何蔚云;梁建华;吴莉萍;陈清
目的 建立、优化快速检测临床标本中热带假丝酵母菌的实时荧光定量PCR方法,并对其临床应用进行初步评价.方法 用自行设计的高效引物、探针检测5种临床标本中的热带假丝酵母菌,对该方法的敏感性、特异性进行评价,并与真菌培养法进行比较.结果 检测临床标本中热带假丝酵母菌的灵敏度可达10 copies/ml,与人类基因组、细菌及其他真菌无交叉阳性反应.与真菌培养法的检测一致性好(Kappa值为0.916,P<0.01).结论 实时荧光定量PCR检测热带假丝酵母菌灵敏度高、特异性强,可直接用于各种临床标本中热带假丝酵母菌的检测,而且可大大缩短报告时间,为临床诊断提供可靠依据.
作者:龙燕;郑磊;曾方银;杨红玲;王前 刊期: 2012年第05期
目的 观察大鼠肾小球系膜细胞中内脏脂肪素(Visfatin)对肾素血管紧张素系统(RAS)mRNA表达的影响及探讨其机制.方法 分别构建Visfatin表达载体质粒及Visfatin RNAi表达载体质粒,将细胞分为8组:正常糖对照组、正常糖+NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC)组、过表达Visfatin组、过表达Visfatin +PDTC组、空白过表达载体组、空白过表达载体+PDTC组、Visfatin RNAi组及空白沉默载体组,用Realtime-PCR方法检测血管紧张素原(AGT)、血管紧张素转化酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)、血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)等RAS相关基因表达,使用电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测NF-κB活性,比较各组间基因表达及NF-κB活性的差异;以及通过观察PDTC处理对照组、过表达Visfatin组、空白过表达载体组前后上述指标的变化.结果 细胞过表达Visfatin后,NF-κB活性、Visfatin、AGT、ATIR mRNA表达量显著升高,分别为正常糖对照组的1.52、11.42、2.85、1.25倍(P均<0.01);转染RNAi质粒pSIREN-Visfatin/sh RNA后,NF-κB活性、Visfatin、AGT、AT1R mRNA表达量显著降低,分别为正常糖对照组的10.90%、26.83%、30.00%、73.47%(P均<0.01).经PDTC处理的各组NF-κB活性、AGT mRNA表达量与相应的未经PDTC处理组相比显著降低(P<0.01),正常糖+PDyT℃干预组NF-κB活性、AGT mRNA表达量是正常糖对照组的21.60%、34.59%;过表达Visfatin+PDTC干预组的NF-κB活性、AGT mRNA表达量是过表达Visfatin组的37.96%、19.72%;空白过表达载体+PDTC干预组NF-κB活性、AGT mRNA表达量是空白表达载体组的52.53%、33.08%,差异均具有统计学意义(P<0.01).结论 在大鼠肾小球系膜细胞中,Visfatin可通过NF-κB引起RAS相关基因表达的变化.
作者:吴秋菊;郭颖;曾华;何爽;冯志美;丁鹤林 刊期: 2012年第05期
B细胞主要通过分泌各种抗体发挥免疫学作用,新近研究发现在B细胞中存在一种新的细胞亚群——调节性B细胞,它们可通过分泌IL-10和TGF-β1抑制获得性免疫介导的炎症反应发展和(或)加快炎症的恢复,相关研究表明此种细胞可在炎症性肠病、系统性红斑狼疮、肿瘤等疾病中发挥重要作用.本文综述了调节性B细胞的来源、功能、作用机制及相关研究进展.
作者:刘洪波;封艳玲;郑学宝 刊期: 2012年第05期
目的 构建并表达弓形虫复合基因SAG1-BAG1及分析重组抗原的免疫反应性.方法 利用PCR扩增弓形虫SAG1基因,利用RT-PCR扩增弓形虫BAG1基因,通过酶切连接分别将SAG1、BAG1基因克隆到pET28a表达载体中构建复合基因SAG1-BAG1.将质粒pET28a-SAG1-BAG1转入大肠杆菌BL21( DE3)中进行诱导表达,Western-blot分析该重组蛋白的免疫反应性.结果 复合基因SAG1-BAG1全长约1 407 bp,重组蛋白相对分子质量约为50 000,表达量约占菌体总蛋白的10%,Western-blot分析显示重组蛋白具有良好的免疫反应性.结论 成功构建并表达弓形虫复合基因SAG1-BAG1.
作者:秘文婷;姚硕;钟志刚;杨培梁;吴焜;陈晓光 刊期: 2012年第05期
目的 应用四聚体技术研究肺结核患者治疗前后各时间点外周血中E7多肽特异性CD4+T细胞的变化及结核患者肺组织切片中特异性CD4+T细胞的分布.方法 培养能稳定分泌表达E7/HLA-DRB1*0404和E7/HLA-DRB1*1602的果蝇S2细胞株,表达纯化获得2种蛋白质单体,并制备成PE标记的相应四聚体,流式细胞分析检测肺结核患者外周血中特异性CD4+T细胞.制备FITC标记的四聚体,对肺结核患者的肺组织切片进行原位染色,观察特异性CD4+T细胞的分布.结果 肺结核患者治疗前组及治疗1~60 d组分别与治疗61 d后各组及脐带血组之间的四聚体阳性多肽特异性CD4+T细胞差异均有统计学意义(P<0.05),但治疗前组与治疗1~60 d组之间、治疗61 d后各组之间及分别与脐带血之间、2个四聚体检测组之间差异均无统计学意义(P>0.05).在肺结核患者的肺组织切片中可观察到特异性CD4+T细胞.结论 制备的2种E7/HLA-DR四聚体对于结核病的检测具有一定的意义,可以用于检测研究肺结核患者治疗前后外周血E7多肽特异性CD4+T细胞的变化及肺结核患者局部病理组织中特异性CD4+T细胞的分布.
作者:黄利荣;李研;方毅敏;任亮亮;朱艳;赖小敏 刊期: 2012年第05期
目的 用一种简单可行且与临床接近的方法建立大鼠慢性酒精性脂肪肝模型.方法 将66只健康雄性SD大鼠随机分成正常对照组、白糖组、模型组3组.正常对照组大鼠自由饮水;白糖组大鼠自由饮用含10%的糖水;模型组大鼠自由饮用55°二锅头白酒配制成不同浓度的酒水饮料,并含有10%的白糖,其白酒度按照5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%(Ⅴ/Ⅴ)逐渐递增,每个浓度持续10d,40%时维持20周.并于第15、20、25周末随机取2只模型组大鼠行肝脏病理切片观察,造模结束后测定各组血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及血脂四项指标即甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)水平并观察肝脏病理形态学改变.结果 随着造模时间延长,模型组肝脏脂肪变性程度逐渐加重,造模结束后肝脏病理提示为重度脂肪变性,血清转氨酶及血脂(TG、CHO、LDLC)水平明显升高,与正常对照组比较差异有统计学意义(ALT:P<0.01,AST、TG、CHO、LDLC:P<0.001),HDLC水平降低,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.001).结论 本造模方法与人类慢性酒精性脂肪肝的发生发展相似,并且简单易行,稳定,可重复,动物死亡率低,为慢性酒精性脂肪肝的相关研究提供了较有价值的动物模型.
作者:文健;魏威;王萍;李珍;董文其 刊期: 2012年第05期
目的 构建带有血凝素(HA)标签的小鼠组蛋白变异体macroH2A1 (mH2A1)的真核表达载体,并观察其在人胚肾293T细胞中的表达定位情况.方法 提取内毒素休克的BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应获得内毒素休克小鼠肝脏组织的cDNA,以cDNA为模板使用PCR方法扩增得到mH2A1编码序列,并将其酶切后连接至带有HA标记的载体pcDNA3-HA上;对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定.随后将重组质粒瞬时转染293T细胞,利用荧光显微镜观察.结果 PCR、双酶切和测序鉴定表明pcDNA3-mH2A1-HA真核表达质粒构建正确;经转染实验发现,该质粒能够在293T细胞中表达,表达产物主要定位在细胞核中.结论 mH2A1真核表达载体pcDNA3-mH2A1-HA的成功构建及明确其在哺乳动物细胞中的具体核定位,为进一步研究mH2A1作用细胞的信号通路提供了一个重要的工具.
作者:张菁;罗海华;王娟;卢康荣;姜勇 刊期: 2012年第05期
目的 探讨英夫利昔单抗(INF)治疗难治性银屑病关节炎(PsA) 22周的疗效与安全性.方法 18例接受规范的非甾体抗炎药(NSAIDs)和改善病情抗风湿药物(DMARDs)治疗6月以上病情仍活动的PsA患者,0、2、6、14周予INF 3 mg/kg静脉输注.主要疗效评价指标为第2、14、22周达到PsA疗效标准(PsARC)及PASI改善50%(PASI 50)的患者比例,次要疗效指标为第2、14、22周达到PASI 70/90的患者比例及各疗效参数(关节肿胀及压痛数、患者总体评价、健康评估问卷、医师综合评价、PASI评分、CRP)的变化.治疗前及观察期间查血常规、自身抗体、肝肾功、胸片等,记录不良反应.结果 治疗2、14、22周时,达到PsARC、PASI 50的患者比例分别为55.6%、55.6%,72.2%、83.3%,88.9%、88.9%;达到PASI 70、PASI 90的患者比例分别为33.3%、22.2%,55.6%、38.9%,77.8%、61.1%;各疗效参数均较基线有改善(P<0.05).出现3例感染,对症治疗后痊愈,无严重不良反应发生.结论 INF治疗难治性PsA有较好的疗效和安全性.
作者:李静;李娟;朱俊卿 刊期: 2012年第05期
目的 建立稳定、高效的HBx、羧基末端截短的中分子表面蛋白(MHBst)体外表达细胞株,以进一步研究HBx、MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及其机理.方法 设计特异性引物,采用PCR方法从adr亚型HBV质粒pHBV DNA中扩增HBx、羧基末端截短至155位氨基酸的中分子表面蛋白(MHBst155)编码基因,并定向插入绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pEGFP-C1的BglⅡ、Kpn Ⅰ和BglⅡ、BamH Ⅰ酶切位点,转化宿主菌DH5α,提取质粒,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒.采用脂质体介导将空载体、重组质粒分别转染到人肝肿瘤细胞株HepG2中,G418筛选抗性细胞克隆,荧光显微镜下观察GFP表达,挑取表达GFP的抗性克隆扩大培养、传代.采用RT-PCR、蛋白印迹检测抗性细胞中HBx、MHBst155的mRNA及蛋白水平.结果 经酶切及测序鉴定成功构建了pGFP-HBx、pGFP-MHBst155重组表达载体,将空载体及重组质粒转染HepG2,经G418筛选约20 d获得抗性细胞克隆.将带有绿色荧光的抗性克隆扩大培养并经传代40次,细胞仍表达强的绿色荧光.RT-PCR及蛋白印迹检测表明转染重组体的HepG2/GFP-HBx、HepG2/GFP-MHBst155细胞有相应的条带,而空载体、空白对照组未出现条带.结论 成功构建了HBx、MHBst155真核重组表达载体pGFP-HBx、pGFP-MHBst155,获得了稳定表达融合蛋白GFP-HBx、GFP-MHBst155的HepG2细胞系,为进一步研究HBx及MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及分子机制构建了良好的平台.
作者:康艳红;杨林;麦丽;张绍全;胡朝霞;谢奇峰;高志良 刊期: 2012年第05期
目的 探讨白细胞介素8(IL-8)对OX-LDL诱导的小鼠单核巨噬细胞264.7细胞株(RAW264.7)的作用.方法 以IL-8作用于OX-LDL诱导RAW264.7细胞株,48 h后收集细胞和上清培养液,分别用流式细胞仪检测细胞表位CD14、CD34、CD86及其早、晚期凋亡率;用RT-PCR法检测细胞内IL-8 mRNA的表达水平;用Western bot检测IL-8 mRNA表达蛋白的量;用ELISA方法检测上清液IL-1β、IL-10的量.结果 与对照组相比,实验组的CD14、CD34表位表达及晚期凋亡明显增多(P<0.05),而对CD86、早期凋亡影响不明显(P>0.05),IL-8 mRNA及其表达的蛋白量明显升高,上清培养液中IL-1β增多(P<0.05),IL-10减少(P<0.05).结论 IL-8致动脉粥样硬化(AS)作用可能是部分通过上调单核巨噬细胞表面CD14、CD34表位表达,促进IL-8 mRNA及其表达蛋白的量,促进IL-1β、抑制IL-10的分泌,并促进其晚期凋亡,参与AS的炎症反应.
作者:刘家超;李志樑;严全能;傅强 刊期: 2012年第05期
目的 探讨CCR5基因启动子59029位点单核苷酸多态性(SNPs)与HIV-1感染者疾病进展的关系.方法 按照制定的检索策略,在PubMed、CBM、VIP等数据库检索有关CCR5基因启动子59029位点SNPs与HIV-1感染者疾病进展关系的研究,按照纳入和排除标准选取文献,评价文献质量,提取相关数据.用Stata 10.0统计软件对数据进行Meta分析.结果 按照纳入和排除标准,共纳入4个病例对照研究,其中长期不进展者(LTNP)总例数375人,快速进展者(RP)总例数282人.Meta分析结果显示,在排除了CCR5△32和CCR2-64I突变后,RP组的59029A/A纯合子基因型频率是0.235,高于LTNP组的0.144,两者差异具有统计学意义(Z=2.37,P=0.018),OR及95%CI是3.441(1.236,9.582).RP组的59029A等位频率是0.513,也高于LTNP组的0.370(Z=3.13,P=0.002).结论 CCR5基因启动子59029A等位与HIV-1疾病的快速进展相关.
作者:朱文昌;聂军;王云芸;李建栋;陈清;俞守义 刊期: 2012年第05期
目的 探讨复方中药含药血清对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶(TYR)活性的影响.方法 体外培养人A375黑素瘤细胞,采用多巴速率氧化法研究复方中药含药血清对TYR活性的影响.结果 低浓度(5%~10%)的Ⅰ方、Ⅱ方、Ⅲ方对酪氨酸酶活性无明显激活作用(P>0.05);高浓度(20%~30%)的Ⅰ方、Ⅲ方、Ⅵ方对TYR活性均有明显激活作用(P<0.05),以Ⅵ方作用显著,且与其它各组相比,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 对TYR具有激活作用的中药组成复方并不一定对TYR有激活作用,具有祛风活血和补肾三重作用的Ⅵ方在促进TYR活性上优于祛风除湿Ⅰ方、养血活血Ⅱ方和滋补肝肾Ⅲ方.
作者:刘利利;杨柳;洪逊强 刊期: 2012年第05期
目的 采用光激化学发光免疫分析技术建立快速定量检测人促黄体生成素(hLH)的方法.方法 用2株配对的hLH单克隆抗体,1株hLH单克隆抗体包被受体微球,另1株hLH单克隆抗体先用生物素标记,再与链霉亲合素的供体微球共同组成人促黄体生成素光激化学发光免疫分析试剂,进而优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价.结果 自制hLH试剂分析灵敏度为0.164 U/L,线性测量范围为0.164~135 U/L,分析内和分析间的精密度分别为4.3%~6.1%和7.4%~8.1%,均低于10%,与hTSH、hFSH和hCG无明显交叉反应,158份临床血清样本用本试剂与罗氏电化学发光检测试剂盒平行检测,对所测数值采用配对t检验分析,结果显示两种方法检测结果差异无统计学意义(t=-1.468,P=0.07).结论 自制hLH光激化学发光免疫分析试剂各项指标均能达到临床要求,有望替代国外同类产品.
作者:林冠峰;邹丽萍;刘天才;侯经远;任志奇;吴英松 刊期: 2012年第05期
目的 构建过表达鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因慢病毒载体,并研究其对氧化应激诱导大鼠H9C2心肌细胞凋亡的影响.方法 构建大鼠ODC基因pHIV-ODC过表达质粒,与包装质粒psPAX2、pMD2G共转染293FT细胞,检测其侵染效率;包装慢病毒并侵染H9C2心肌细胞;72 h后观察其侵染效率,RT-PCR法检测细胞ODC mRNA的表达,利用CCK-8、Hochest33258染色检测ODC对H2O2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响.结果 酶切及测序鉴定ODC序列正确插入慢病毒过表达载体.侵染H9C2细胞72 h后ODC mRNA水平较阴性慢病毒感染组显著升高.过表达ODC能抑制H2O2诱导的细胞活力下降,减轻H2O2诱导的心肌细胞凋亡,与H2O2组比较差异均有统计学意义(P<0.001).结论 成功构建的过表达ODC慢病毒,上调H9C2细胞中ODC的表达,过表达ODC能显著抑制氧化应激诱导的H9C2心肌细胞凋亡.
作者:臧书文;刘彬;周迎春;孙学刚;黄平;邱锦帆;刘紫庭 刊期: 2012年第05期
目的 回顾性分析轻微血糖升高对大陆地区孕妇不良妊娠结局的影响.方法 符合以下入选标准:①年龄大于18岁;②单胎、头胎、胎龄符合孕周;③于孕24~32周行50 g GCT试验,1 h PG≥7.8 mmol/L者于1周内行75 g OGTT试验,且OGTT试验在正常范围内(FBG<5.1 mmol/L、1 h<10.0 mmol/L、2 h<8.5 mmol/L).结果 共有527例符合入选标准,根据血糖水平高低将FBG、1 h BG、2h BG等各分为4个亚组,每个亚组相差一个标准差.随着FBG、1h BG、2h BG水平升高,大于胎龄儿、新生儿高胆红素血症的发生率也随着增加;而胎儿宫腔内感染、先兆子痫、1min Apgar评分低及转儿科监护治疗的发生率并未达到差异具有统计学意义的升高.结论 对于轻微血糖升高的孕妇而言,大于胎龄儿、新生儿高胆红素血症的血糖阈值是4.6 mmol/L<FBG≤5.0 mmol/L、9.5 mmol/L<1 h BG≤9.9 mmol/L、8.0 mmol/L<2 h BG≤8.4 mmol/L,而需转新生儿监护治疗的血糖阈值是4.6 mmol/L<FBG≤5.0 mmol/L、9.5 mmol/L<1 h BG≤9.9 mmol/L.但这仍需更大规模的前瞻性研究加以证实.
作者:潘燕飞;沈洁;韩亚娟;陈超凤;谢敏 刊期: 2012年第05期
内质网(ER)是细胞内重要的细胞器,参与多种细胞进程,这些进程对于维持细胞存活和发挥细胞的正常生理功能具有重要的作用.然而在多种生理病理条件下,内质网稳态会发生变化而失衡,从而诱发内质网应激(ERS),此时机体通过激活未折叠蛋白反应(UPR)来恢复内质网的正常功能.当持续的ERS状态无法恢复时,ERS就会触发细胞凋亡程序,通过不同的凋亡途径引起细胞凋亡.
作者:王硕;孟庆华;秦秀德;刘辉;王丹丹;康立源 刊期: 2012年第05期
目的 比较不同性别PCI术后患者服药依从性和生活质量的差异.方法 采用问卷调查法对403例PCI术后患者(其中男性242例,女性161例)的服药依从性和生活质量进行评定,Morisky问卷调查PCI术后服药依从性、西雅图心绞痛量表和SF-36评定PCI术后半年生活质量.结果 不同性别患者对Aspirin、BBs、ACEI/ARB这三类药物依从性差异具有统计学意义(P<0.05).女性较男性依从性好,但对Statins类药物依从性差异无统计学意义(P=0.051).不同性别患者SF-36总体得分差异无统计学意义(P>0.05),但在躯体功能、生理职能、躯体疼痛及躯体健康方面差异有统计学意义(P<0.05),女性得分较男性高;SAQ得分女性在躯体活动受限程度、心绞痛发作情况、心绞痛稳定状态方面得分较男性高(P均<0.05),而男性对疾病的主观感受高于女性(P<0.05).结论 对PCI术后患者应针对不同性别采取相应的健康干预措施,男性主要在改善其遵医行为方面,女性侧重于精神心理方面.
作者:杨静;李亚洁;袁为群;董文 刊期: 2012年第05期
目的 建立环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测痢疾志贺菌,并对其特异性、灵敏度与传统PCR进行比较.方法 以痢疾志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)为靶序列,设计6条特异性引物(内引物、外引物和环引物各2条),优化LAMP反应体系及反应条件,检测LAMP反应的灵敏度、特异性及模拟样品,同步与PCR进行比较.结果 LAMP法和PCR均能特异性地扩增出志贺菌靶DNA,而其他非志贺菌均未扩增出特有条带.检测细菌纯培养物和模拟食品的灵敏度LAMP法分别为5.3×101 cfu/ml、6.8× 101 cfu/ml,PCR法分别为5.3× 102 cfu/ml和6.8× 102 cfu/ml.结论 利用LAMP技术,可快速、灵敏、简便地检测痢疾志贺菌,与PCR方法比较,特异性强、操作简便、检测成本低、耗时短,有望发展成为快速检测痢疾志贺菌的有效手段.
作者:曾桂芬;龙北国;姜容;刘行超;廖韫婕;范宏英 刊期: 2012年第05期
目的 了解艾滋病病毒(HIV)感染者和艾滋病( AIDS)病人(简称PLWHA)焦虑状况,探讨其影响因素.方法 采用Zung氏焦虑自评表(SAS)和评价方法,在广州市番禺区艾滋病VCT门诊对144名PLWHA进行面对面问卷调查,采用SPSS统计软件进行统计学析.结果 PLWHA的SAS总粗分(32.19±6.91)高于国内常模,差异有统计学意义(t=3.919,P<0.01).焦虑总发生率为17.36%,其中HIV感染者和AIDS病人分别为16.16%和20.00%.SAS标准总分方面,AIDS病人、年龄>50岁者、在本市居住的非本市户籍者中居住年限<5年者、确认感染HIV年限<1年者、抗病毒治疗年限<1年者和CD4细胞计数≤200个/mm3者均相对较高,差异均有统计学意义(P<0.05).年龄> 50岁者和确认感染HIV年限<1年者的焦虑患病率均相对较高,差异均有统计学意义(P<0.05).Logistic多因素分析发现,性别、年龄和确认感染年限是PLWHA焦虑的主要影响因素,年龄>50岁者产生焦虑的危险是≤50岁者的7.8倍.结论 PLWHA的焦虑状况较一般人群严重,并受多方面因素的影响,应在随访关怀过程中加强心理支持体系的构建,改善其焦虑状况,提高生活质量.
作者:杨燕君;凌莉;张晖;秦小洁;黄桂锋;曾锐志;李功理 刊期: 2012年第05期
目的 观察白介素32(IL-32)在胃癌细胞株中的表达情况,探讨其在胃癌发生、发展中的意义.方法 采用逆转录PCR、real-time PCR及Western blot法分别从基因和蛋白水平上检测IL-32在正常胃上皮细胞GES-1以及胃癌细胞株MKN-45、KATO中的表达情况.结果 逆转录PCR及real-time PCR结果均显示胃癌细胞IL-32 mRNA表达水平明显高于正常胃上皮细胞,逆转录PCR灰度比值(目的/内参)为:GES-1(0.34±0.09)、MKN-45 (0.79±0.11)、KATO( 0.90±0.17),差异有统计学意义(P<0.05).real-time PCR Ct值显示:MKN-45的IL-32基因表达量是GES-1的(5.34±1.09)倍,KATO是GES-1的(4.07±1.69)倍,差异均有统计学意义(P<0.05).Western blot结果显示IL-32在蛋白表达水平的结果与前一致,灰度比值(目的/内参)为:GES-1 (0.30±0.10)、MKN-45(0.92±0.32)、KATO(0.86±0.15),差异有统计学意义(P<0.05).结论 IL-32在胃癌细胞株中呈高表达,推测其可能在胃癌的发生、发展中起一定作用.
作者:詹磊磊;唐保东 刊期: 2012年第05期