学术投稿

白纹伊蚊Rh类糖蛋白基因的克隆与生物信息学分析

吴瑜;郑小英;张美春;何蔼;李卓雅;詹希美

关键词:白纹伊蚊, Rh类糖蛋白, 铵离子通道
摘要:目的 应用简并引物RT-PCR和RACE方法获取白纹伊蚊Rh类糖蛋白(Aedes albopictus rhesus-like glycoprotein,AaRh)基因的全长cDNA.方法 根据冈比亚按蚊、埃及伊蚊等亲缘关系较近物种的Rb类糖蛋白同源性分析结果,在氨基酸高度保守区域184/343和219/337氨基酸位点设计2对简并引物,以白纹伊蚊雌蚊总RNA为模板,应用巢式RT-PCR扩增AaRh的基因片段.根据获得的AaRh基因部分序列,设计2对特异性引物AaRh GSP1、CSP2和AaRh GSP3、GSP4,应用5'RACE和3'RACE分别扩增AaRh基因的5'端和3'端cDNA片段,然后拼接出全长cDNA序列.通过在线生物信息学分析(NCBI和Expasy),对目的 基因序列进行生物信息学分析.结果 应用2对简并引物进行巢式RT-PCR,获得379 bp AaRh基因片段.应用5'RACE和3'RACE方法,分别获得AaRh基因5'端1008 bp、3'端822 bp cDNA序列,根据两个片段的首/尾共同序列拼接为1717 bp的基因片段.该核苷酸序列经BLASTn分析显示,与埃及伊蚊Rh蛋白的一致性高达95%,鉴定其为白纹伊蚊Rh类糖蛋白基因.AaRh基因具有完整的开放阅读框,其ORF从第128位到1516位含1389bp,编码462个氨基酸.Expasy在线生物信息学程序分析显示,白纹伊蚊Rh类糖蛋白是一个整合膜蛋白,跨膜11次,58aa-446aa具有铵离子通道的结构功能域;理论等电点(pI)5.37,分子量49775.10 Mr,1aa-26aa可能为分泌信号肽序列;含有4个潜在的天冬酰胺糖基化位点和17个线性抗原决定簇,翻译后可能进行糖基化修饰,提示其为糖蛋白.结论 成功获取AaRh基因的全长cDNA,生物信息学分析结果为AaRh蛋白的生物学特性和功能研究奠定了基础.
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  • 深圳市福田区2006-2008年流行性腮腺炎流行特征分析

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    作者:肖骞;司徒潮满;黄慈林;石向辉;范苏云;段丽娜;牛姬飞 刊期: 2009年第12期

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    作者:莫兆波;周悦亮;黄艳珍 刊期: 2009年第12期

  • AFP联合CA19-9检查对良恶性肝病鉴别诊断的临床研究

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    作者:钟永根;古旭东 刊期: 2009年第12期

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    作者:吴瑜;郑小英;张美春;何蔼;李卓雅;詹希美 刊期: 2009年第12期

  • TD-PCR技术用于肠道病毒71的检测

    目的 评价降落聚合酶链反应(touchdown PCR,TD-PCR)检测肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)的效能和敏感性.方法 根据touchdown原理设计TD-PCR程序,试验选择PCR佳反应条件,分别与普通PCR及TD-PCR、普通Taq酶与热启动酶扩增效果进行比较,并利用10倍稀释法检验了TD-PCR方法的灵敏度.琼脂糖凝胶电泳验证扩增产物,纯化后DNA产物测序验证该方法的特异性.结果 TD-PCR的扩增片段条带清晰,检测效果明显优于普通PCR,使用普通Taq酶的TD-PCR比使用热启动酶有更优的性价比,测序证实了此组片段的特异性,cDNA的低检测浓度为1.03.μg/mL.结论 成功建立TD-PCR检测EV71的方法,使用普通Taq酶获得理想的检测结果,为快速检测手足口病的病原体提供了可靠的手段.

    作者:高璐璐;陈清;郭江;陈志永;俞守义 刊期: 2009年第12期

  • 机会性感染的现状与展望

    医学发展到今天,传染病的发生和流行已得到了有效的控制,某些烈性传染病有的已被消灭或接近消灭,这表明人类在同感染性疾病的斗争中取得了一定的胜利,然而随着社会和环境的变迁,人类的疾病谱也不断发生着变化,如一些先前不被重视的感染性疾病如机会性感染已成为临床比较棘手的难题,某些情况下,免疫低下导致的机会性感染比原发基础疾病更为凶险.因而,机会性感染已成为临床各项工作的重要研究课题,本文就机会性感染的现状和相关研究的发展作一概述.

    作者:谷俊朝;刘建 刊期: 2009年第12期

  • 臭氧治疗外阴阴道假丝酵母菌病的临床观察

    目的 观察臭氧对外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)的治疗效果.方法 将102例VVC患者随机分为观察组(51例)和对照组(51例),观察组接受臭氧治疗,对照组接受达克宁硝酸咪康唑栓治疗.两组于治疗后第3天进行临床和真菌学疗效分析.结果 治疗结束后第3天,观察组治愈42例(82.3%)、显效6例(11.8%)、有效3例(5.3%),总有效率为100%;对照组治愈28例(55.0%)、显效12例(23.5%)、有效6例(11.8%)、总有效率为90.3%.两组治愈率差异有统计学意义(P<0.01).结论 臭氧治疗外阴阴道假丝酵母菌病效果显著,不良反应发生率低.

    作者:谭川云 刊期: 2009年第12期

  • 中低位直肠癌合并自发性穿孔的临床诊疗特点

    目的 探讨中低位直肠癌合并自发性穿孔的诊断与治疗措施.方法 回顾性分析11例中低位直肠癌合并肠穿孔的诊断与治疗.收集患者的一般情况、发病时临床表现、实验室检查、术中探查情况、手术方式、病理资料及患者结果等临床资料,探讨其临床诊疗特点.结果 除弥漫性腹膜炎及腹腔内游离气体等消化道穿孔常见临床表现外,穿孔12 h内,11例中有7例(63%)白细胞计数未见升高,其中有4例(36%)白细胞计数下降明显.术前仅2例(18%)经直肠指诊诊断为直肠癌.除3例(28%)肿瘤自身穿孔外,8例(72%)穿孔部位位于乙状结肠.9例(81%)一期肿瘤切除患者中8例痊愈出院.结论 术前明确诊断较为困难,直肠指诊是术前明确诊断的唯一方法.弥漫性腹膜炎症状后短期内出现白细胞水平下降这种现象可能是下消化道穿孔特征性表现.除少数肿瘤部位穿孔外,穿孔部位多位于乙状结肠.治疗以手术治疗为主,一期肿瘤切除是安全可靠的.

    作者:郭卫平;卫洪波;郑峰;陈图锋;黄江龙;刘建培;区广生 刊期: 2009年第12期

  • 齿龈内阿米巴与口腔毛滴虫的研究进展

    齿龈阿米巴(Entamoeba gingivalis)与口腔毛滴虫(Trichomonas tenax)是寄居人体口腔龈沟、龋齿和牙垢内的原虫.越来越多的流行病学调查及动物实验都间接或直接的证明了两种原虫与口腔疾病的密切关系.本文重点综述两种口腔原虫的形态学观察、人群中感染情况、致病机制、病原诊断方法和防治措施方面的研究进展,以期推动研究的进一步深入,为口腔疾病的治疗带来新的曙光.

    作者:徐曙光;吕向辉;牛卫兵 刊期: 2009年第12期

  • 降氟除氟技术措施推广应用示范研究的防治现状分析

    目的 了解降氟除氟技术措施推广应用示范研究的6个示范村燃煤型氟中毒的防治现状,为实施降氟除氟技术措施提供科学依据.方法 采用整群抽样法对6个示范村进行入户调查,调查示范村居民基本情况、卫生行为习惯、能源结构、健康教育知识知晓情况、炉灶使用等情况,计算居民地氟病防治知识知晓率、炉灶改造率和正确使用率.结果 示范村村民饮食结构中,以大米(52.9%)、土豆(33.5%)、玉米(7.3%)、面食(6.3%)为主,其中玉米(6.52%)、薰肉(80.40%)、辣椒(18.07%)存在烤食或烤干的问题.空气氟监测30户中,封火期平均值为0.0083 mg/m~3,范围在0.0003~0.0286 mg/m~3之间;旺火期平均值为0.0037 mg/m~3,范围在0.0003~0.0340 mg/m~3之间.灶的改造率为84.23%,正确使用率为50.90%;炉的改造率为95.26%,正确使用率为63.66%,以户为单位的炉灶正确使用率为53.29%.户主地氟病危害知晓率为45.02%,防治措施知晓率为45.50%.结论 6个示范村以煤作为主要燃料,以炉灶使用为主,仍然存在烤火取暖和烤食的生活习惯,人体摄入氟的途径中空气氟所占比重加大,村民炉灶的正确使用率低,地氟病危害和防治措施的知晓率均较低.因此,根据病区生活习惯、饮食结构、炉灶使用习惯等因素采取以排出室内空气氟为主的新型降氟除氟技术措施,辅之以改变饮食习惯,进一步加强地氟病危害和防治措施的健康教育宣传,可以达到降氟除氟的目的 .

    作者:晏维;王豫林;肖邦忠;罗兴建;张洁;苏勇;杨伟;黎华君 刊期: 2009年第12期

  • 东莞市美沙酮维持治疗门诊海洛因成瘾者心理健康及社会支持情况调查

    目的 了解东莞市美沙酮维持治疗门诊海洛因成瘾者的心理健康及社会支持情况,为采取进一步的干预措施提供依据.方法 采用症状自评量表SCL-90和社会支持量表对2007年4月至2008年8月在美沙酮维持治疗门诊就诊的海洛因成瘾者进行调查.结果 除阳性均分外,该人群的症状总分、总均分、阳性项目数、躯体化、强迫、人际关系、抑郁、焦虑、敌意、恐怖、偏执、精神病性因子得分均显著高于全国常模(P<0.001).其社会支持总分与全国常模比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 接受调查的东莞市美沙酮治疗门诊的海洛因成瘾者存在感觉、情绪、行为、人际关系、饮食睡眠等方面的心理问题,但该人群近期获得的社会支持良好.应进一步加大对该人群的尊重、关爱、支持和鼓励的力度,同时有必要对该人群的心理健康和社会支持情况进行动态测定和分析.

    作者:张巧利;金行申;袁丁;方晓君;郑少敏 刊期: 2009年第12期

  • 血管内皮生长因子C促进HeLa宫颈癌细胞粘着斑激酶活性的研究

    目的 探讨粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)介导血管内皮细胞生长因子C(vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)促宫颈癌恶性进展的作用.方法 提取不同病理分期的宫颈癌组织标本蛋白,采用Western-blot检测VEGF-C及FAK蛋白的表达情况.在体外培养宫颈癌细胞株HeLa细胞,采用Western-blot测定VEGF-C对FAK蛋白的表达和磷酸化的调控作用.结果 随着宫颈癌恶性程度的增高,VEGF-C、FAK蛋白及磷酸化FAK蛋白表达水平均随之增加.与正常宫颈组织比较,宫颈原位癌(CIN)组织中VEGF-C、FAK、磷酸化FAK蛋白表达分别增加了(48±10)%、(78±14)%、(83±15)%,P<0.05;宫颈鳞癌Ⅰ期各蛋白增高幅度分别为(104±22)%、(121±28)%、(143±30)%(P<0.01);宫颈鳞癌Ⅱ期(未放疗、化疗)各蛋白表达增高更为显著,其幅度分别为(195±28)%、(186±22)%、(204±31)%,P<0.001.在培养的宫颈癌细胞株HeLa细胞上,VEGF-C(100μg/L)处理24 h后,可显著增高FAK蛋白、磷酸化FAK蛋白的表达,该作用可被VEGF-C单克隆抗体明显抑制.结论 VEGF-C、FAK蛋白表达与宫颈癌恶性程度密切相关,VEGF-C可能通过上调FAK表达及其磷酸化水平而促进宫颈癌的恶性进展.

    作者:王书刚;程杨;陈华云 刊期: 2009年第12期

  • 延安市286例呼吸科患者血清嗜肺军团菌抗体的检测

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    作者:景彩霞;薛亚娟;陈建平 刊期: 2009年第12期

  • 细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫BALB/c小鼠后脾T淋巴细胞增殖的动态观察

    目的 动态观察细粒棘球绦虫转正Eg95-Eg31融合基因苜蓿疫苗免疫小鼠后脾T淋巴细胞的增殖情况.方法 热絮凝法提取转基因苜蓿疫苗叶蛋白,配成浓度为20 μg/μL.88只BALB/c小鼠随机分为两组,用100 μl(约含1μg融合抗原)口服灌胃和10 μl(约含0.1μg融合抗原)鼻腔黏膜接种分别免疫小鼠,每3天1次,连续免疫2月.在末次免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各组随机剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞,体外经Eg粗抗原(EgAg)或刀豆素A(ConA)刺激培养,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测免疫小鼠脾T淋巴细胞增殖情况.结果 口服灌胃组的脾T淋巴细胞增殖水平在末次免疫后4~10周升高,在末次免疫后6周达高水平;鼻腔黏膜接种组的脾T淋巴细胞增殖水平在末次免疫后4~12周升高,在末次免疫后6周达高水平;鼻腔黏膜接种组脾T淋巴细胞增殖水平高于口服灌胃组.EgAg或ConA刺激组脾T淋巴细胞增殖水平高于相应原液组,且ConA刺激组高于相应EgAg刺激组(P<0.01或P<0.05).结论 细粒棘球绦虫转正Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗能诱导免疫鼠产生脾T淋巴细胞增殖反应,鼻腔黏膜接种途径优于口服灌胃途径.

    作者:叶艳菊;李文桂 刊期: 2009年第12期

  • 佛山市2005-2008年麻疹流行病学特征分析及控制对策

    目的 分析佛山市麻疹流行病学特征,探讨麻疹的控制对策.方法 对2005-2008年麻疹发病情况进行描述性流行病学分析.结果 佛山市2005-2008年共报告麻疹病例3721例.年平均发病率为16.09/10万;病例主要集中在流动人口较多的顺德区、南海区和禅城区,发病数占全市总病例数的94.97%;4~8月为高发季节,占总病例数的67.53%;小于15岁为麻疹高发年龄组,占总病例数的70.36%;散居儿童病例占51.49%;流动人口病例占62.00%;无免疫史及免疫史不详者占88.33%.结论 佛山市近年麻疹发病持续保持较高水平,应进一步加强以流动儿童为重点的适龄儿童麻疹常规免疫,加强麻疹的监测和控制,适时对重点人群实施强化免疫等综合防控措施.

    作者:孙宝志;黄祖星;杨泽锋 刊期: 2009年第12期

  • 登革热疫点22年后的血清流行病学调查

    目的 了解曾发生登革热流行的旧疫区健康人群抗登革病毒的抗体水平及分布.方法 在1986年曾爆发Ⅱ型登革热疫情的黄埔区鱼珠街一带,对2周内无临床症状的健康人群横断面采样,收集血清,ELISA 法检测血清中抗登革病毒IgG抗体,并和非疫点健康人群抗登革病毒IgG抗体阳性率进行比较.RT-PCR法检测抗体阳性者血清中登革病毒.结果 登革热疫点健康人群抗登革病毒IgG抗体阳性率为23.3%,非疫点健康人群抗登革病毒IgGc抗体阳性率为3.8%,两者差异有统计学意义(P<0.01);登革热疫点人群抗体阳性率与年龄成正相关,0~20、21~30、31~40、41~50、51~60、61~70和70岁以上各年龄组的抗体阳性率分别为3.8%、5.8%、9.1%、26.5%、27.7%、32.5%和35.1%.30岁以下年龄组与31~40岁年龄组、31~40岁年龄组与41~60岁年龄组、41~60岁年龄组与61岁年龄组间的抗登革病毒IgG抗体阳性率差异分别具有统计学意义(P<0.05).登革熱疫点和非疫点15岁以下中小学生滤纸血样标本中均未检测到抗登革病毒IgG抗体.RT-PCR法未检测到抗体阳性者血清中有登革病毒.结论 登革热疫点人群抗登革病毒IgG阳性率明显高于非疫点人群,疫点人群抗体阳性率随年龄增长而上升,提示登革热疫点在登革热疫情后,登革病毒可能在蚊媒体内存在低密度的循环.

    作者:郑小英;吴瑜;张美春;何霭;李卓雅;曲振宇;詹希美 刊期: 2009年第12期

  • 护肝合剂对肝星形细胞的活化及胶原表达的作用和机制

    目的 观察护肝合剂对肝损害模型大鼠血清TGF-β1的影响及护肝合剂含药血清对HSC-T6细胞的增殖、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达的影响,探讨该复方对肝纤维化的可能作用及其机制.方法 设立正常组、护肝合剂组、模型组,采用卡介苗和脂多糖进行肝损害造模,然后观察3组ALT、AST和血清TGF-β1的变化.制备各组大鼠的血清,进行HSC-T6细胞的培养,采用MTT方法观察该细胞的增殖情况,并用RT-PCR的方法观察Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达.结果 模型组造模前后的ALT、AST及了TGF-β1都显著升高(P<0.01),护肝合剂组上述指标较模型组显著下降(P<0.01),护肝合剂组的HSC-T6细胞增殖较模型组显著下降(P<0.01),且没有Ⅱ型胶原和Ⅲ型胶原的表达.结论 护肝合剂能在一定程度上通过改善肝功能、降低FGF-β1水平抑制肝星形细胞的增殖,改善肝纤维化程度.

    作者:游唯春;项凤梅;卢建溪 刊期: 2009年第12期

  • 晚期血吸虫病门脉高压症术后近期再手术分析

    目的 分析晚期血吸虫病门脉高压症术后近期再手术原因,探讨控制再手术率的措施.方法 回顾性分析2004年9月至2009年9月湖南省晚期血吸虫病救助期间23例近期再手术病例资料.结果 晚期血吸虫病门脉高压症手术589例,近期再手术23例,再手术率为3.9%.其中2次手术16例,3次手术6例,4次手术1例.再手术原因有腹腔大出血、消化道穿孔、胰尾部损伤、粘连性肠梗阻、切口感染、切口裂开、膈下脓肿.所有患者均痊愈出院,随访5~20月均无严重并发症出现.结论 晚期血吸虫病术后近期再次手术原因与术前准备不充分,术中操作过失及术后处理不到位有关.加强围术期处理是提高手术质量和疗效、控制再手术率的关键.

    作者:邓维成;丁国建;王鹏;李紫成;潘舸;陈学金;刘佳新 刊期: 2009年第12期

  • 三种器械对根管清洁效果的比较研究

    目的 通过比较观察扫描电镜结果,评价不锈钢K锉、机动和手动ProTaper镍钛器械对根管预备的清洁效果.方法 选用因正畸治疗而拔除的下颌前磨牙60颗,随机分为3组,每组20颗牙.组A采用不锈钢K锉进行根管预备,组B采用机动ProTaper进行根管预备,组C采用手动ProTaper进行根管预备.根管预备完成后纵剖根管,扫描电镜下观察根管内壁表面的碎屑、玷污层及牙本质小管的形态变化.结果 在根管的冠1/3和中1/3段,组B和组C根管壁碎屑含量及玷污层均明显低于组A(P<0.05),但组B与组C之间根管壁碎屑含量及玷污层差异无统计学意义(P>0.05);在根尖部1/3段,3组之间的根管壁碎屑含量及玷污层差异均无统计学意义(P>0.05).结论 机动和手动ProTaper镍钛器械对根管的冠1/3和中1/3段的清洁效果显著高于不锈钢K锉,但3种器械对根尖1/3段的根管壁碎屑及玷污层的清洁效果无显著性差异.

    作者:张增方;张秀琴;黄世光;宋宁;邓国珍 刊期: 2009年第12期

热带医学杂志

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会