.T-cadherin质粒后获得的表达和不表达T-cadherin的C6细胞克隆,以流式细胞仪检测两种克隆细胞的细胞周期的变化,同时分析其细胞周期与细胞分裂指数的关系.结果转染后表达T-cadherin的C6细胞在去血清培养48 h使细胞周期同步后,分别用血清刺激培养12h后行流式细胞仪检测,与转染空载体的1、2克隆相比,转染T-cadherin基因后表达T-cadherin的3、4克隆于G2/M期的细胞比例显著增加(3、4克隆为52.60%和51.84%,1、2克隆为16.17%和13.47%),而G1期的细胞比例显著下降(3、4克隆为0.66%和0.39%,1、2克隆为50.6%和57.9%).在血清刺激0、4、8、12、24和48 h时,空载体克隆1在各时间点的分裂指数与其G2/M期的细胞比例一致,而表达T-cadherin的克隆3在各时间点的分裂指数显著低于其G2/M期的细胞比例数.结论T-cadherin分子表达能诱导C6细胞G2期细胞阻滞,该机制可能是T-cadherin抑制C6细胞增殖的主要机制.
作者：黄志勇；陈孝平；吴在德 刊期： 2005年第10期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
