学术投稿

应用悬浮点阵和变性高效液相色谱技术检测β地中海贫血基因的比较

邹汉良;梁汉彰;赵毅;张松;罗史科;候家兴

关键词:PCR反向斑点杂交技术, 悬浮点阵技术, 变性高效液相色谱技术, β-地中海贫血, 基因
摘要:目的 比较悬浮点阵技术(suspension array,SA)及变性高效液相色谱技术(DHPLC)在β-地中海贫血及基因分型诊断中的应用.方法 通过分析100例正常人标本和69例经PCR反向斑点杂交技术(PCR-RDB)确认的β-地中海贫血患者外周血DNA标本,经PCR扩增并分别运用SA及DHPLC两种方法对其进行基因分型诊断.结果 100例正常人标本结果为阴性,69例β-地中海贫血标本经两种方法检测其缺失和突变的基因型别完全一致,其中单位点基因突变65例,多位点基因突变4例.结论 两种检测技术在β-地中海贫血基因分型诊断中准确性完全一致,具有快速、高效、检测平台的通用性的共同点;但悬浮点阵技术在临床标本检测具有更高的优势,变性高效液相色谱技术则可检测未知突变,在基础研究方面具有优势.
热带医学杂志相关文献
  • 乌梢蛇蛋白对滑膜细胞增殖、凋亡及wt-p53/bcl-2 mRNA表达的影响

    目的 研究乌梢蛇蛋白对体外培养的类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-likesynoviocytes,FLS)生长的抑制情况,探讨乌梢蛇蛋白影响FKS凋亡的可能分子机制.方法 常规方法提取乌梢蛇总蛋白,组织贴块法培养FLS;采用不同剂量(高、中、低剂量)乌梢蛇蛋白作用FLS后,应用MTT法检测乌梢蛇蛋白对细胞增殖的影响,流式细胞仪技术检测细胞的凋亡情况,RT-PCR方法检测细胞wt-p53/bcl-2 mRNA的变化.结果 乌梢蛇蛋白中高剂量组FLS增殖率与空白对照组比较明显减少.细胞凋亡率明显增加.差异均有统计学意义(P<0.01);乌梢蛇蛋白中高剂量组FLS的wt-p53 mRNA表达量增加,Bcl-2 mRNA表达量降低,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01).结论 乌梢蛇蛋白可抑制FLS增殖和促进其凋亡,其作用机制可能是通过调节wt-p53/bcl-2基因表达来实现.

    作者:吴贺勇;李娟 刊期: 2009年第04期

  • 转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿的培育及鉴定

    目的 培育并鉴定转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿,为进一步研究转基因苜蓿疫苗提供依据.方法 将构建好的Pbi-Eg95-EgA31质粒电穿孔转化根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA4404株,利用重组根瘤农杆菌(rAt)侵染苜蓿(alfalfa)叶片,卡那霉素抗性筛选伤愈组织体胚,培育转基因苜蓿,用SDS-PAGE、Western-blot、PCR和RT-PCR鉴定转基闪苜蓿.结果 SDS-PAGE和Western-blot证实Eg95-EgA31融合基因在苜蓿中得到表达,表达产物分子质量约为37500 Mr,表达效率约占苜蓿叶总蛋白的0.05%,且能被感染细粒棘球蚴的鼠血清特异识别.PCR和RT-PCR均扩增出1016 bp Eg95-EgA31融合基因片段.结论 成功培育了转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿,为进一步研究细粒棘球绦虫转基因苜蓿疫苗奠定了基础.

    作者:周辉;李文桂;叶艳菊;周必英 刊期: 2009年第04期

  • 脑脊液病原菌变迁和耐药性分析

    目的 了解临床脑脊液培养阳性患者病原菌分布及其耐药情况.方法 对2002~2008年临床脑脊液培养病原菌阳性患者标本进行回顾性统计分析;按常规方法进行细菌分离和鉴定;细菌药物敏感试验采用Kirby-Bauer纸片扩散法.结果 分离出细菌97株,其中革兰阳性球菌占54.63%,革兰阴性菌占28.87%;新型隐球菌占13.40%.常见的6种感染菌分别为凝固酶阴性葡萄球菌(40.21%)、不动杆菌属(8.25%)、铜绿假单胞菌(6.19%)、金黄色葡萄球菌(5.15%)、肺炎克雷伯菌(5.15%)、肠球菌属(5.15%);耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCN)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检出率分别是89.7%和80.0%,细菌对常用抗生素耐药性较高,未见万古霉素耐药的葡萄球菌;美洛培南以及头孢哌酮/舒巴坦对革兰氏阴性杆菌有良好的抗菌活性.结论 近6年来细菌性脑膜炎患者病原菌以革兰阳性球菌为主,主要为医院获得性细菌性脑膜炎感染.检出病原菌对常用抗生素耐药性较高,临床需警惕新型隐球菌的高发病趋势.

    作者:肖柯玲;魏衍超;陈文捷;孙卫民;郭海波 刊期: 2009年第04期

  • 应用悬浮点阵和变性高效液相色谱技术检测β地中海贫血基因的比较

    目的 比较悬浮点阵技术(suspension array,SA)及变性高效液相色谱技术(DHPLC)在β-地中海贫血及基因分型诊断中的应用.方法 通过分析100例正常人标本和69例经PCR反向斑点杂交技术(PCR-RDB)确认的β-地中海贫血患者外周血DNA标本,经PCR扩增并分别运用SA及DHPLC两种方法对其进行基因分型诊断.结果 100例正常人标本结果为阴性,69例β-地中海贫血标本经两种方法检测其缺失和突变的基因型别完全一致,其中单位点基因突变65例,多位点基因突变4例.结论 两种检测技术在β-地中海贫血基因分型诊断中准确性完全一致,具有快速、高效、检测平台的通用性的共同点;但悬浮点阵技术在临床标本检测具有更高的优势,变性高效液相色谱技术则可检测未知突变,在基础研究方面具有优势.

    作者:邹汉良;梁汉彰;赵毅;张松;罗史科;候家兴 刊期: 2009年第04期

  • 卡维地洛对心绞痛患者心率变异性的影响

    目的 评价卡维地洛对冠心病心绞痛型患者心率变异性(HRV)的影响.方法 冠心病心绞痛型患者120例随机分为卡维地洛组(62例)和对照组(58例),用药前后2周分别记录24 h动态心电图,评价患者心率变异性指标的变化.结果 两组治疗后心率变异性各参数较治疗前均显著改善(P<0.01),治疗后卡维地洛组较对照组改善更为显著(P<0.01).结论 卡维地洛可以显著提高冠心病心绞痛型患者的心率变异性.

    作者:余新东;王孝杰;李庆云 刊期: 2009年第04期

  • 造影剂相关性肾病患者尿液β2-MG、NAG及KIM-1的变化

    目的 通过检测造影剂相关性肾病患者尿液中β2微球蛋白(β2-MG)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)及肾损伤分子1(KIM-1)的水平,了解β2-MG、NAG及KIM-1在造影剂相关性肾病患者中的改变及其与肾功能之间的关系.方法 收入49例造影剂相关性肾病患者,同时收入52例健康志愿者,以ELISA法分别检测其尿液中的β2-MG、NAG及KIM-1水平,分析其与患者肾功能之间的关系.结果 造影剂相关性肾病患者尿液中β2-MG、NAG、KIM-1分别为(594.62±87.93)mg/L、(24.52±4.64)U/L、(4.68±0.83)ng/mL,均高于健康对照组[β2-MG(108.16±10.55)mg/L,NAG(8.74±1.75)U/L,KIM-1(0.28±0.10)ng/mL],差异有统计学意义(P均<0.05);患者组的肌酐清除率Ccr为(25.09±7.50)ml/min,低于健康对照组的(83.75±33.84)ml/min,差异亦有统计学意义(P<0.05).结论 造影剂相关性肾病患者尿液中β2-MG、NAG及KIM-1水平较健康对照组明显升高,反映了肾小管的损伤情况,可作为造影剂相关性肾病患者肾功能的检测指标.

    作者:徐向明;何坚;贺军 刊期: 2009年第04期

  • 人IgE重链3-4区蛋白的表达、纯化及功能分析

    目的 通过基因重组的方法表达IgE Cε3-Cε4区,鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεR Ⅰ之间的相互作用,并用重组蛋白免疫小鼠制备血清.方法 用RT-PCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞调取IgE Cε3-Cε4 cDNA片段,克隆至pET28a(+)构建原核表达载体IgE Cε3-Cε4-pET28a(+),将重组质粒转化到大肠杆菌B121(DE3),诱导表达IgE Cε3-Cε4区蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白后,用免疫荧光方法鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FceR Ⅰ之间的结合能力,并用UniCAP 100全自动分析检测仪对重组抗原进行定量检测与鉴定;用表达蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗鼠血清,用Western-blot法对多克隆抗体进行鉴定.结果 成功调取的人IgE Cε3-Cε4区基因与已报道的序列相一致;获得的IgE Cε3-Cε4区蛋白相对分子质量(Mr)同预期的结果相一致;IgE Cε3-Cε4能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcaR Ⅰ受体;通过UniCAP 100全自动分析检测仪能够检测到重组抗原并精确到国际单位;免疫鼠血清多抗能特异性结合天然人血清IgE.结论 成功构建了IgE Cε3-Cε4-pET28a(+)表达载体,获得了能被人嗜碱性粒细胞表面的FeaR Ⅰα亚基特异性识别的IgE Cε3-Cε4区蛋白,并用天然人血清IgE鉴定了多克隆抗体,为下一步单克隆抗体的制备打下了基础.

    作者:付琛颖;曲戎梅;邱国真;魏威;林志斌;王萍;王文敬;李珍;董文其 刊期: 2009年第04期

  • 缬沙坦对人脐动脉平滑肌细胞妊娠相关蛋白-A、基质金属蛋白酶-9表达的影响

    目的 探讨缬沙坦对人脐动脉平滑肌细胞PAPP-A、MMP-9表达的影响.方法 分别在10-5mol/L的Ox-LDL的基础上,给予Ang Ⅱ以及Ang Ⅱ、缬沙坦混合培养人脐动脉平滑肌细胞,以普通培养基培养为对照,应用RT-PCR法检测PAPP-A、MMP-9的表达量.结果 AngⅡ组PAPP-A与MMP-9的表达量均显著高于对照组、Ox-LDL及缬沙坦组(P<0.01),缬沙坦组PAPP-A的表达量高于对照组(P<0.01),而与Ox-LDL组无明显差异(P>0.05),缬沙坦组MMP-9的表达量与Ox-LDL组及对照组均无明显差异(P>0.05).结论 Ang Ⅱ可促进人脐动脉平滑肌细胞PAPP-A和MMP-9的表达.缬沙坦可以抑制Ang Ⅱ的这种作用.

    作者:查政;张清华;蒋知新;王小冬 刊期: 2009年第04期

  • 多模式CT指导下的急性脑梗死rt-PA静脉溶栓初步研究

    目的 探讨多模式CT指导下rt-PA静脉溶栓治疗急性脑梗死的疗效与安全性.方法 选择16例符合美国国立神经疾病与卒中研究院溶栓试验(NINDS)标准的急性脑梗死患者行多模式CT检查,对符合溶栓标准的8例患者给予重组组织型纤溶酶原激活物(rt-PA)0.9 mg/kg溶栓治疗,比较治疗前和治疗后24h、7 d、30 d的美国卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及生活质量评分(Barthel)指数.结果 治疗前NIHSS评分为(12.8±5.33),治疗后24 h、7 d、30 d的NIHSS评分分别为(10.01±6.69)(6.77±3.56)、(4.12±3.09),治疗前和治疗后7 d、30 d比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗前生活质量评分(Barthel)指数为(20.63±8.67),治疗后24 h、7 d、30 d Barthel指数分别为(22.77±8.96)、(45.78±23.89)、(59.45±31.03),治疗前和治疗后7 d、30 d比较差异有统计学意义(P<0.05).1例因再梗塞死亡.结论 多模式CT指导下的急性脑梗死早期rt-PA静脉溶栓治疗是有效和安全的,有助于减少症状性颅内出血风险,使更多的患者从溶栓治疗中获益.

    作者:成秋生;潘小平;杨勇;李泽;余健敏;李蒙燕;王彦莉;黄翬 刊期: 2009年第04期

  • 尿激酶型纤溶酶原激活因子cDNA的克隆与原核表达

    目的 构建尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21中表达,为进一步研究uPA奠定基础.方法 应用逆转录RT-PCR,从人肝细胞cDNA中扩增人尿激酶型纤溶酶原激活因子基因序列,与原核表达质粒pET32a重组,获得表达质粒uPA-pET32a.用氨苄青霉素平板筛选转化子,双酶切与DNA测序进行鉴定,用IPTG诱导表达,并用Western blotting进行鉴定.结果 从肝细胞cDNA中扩增的uPA基因片段长1296 bp,酶切及DNA测序证实uPA-pET32a重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为68900Mr,经Western blotting证实为目的蛋白.结论 成功构建了重组原核表达质粒uPA-pET32a.并能在大肠埃希菌内表达,所表达的融合蛋白分子量大小与预期的相一致,为进一步的研究奠定了基础.

    作者:邱峰;刘振杰;陈富 刊期: 2009年第04期

  • 急性呼吸道感染相关症状监测及其病原体监测的研究进展

    基于疾病症候群的症状监测系统已经成为对疾病(生物恐怖袭击、新发传染病、原因不明疾病和其他聚集性不良公共卫生事件)暴发进行早期探查、预警和快速反应的重要方法.本文将对急性呼吸道感染的症状监测的发展现状及其病原体的研究进展进行综述.

    作者:秦鹏哲;李铁钢;李泽荣;刘维斯 刊期: 2009年第04期

  • 长寿区疟疾流行概况与防治效果

    目的 分析长寿区疟疾流行概况,评价防治效果,总结推广防治经验.方法 将长寿区1951-2008年疟疾发病资料、流行病学调查、媒介调查、防治、监测资料进行全面分析.结果 长寿区20世纪50年代疟疾暴发流行,1954年年发病率高达622.90/万.主要分布于晏家、龙溪、双龙、石堰等9个乡镇.经过约10年的普查、现症病人治疗、休止期对有疟史者根治、健康人群预防服药和灭蚊综合防治措施后.疟疾年发病率持续下降,1983年以来,年发病率稳定在1/万以下,1985年经省级考核验收,达到基本消灭疟疾部颁标准.结论 经过监测,证实长寿区已控制疟疾流行,且抗疟成绩巩固.今后应加强监测,加强疟疾流动人口管理,向消除疟疾标准迈进.

    作者:王奎;勾能;雷群建;周万江;蒋和宏 刊期: 2009年第04期

  • 脑卒中伴慢性阻塞性肺疾病患者应用ACEI对并发吸入性肺炎的影响

    目的 观察合并高血压的脑卒中并发稳定期慢性阻塞性肺疾病患者应用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)类降压药对其预防吸入性肺炎的影响.方法 将120例合并高血压非昏迷且年龄≥60岁的脑卒中伴稳定期慢性阻塞性肺疾病患者分为ACEI组和对照组,ACEI组患者应用ACEI类降压药(卡托普利)治疗,对照组应用其它类型的降压药,观察两组在住院期间吸入性肺炎等并发症的发生情况.结果 在住院期间ACEI组有4例患者(6.7%)并发吸入性肺炎,而对照组有13例患者(21.7%)合并吸入性肺炎,两组相比差异有统计学意义(P<0.05).ACEI组有11例(18.3%)患者出现不同程度咳嗽,其中4例因持续性干咳而停药.ACEI组住院期间患者死亡率为313%,而对照组患者死亡率为5%,两组差异无统计学意义.结论 预防性应用ACEI类降压药,可降低合并高血压非昏迷老年脑卒中伴稳定期慢性阻塞性肺疾病患者并发吸入性肺炎的发生率.

    作者:李子渊;晏良 刊期: 2009年第04期

  • 老年大鼠血液白细胞基因表达谱的生物信息学分析

    目的 了解老年大鼠血液白细胞基因表达水平的变化.方法 将雄性Wister大鼠分为老年组(18月龄)和年轻组(4月龄),用illumina大鼠全基因组芯片研究其分子水平的变化.结果 生物信息学分析显示.造成老年组和年轻组显著生物学差异的基因功能及所属基因是:28条凋亡基因和22条炎性基因上调,9条涉及氧与活性氧中间物代谢的基因下调.结论 差异基因功能导致老年大鼠和年轻大鼠的生物学差异.

    作者:张燕;罗炳德 刊期: 2009年第04期

  • 黄连解毒汤对小鼠肠道菌群的影响

    目的 通过观察黄连解毒汤对小鼠肠道菌群的影响,为临床合理使用清热解毒中药提供参考资料.方法 建立抗生素引起菌群失调的小鼠模型和不同剂量的黄连解毒汤灌胃小鼠模型,与正常小鼠比较,评价黄连解毒汤对小鼠肠道菌群的影响情况.结果 灌胃14 d后黄连解毒汤高剂量组出现菌群失调,其肠道益生菌与正常组差异有统计学意义(P<0.05).黄连解毒汤低剂量组无菌群失调现象,其肠道益生菌乳酸杆菌、双歧杆菌与抗生素组差异有统计学意义(P<0.05),且其条件致病菌肠球菌显著减少.结论 黄连解毒汤在高剂量长期应用时有类似滥用抗生素的破坏作用,在低剂量使用时或许有调节肠道菌群平衡的作用.

    作者:罗海华;董姝;张晟;李达;时权;周红;邝枣园 刊期: 2009年第04期

  • 胱抑素C和尿蛋白联合分析对早期糖尿病肾病的诊断价值研究

    目的 探讨糖尿病患者血清胱抑素C(CysC)、尿白蛋白(Alb)、β2微球蛋白(β2-M)、Tamm-Horsfall蛋白(T-Hp)及视黄醇结合蛋白(RBP)的变化对早期精尿病肾病的诊断价值.方法 分别采用免疫比浊法和放射免疫法对糖尿病病人和正常人血清中的Cysc含量及尿中4项尿蛋白指标(Alb、β2-M、T-HP和RBP)的水平进行联合检测.结果 糖尿病患者尿Alb、β2-M、RBP及血清CysC显著高于正常人(P<0.01),而尿T-HP则明显低于正常人(P<0.01),尿RBP水平与尿Alb含量呈显著正相关(r=+0.47,P<0.05).随着肾脏病变的加重上述各项指标的异常改变更趋显著.结论 联合检测糖尿病病人尿Alb、β2-M、T-HP、RBP及血清CysC有助于糖尿病肾病的早期诊断.

    作者:池晓霞;陈剑雄;阎德文 刊期: 2009年第04期

  • 江门市某公司诺如病毒性肠炎暴发的调查

    目的 查明2007年江门市某公司一起诺如病毒引起的肠炎的流行特点,探讨暴发疫情调查处理的经验,为今后控制类似疫情提供科学依据.方法 由疾控中心专业人员用专门的个案调查表对所有病例进行流行病学调查.部分病例采集大便样本进行检测,并结合实验室结果进行流行病学分析.结果 本次疫情由诺如病毒引起.呈腹痛、腹泻等胃肠炎症状,病情较轻,共有71人发病,罹患率为7.68%,病例主要分布在30~39岁年龄段,集中在集装箱厂内的总装部和完工部.结论 本次疫情通过日常生活的密切接触相互感染,经及时落实各项相应防控措施后迅速得到控制.

    作者:周悦亮;钟文龙;陈茂余 刊期: 2009年第04期

  • IgA肾病肾阴虚证cDNA文库的构建

    目的 应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建汉族人IgA肾病肾阴虚证cDNA消减文库.方法 选择IgA肾病且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组,进行正向和反向消减杂交.采用Trizol BD法提取总RNA,用SMART技术逆转录并扩增总cDNA,用Rsa Ⅰ酶切基因组cDNA成大小不等的片段,分别与两种不同的接头连接,进行2次消减杂交及2次抑制性PCR,然后将PCR产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒.构建IgA肾病肾阴虚证消减文库.结果 用SSH方法筛选出了IgA肾病肾阴虚证的差异cDNA片段.其中正向消减文库共获得325个阳性克隆,反向消减文库获得306个阳性克隆,从而成功地构建了IgA肾病肾阴虚证的cDNA消减文库.结论 SSH技术能够快速有效地分离差异cDNA片段.成功构建了IgA肾病肾阴虚证的cDNA文库,为进一步克隆肾阴虚证的相关基因奠定了基础.

    作者:魏敏;孙晓敏;黄平;赵晓山;李玉萍;陈晶;赖名慧;罗仁 刊期: 2009年第04期

  • 山西长治市妇科门诊病人阴道毛滴虫感染流行病学调查

    目的 对长治市妇科门诊病人阴道毛滴虫感染情况进行调查,分析其流行因素,为制定本地区阴道毛滴虫防治措施提供科学依据.方法 随机选择2007年12月至2008年11月在长治市晋城妇幼保健医院妇科门诊就诊的妇女作为调查对象,用阴道分泌物生理盐水涂片法检查阴道毛滴虫,并对受检者年龄、职业、文化水平、性行为等进行问卷调查.结果 共检测516份标本,55份阳性,滴虫阳性率为10.66%.对所收集资料进行统计学分析得出,阴道毛滴虫感染与年龄、职业、文化水平、性病知识知晓水平、性行为等因素具有相关性.结论 阴道毛滴虫感染是该地区妇科门诊患者的主要病原体之一;应根据其流行因素,制定预防保健措施,从保障该地区妇女生殖健康.

    作者:郭步平;李宇飞;张建斌 刊期: 2009年第04期

  • 中国新型化学灭螺药的研究

    化学药物灭螺是目前主要采用的杀灭钉螺的方法.中国近研究出强螺杀粉剂、25%氯硝柳胺悬浮剂、4%杀螟丹颗粒剂和50%杀螟丹可溶性粉剂、三苯基锡壳聚糖羧酸酯、氯代水杨胺、荣宝与荣芽、O-磷酰化酚基化合物、密达利等新剂型的化学灭螺药.这些药物(除O-磷酰化酚基化合物)均已被证实具有一定的灭螺作用,有望用于现场灭螺,但尚需进一步研究以提高其灭螺效果及改进其不足.本文就这些新研究情况做一综述.

    作者:吴月英;宁安 刊期: 2009年第04期

热带医学杂志

热带医学杂志

主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会