学术投稿

尿激酶型纤溶酶原激活因子cDNA的克隆与原核表达

邱峰;刘振杰;陈富

关键词:尿激酶型纤溶酶原激活因子, 克隆, 原核表达
摘要:目的 构建尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21中表达,为进一步研究uPA奠定基础.方法 应用逆转录RT-PCR,从人肝细胞cDNA中扩增人尿激酶型纤溶酶原激活因子基因序列,与原核表达质粒pET32a重组,获得表达质粒uPA-pET32a.用氨苄青霉素平板筛选转化子,双酶切与DNA测序进行鉴定,用IPTG诱导表达,并用Western blotting进行鉴定.结果 从肝细胞cDNA中扩增的uPA基因片段长1296 bp,酶切及DNA测序证实uPA-pET32a重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为68900Mr,经Western blotting证实为目的蛋白.结论 成功构建了重组原核表达质粒uPA-pET32a.并能在大肠埃希菌内表达,所表达的融合蛋白分子量大小与预期的相一致,为进一步的研究奠定了基础.
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    作者:徐向明;何坚;贺军 刊期: 2009年第04期

  • 江门市某公司诺如病毒性肠炎暴发的调查

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    作者:周悦亮;钟文龙;陈茂余 刊期: 2009年第04期

  • 变应性鼻炎特异性免疫治疗患者的依从性及相关因素分析

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    作者:林志斌;李添应;董文其 刊期: 2009年第04期

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    作者:吴贺勇;李娟 刊期: 2009年第04期

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    化学药物灭螺是目前主要采用的杀灭钉螺的方法.中国近研究出强螺杀粉剂、25%氯硝柳胺悬浮剂、4%杀螟丹颗粒剂和50%杀螟丹可溶性粉剂、三苯基锡壳聚糖羧酸酯、氯代水杨胺、荣宝与荣芽、O-磷酰化酚基化合物、密达利等新剂型的化学灭螺药.这些药物(除O-磷酰化酚基化合物)均已被证实具有一定的灭螺作用,有望用于现场灭螺,但尚需进一步研究以提高其灭螺效果及改进其不足.本文就这些新研究情况做一综述.

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    目的 探讨缬沙坦对人脐动脉平滑肌细胞PAPP-A、MMP-9表达的影响.方法 分别在10-5mol/L的Ox-LDL的基础上,给予Ang Ⅱ以及Ang Ⅱ、缬沙坦混合培养人脐动脉平滑肌细胞,以普通培养基培养为对照,应用RT-PCR法检测PAPP-A、MMP-9的表达量.结果 AngⅡ组PAPP-A与MMP-9的表达量均显著高于对照组、Ox-LDL及缬沙坦组(P<0.01),缬沙坦组PAPP-A的表达量高于对照组(P<0.01),而与Ox-LDL组无明显差异(P>0.05),缬沙坦组MMP-9的表达量与Ox-LDL组及对照组均无明显差异(P>0.05).结论 Ang Ⅱ可促进人脐动脉平滑肌细胞PAPP-A和MMP-9的表达.缬沙坦可以抑制Ang Ⅱ的这种作用.

    作者:查政;张清华;蒋知新;王小冬 刊期: 2009年第04期

  • 应用悬浮点阵和变性高效液相色谱技术检测β地中海贫血基因的比较

    目的 比较悬浮点阵技术(suspension array,SA)及变性高效液相色谱技术(DHPLC)在β-地中海贫血及基因分型诊断中的应用.方法 通过分析100例正常人标本和69例经PCR反向斑点杂交技术(PCR-RDB)确认的β-地中海贫血患者外周血DNA标本,经PCR扩增并分别运用SA及DHPLC两种方法对其进行基因分型诊断.结果 100例正常人标本结果为阴性,69例β-地中海贫血标本经两种方法检测其缺失和突变的基因型别完全一致,其中单位点基因突变65例,多位点基因突变4例.结论 两种检测技术在β-地中海贫血基因分型诊断中准确性完全一致,具有快速、高效、检测平台的通用性的共同点;但悬浮点阵技术在临床标本检测具有更高的优势,变性高效液相色谱技术则可检测未知突变,在基础研究方面具有优势.

    作者:邹汉良;梁汉彰;赵毅;张松;罗史科;候家兴 刊期: 2009年第04期

  • 鼠艾滋病病毒荧光定量PCR标准品RNA的构建

    目的 合成构建鼠艾滋病病毒(FLV)荧光定量检测标准品,明确核糖核酸(RNA)标准品体外合成的基本原则.方法 通过序列对比,找到FLV为保守的区段作为RNA标准品的合成目标,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆于T载体,测序,设计带有T7启动子的引物,PCR扩增,将所得的PER产物凝胶回收纯化,用T7RNA聚合酶进行体外合成RNA,后用PER和电泳检测验证.结果 成功合成了FLV荧光定量PCR标准品.结论 FLV荧光定量标准品的成功合成必须遵守以下4条基本原则:①选择保守序列;②设计引物时将潜在的终止密码或起始密码排除在PCR目标产物之外;③将启动子(如r17启动子)挂在适当的引物上,保证所合成的RNA模板与所要定量检测的RNA模板一致,而不是互补;④合成RNA后必须检测,以保证不含其他RNA或者未消化完的DNA.

    作者:葛文华;何金洋 刊期: 2009年第04期

  • 基孔肯雅热的流行现况及其防治对策

    基孔肯雅热(Chikungunya fever,CHIK)是由基孔肯雅病毒(chikungunya virus,CHIKV)引起的一种急性传染病.本文针对基孔肯雅热的病原学、流行现况、诊断方法、防治对策等方面做一综述.

    作者:刘春芳;司菡;陆家海 刊期: 2009年第04期

  • 肝豆状核变性患者心理状况分析

    目的 探讨肝豆状核变性(HLD)患者的心理状况.方法 对58例住院HLD患者采用症状自评量表(Scl-90)进行测查,并与43名正常人进行对照.结果 HLD患者的焦虑、敌对性、躯体化、抑郁、恐怖因子、阳性项目数与健康对照组比较差别有统计学意义(P<0.001,P<0.01);锥体外系症状为主的HLD患者(脑型)躯体化、焦虑、敌对性、恐怖因子均分高于肝损害为主的HLD患者(肝型,P<0.05).结论 HLD患者有许多心理症状.尤其是脑型HLD患者;在药物驱铜治疗的同时,应重视心理治疗,以提高临床疗效.

    作者:张明兴;洪铭范;桀骜 刊期: 2009年第04期

  • 广州管圆线虫感染福寿螺模型的建立

    目的 建立具有足够感染度的感染有广州管圆线虫的福寿螺模型.方法 将福寿螺随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,每组16只.分别用每只螺0条、1500条、2500条、3500条一期幼虫感染福寿螺.感染24 h后以相同感染数量相同时间重复感染一次.35~40 d后,使用酶消化法查找三期幼虫,观察螺的死亡率、感染率、感染度等指标.结果 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组死亡率分别为0、31.25%、31.25%、62.5%;Ⅰ组各螺无三期幼虫感染,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组感染率均为100%;感染度Ⅲ组和Ⅳ组明显高于Ⅱ组(P<0.05),Ⅲ组与Ⅳ组之间感染度差异无统计学意义(P>0.05).结论 无广州管圆线虫感染时,Ⅰ组螺可正常生存,无死亡;Ⅱ组螺死亡率较低,但感染度亦不高;Ⅳ组螺感染度较高死亡率亦高;Ⅲ组福寿螺死亡率较低、感染度较高、感染虫数较均衡.适宜作为模型.

    作者:孙志坚;彭东觉;贺华良;何蔼;杨潇;曲振宇;詹希美 刊期: 2009年第04期

  • 卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1水平的变化

    目的 检测卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1水平.方法 建立清洁级SD大鼠PCP动物模型,同时设正常对照组,检测血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1含量,并观察肺脏病理学的变化.结果 PCP模型组血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1含量分别是(3.65±0.73)ng/mL、(0.65±0.12)ng/mL和(1247.39±288.57)pg/mL,正常对照组的含量分别是(0.70±0.21)ng/mL、(0.14±0.10)ng/mL和(261.40±53.21)pg/mL,并且PCP模型组肺组织炎症反应明显.结论 卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1的含量均升高,并且肺组织炎症反应明显.

    作者:周必英;周泠 刊期: 2009年第04期

  • HBsAg含量与脂代谢关系的探讨

    目的 探讨乙肝HBsAg携带者HBsAg含量与脂代谢的关系.方法 对70例乙肝HBsAg携带者(其中26例低滴度携带者,44例高滴度携带者)及74例正常人的ALT、TG、CHOL、HDL、LDL、APOA、APOB等指标进行检测.结果 与正常对照组相比,乙肝病毒携带组TG、CHOL、LDL、APOB等结果明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与低滴度乙肝HBsAg携带者相比,高滴度组CHOL、HDL、LDL、APOA、APOB有下降的趋势.结论 HBsAg的持续表达可能造成脂类慢性消耗,影响机体的脂质水平.

    作者:吴莫龄;朱逸文;吴晓蔓 刊期: 2009年第04期

  • 德国小蠊抗药性及抗性机理的研究进展

    德国小蠊的抗药性问题日渐突出,成为城市害虫防治的一大难点.德国小蠊抗性机理的研究可为抗性监测、治理以及新型杀虫剂的开发提供理论基础.本文主要就德国小蠊的抗药性产生情况及抗性机理的研究进展进行综述.

    作者:赵霞;张仁利;张韶华;胡章立 刊期: 2009年第04期

  • 黄连解毒汤对小鼠肠道菌群的影响

    目的 通过观察黄连解毒汤对小鼠肠道菌群的影响,为临床合理使用清热解毒中药提供参考资料.方法 建立抗生素引起菌群失调的小鼠模型和不同剂量的黄连解毒汤灌胃小鼠模型,与正常小鼠比较,评价黄连解毒汤对小鼠肠道菌群的影响情况.结果 灌胃14 d后黄连解毒汤高剂量组出现菌群失调,其肠道益生菌与正常组差异有统计学意义(P<0.05).黄连解毒汤低剂量组无菌群失调现象,其肠道益生菌乳酸杆菌、双歧杆菌与抗生素组差异有统计学意义(P<0.05),且其条件致病菌肠球菌显著减少.结论 黄连解毒汤在高剂量长期应用时有类似滥用抗生素的破坏作用,在低剂量使用时或许有调节肠道菌群平衡的作用.

    作者:罗海华;董姝;张晟;李达;时权;周红;邝枣园 刊期: 2009年第04期

  • 多模式CT指导下的急性脑梗死rt-PA静脉溶栓初步研究

    目的 探讨多模式CT指导下rt-PA静脉溶栓治疗急性脑梗死的疗效与安全性.方法 选择16例符合美国国立神经疾病与卒中研究院溶栓试验(NINDS)标准的急性脑梗死患者行多模式CT检查,对符合溶栓标准的8例患者给予重组组织型纤溶酶原激活物(rt-PA)0.9 mg/kg溶栓治疗,比较治疗前和治疗后24h、7 d、30 d的美国卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及生活质量评分(Barthel)指数.结果 治疗前NIHSS评分为(12.8±5.33),治疗后24 h、7 d、30 d的NIHSS评分分别为(10.01±6.69)(6.77±3.56)、(4.12±3.09),治疗前和治疗后7 d、30 d比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗前生活质量评分(Barthel)指数为(20.63±8.67),治疗后24 h、7 d、30 d Barthel指数分别为(22.77±8.96)、(45.78±23.89)、(59.45±31.03),治疗前和治疗后7 d、30 d比较差异有统计学意义(P<0.05).1例因再梗塞死亡.结论 多模式CT指导下的急性脑梗死早期rt-PA静脉溶栓治疗是有效和安全的,有助于减少症状性颅内出血风险,使更多的患者从溶栓治疗中获益.

    作者:成秋生;潘小平;杨勇;李泽;余健敏;李蒙燕;王彦莉;黄翬 刊期: 2009年第04期

  • 卡维地洛对心绞痛患者心率变异性的影响

    目的 评价卡维地洛对冠心病心绞痛型患者心率变异性(HRV)的影响.方法 冠心病心绞痛型患者120例随机分为卡维地洛组(62例)和对照组(58例),用药前后2周分别记录24 h动态心电图,评价患者心率变异性指标的变化.结果 两组治疗后心率变异性各参数较治疗前均显著改善(P<0.01),治疗后卡维地洛组较对照组改善更为显著(P<0.01).结论 卡维地洛可以显著提高冠心病心绞痛型患者的心率变异性.

    作者:余新东;王孝杰;李庆云 刊期: 2009年第04期

  • 应用胶体金层析法快速检测鼠疫耶尔森氏菌F1抗原

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    目的 探索宝安地区肝吸虫感染的危险因素,为制定适合本地的防制策略提供参考.方法 采用多级整群抽样法对宝安区居民进行肝吸虫血清学监测,并利用病例对照研究方法分析肝吸虫感染危险因素.结果 共抽查856人,阳性32人,阳性率为3.74%.各年龄组感染率差别有统计学意义;性别及学历组感染率差别无统计学意义.病例对照研究表明生吃或半生吃海鱼、生吃或半生吃淡水鱼、食用生鱼粥、生吃或半生吃淡水虾、有过抓生鱼虾后不洗手就抓食物吃的行为、用盛过生鱼虾的器皿不洗干净就盛熟食以及用切过生鱼的刀及砧板不洗就切熟食是当地引起感染的危险因素.结论 引起本地区肝吸虫感染增高的主要原因是由于个人或家庭的饮食和卫生行为习惯不良而造成.

    作者:马智超;陈兵;余家麟;余平;朱奕;黄振宇;周小涛;张仁利;高世同 刊期: 2009年第04期

  • 尿激酶型纤溶酶原激活因子cDNA的克隆与原核表达

    目的 构建尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21中表达,为进一步研究uPA奠定基础.方法 应用逆转录RT-PCR,从人肝细胞cDNA中扩增人尿激酶型纤溶酶原激活因子基因序列,与原核表达质粒pET32a重组,获得表达质粒uPA-pET32a.用氨苄青霉素平板筛选转化子,双酶切与DNA测序进行鉴定,用IPTG诱导表达,并用Western blotting进行鉴定.结果 从肝细胞cDNA中扩增的uPA基因片段长1296 bp,酶切及DNA测序证实uPA-pET32a重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为68900Mr,经Western blotting证实为目的蛋白.结论 成功构建了重组原核表达质粒uPA-pET32a.并能在大肠埃希菌内表达,所表达的融合蛋白分子量大小与预期的相一致,为进一步的研究奠定了基础.

    作者:邱峰;刘振杰;陈富 刊期: 2009年第04期

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