刘庆森；李莉；罗成华；杨云生
目的 观察经国产肌部封堵器介入封堵治疗室间隔肌部大缺损患者术后的心电图演变,并探讨演变与置入封阻器的关系.方法 患者男,20岁,体质量50 kg,心脏超声心动图示左心室增大,室间隔肌部缺损,缺损口直径8 mm,术前心电图示左前分支阻滞.选择φ12 mm长7 mm国产(先健科技)肌部封堵器,经操纵杆在X线透视下推送至左心室.术后行心电监护7 d,并每天记录心电图;青霉素360万U/d,共3 d;地塞米松10 mg/d,共5 d;口服阿斯匹林100 mg/d,维持6个月;术后1个月复查超声心动图及动态心电图.结果 术后1周内心电图出现了一系列动态演变,包括结性心动过速,左束支传导阻滞,右束支传导阻滞,室性心动过速等,经密切观察和地塞米松治疗恢复正常.术后1个月彩色多普勒超声心动图提示:心脏各腔室大小正常,封堵器位置固定良好无移位,无残余分流,主动脉瓣、三尖瓣无返流.结论 国产肌部封堵器介入治疗室间隔肌部大缺损术后1周内心电图出现了一系列动态演变,其中选择封堵器大小为关键.
作者：程应樟；吴清华；程晓曙；徐劲松；李菊香；胡建新；吴延庆 刊期： 2007年第38期
目的:分析α防御素3前体蛋白对于克雷伯菌和大肠杆菌的杀菌效果,为进一步研究人类α防御素3的杀菌机制提供依据.方法:实验于2005-11/2006-09在上海交通大学生命科学技术学院刘建华实验室完成.将α防御素3前体的编码基因克隆到载体pDEST17中,载体转化入大肠杆菌DE3细胞,通过体外诱导及亲和纯化的方法获得α防御素3前体蛋白.根据在不同蛋白浓度下生存下来大肠杆菌和克雷伯菌所占的比例以及导致50%,90%和99%细菌死亡(LD50,LD90和LD99)时人α防御素3前体蛋白浓度来判断前体蛋白的杀菌作用.结果:①在1 L培养基培养条件下,可获得纯化后α防御素3前体蛋白12 mg,复性效率为15%～20%.②蛋白浓度为5,10,15和30 mg/L时,克雷伯菌仔活率分别为50%,33%,10%和4%.蛋白浓度为10,20,30和45 mg/L时,大肠杆菌存活率分别为50%,10%,5%和1%.③克雷伯菌50%和99%致死率的蛋白质浓度为5和35 mg/L.大肠杆菌50%和99%致死率的蛋白质浓度为10 mg/L和45 mg/L.结论:重组纯化的人α防御素3前体蛋白具有有效杀灭大肠杆菌和克雷伯菌的作用.
作者：周立强；辜臻晟；张毅；刘建华 刊期： 2007年第38期
背景:在胰岛移植过程中,胰岛细胞的数量和胰岛细胞的活性是非常重要的.胰岛细胞移植中玲缺血时间和组织相容性是关系胰岛细胞移植能否成功的关键问题.目的:观察冷缺血时间及血液相容性不同对于胰岛细胞数量和活性的影响.设计:观察性实验.单位:广西中医学院附属瑞康医院.材料:采用脑死亡自愿捐赠者的器官(已知血型和HLA配型),在其他器官切取后或同时进行胰腺的获取;血型相同、HLA配型相符的血液;HLA配型高致敏(错配3个以上位点)或群体反应性抗体＞50%或淋巴毒阳性受者的血液;分离纯化后的胰岛细胞悬浊液,经过70μm的筛网滤过后,保留直径大于70μm的胰岛细胞,配置成浓度1.20×105L-1左右活性胰岛细胞悬浊液.方法:高渗枸橼酸盐嘌呤溶液经过腹主动脉原位灌注后,参照文献进行肝、肾、胰腺联合及分别切取.用于切取的时间:胰腺肾脏的联合切取、肝脏胰腺肾脏的联合切取方法平均需时15 min,肝脏、胰腺、肾脏的单独切取平均需时20 min,用于胰岛分离的胰腺12份,冷缺血时间2.5～8 h.冷却血时间在5 h以内的9份,温缺血时间0～3 min,消化的时间15±2.4 min.采用胶原霉P进行消化分离胰岛细胞,双硫腙、丫腚橙染色测定不同的冷缺血时间条件下活性胰岛细胞活性,分析体外胰岛细胞和血液与供受者的组织相容性和胰岛细胞存活的关系.主要观察指标:胰岛细胞活性率和血小板、中性粒细胞和单核细胞计数.结果:肝、肾、胰腺联合切取及各器官的单独切取顺利,在玲却血5 h以内胰岛细胞活性率都在80%以上,用于胰岛细胞移植的胰腺和其他器官的切取不会影响胰岛细胞的活性;人类胰岛暴露于未经抗凝的人类血中,胰岛将诱发一个迅速的血细胞消耗;进行血小板、中性粒细胞和单核细胞计数,HLA错配组和HLA匹配组与对照组比较血细胞都发生明显的消耗;加入肝素后血细胞计数与对照组比较差异明显(P＜0.05),反应明显减轻.HLA匹配组和HLA错配组胰岛细胞体外培养24 h活性胰岛细胞数量较,差异明显(P＜0.05).结论:在冷缺血时间＜5 h的情况下获取的胰腺可以用于临床胰岛细胞的移植;血液相容性好能够明显提高胰岛细胞移植的成功率.
作者：高宏君；梁泰生；杨欢；罗向东；吴佩钟；谭臻；梁芳芳 刊期： 2007年第38期
背景:排斥反应的发生是导致小肠移植失败的主要原因,趋化因子RANTES及其受体介导的细胞免疫在急性排斥反应中具有重要作用.目的:观察小肠移植术后早期应用趋化因子受体拮抗剂Met-RANTES对排斥反应的免疫抑制作用及其与他克莫司的协同效应.设计:随机化完全区组设计,观察对照动物实验.单位:解放军第四五一医院普通外科、解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室及解放军第四军医大学基础部电子显微镜中心.材料:实验于2003-09/2005-03在解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室完成.以96只SD大鼠为供者,96只Wistar大鼠为受者,施行异基因节段性异位小肠移植.方法:移植后的大鼠以随机化完全区组设计分为4组(n=24):对照组、Met-RANTES组(200 μg/d)、他克莫司组(0.5 mg/(kg·d))及Met-RANTES+他克莫司组(Met-RANTES 200μg/d+他克莫司0.5 mg/(kg·d)).后3组均于移植术后腹腔注射给药,共7 d;对照组移植前后不作任何处理.术后观察移植大鼠的一般状况、存活时间以及免疫细胞浸润情况,并于移植术后3,5,7d分别取各组大鼠移植肠标本(n=6)进行组织病理学检查,采用免疫荧光染色和激光扫描共聚焦显微镜技术对移植肠RANTES和CD4+,CD8+,CD25+ T淋巴细胞的表达进行连续定量测定.每组剩余6只大鼠作存活时间观察,观察期限为5周.主要观察指标:①各组大鼠移植术后存活时间.②各组大鼠移植肠的病理改变.③各组大鼠移植肠RANTES及T淋巴细胞亚群的表达.结果:移植术后96只Wistar受体大鼠全部进入结果分析.①Met-RANTES组、他克莫司组和Met-RANTES+他克莫司组大鼠平均存活时间显著长于对照组(P＜0.01);Met-RANTES+他克莫司组大鼠存活时间长,与Met-RANTES组、他克莫司组差异均有显著性意义(P＜0.01).②对照组全部死于急性排斥反应及感染,组织病理学检查显示移植后第3,5,7天分别符合轻、中、重度排斥反应.Met-RANTES组、他克莫司组和Met-RANTES+他克莫司组病理学检查无明显排斥反应征象.③对照组大鼠的移植肠RANTES表达在术后各时段均显著高于其他3组(P＜0.01),其动态变化与急性排斥反应的进程成正相关;Met-RANTES组和Met-RANTES+他克莫司组大鼠移植肠RANTES、CD4+、CD8+和CD25+T细胞的表达均低于对照组(P＜0.01).结论:Met-RANTES能明显抑制小肠移植急性排斥反应,有效保护移植肠功能,显著延长移植物的存活时间,并可增强小剂量(0.5 mg/(kg·d))他克莫司的免疫抑制作用.
作者：杨建军；王为忠；付京；徐宏勇；王春梅 刊期： 2007年第38期
目的:从伦理学角度探讨器官移植面临的困境,探索相应对策.方法:为实现研究目标,首先进行了文献检索,全面系统地回顾、分析、总结上世纪80年代以来国内外有关器官移植的相关技术、政策资料、法律法规及其效果评价等方面的研究成果.登陆国际互联网站和专业期刊网站全文数据库,搜索国家媒体的有关报道及社会学、卫生法学、医学、医学伦理学等领域的相关研究成果.与从事多年器官移植技术工作的专家以及从事多年卫生法学、医学伦理学教学工作的教授进行深入交流和探讨,结合国内器官移植技术的实际情况进行分析.结果:器官移植技术的开展与人们的传统观念、道德、伦理发生冲突,使得该技术的广泛应用陷入诸多困境.活体供者、尸体供者、胎儿供体、死刑犯供体、受体的伦理困境、异种器官移植的伦理困境以及卫生资源分配的困境制约着器官移植医学的发展.结论:应尽快建立器官捐献的激励机制;坚持器官分配的效用和公正原则;确定符合国情的器官移植发展速度和适宜的规模;建立长效的宣传教育机制;建立全国性的或者区域性的器官移植调配中心或网络;建立健全的法律保障机制.
作者：王莲花；杨宣；孙建萍 刊期： 2007年第38期
目的:采用大鼠原代肝细胞四氯化碳化学性损伤模型,结合四甲基偶氮噻唑蓝比色法的体外药理模型,对传统中草药叶下珠的活性成分进行提取和初步分离,追踪叶下珠保肝护肝的活性单体成分.方法:实验于2006-05/12在浙江大学药学院中药开发及评价重点研究实验室完成.①制备新生大鼠原代肝细胞四氯化碳损伤的药理模型.②叶下珠提取物的制备:采用水、体积分数为0.95的乙醇对叶下珠活性成分进行回流提取.③活性成分的初步分离:依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取;应用AB-8大孔吸附树脂分步洗脱法,即体积分数为0.1～0.9的乙醇洗脱.④采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法,通过保护率及增生指数,观察回流提取物、各萃取物及AB-8大孔树脂各洗脱部位对大鼠四氯化碳损伤原代肝细胞的保护作用.结果:①正丁醇萃取物对大鼠四氯化碳损伤原代肝细胞的保护率及其增生指数高于阳性对照槲皮素及其他各萃取物(P＜0.05～0.01).②正丁醇萃取物中,体积分数为0.1,0.3,0.5的乙醇洗脱部分对大鼠四氯化碳损伤原代肝细胞具有保护作用,但体积分数为0.1的乙醇洗脱部分保护作用强,显著高于阳性对照槲皮素及其他各处理组(P＜0.01),体积分数为0.1乙醇洗脱部分在剂量为200 g/L时,保护率为64.43%,增生指数达到2.952.结论:叶下珠保肝护肝的有效部位为正丁醇萃取物中AB-8大孔吸附树脂体积分数为0.1的乙醇洗脱部分.但叶下珠中保肝的有效单体成分还没有确定,有待进一步实验证明.
作者：范适；左家哺；易诚；彭国平；杨华；石国荣；饶力群 刊期： 2007年第38期
目的:游离足趾移植是拇指Ⅱ类以上缺损再造术的首选.分析与Ⅱ趾移植相关的足部供血系统的血管走行、分支情况及变异程度,并提出临床应用中为保证手术成功而采取的相应对策.方法:对1978-03/2007-06天津医院手、显微外科收治的91例Ⅱ趾移植再造拇(手)指患者进行回顾性分析,所有病例均为Ⅱs～ⅢB类型拇指缺损,均为择期手术,对治疗方案知情同意.术中遇第一跖背动脉纤细型,采取足背动脉-足底深支-第一跖底动脉的第2套供血系统.当第一跖背动脉走行不定而误伤时,手术继续进行,完整切取Ⅱ趾后,进行第一跖背动脉吻合修复.注意第一跖背动脉至足趾的分支解剖特点,辨清与Ⅱ趾的关系,采取不同的手术对策.结果:91例拇指缺损患者获得了97.8%的成活率及优良的外形与功能恢复,移植术中Ⅱ趾的使用率是100%.Ⅱ趾的血供系统特点:①由足背动脉发出的第二跖背动脉很少见,足背动脉的弓状动脉分支也很少见.②第一跖背动脉起始、走行、口径虽不恒定,但是有章可循.③第一跖背动脉终末交通支及至Ⅱ趾的分支情况分为3型,各型对Ⅱ趾的血供也有其不同特点.结论:全面掌握与Ⅱ趾移植相关的足部供血系统的解剖特点,术中仔细游离并采取相应的处理方法,是保证手术成功的关键.
作者：陆芸；高广伟；陈克俊；张宝贵；阚世廉；孔令震 刊期： 2007年第38期
目的:观察自体脾组织大网膜内移植后,移植脾组织血管神经再生过程中血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体及神经肽Y表达的动态变化,分析自体移植脾组织血管神经生成规律.方法:实验于2004-09/2006-10在解放军第三军医大学基础部外科应用解剖与手术学教研室实验室完成.①选用Wistar大鼠70只,按随机数字表法分为7个时相组,每组10只.②行脾切除自体脾组织大网膜内移植,分别于术后7,14,30,60,90,120,180 d,采用免疫组化血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体、神经肽Y阳性神经纤维抗体染色方法,应用光镜、电镜、图像分析观测自体移植脾组织.结果:70只大鼠全部进入结果分析,无脱失.①自体脾组织移植术后7 d即有血管长入移植脾组织,180 d再生血管接近正常;术后30 d神经开始再生,180 d趋于正常.②术后7,14 d血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体阳性染色细胞密度迅速升高,60 d达高峰,随后逐渐降低;术后30 d出现神经肽Y阳性神经纤维.术后180 d血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体阳性染色细胞密度趋于正常;术后120,180 d神经肽Y阳性神经纤维广泛分布.结论:自体移植脾组织再生过程中移植脾组织再生血管神经来源于大网膜内的神经.自体移植再生脾组织内血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体表达量早期开始升高,移植脾组织先出现血管再生,后出现神经再生.
作者：郭光金；张坤；蒋登金；左艳芳 刊期： 2007年第38期
目的:观察参芪健胃颗粒对急性炎症模型的抗炎作用.方法:实验于2006-02/05在河南中医学院动物实验中心完成.①将50只昆明小鼠随机均分为5组:大、中、小剂量的参芪健胃颗粒组(2.4,1.2,0.6g/kg),三九胃泰颗粒组(10 g/kg)及生理盐水组.给药体积0.02 mL/g.灌服给药1次/d,连续给药5 d,于后1次给药后1 h,每鼠右耳涂二甲苯,4 h后处死小鼠,沿耳廓基线解剖位置仔细剪下全耳,对齐双耳,修剪,使每耳大小一致,迅速用分析天平称重,并计算肿胀度(肿胀度=右耳重-左耳重).②将40只SD大鼠随机均分为5组:大、中、小剂量的参芪健胃颗粒组(16,8,4 g/kg),三九胃泰颗粒组(6.7 g/kg)及同体积生理盐水组.给药体积2 mL/kg.灌服给药1次/d,连续给药5 d,于后1次给药后立即在大鼠足趾肿胀仪上测大鼠正常左后足跖体积,给药后30 min立即给每鼠左后足跖皮下注射0.1 mL新配制的10%新鲜鸡蛋清液,分别于给蛋清后30,60,120,240,360 min再次在大鼠足趾肿胀仪上测大鼠左后足跖体积,并计算肿胀率[足跖肿胀率=(给药后不同时间足跖体积-同侧正常足跖体积)/同侧正常足跖体积].结果:50只小鼠和40只大鼠均进入结果分析.①大、中剂量的参芪健胃颗粒组和三九胃泰颗粒组耳壳肿胀度显著小于生理盐水组(P＜0.01),小剂量参芪健胃颗粒组小于生理盐水组(P＜0.05).②与生理盐水组比,大剂量参芪健胃颗粒组和三九胃泰颗粒组在给药后30～60 min均可明显抑制大鼠蛋清性足跖肿胀,使足跖肿胀率明显减小(P＜0.05),在给药后120～360 min均可显著抑制大鼠蛋清性足跖肿胀,使足跖肿胀度明显减小(P＜0.01);中剂量参芪健胃颗粒组在给药后30～120 min可明显抑制大鼠蛋清性足跖肿胀,使足跖肿胀率明显减少(P＜0.05),在给药后240～360 min可显著抑制大鼠蛋清性足跖肿胀,使足跖肿胀率显著减少(P＜0.01);小剂量参芪健胃颗粒在给药后30～360 min仅有抑制大鼠蛋清性足跖肿胀的趋势.结论:参芪健胃颗粒可显著抑制小鼠耳壳肿胀和大鼠足趾肿胀程度,有较好的抗炎作用.
作者：白明学；苗明三；张玉林；史晶晶；杨亚蕾；刘会丽 刊期： 2007年第38期
背景:以往的研究表明,ADp14ARF转染p53阳性的肿瘤细胞系,可以发现明显的细胞增殖受阻现象.而转染p53阴性的肿瘤细胞系,尽管也可见肿瘤细胞增殖受阻,但在程度上明显轻于前者.同时转染p14ARF和p53两种基因,既增强p53表达又加强p53积累,能否更易促进肿瘤细胞凋亡?目的:利用基因工程技术构建双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53,并观察其对骨肉瘤细胞增殖生长的抑制作用.设计:随机对照观察.单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科.材料:实验于2005-01/2006-10于华中科技大学同济医学院基础医学院免疫教研室公共实验平台完成.人骨肉瘤MG-63细胞有华中科技大学同济医学院免疫教研室细胞室提供.含p53全长基因序列的质粒pIRES-p53和pIRES载体均购自武汉晶赛生物公司.方法:利用基因工程技术,将从培养的正常人肝细胞系L02细胞中扩增出的p14cDNA(0.5kb)亚克隆至pIRES载体中,通过PCR、限制性内切酶酶切鉴定重组质粒pIRES-p14ARF-p53.通过脂质体介导转染入骨肉瘤MG-63细胞中,并筛选出阳性克隆,将细胞分为3组:空白对照组(MG-63细胞),空载体对照组(稳定转染pIRES-neo细胞),p14ARF-p53组(稳定转染pIRES-p14ARF-p53细胞).①采用流式细胞仪测定转染前后瘤细胞DNA含量和细胞周期.②逆转录PCR(RT-PCR)和Western bolt对稳定转染后的瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达进行定性和半定量检测.③采用噻唑蓝比色法与细胞生长曲线观察细胞增殖情况.主要观察指标:①骨肉瘤细胞DNA含量和细胞周期.②瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达.③细胞增殖情况.结果:成功构建出双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53.①骨肉瘤细胞DNA含量和细胞周期:流式细胞仪检测发现转染后的瘤细胞多停滞于G1期.②蛋白表达检测结果:RT-PCR与Western blot检测证实p14ARF、p53基因在靶细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达.③细胞生长情况:转染MG-63后24,48,72,96 h瘤细胞生长抑制率分别为33.43%、69.37%、66.19%、75.26%,与空载体对照组差异显著(P＜0.01).结论:野生型p53和p14ARF可协同抑制骨肉瘤细胞的增殖促进瘤细胞的凋亡.
作者：李进；杨述华；邹利军；邵增务；廖翔 刊期： 2007年第38期
目的:了解原发性高血压心脏超声构型的分型与血浆儿茶酚胺水平的关系.方法:实验于2003-02/2005-07在泰安市中心医院完成.选择102例原发性高血压患者,采用超声心动图(Ganau标准)将患者分为:①正常构型组:左室质量指数及相对室壁厚度均在正常范围.②向心性重构组:左室质量指数正常,但相对室壁厚度增加.③向心性肥厚组:左室质量指数与相对室壁厚度均增加.④离心性肥厚组:左室质量指数增加但相对室壁厚度正常.另选择50名年龄相当的健康查体者做为正常对照组.高血压患者停用降压药2周,所有受检者实验前1 d禁用烟、酒、茶及咖啡,禁食12 h,于清晨采静脉血10 mL,以高效液相色谱法检测其血浆中的肾上腺素及去甲肾上腺素含量.结果:152名研究对象全部进入结果分析.向心性重构组、向心性肥厚组和离心性肥厚组的肾上腺素水平、去甲肾上腺素水平均高于正常对照组及正常构型组(P分别＜0.01),而且向心性重构组＞正常构型组,向心性肥厚组＞向心性重构组,离心性肥厚组＞向心性肥厚组(P＜0.05或0.01).结论:原发性高血压患者血浆肾上腺素、去甲肾上腺素水平的升高促进了左室构型的发展.
作者：杜振兰；张海东 刊期： 2007年第38期
目的:以病理活检结果为金标准,评估多普勒超声检查对移植肾排斥反应的诊断价值.方法:选择2003-01/2006-12在中国医科大学附属第一医院器官移植科行肾移植并在术后行超声检查的患者176例,均知情同意.①实验分组:根据术后移植肾功能分为2组,移植肾功能不良组78例,其中30例次行病理活检;移植肾功能正常组98例.②实验方法及评估:对患者移植肾行多普勒超声检查,参数选择峰收缩期流速、平均舒张期流速、阻力指数及血管显示率.血管显示率的评估标准(0～5级):0级为肾动脉及其远侧血管未显示;5级为肾各级血管均显示良好.以病理活检结果为金标准,分别选取阻力指数=0.7,0.75,0.8,0.85为诊断界值进行诊断试验.结果:169例患者进入结果分析,脱落7例.①峰收缩期流速、平均舒张期流速不呈正态分布,无法作为肾功能评价指标.30例次病理活检中共有28例次被确诊为排斥反应,急性排斥反应15例次,慢性排斥反应13例次.②肾功能正常组患者中血管显示率5级者占63.30%,4级者占36.73%.肾功能不良组患者中血管显示率4级者占41.03%,3级者占46.15%,2级者占10.30%,1级者占2.60%.③移植肾功能不良组患者阻力指数显著高于移植肾功能正常组(P＜0.01).移植肾功能不良组患者移植肾功能恢复后阻力指数显著低于移植肾尚未恢复时(P＜0.01),其中99%以上的患者△(阻力指数)≥0.20.④界值阻力指数=0.75的诊断试验的敏感性、特异性和准确性高,均达到100%.结论:当移植肾血管阻力指数升高至0.75以上,特别是同一患者自身对照升高超过0.2以上和或血管显示率低于4级,结合临床表现和生化结果,提示可能出现移植肾排斥反应.
作者：成东华；吴刚；刘树荣；石蕊；李桂臣；刘永锋 刊期： 2007年第38期
背景:苯丙酮尿症是由于苯丙氨酸羟化酶基因突变引起,苯丙氨酸羟化酶基因突变主要是因为碱基的置换,短片段、插入等.目的:鉴定回族苯丙酮尿症家系中苯丙氨酸羟化酶基因突变.设计:开放性实验.单位:解放军兰州军区乌鲁木齐总医院和北京首都儿科研究所.对象:患儿,男,回族,就诊时3岁1个月.1岁左右时发现智力滞后,近3岁时到医院就医,诊断为脑性瘫痪,反复治疗无效后于2004-12-13转入解放军兰州军区乌鲁木齐总医院就诊.尿液三氯化铁试验呈强阳性,血苯丙氨酸浓度测定1 680 μmol/L,遂确诊患儿为经典型苯丙酮尿症.方法:抽取患儿及父母静脉血各5 mL,EDTA-Na2抗凝.基因组DNA提取采用经典的酚/氯仿法进行.PAH基因外显子7,6,11,3,12,5的PCR引物序列参照文献设计.PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测.取5μL PCR产物与等体积的变性缓冲液混匀,97℃变性5 min,冰浴并迅速上样于80 g/L非变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳.电泳结束后常规方法银染,分析并记录单链DNA带型.采用PCR产物直接测序的方法,由上海博亚生物技术公司应用ABI377全自动序列分析仪(PE公司)完成样品纯化及序列分析.主要观察指标:尿液三氯化铁试验,血液血苯丙氨酸浓度和苯丙氨酸羟化酶突变基因类型.结果:分析患者及其父母PAH第7,6,11,3,12,5外显子基因,发现在外显子6中患者及父母的SSCP电泳行为与正常对照均不相同,其中父亲和母亲的电泳条带位置一致,而患儿的电泳条带位置相异.测序结果显示,父亲和母亲的苯丙氨酸羟化酶基因cDNA第526位发生了胞嘧啶被胸腺嘧啶替代的点突变,是R176X突变型杂合子,而患儿的两条染色体都在同一位点发生了突变,为R176X突变型纯合子.结论:在中国回族首次检出苯丙酮尿症R176X突变型纯合子.
作者：余伍忠；仇东辉；宋昉；刘丽；金煜炜；余良宽；石小湘 刊期： 2007年第38期
目的:分离、克隆和测定中国人纤溶酶原Kringle5功能区基因,为进一步研究其功能奠定基础.方法:实验于2002-06/2003-05在广州医学院金域医学检验中心完成.①实验材料:国人胚肝组织取自广州医学院第一附属医院的流产胚胎(取得家属同意,并经广州医学院第一附属医院伦理委员会批准).pET21a(+)载体购自Novagen公司,大肠杆菌BL21(DE3)为医学检验中心保存.引物均由上海生工合成.②实验方法:从国人胚肝组织中提取mRNA,用反转录-聚合酶链反应方法将人纤溶酶原Kringle5的cDNA扩增出来,克隆到pET21a(+)载体中测序.③实验评估:采用紫外分光光度仪和琼脂糖凝胶电泳分析胚肝组织总RNA的抽提结果;经琼脂糖凝胶电泳鉴定Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果;pET-Kringle5重组质粒的酶切鉴定;序列测定.结果:①胚肝组织提取总RNA结果:提取的总RNA经紫外分光光度仪测得A260nm/A280nm＞1.8,A260nm/A270nm＞1.2,表明无蛋白残留;电泳结果显示提取的总RNA有明显的28 S、18 S两条带,说明RNA基本完整.②Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果:人Kringle5 cDNA片段长为240 bp,加上引物设计的2个酶切位点,总长度为258 bp,聚合酶链反应产物长度与该长度一致,符合预期结果.③pET-Kringle5重组质粒的构建和酶切鉴定结果:用引物所带的限制性内切酶BamH I、Nde I双酶切,结果有250 bp左右条带出现.④序列测定结果:证实国人纤溶酶原Kringle5功能区基因被成功克隆,序列分析证实为该基因,未发现有基因突变或多态性现象,但第153位核苷酸与文献比较存在碱基替代现象,其组成的密码子由于遗传的简并性,所编码的氨基酸相同,并未造成氨基酸组成的改变.结论:中国人纤溶酶原Kringle5功能区cDNA基因编码序列与国外文献报道的相应序列可能存在碱基替代现象.
作者：甘舜进；胡朝晖；曾征宇；燕启江；陈广南 刊期： 2007年第38期
目的:观察雷公藤甲素对脂多糖诱导的海马内慢性炎症CA3区星形胶质细胞活化及相关因子的影响,为雷公藤甲素应用于临床治疗提供实验依据.方法:实验于2006-07/11在中南大学湘雅医学院人体解剖学教研室实验室完成.选用30只SD大鼠,按随机数字表法分为3组(n=10):①雷公藤甲素组:海马内注射脂多糖10μL制备海马慢性炎症模型后,腹腔注射雷公藤甲素20μg/kg,1次/d.②单纯脂多糖组:制备海马慢性炎症模型.③生理盐水组:海马注射10μL生理盐水.每组分别取术后7 d,14 d两个时间点(n=5),应用免疫组织化学染色结合图像分析方法观察海马CA3区注射部位胶质纤维酸性蛋白、环氧化酶2和核因子κB的表达变化.结果:①与生理盐水组比较,单纯脂多糖组可以引起海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白表达增加,胞体变大,突起粗大;神经元环氧化酶2表达增加,阳性产物位于细胞浆;神经元核因子κB免疫阳性产物表达增加,阳性产物位于细胞浆和细胞核内.②雷公藤甲素可下调脂多糖诱导的胶质纤维酸性蛋白、环氧化酶2及核因子κB的表达,同时逆转星形胶质细胞的形态变化.结论:雷公藤甲素可能通过抑制海马炎症反应过程中星形胶质细胞的激活以及环氧化酶2、核因子κB的表达发挥其抗炎和神经保护作用.
作者：李小红；简晓红；代玉桥；邓小华；罗学港；雷德亮 刊期： 2007年第38期
目的:观察三七总皂甙对人肝癌细胞SMMC-7721缝隙连接细胞间通讯、以及缝隙连接蛋白32 mRNA和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2表达的影响.方法:实验于2005-08/2006-03在江西省分子医学重点实验室完成.①实验操作:SMMC-7721细胞用含100 mg/L,200 mg/L,400 mg/L三七总皂甙的培养液预处理,对照组SMMC-7721细胞不加三七总皂甙.②实验评估:采用划痕标记/染料示踪技术检测缝隙连接细胞间通讯的变化;采用反转录-聚合酶链反应检测缝隙连接蛋白32 mRNA水平;采用流式细胞仪检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的表达.结果:①对照组染料局限于划痕两侧的细胞内,无明显的荧光染料传输,GJIC阴性;三七总皂甙可上调染料传输范围,且随三七总皂甙剂量增高,染料传输范围逐渐增大,远可达三四层细胞.②反转录-聚合酶链反应结果显示,各组细胞缝隙连接蛋白32 mRNA水平差异无显著性意义(P＞0.05).③流式细胞仪结果显示,对照组SMMC-7721细胞磷酸化细胞外信号调节激酶1/2表达的阳性率较高,伴随三七总皂甙剂量增加磷酸化细胞外信号调节激酶1/2表达的阳性率逐渐下降,呈一定的剂量依赖效应.结论:三七总皂甙可能通过抑制SMMC-7721细胞磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的活化减少缝隙连接蛋白32的磷酸化,进而上调SMMC-7721细胞的缝隙连接细胞间通讯功能.
作者：李学东；尚西亮；刘锡文；黄长文；傅华群 刊期： 2007年第38期
目的:目前成人股骨头缺血性坏死的手术方法较多,但远期疗效大多不肯定.股方肌肌骨瓣植入术可以治疗成人股骨头缺血性坏死,但需验证其近远期疗效.方法:选择2001-01/2007-01铜川市矿务局中心医院骨科收治的股方肌肌骨瓣植入治疗股骨头坏死患者15例(18髋),均知情同意.术中暴露股方肌及其在股骨近端的附着点,于附着点处凿取骨瓣,骨瓣为4 cm×1.5 cm×1.0 cm的长方形,将骨瓣插入股骨头内,远端用可吸收骨钉固定.术后3,6,12,24个月门诊复查拍患髋正位和蛙式位X射线片,根据临床查体和X射线片表现将手术效果分为优、良、差3级.结果:全部患者均获随访,随访时间4～36个月.近期疗效满意,出院时疼痛症状均缓解,未见手术相关并发症.中远期随访结果优10髋,良6髋,差2髋,优良率88.9%.结论:股方肌肌骨瓣植入术治疗成人股骨头缺血性坏死近远期疗效确切,手术操作相对简单.
作者：王宏刚；闫宏伟；刘凯 刊期： 2007年第38期
目的:聚合酶链反应方法检测后天感染鸭乙型肝炎病毒模型中共价闭环状DNA的表达.方法:实验于2006-06/2007-01在解放军总医院老年医学研究所完成.1日龄北京雏鸭6只经腿静脉注射上海麻鸭DHBV阳性血清(中国医学科学院提供)0.2 mL/只,感染7 d后处死动物取血分离血清并取肝组织,同时取同日龄正常鸭6只肝组织作为对照.聚合酶链反应技术检测肝脏、血清中鸭乙型肝炎病毒DNA及共价闭环状DNA的表达.结果:①血清斑点杂交显示模型制备成功,平均病毒吸光度值为0.62±0.12.②琼脂糖凝胶电泳显示,模型肝脏、血清中DHBVDNA均高表达,而共价闭环状DNA仅在模型肝脏表达,正常鸭DNA与共价闭环状DNA均不表达.结论:后天感染鸭乙型肝炎病毒模型中共价闭环状DNA高表达,可作为临床乙肝药物筛选模型.
作者：耿淼；杨新波；鲁小杰；陈红艳；王建华；黄正明；李壮 刊期： 2007年第38期
背景:Crohn病症状复杂多变,缺乏特异性,与肠内病变的部位,范围,严重程度,有无并发症等有关,诊断多困难.因该病病因不甚清楚,尚缺乏根治性治疗.国内外报道Crohn病患者在临床表现和治疗措施方面亦有所不同.目的:探讨中国与美国Crohn病患者的临床特征及治疗的不同.设计:回顾性病例分析.单位:解放军总医院消化内科.对象:收集解放军总医院1985/2004期间住院的Crohn病患者85例和美国佛罗里达克利夫兰医院(Cleveland Clinic Florida,CCF)1985/2004Crohn病患者68例的病例资料.Crohn病的诊断依据WHO标准,根据患者内镜或X射线平片表现及病理特征做出诊断.方法:比较两医院患者的临床资料包括:年龄,性别,家族史,肠外表现,病变部位,病变特征,药物治疗及手术治疗.组间计数资料差异比较采用χ2检验.主要观察指标:Crohn病发病年龄、家族史、肠外表现、病变部位、病变特征、药物治疗及手术治疗.结果:①一般情况及肠外表现:解放军总医院男性患者与女性患者比例1.74:1,CCF为男:女=1:1.43.CCF患者家族史阳性率和肠外表现发生率分别为7%,34%,均高于解放军总医院(1%,14%,χ2=4.631 2,8.315 0,P＜0.05).②病变部位与病理特征:解放军总陕院患者病变部位累及回肠末端(69%)较多,无一例累及肛周,病变以溃疡(66%)多见,溃疡、肠腔梗阻发生率分别为66%和14%,高于CCF患者(25%和4%,χ2=25.309 2,4.024 6,P＜0.05).CCF患者累及结肠及直肠较多,肛周瘘管或直肠阴道瘘(51%)较多,肛周病变、腹腔内瘘发生率分别为51%和9%,显著高于解放军总医院(0和6%,χ2=38.429 0,0.148 2,P＜0.05).③治疗:解放军总医院治疗药物以SASP(54%),5-ASA(19%)及甲硝唑(21%)为主,CCF患者以激素(60%),硫唑嘌呤(34%),infliximab(46%)为主.CCF患者接受手术治疗率明显高于301医院(96%,49%,χ2=36,1459,P＜0.01).结论:301医院与CCF的Crohn病患者临床特征和治疗手段有明显差异,临床特征的不同是两者在治疗方法上采取不同措施的原因之一.
作者：刘庆森；李莉；罗成华；杨云生 刊期： 2007年第38期
背景:前臂外侧皮神经营养血管皮瓣适合手部修复,但远端蒂血管缺少具体可操作性的描述,临床应用还比较困难.目的:探讨前臂外侧皮神经-头静脉营养血管远端蒂复合瓣和旋转点下移的解剖学基础.设计:单一样本观察.单位:解放军南京军区福州总医院军区临床解剖学研究中心.材料:实验于2004-01/05在解放军南京军区福州总医院军区临床解剖学研究中心实验室完成.选用30侧动脉灌注红色乳胶成人上肢标本(由解放军南京军区福州总医院军区临床解剖学研究中心提供).方法:以桡骨茎突为观测标志点,重点显微解剖:①前臂外侧皮神经-头静脉下1/3段的营养血管来源、分支分布及吻合.②前臂外侧皮神经-头静脉营养血管与桡骨膜血管的关系.③头静脉浅深交通支.主要观察指标:①前臂外侧皮神经-头静脉营养血管的来源、分支及吻合.②前臂外侧皮神经-头静脉营养血管与邻近骨、皮的血供关系.结果:①在前臂的下1/3段,前臂外侧皮神经-头静脉的营养血管来源:该营养血管来自:桡动脉穿皮支6～11支,外径(0.7±0.3)mm;掌浅支穿皮支2～6支,外径(0.5±0.3)mm;桡骨茎突返支穿皮支一二支,外径(0.8±0.1)mm;鼻烟壶穿皮支一二支,外径(0 6±0.2)mm.在距桡骨茎突上80～15.0 cm,桡动脉肌间隙骨皮穿支1～3支,起始外径(1.1±0.2)mm.骨膜支分布桡骨体部中下段的裸露区,皮支外径(0.8±0.2)mm.②在前臂的下1/3段,前臂外侧皮神经-头静脉的营养血管分布:前述穿皮支发皮支、筋膜支、皮神经-浅静脉营养血管,形成皮神经-头静脉血管链以及深、浅筋膜血管网.结论:前臂外侧皮神经-头静脉营养血管与肌、骨、皮营养血管同源,以桡动脉皮支为蒂前臂外侧皮神经-头静脉营养血管远端蒂复合瓣,旋转轴点在腕关节平面,可用于手部远处组织缺损修复.
作者：庄颜峰；张发惠；张国栋 刊期： 2007年第38期
中国组织工程研究杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
