王彬；冯新顺；薛武军
目的 研制一种新型DNA芯片,用于快速检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变.方法 根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计探针并制作DNA芯片,用TAMRA标记的引物扩增结核分枝杆菌rpoB基因突变热点的片断,与DNA芯片杂交,同时以PCR-SSCP和DNA测序法为对照.结果 240株结核分枝杆菌临床分离株中,55株全敏感株和66株耐其他药物的利福平敏感株的PCR-SSCP和DNA芯片杂交结果与结核分枝杆菌标准株完全相同;119株耐RFP临床分离株中DNA芯片杂交有117株检测到rpoB基因突变,其中111株单位点突变,78株为531位密码子TCG→TTG(Ser→Leu)、TCG→TGG(Ser→Trp)和TCG→TAC(Ser→Tyr)突变;24株为526位密码子CAC→TAC(His→Tyr)、CAC→GAC(His→Asp)、CAC→CCC(His→Pro)、CAC→CTC(His→Leu)和CAC→CGC(His→Arg)突变;4株为516位密码子GAC→GTC(Asp→Val)和GAC→GGC(Asp→Gly)突变;3株为533位密码子CTG→CCG(Leu→Pro)突变;1株为511位密码子CTG→CCG(Leu→Pro)突变;1株为513位密码子CAA→AAA(Gln→Lys)突变;6株为双位点突变,其中3株511和516位联合突变,2株533和515位联合突变,1株517位密码子CAG→CAC(Gln→His)和518位密码子AAC→GAC(Asn→Asp)联合突变.DNA测序结果与DNA芯片杂交结果完全一致.1株516位GAC-TAC(Asp→Tyr)突变的分离株及1株516位GAC-TAC(Asp→Tyr)和518位AAC-CAC(Asn→His)联合突变的分离株DNA芯片检测阴性,是因为芯片上无相应的探针.结论 用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变,可用于临床耐药性的检测,指导临床用药.
作者：张俊仙；吴雪琼；邢婉丽；张琼；梁建琴；张洪恩；陆阳；张广宇；李洪敏；阳幼荣 刊期： 2007年第13期
目的 探讨冠心病患者同型半胱氨酸与过氧化体增殖剂激活的受体的关系.方法 采用高效液相色谱法测定287例冠心病患者和50例健康体检者(健康对照组)空腹血清Hcy的水平,根据测量结果将冠心病患者Hcy的水平分为冠心病Hcy正常、轻、中、重组,实时RT-PCR、western blot检测各组血浆单核细胞PPARα、PPARγmRNA和蛋白表达.结果 冠心病轻、中、重组患者的PPARα、PPARγmRNA、蛋白表达明显低于健康对照组(P＜0.05)和冠心病Hcy正常组(P＜0.05),并与Hcy呈明显负相关.结论 冠心病患者Hcy较高而PPARα、PPARγ等的表达较低,提示高Hcy血症通过某种方式抑制PPARα、PPARγ等的表达,是其导致动脉粥样硬化的机制之一.
作者：姜怡邓；张慧萍；曹军；李桂忠；王树人 刊期： 2007年第13期
目的 探讨来氟米特(LEF)对人肾间质成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.方法 在体外培养的人肾间质成纤维细胞中,加入不同浓度来氟米特活性代谢产物A771726和重组人结缔组织生长因子(rhCT-GF),MTT法测定两者单独及同时干预下细胞增殖情况;ELISA法测定细胞合成Ⅰ、Ⅳ型胶原的含量.结果 经不同浓度的rhCTGF刺激,成纤维细胞增殖和细胞合呈Ⅰ型、Ⅳ型胶原均成剂量依赖性增加(P＜0.01);而来氟米特作用细胞后,细胞增殖及胶原合成均呈剂量依赖性减少(P＜0.01);在来氟米特与结缔组织生长因子(CTGF)共同作用下,细胞的增殖和胶原的合成较单用同剂量的CTGF时减少(P＜0.05).结论 rhCTGF能够促进人肾间质成纤维细胞的增殖及Ⅰ、Ⅳ型胶原合成;来氟米特则抑制细胞的增殖及细胞合成Ⅰ、Ⅳ型胶原;来氟米特对rhCTGF诱导的胶原合成增加有一定的拮抗作用.
作者：王玉柱；周春华 刊期： 2007年第13期
目的 建立定量检测血清Cap43蛋白表达双抗体夹心ELISA法,并初步探讨血清Cap43蛋白表达水平在肺癌患者与正常人群间有无差异,以及该蛋白表达水平的高低与肺癌组织学分型间的关系.方法 建立双抗体夹心ELISA方法对肺癌患者与正常人群血清中Cap43蛋白的含量进行定量检测.结果 双抗夹心ELISA包被Ⅰ抗羊抗人NDRG1多克隆抗体(PcAb)、Ⅰ抗兔抗人Cap43 PcAb以及辣根酶(HRP)标记的羊抗兔Ⅱ抗的佳工作浓度分别为1∶750,1∶1200,1∶350,标准蛋白曲线的回归方程为:y=0.53566+0.00046x,R2=0.9939,P＜0.0001.应用该方法初步检测结果显示:肺癌组血清标本Cap43蛋白含量明显高于正常对照组(P＜O.01),且肺腺癌组病人血清Cap43含量高于肺鳞癌组(P＜0.01).该方法的敏感度(SE)为84.51%,特异度(SP)为35.00%.结论 建立了一种敏感度高,重复性好的定量检测血清中Cap43蛋白的双抗体夹心ELISA方法;Cap43蛋白在肺癌患者血清中呈现高表达,且在肺腺癌组病人血清中表达水平高于肺鳞癌组.
作者：张志强；何萍；隋承光；孟凡东；姜又红 刊期： 2007年第13期
目的 优选HepG2细胞佳培养条件.方法 分别以培养基、细胞接种密度、血清含量、双抗浓度、pH、Hanks清洗次数、胰酶浓度和消化时间为量化指标设计正交试验,SPSS11.0统计软件分析,得方差分析及多重比较结果.结果 含15%胎牛血清的DMEM培养基,接种密度为4×104个/mL,双抗浓度为0.5%,pH为7.2;在汇合度达95～100%时,Hanks洗3次,0.05%胰酶-EDTA-Na2H2O消化1 min,传代效果好,条件易于控制,且细胞能顺利生长.结论 本法为HepG2细胞佳培养条件的确定提供了可靠的实验数据.
作者：王爽；梁伟伶；刘斯斯；尹继云；徐馨；秦学功 刊期： 2007年第13期
目的 分析乳腺癌SLN中CD25+T及NK细胞的变化规律.方法 从2001年4月～2003年6月所进行的乳腺癌SLNB病例中,选择应用CK19单抗检测到SLN具有微转移的病人12例,并随机选择无转移的9例,HE有转移的10例共82个SLN.将82个SLN分为无转移、微转移及转移组;选择CD25及CD56单抗,采用免疫组化SABC的方法,计数5个高倍视野下阳性染色细胞数和淋巴细胞总数的比值,取其平均值,得出阳性细胞百分比率.结果 82个SLN中未转移35个,微转移20个,转移27个;3组淋巴结中CD25+细胞占总淋巴细胞的百分比率在无转移组与微转移组间差异无统计学意义(P=0.260)、而在微转移组与转移组间差异有显著性(P＜0.01).3组SLN中NK细胞占总淋巴细胞的百分比率差异无显著性(F=0.755,P＞0.05).结论 在SLN无转移和微转移状态下,CD25+细胞的数量无明显变化,而一旦出现HE转移,则CD25+细胞的数量显著增加.SLN转移与否,NK细胞的数量无明显变化.
作者：何建军；任予；霍永平；张云锋；王珂；陈武科 刊期： 2007年第13期
目的 评估单层缝合在胃肠道吻合中的可行性及安全性.方法 将24只新西兰大白兔按照年龄、性别、体重随机平均分成A、B两组.其中A组行单层间断缝合,B组行双层缝合(胃肠的端端吻合),并于术后2、4、7d作吻合口的内径,压力测试实验及光镜、电镜、免疫组化切片观察新生肉芽组织的生成情况.结果 A、B两组之间的吻合口漏与狭窄的发生率无统计学意义;而两组之间的吻合口的耐压、壁厚、内径均有显著的统计学差异(P＜0.05).两种吻合术均无吻合口大出血.结论 单层缝合与双层缝合的安全性的差别无统计学意义,但是单层缝合组的肉芽组织生成早,愈合快,并且节约了手术时间及手术费用,故为一种安全、可靠的缝合方法.
作者：罗强；陈勇军；俞亚红；周松；陈坤；丁志强 刊期： 2007年第13期
目的 探讨AG490对混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture,MLC)中人淋巴细胞增殖和分化的影响.方法 应用MLC法诱导人淋巴细胞产生增殖,观察在不同干预剂(AG490、CsA、FK 506)作用下人淋巴细胞增殖的抑制率及淋巴细胞亚群分化的变化.结果 AG490在体外实验中,对人淋巴细胞(T、B混合存在)增殖反应均有明显的抑制作用.尤其是对CD3细胞及CD4细胞其抑制作用更为明显.结论 AG 490可能是一种潜在的免疫抑制剂,具有较大的研究和应用前景.
作者：王彬；冯新顺；薛武军 刊期： 2007年第13期
目的 检测瘦素mRNA和瘦素受体mRNA在乳腺癌合并肥胖症患者乳腺癌组织中的表达情况,并探讨二者之间及其与临床病理之间的关系.方法 采用逆转录多聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测48例乳腺癌合并肥胖症和36例乳腺良性病变合并肥胖症患者乳腺组织中瘦素mRNA和瘦素受体mRNA的表达,分析二者之间及其与临床病理之间的关系.结果 瘦素mRNA、瘦素长型受体[Leptin receptor long form,Lep-R(L)]mRNA及瘦素短型受体[Leptin receptor short form,LeP-R(S)]mRNA在乳腺癌合并肥胖症患者乳腺组织中的表达水平分别为:(0.71±0.32)、(0.64±0.29)和(0.57±0.21),明显高于乳腺良性病变合并肥胖症患者[(0.41±0.26)、(0.34±0.19)和(0.30±0.17)],(P＜0.05).乳腺组织中瘦素mRNA的表达水平与Lep-R(L)及Lep-R(S)mRNA水平呈显著正相关分别为:(r=0.4030,P=0.0002;r=0.3502,P=0.0014).瘦素mRNA和瘦素受体mRNA的表达与腋窝淋巴结转移、绝经、TNM分期及病理类型均无显著相关性.结论 瘦素可能以自分泌的方式参与了乳腺癌的发生.
作者：李春蕊；刘文励；孙汉英；周剑峰 刊期： 2007年第13期
目的 探讨CT引导下经皮穿刺肺内小结节病变的应用价值.方法 经细胞学、组织学或临床随访证实的病例39例,病灶直径为1.0～3.0 cm(平均直径2.1 cm).穿刺后即刻至7 d内行CT复查及临床观察,看有无并发症的发生.病例随访时间为3～28个月,平均13个月.结果 39例中,经手术后病理检查或临床随访确诊为恶性肿瘤者21例,其中,穿刺与手术或临床随访结果一致者17例;经手术后病理检查或临床随访确诊为良性病变18例,其中穿刺与手术或临床随访结果一致者14例.恶性肿瘤的准确性为81%(17/21),良性病变的准确性为73%(14/18).发生并发症者8例(20%),其中气胸6例(15%),咯血2例(5%).结论 CT引导下经皮穿刺活检对肺内小结节病变的定性有重要价值.
作者：余世荣；陈光斌；邹文远 刊期： 2007年第13期
目的 探讨白细胞介素13(IL-13)对肾小球系膜细胞分泌白细胞介素12(IL-12)的调节作用.方法 用酶联免疫吸附(ELISA)法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测系膜细胞的IL-12蛋白水平和IL-12p40 mRNA的表达.结果 未受刺激的系膜细胞无IL-12 mRNA的表达及其蛋白分泌.LPS诱导系膜细胞的IL-12p40 mRNA的表达及其蛋白分泌.IL-13在1～100 ng/ml的浓度范围内呈剂量依赖性抑制LPS诱导的系膜细胞的IL-12分泌及其mRNA的表达.结论 LPS诱导系膜细胞分泌IL-12,而IL-13则抑制LPS诱导的系膜细胞IL-12的表达;IL-13可能通过抑制IL-12的产生,调整了体内Th1/Th2细胞因子的平衡,作为抗炎性细胞因子在肾小球肾炎发病机制中发挥一定的作用.
作者：吴瑗；江黎明；陈孝文 刊期： 2007年第13期
目的 观察大黄、丹参对重症急性胰腺炎(SAP)时血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)的影响及其对SAP的治疗作用及机制.方法 将43例SAP患者随机分为治疗组和对照组,治疗组在西医综合治疗基础上加用大黄及丹参注射液,对照组仅采用西医综合治疗.检测治疗前及治疗后10 d两组血清TNF-α、IL-10水平,并评价两组的治疗有效率;白细胞、血淀粉酶恢复时间;腹痛缓解时间及平均住院时间.结果 治疗后治疗组白细胞、血淀粉酶恢复正常时间,腹痛缓解时间及平均住院时间较对照组明显缩短(P＜0.01).两组TNF-α水平较治疗前明显下降(P＜0.01);IL-10水平较治疗前明显增高(P＜0.01),而治疗组较对照组变化更明显(P＜0.01).结论 大黄、丹参能抑制TNF-α分泌,上调IL-10水平,对SAP具有良好的治疗作用.
作者：郭莲怡；卢艳云 刊期： 2007年第13期
目的 探讨半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒对兔VX2肝癌的磁介导热疗作用.方法 将成模后的荷瘤白兔随机分成6组:A组,对照组,即生理盐水组;B组,游离阿霉素组;C组,半乳糖磁性阿霉素纳米粒组;D组,Fe3O4纳米粒组;E组,阿霉素磁性纳米粒组;F组,半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒组化白蛋白.各组经肝动脉插管灌注药物(按2 mg/kg阿霉素计算),除C组外,其它各组置交变磁场中作用30min,期间监测癌中心区、癌边缘区、正常肝组织和直肠的温度变化;观察治疗后14d的肝癌体积、肝癌的生长率、肝癌及正常肝组织的病理改变.结果 D、E、F组癌中心区和边缘区温度显著高于正常肝组织和直肠(P＜0.001);A、B、C组各部位的温度无明显升高.治疗后14d,F组肿瘤体积明显缩小,肿瘤生长率为-15%;肝癌细胞可见大面积坏死,平均在70%以上,癌灶及癌边缘可见栓塞的铁磁微粒,而右肝未见铁磁微粒的沉积;其它各组体积增大3.5～13倍,肿瘤生长率显著增加(127%～568%),肝癌细胞中至轻度坏死(0%～70%).结论 交变磁场下,A、B、C组癌组织升温达到42℃以上;半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒对肝癌组织有独特的靶向作用,表现出明显的热化疗协同增效的治疗效果.
作者：贺莲香；张阳德；何剪太；李年丰 刊期： 2007年第13期
目的 探讨吗啡复合罗哌卡因硬膜外自控术后镇痛对高血压病患者内皮素(ET),肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的影响.方法 40例拟行腹式全子宫切除术的高血压病患者随机分为两组:A组为对照组,术后根据需要间断肌注哌替啶镇痛;B组术后行吗啡复合罗哌卡因硬膜外自控术后镇痛(PCEA).采用放免法测定术前、术毕3 h、术后24 h及术后48 h血浆ET、肾素活性(PRA)及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度;监测心率、血压及VAS评分.结果 B组术毕3h、术后24h及48h血浆ET值显著低于A组(P＜0.01),而且B组术毕3h及术后24 h血浆PRA,AngⅡ值低于A组,B组术后收缩压(SBP)及VAS评分显著低于A组同期值(P＜0.01).结论 吗啡复合罗哌卡因硬膜外自控术后镇痛,能有效减轻病人疼痛,抑制高血压患者ET、PRA和Ang Ⅱ释放和应激反应,维持血流动力学稳定.
作者：李雅兰；胡冬华；彭雪梅；王小平；周长忍；蔡明雪；陈雷；邹鹏 刊期： 2007年第13期
目的 分析法洛氏四联症(TOF)一期根治术后并发早期急性肺损伤(ALI)的危险因素,探讨预防的相关措施.方法 分析147例法洛氏四联症Ⅰ期根治术围手术期的相关情况.其中,男63例,女84例.术后ALI包括灌注肺、严重低氧血症、肺不张或液气胸等.利用单因素分析及Logistic逐步回归统计分析ALI发生的相关危险因素.结果 紫绀发病年龄＜3.2个月,Nakata指数＜140 mm2/m2,AO/PA比值＞2.6,跨瓣环补片,体外循环时间＞107 min,主动脉阻断时间＞81 min以及术后呼吸机辅助呼吸时间＜11h等因素与术后ALI发生有关.结论 Nakata指数＜140mm2/m2、体外循环时间＞107 min、主动脉阻断时间＞81 min是TOF术后早期肺损伤发生的危险因素.
作者：徐盛松；葛建军；周汝元；林敏；葛圣林；高晴云 刊期： 2007年第13期
目的 检测类风湿关节炎(RA)中抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体的阳性率,探讨抗CCP抗体在RA中的诊断价值及临床意义.方法 用ELISA测定48例RA患者、45例其他系统性疾病患者及40例健康人血清中的抗CCP抗体.比较活动性RA患者与非活动性RA患者的抗CCP抗体水平.分析抗CCP抗体与RA临床症状和实验室指标的相关性.结果 抗CCP抗体对RA诊断的敏感性为83.3%,特异性为95.6%;抗CCP抗体与类风湿因子无相关性,两者联合检测敏感性增加至89.6%,同时能保证较高的特异性(91.4%);抗体阳性患者与抗体阴性患者在晨僵、X线分期方面有显著性差异.不同的X线分期抗CCP抗体水平有显著性差异;活动性RA患者与非活动性RA患者抗CCP抗体水平有显著性差异.结论 抗CCP抗体对RA具有良好的敏感性和特异性,抗CCP抗体与RA的活动性及病程进展相关,有助于判断RA病情.
作者：王嫱；左晓霞；游运辉；罗卉；王彦平 刊期： 2007年第13期
目的 检测尿毒症患者肾移植前后外周血白细胞介素18受体(IL-18R)的变化,探讨IL-18R在肾移植急性排斥反应中的作用.方法 受试者分为:尿毒症组(n=32),肾功能稳定组(n=24),急性排斥组(n=8),长期存活组(n=12)和健康对照组(n=7).提取受试者的外周血淋巴细胞,加入双荧光标记的鼠抗人CD4/IL-18Rα及CD8/IL-18Rα单克隆抗体,利用流式细胞仪进行测定,计算机分析打印结果.结果 CD4/IL-18Rα及CD8/IL-18Rα在健康对照组(n=7)中的阳性率分别为(5.9±3.4)%和(14.9±4.6)%,而在尿毒症组的阳性率分别为(17.6±9.7)%和(28.0±5.6)%,两组比较差别有显著性(P=0.02,P=0.04).术后恢复顺利者及术后长期存活者外周血CD4/IL-18Rα及CD8/IL-18Rα的表达明显低于急性排斥反应患者.排斥反应发生时外周血CD4/IL-18Rα及CD8/IL-18Rα的阳性率分别为(31.9±11.6)%和(45.7±14.7)%,明显高于肾功能正常组;激素冲击治疗后其阳性率分别为(4.6±1.7)%和(11.2±3.8)%,与激素冲击治疗前比较明显降低.结论 利用流式细胞技术检测尿毒症患者肾移植前后外周血CD4/IL-18Rα及CD8/IL-18Rα的变化,可以较早预测肾移植后急性排斥反应,预测肾移植后恢复情况,评估排斥反应对激素治疗的效果,为排斥反应的早期诊断和选择抗排斥治疗方案提供简单、快速和非创伤性的检测方法.
作者：郝俊文；闵志廉；李香铁；陈英剑；郑军华 刊期： 2007年第13期
目的 探讨凝血酶(thrombin,TM)对血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性的影响和细胞凋亡(Apoptosis)的可能机制.方法 108只SD大鼠随机分为A、B、C 3组,分别向大鼠右侧基底节区注入凝血酶、凝血酶加组织蛋白酶G(Cathepsin G,CATG)、生理盐水,于注射后6、24、48和72 h取脑组织,测定BBB通透性(Evans-blue法)、脑水含量(干湿重法)以及Caspase-3蛋白表达(Western-blot).结果 TM脑内注射后6 h同侧基底节区BBB通透性明显增加(P＜0.05),24 h时达高峰(P＜0.01),持续至48 h(P＜0.05),然后逐渐消退;脑水含量的变化规律与BBB通透性的变化类似.TM脑内注射后6 h Caspase-3蛋白开始增加(P＜0.01),24 h达高峰(P＜0.01),然后逐渐下降.TM+CATG组在各个时间点BBB通透性、脑水含量和Caspase-3蛋白表达与对照组比较均无明显差异(P＞0.05).结论 TM增加BBB通透性是其诱发脑水肿形成的主要机制.TM对BBB通透性的影响可能是通过激活蛋白酶激活受体-1(protease activated receptor-1,PAR-1)实现的;凝血酶可能通过激活PAR-1受体诱导凋亡.
作者：陈志斌；关景霞；袁昆雄；蔡美华；曹学兵；苏庆杰；王埮 刊期： 2007年第13期
目的 以乙肝核心抗原为载体进行HCV T表位的表达,并对表达产物进行免疫原性分析.方法 利用DNA重组技术将HCV T表位(131-140aa)插入HBcAg el-loop处,构建病毒颗粒样抗原表达载体pTrc-core-HCV(T),并在JM109中进行表达,蔗糖密度梯度离心提取纯化表达产物HBcAg-T,该蛋白经免疫原性检测、纯度分析及定量后,以pTrc-core表达产物HBcAg作对照免疫Balb/C鼠.适时进行抑瘤实验、HBcAb检测、流式细胞仪进行T细胞分类,以观察HBcAg-T的免疫原性.结果 抑瘤实验中HBcAg-T免疫组小鼠仅形成一个瘤块,数量和大小均低于对照组,ELISA结果显示HBcAg-T免疫组HBcAb滴度相似于HBcAg免疫组,流式散点图显示HBcAg-T免疫组CD8+T细胞所占比例明显增高.结论 HBcAg-T诱导出高水平的细胞免疫应答,可作为HCV治疗性疫苗的候选.该实验为HCV治疗性疫苗的成功研制奠定了基础.
作者：陈佳玉；李景利；李凡 刊期： 2007年第13期
目的 研究人乳腺癌组织中淋巴管内皮细胞生长因子-C的表达及临床意义.方法 应用免疫组化PV 9000二步法检测50例乳腺癌组织VEGF-C的表达.结果 50例患者中VEGF-C染色阳性33例,阳性率66%,阳性物质主要位于乳腺癌细胞胞浆内.乳腺癌组织中VEGF-C的表达与乳腺癌的淋巴结转移有关,有淋巴结转移的乳腺癌组织中VEGF-C阳性表达率明显高于无淋巴结转移组织,但与乳腺癌组织病理学分型、肿瘤大小和临床分期无关.结论 VEGF-C表达与乳腺癌淋巴转移有关,可作为提示临床预后较差的指标.
作者：张艳君；李荣；刘梅；钟梅 刊期： 2007年第13期
中国现代医学杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：中南大学,中南大学肝胆肠外科研究中心
