学术投稿

1.3倍乙型肝炎病毒全基因真核表达载体的构建及其在Bewo细胞中的表达

资捷;王前;郑磊;熊石龙;蔡贞

关键词:乙型肝炎病毒, 1.3倍HBV基因组, 真核表达载体, BeWo细胞
摘要:目的 构建1.3倍乙型肝炎病毒(HBV)全基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBV1.3,并观察其在Bewo细胞中的表达.方法 以质粒pMD18T-HBV上的HBV DNA序列为模板,构建1.3倍HBV全基因序列,将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),用酶切、PCR及测序鉴定,并把该载体转染Bewo细胞,以Western免疫印迹、微粒子酶免疫分析法(MEIA)和荧光定量PCR法分别检测胞内和上清中HBsAg、HBeAg蛋白的表达及HBV DNA水平.结果 通过酶切、PCR及测序鉴定,成功构建1.3倍HBV全基因表达载体,该载体可以在Bewo细胞系中表达和分泌HBsAg与HBeAg,并可检测到高水平的HBV DNA.结论 成功构建了1.3倍HBV全基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBV1.3,为研究胞内HBV宫内感染奠定了基础.
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    作者:吴晓丽;蔡云清 刊期: 2010年第02期

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    作者:许燕佳;崔燕玲;陈虹;沈浩贤;张惠球;麦璟莹;李小敏;何芳;朱蔚云;黎银燕;马长玲;陈代雄;陈新宇 刊期: 2010年第02期

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    作者:周俊梅 刊期: 2010年第02期

  • 葛根提取物对颈神经根性痛大鼠体感诱发电位的影响

    目的 探讨以葛根素为主要有效成分的葛根提取物对颈神经根性痛大鼠体感诱发电位的影响.方法 首先对葛根中葛根素的提取方法进行优化,确定佳提取工艺.然后通过椎管插线法建立神经根型颈椎病根性疼痛模型.将符合入组条件的大鼠随机分成5组:颈复康组,葛根提取物高、中、低剂量组,生理盐水组,每组8只.治疗前和治疗10 d后,分别对大鼠进行疼痛行为及步态评分、正中神经体感诱发电位测量.结果 葛根提取物各剂量组及颈复康组均能显著改善模型大鼠根性疼痛的相关行为,且能显著改善体感诱发电位潜伏期、波幅和传导速度,与生理盐水组相比差异有显著性意义(P<0.05).其中葛根提取物高剂量组(葛根素含量266.1 mg·kg-1·d-1)疗效佳,中剂量组(葛根素含量133.0 mg·kg-1·d-1)与高剂量组之间差异无统计学意义.结论 以葛根素为主要有效成分的葛根提取物能明显减轻颈神经根根性疼痛,并提示存在量效关系.

    作者:于林;陈宝田;谢炜;赵伟宏 刊期: 2010年第02期

  • 广州某快餐连锁店2005-2008年冷饮微生物检测结果分析

    目的 了解广州市快餐连锁店冷饮的卫生质量,为监督执法提供有力可靠的科学依据,探讨快餐连锁店冷饮微生物污染的规律.方法 对2005-2008年广州市某快餐连锁店监督抽检的冷饮样品575份进行微生物指标分析;数据采用SPSS.13.0软件包进行统计学处理.结果 冷饮样品微生物指标合格率为83.3%,其中果汁类冷饮的合格率为80.0%:总体是大肠菌群超标比菌落总数为多.结论 2005-2008年该连锁店冷饮卫生质量不稳定;上规模、管理规范的连锁经营,其卫生质量远高于散户小型饮料店.加强企业自身管理、引入HACCP概念,有利于提高食品安全质量.

    作者:成莉莉;谭铭雄;黎庆强 刊期: 2010年第02期

  • 弥漫大B细胞性淋巴瘤survivin表达与其预后的关系

    目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤survivin表达与临床表现的关系.方法 收集有完整随访资料的弥漫大B细胞性淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)患者128人,均有5年以上完整的随访资料.用免疫组化sP法检测其survivin表达情况,并分析其表达与临床预后的关系.结果 128例DLBCL患者中有84例survivin蛋白表达阳性,阳性率为65.6%.表达阳性者与阴性者5年(overall survival,OS)分别为58.8%和18.7%,差异具有统计学意义.在淋巴瘤国际预后指数(international prognostic index,IPI)积分低危患者中,survivin表达阳性者5年总生存期OS及无病生存期(disease free survival,DFS)明显低于表达阴性者;在国际预后指标(international prognosis index,IPI)积分高危患者中,survivin表达阳性与阴性者5年OS无明显差异.结论 Survivin是DLBCL的一个较有价值的预后指标,与IPI联合应用可筛选出低危患者中预后不良病例.

    作者:张红雨;陈红涛;汪波;管忠震;林桐榆 刊期: 2010年第02期

  • 恩替卡韦与拉米夫定治疗乙肝病毒所致慢加急性肝功能衰竭疗效的对比研究

    目的 比较恩替卡韦和拉米夫定治疗乙肝病毒(HBV)所致慢加急性肝功能衰竭(subacute-onchronic liver failure,SCLF)的疗效.方法 93例HBV所致慢加急性肝功能衰竭患者随机分为恩替卡韦组(46例)和拉米夫定组(47例)两组.两组患者均在常规内科治疗基础上加用恩替卡韦或拉米夫定,疗程48周.观察用药后两组患者血清生化指标、HBV DNA转阴率、存活率及病毒反跳情况.结果 治疗4周和12周时恩替卡韦组的ALT值分别为(49.9±31.4)U/L和(33.2+20.5)U/L,明显低于拉米夫定组的(88.6±58.2)U/L和(55.4±31.7)U/L,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).其他生化指标两组比较差异无统计学意义.恩替卡韦治疗后4周及48周时HBV DNA转阴率分别为71.7%及97.8%,显著高于拉米夫定组的51.1%和72.3%,差异具有统计学意义(P<0.05).治疗48周内恩替卡韦组的存活率为80.4%,高于拉米夫定组的61.7%.恩替卡韦组46例患者无1例发生病毒反跳,而拉米夫定组47例患者中有5例发生病毒反跳.结论 恩替卡韦治疗慢加急性肝功能衰竭的抗病毒效果及患者存活率均高于拉米夫定,且不容易发生病毒反跳,因此适合慢加急性肝功能衰竭的长期治疗.

    作者:文彬;袁静;胡敏冬;张娇红;邬明;姚思敏 刊期: 2010年第02期

  • 清新县流动人口血吸虫病监测效果分析

    目的 通过对清新县流动人口监测结果的分析,探讨优化输入性血吸虫病人的防控措施.方法 对清新县流动人口血吸虫病的监测结果进行统计分析.结果 2005年清新县对流动人口67045人进行调查,显示有66%的流动人口居住在该县的城乡结合部或农村地区,来自疫区的人群约占流动人口的12%.2001-2008年,采用常规主动监测1052人、选择性主动监测1456人,血吸虫血清抗体阳性率分别为2.57%(27/1052)和4.81%(70/1456),两者差异有统计学意义(X2=8.25,P<0.01);发现输入性临床诊断慢性病人分别为0例和13例(0.89%),病原确诊病人分别为0例和2例(0.14%).显示选择性主动监测对查获输入性病例的效果明显优于常规主动监测.结论 来自疫区的流动人口中存在一定数量的血吸虫病患者,为做好输入性传染源的防控工作,现阶段要重点开展选择性主动监测,同时加强被动监测,并通过选择灵敏度较高的检查方法以提高监测效果.

    作者:周志珊;黄德厚;李初升;许广才 刊期: 2010年第02期

  • 资源县368例手足口病病例分析

    目的 分析手足口病的临床特点,为手足13病的临床诊断、治疗及预防提供依据.方法 对2008年5月1日至2009年3月31日期间收住院的368例手足口病患儿的临床资料进行回顾性分析.结果 368例手足13病患儿中,男女比例为1.3:1,3岁以下发病人数多(76.09%).患者均有皮疹,并发肺炎患儿多(43.5%).经抗炎、抗病毒及对症治疗后,359例患者治愈出院(97.5%),无后遗症,重症9例,死亡1例.结论 患者主要是3岁以下的儿童,成年患者较少,轻型为主,常见并发症为支气管肺炎;及时抗炎抗病毒及对症治疗后,大部分预后良好.

    作者:张才儒;蒋骞;马蕾;蒋就喜 刊期: 2010年第02期

  • 顶复器原虫钙依赖蛋白激酶的研究进展

    钙依赖蛋白激酶(calcium-dependent protein kinase,CDPKs)全称为钙依赖的而钙调素不依赖的蛋白激酶,在结构上具有明显的特征,从N端到C端存在4个结构域,依次为可变区、催化区、连接区和调控区.研究发现CDPKs存在于植物、绿藻、纤毛虫及顶复器原虫中,参与调控顶复器原虫(如疟原虫、弓形虫、球虫等)的运动,以及参与对宿主细胞的黏附和入侵,在入侵宿主细胞中发挥了重要功能.由于在脊椎动物体内没有发现CDPKs,顶复器原虫的CDPKs将有可能作为新治疗药物的靶标和新型疫苗的靶分子.本文介绍了CDPKs的结构与功能,以及疟原虫、弓形虫、球虫的CDPKs研究现状.

    作者:李洋;韩红玉;黄兵 刊期: 2010年第02期

  • Septin 8红色荧光蛋白融合载体的构建及表达

    目的 构建在哺乳动物细胞中表达的septin 8红色荧光蛋白融合表达载体(pmCherry-C2/septin 8),并观察其在细胞内的表达和定位情况.方法 采用PCR的方法从人脑胶质细胞瘤cDNA文库中扩增获得septin 8基因编码区序列,将其克隆至红色荧光蛋白载体pmCherry-C2上,重组质粒经PCR、酶切以及序列分析正确无误后转染NIH3T3细胞,并利用Western blotting和细胞免疫化学技术分析重组蛋白在细胞内的表达和定位.结果 重组pmCherry-C2/septin 8融合蛋白在NIH3T3细胞中得到高量表达且主要分布于细胞浆.结论 成功构建了pmCherry-C2/septin 8融合表达载体,该载体能在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究septin 8细胞内生物学功能打下了良好的基础.

    作者:王丹;梅柱中;刘爱华;明小燕;王达安;王旭;姜勇 刊期: 2010年第02期

  • 血培养常见菌株的分布及金黄色葡萄球菌耐药性的分析

    目的 调查同济医院2006年1月至2008年12月血培养中常见非重复分离菌株的构成;分析金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药性.方法 采用WHONET5.4软件分析连续3年血培养中的非重复分离菌株的分布;采用K-B纸片法测定金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的敏感性.结果 2006年1月至2008年12月共分离细菌1336株,其中革兰阳性球菌占58.5%(781/1336)、革兰阴性杆菌占37.2%(497/1336)、真菌占4.27%(57/1336).分离的前10位菌株依次为凝周酶阴性葡萄球菌(CNS,40.42%)、大肠埃希菌(13.47%)、肠球菌属(5.54%)、克雷伯菌属(4.94%)、金黄色葡萄球菌(4.34%)、草绿链球菌(4.34%)、真菌(4.27%)、沙门菌属(3.59%)、铜绿假单胞菌(3.29%)、嗜麦芽窄食单胞菌(3.14%).金黄色葡萄球菌共58株,其中甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)占44.8%(26/58).MRSA对头孢菌素类、氨苄西林/舒巴坦、红霉素、克林霉索、复方新诺明、庆大霉素和左氧氟沙星、磷霉素、利福平耐药率明显高于甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus,MSSA),且差异具有统计学意义(P<0.001).未发现对万古霉素和替考拉宁不敏感的菌株.结论 本院血培养分离株中,凝同酶阴性葡萄球菌仍占据第一位.金黄色葡萄球菌占分离菌株第五位,其中MRSA检出率较高,且耐药性严重.MRSA病区的分布及耐药谱分析提示可能存在MRSA的克隆传播.

    作者:石祖亮;简翠 刊期: 2010年第02期

  • 湘潭市2001-2008年结核病控制效果分析

    目的 评价近8年来湘潭市实施结核病控制的防治效果.方法 对湘潭市2001-2008年结核病控制工作月报表、季报表、年报表及网络直报信息库资料进行分析.结果 湘潭市可疑肺结核患者就诊率、活动性肺结核病人的登记率,分别由2001年的64.1/10万和37.9/10万,上升到2008年的186.4/10万和67.6/10万.综合医院、乡镇卫生院和村医生等转诊来的病人由2001年的25.2%上升到2008年的36.5%.7年来的初治、复治涂阳肺结核病人平均治愈率分别为88.0%和80.3%.结论 通过实施结核病控制项目,发现和治愈了大批的涂阳肺结核病人,减少了结核病传染源,节省了病人医药费,收到了显著的社会效益和经济效益.

    作者:袁伟;陈有芳;李家明 刊期: 2010年第02期

  • 1.3倍乙型肝炎病毒全基因真核表达载体的构建及其在Bewo细胞中的表达

    目的 构建1.3倍乙型肝炎病毒(HBV)全基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBV1.3,并观察其在Bewo细胞中的表达.方法 以质粒pMD18T-HBV上的HBV DNA序列为模板,构建1.3倍HBV全基因序列,将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),用酶切、PCR及测序鉴定,并把该载体转染Bewo细胞,以Western免疫印迹、微粒子酶免疫分析法(MEIA)和荧光定量PCR法分别检测胞内和上清中HBsAg、HBeAg蛋白的表达及HBV DNA水平.结果 通过酶切、PCR及测序鉴定,成功构建1.3倍HBV全基因表达载体,该载体可以在Bewo细胞系中表达和分泌HBsAg与HBeAg,并可检测到高水平的HBV DNA.结论 成功构建了1.3倍HBV全基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBV1.3,为研究胞内HBV宫内感染奠定了基础.

    作者:资捷;王前;郑磊;熊石龙;蔡贞 刊期: 2010年第02期

  • 深圳市酒店三文鱼和北极贝生食中致病菌污染状况调查

    目的 了解酒店、日韩料理餐厅冰鲜海产品(三文鱼、北极贝)的微生物污染状况,为预防病原微生物食物中毒提供科学依据.方法 抽取酒店、日韩料理餐厅、超市商场等冰鲜海产品共168份,依照国家标准方法和荧光PCR方法对样品进行检测.结果 168份样品中共检出不合格大肠菌群101份,阳性率为60.12%;菌落总数29份,阳性率为17.26%;致病菌:检出副溶血性弧菌5份,阳性率为2.98%;金黄色葡萄菌38份,阳性率为22.62%.沙门氏菌和志贺氏菌致病菌未检出.结论 冰鲜海产品三文鱼和北极贝受到病原微生物的污染相当严重,各部门要加强监管监测,积极做好预防控制工作,减少食原性食物中毒发生的危险.

    作者:吴平芳;贺连华;石晓路;扈庆华;王冰;冼慧霞;陈妙玲 刊期: 2010年第02期

  • 广东登革3型病毒株的分离培养和鉴定

    目的 对2009年发生于广东地区的3例家庭聚集性登革热患者血清进行登革病毒的鉴定和病毒株的培养分离.方法 用胶体金法检测患者血清中登革病毒特异性IgM、IgG抗体;C6/36细胞培养患者血清中登革病毒;RT-PCR扩增C-PrM基因序列的片段以检测患者血清中登革病毒RNA,PCR产物经序列测定后进行生物信息学分析.结果 3例患者血清学检测均为登革病毒特异性IgM阳性、IgG阴性;特异性RT-PCR产物长约290bp,经琼脂糖电泳和测序分析,证实3例患者血清中均存在登革3型病毒;从1例患者血清中培养分离到了登革病毒株,经RT-PCR和测序证实为登革3型病毒.结论 2009年发生于广东地区的3例登革热患者经病毒培养和分子生物学鉴定,证实均为登革3型病毒感染.

    作者:周伟泽;张复春;胡凤玉;王建;洪文昕 刊期: 2010年第02期

  • 日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达

    目的 构建日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,分析该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达情况.方法 超声粉碎日本血吸虫成虫提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Sj26GST和Sj32抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Sj26GST和Sj32,得到Sj26GST-Sj32融合基因,克隆至原核表达载体pET32α(+),构建重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,转化人大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定.结果 基因拼接法扩增出约1991 bp的Sj26GST-Sj32融合基因;双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST-Sj32融合基因成功插入pET32a(+)中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子质量约82000 Mr的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的22%;Westem-blot鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别.结论 成功构建了日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性.

    作者:李文桂;肖邦忠;罗兴建;陈雅棠;吴成果 刊期: 2010年第02期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会