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正交设计优化皱叶生菜离体再生体系

朱春燕;雷建军;周浩;吴敏;陈清;陈燕珍;杨素华;俞守义

关键词:生菜, 外植体, 离体培养, 植物生长调节剂, 植株再生
摘要:目的 为获得生菜高频率的离体再生体系.方法 采用正交试验设计,探讨不同生菜品种、不同消毒时间对培养生菜无菌苗的影响,并研究不同浓度的植物生长调节剂、AgNO3 和不同外植体切段对生菜外植体芽分化及生根成苗的影响.应用回归分析法对试验结果进行分析.结果 美国大速生品种用70%乙醇浸泡60 s,再用2%次氯酸钠处理15 min,发芽率达到80%,无菌苗生长好;生菜离体培养再生芽的优分化条件组合为Ms(murashige and skoog's medium)附加BA(6-苄基腺嘌呤,6-benzylaminopurine)0.2 mg/L,NAA(萘乙酸,α-naphthaleneacetic acid)0.1 ms/L,外植体为2~3 d的子叶;生菜再生芽在含低浓度的生长素[NAA浓度为0.05 mg/L,或LAA(吲哚乙酸,indole-3-acetic acid)浓度为0.5 mg/L]的1/2 MS培养基中生根情况较好.结论 优化的,生菜离体再生体系具有很好的重复性,可用于遗传转化获得保健生菜的研究.
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  • 正交设计优化皱叶生菜离体再生体系

    目的 为获得生菜高频率的离体再生体系.方法 采用正交试验设计,探讨不同生菜品种、不同消毒时间对培养生菜无菌苗的影响,并研究不同浓度的植物生长调节剂、AgNO3 和不同外植体切段对生菜外植体芽分化及生根成苗的影响.应用回归分析法对试验结果进行分析.结果 美国大速生品种用70%乙醇浸泡60 s,再用2%次氯酸钠处理15 min,发芽率达到80%,无菌苗生长好;生菜离体培养再生芽的优分化条件组合为Ms(murashige and skoog's medium)附加BA(6-苄基腺嘌呤,6-benzylaminopurine)0.2 mg/L,NAA(萘乙酸,α-naphthaleneacetic acid)0.1 ms/L,外植体为2~3 d的子叶;生菜再生芽在含低浓度的生长素[NAA浓度为0.05 mg/L,或LAA(吲哚乙酸,indole-3-acetic acid)浓度为0.5 mg/L]的1/2 MS培养基中生根情况较好.结论 优化的,生菜离体再生体系具有很好的重复性,可用于遗传转化获得保健生菜的研究.

    作者:朱春燕;雷建军;周浩;吴敏;陈清;陈燕珍;杨素华;俞守义 刊期: 2008年第04期

  • 肝细胞癌组织中HBx基因缺失型突变体真核表达载体的构建和鉴定

    目的 构建缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431真核表达载体.方法 以pGM-T/HBx-d382和pGM-T/HBx-d431质粒为模板,PCR扩增含Kpn Ⅰ和Apa Ⅰ酶切位点的HBx基因片段.双酶切后再与载体pcDNA3载体重组连接.重组质粒转化到大肠杆菌DH5a后,经酶切鉴定和DNA序列测定,筛选出重组pcDNA3/HBx-d382和pcDNA3/HBx-d431真核表达载体.结果 成功构建了重组pcDNA3/HBx-d382和pcDNA3/HBx-d431真核表达载体,经DNA序列测定与比对,重组前后HBx基因片段序列一致.结论 pcDNA3/HBx-d382和pcDNA3/HBx-d431真核表达载体构建成功,可为HBx基因缺失型突变体,特别是HBx-d382基因的生物学功能研究提供基因材料.

    作者:朱平安;谭德明;陈莉;彭忠田;宋琳 刊期: 2008年第04期

  • 广州地区HCMV低传代临床病毒株UL143基因的多态性研究

    目的 研究广州地区人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离株UL143基因的多态性.方法 对3株经多重PCR鉴定的HCMV临床低传代分离株进行HCMV UL143基因全序列扩增,扩增产物克隆到pMD18-T载体上测序,并将其序列与GenBank中公布的其它临床分离株UL143基因一起进行分析.结果 D3株UL143基因因碱基缺失形成多处终止密码无法产生有功能的蛋白:Toledo株UL143基因开放读码框由279个核苷酸组成,编码蛋白由92个氨基酸残基组成;其它临床分离株UL143基因开放读码框均由252个核苷酸组成,DNA序列比较保守,变异均为碱基替换,编码蛋白由83个氨基酸残基组成,氨基酸序列也很保守,不同临床分离株氨基酸变异率为1.2%~2.4%;HCMV UL143蛋白翻译后修饰位点在除Toledo株之外的所有分离株中均高度保守,没有缺失或新增;不同临床分离株UL143蛋白二级结构有所不同;除Toledo株外,其余分离株UL143蛋白的等电点均为8.75.结论 临床低传代分离株HCMV UL143基因DNA及其编码产物的氨基酸序列极为保守,但仍存在一定多态性.

    作者:王波;李月琴;叶宁;胡兢晶;苏海浩;何震宇;田传军;张纯青;周天鸿 刊期: 2008年第04期

  • 中晚期食管癌光动力治疗联合化疗的回顾性研究

    目的 比较中晚期食管癌的单纯光动力治疗与光动力+化疗联合治疗的短期疗效,探讨中晚期食管癌光动力+化疗的治疗模式的优势.方法 回顾性分析我院自2002年至2005年期间光动力治疗及光动力+化疗治疗的食管癌患者60例(Ⅲ~Ⅳ期),其中单纯光动力治疗27例,光动力+化疗治疗33例.光动力治疗使用光敏剂Photofrin 2 mg/kg,48h后内镜引导下使用波长为630 nm的激光照射,综合治疗组化疗方案为5-FU+DDP,动力治疗后1周开始化疗,共化疗4周期.结果 60例病人随访时间全部满2年,综合治疗组和单纯光动力治疗组症状缓解率分别为85.2%、93.9%,内镜评价有效率分别为85.2%、90.9%,无明显差异;2年生存率分别为54.5%、29.6%,综合治疗组中位生存期明显延长(Ⅲ期为22m、13m;Ⅳ期为7m、5m),差异有统计学意义(P=0.046).结论 光动力+化疗治疗中晚期食管癌优于单纯光动力治疗,短期疗效相当,2年生存期有优势.

    作者:张晓娜;李黎波;罗荣城;罗宇玲;廖旺军;缪景霞;张志峰 刊期: 2008年第04期

  • 影响高危新生儿HBV慢性感染的相关因素分析

    目的 探讨影响高危新生儿HBV慢性感染的相关因素.方法 采用前瞻性和回顾性相结合的方法收集106份高危新生儿资料,其中HBV慢性感染者34例.对所有数据应用Logistic回归分析方法进行统计分析.结果 孕妇的年龄、妊娠次数、HBeAg、分娩方式、父亲HBV感染、喂养方式等变量未进入新生儿慢性HBV感染统计学方程:孕妇的HBV DNA、新生儿免疫接种方法是影响新生儿慢性HBV感染方程的两个主要变量并有统计学意义.结论 孕妇高水平HBV DNA是新生儿慢性HBV感染的危险因素,主动+被动免疫是新生儿慢性HBV感染的保护因素之一.

    作者:周冬生;唐慧珠;杨刚;蒋就喜 刊期: 2008年第04期

  • 大黄联合乌司他丁治疗重症急性胰腺炎的研究

    目的 探讨早期大黄联合应用乌司他丁治疗重症急性胰腺炎患者的疗效及其对血清中细胞因子IL-6、IL-8水平的影响.方法 将来自本院住院的患者(57例)分成标准的常规治疗组(18例)、乌司他丁治疗组(19例)及乌司他丁+大黄治疗组(20例),将本院门诊体检的健康者(16例)作为空白对照.采用放射免疫学法测定其外周血清中IL-6、IL-8水平,并评价各治疗组的病死率、治疗有效率、腹痛腹胀缓解时间和平均住院时间.结果 重症急性胰腺炎早期上述细胞因子在患者血清中水平明显升高,经治疗5d后.存活者各组的上述细胞因子水平下降,前后比较差异有统计学意义(P<0.01).大黄联用乌司他丁治疗后存活者的腹痛腹胀缓解时间、平均住院时间较其它两组缩短,治疗有效率增高(P<0.05),但3种治疗方法的病死率差异无统计学意义(P>0.05);机体细胞因子IL-6、IL-8水平迅速下降,较常规治疗及乌司他丁治疗组下降水平更明显,结果相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 早期大黄联用乌司他丁治疗重症急性胰腺炎患者,有利于提高治疗效果.

    作者:郑通标;黄冠珠;彭海峰;戴璟瑜;唐滔 刊期: 2008年第04期

  • pHsa-m122真核表达载体的构建及其表达活性的鉴定

    目的 构建肝脏特异性的微RNA-miR-122真核细胞表达载体并对其表达活性进行鉴定.方法 经PCR从人基因组DNA中扩增肝脏特异性的微RNA-miR-122的前体序列,引入酶切位点和Poly T转录终止序列,将其插入siRNA专用真核表达载体pSuper中.将构建载体进行酶切、测序鉴定,再通过共转染含miR-122靶序列的GFP表达质粒后,经荧光显微镜和流式细胞仪及Western Blot检测,鉴定载体功能性表达.结果 miR-122的前体序列成功地克隆到真核表达载体pSuper上.且可表达出具有生物活性的miR-122,将该真核表达载体命名为pHsa-m122.结论 成功构建miR-122真核表达载体pHsa-m122,有助于进一步研究miR-122在肝炎病毒复制及肝癌形成中的作用.

    作者:陈姗姗;余冰;倪明;吕婷婷;张小勇;江敏;陆蒙吉 刊期: 2008年第04期

  • 血清NT-proBNP在高血压病患者中的表达及其临床意义

    目的 测定高血压病患者血清N端前体脑钠肽(NT-proBNP)的浓度变化,并探讨其临床意义.方法 采用电化学发光免疫试验(ECLIA)测定119例高血压患者及50名健康体检者的血清NT-proBNP浓度,超声心动图测定左室射血分数(LVEF)、左心室质量指数(LVMI)、舒张早期速度峰值(E)/晚期速度峰值(A)比值,比较不同NYHA、LVEF、LVMl分级下NT-proBNP水平的差异,并分析它们之间的关系;绘制受试者工作特性(ROC)曲线,计算ROC曲线下面积(AUCROC).结果 高血压病患者的血清LgNT-proBNP水平为3.40,明显高于正常对照组的1.42(P<0.001),不同NYHA、LVEF和LVMI分组下的血清NT-proBNP浓度差异均有统计学意义(P<0.001).NT-proBNP诊断高血压患者心衰的AUCROC为0.863.多变量相关分析表明,血清NT-proBNP浓度与NYHA分级、LVMI、体重指数(BMI)之间具有良好的正相关性(r=0.581,P<0.001,r=0.437,P<0.001及r=0.352,P<0.001),与LVEF分级、E/A比值之间呈良好的负相关关系(r=-0.361,P<0.001和r=-0.626,P<0.001).Iogistic回归分析显示.NT-proBNP是高血压病患者发生左心室肥厚(LVH)强的预测因子(HR=3.392,P<0.01),并与患者的临床治疗结局密切相关.结论 高血压病患者血清NT-pmBNP水平随着心力衰竭程度的增加而升高,可用来评价患者的心功能状况,且与临床预后关系密切.

    作者:杨春莉;裘宇容;周芳;冯平峰;陈宇 刊期: 2008年第04期

  • 副流感病毒核衣壳蛋白的基因克隆、原核表达与多克隆抗体制备

    目的 表达Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白,为制备抗体作前期工作.方法 从分离培养的Ⅱ型副流感病毒标本中RT-PCR扩增出核衣壳蛋白基因,Nde Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切PCR产物,定向连接到原核表达载体pQE2中,得到重组表达质粒pQEHpI2NP,重组表达质粒进行DNA测序鉴定,转化大肠杆菌BL21(DE3).IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的 蛋白的表达.利用Ni-NTA agarose纯化带6个组氨酸标记的重组蛋白,重组蛋白免疫小鼠,制备抗Hpl2NP多抗,Hep-2细胞培养的Ⅱ型副流感病毒制备可溶性抗原.Western-blot分析.结果 构建了表达重组质粒pQE2_Hpl2NP,测序鉴定了克隆序列的准确性,在大肠杆菌中成功地表达并纯化得到重组核衣壳蛋白.经Western-blot证实,重组蛋白免疫的小鼠血清与细胞培养的Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白有特异性反应.结论 成功表达了Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白,并制备了抗Hpl2NP多抗.

    作者:林斌;田新贵;唐启慧;王长兵;游爱萍;周荣 刊期: 2008年第04期

  • 河南省永城市2006年疟疾暴发疫情流行病学分析

    目的 对河南省永城市2006年疟疾暴发情况进行流行病学分析,以探讨控制暴发的措施.方法 收集河南省永城市2006年疟疾报告、个案调查、发热病人血检、暴发点漏报调查及年终全民普查等资料进行描述性流行病学分析.结果 河南省永城市2006年发病2889例,发病率为222.7/10万,较上年的51.9/10万上升3.3倍.病例主要分布在马桥镇、李寨乡、新桥乡和双桥乡4个乡镇,共发病1825例,平均发病率为1067.3/10万,是永城市发病率的4.8倍,而发病数占永城市发病总数的63.2%.这36个暴发点集中在与安徽省交界的上述4个乡镇,共发病1265例,占4个乡镇发病总数的69_3%,平均发病率为1.8%,其中李寨乡的彭庄村发病43人,发病率达4.0%.分析暴发点的1265例患者,男女性别比为1:1.36(730/535),年龄小的4个月,大的92岁,其中15岁以下儿童占23.3%(295/1265),5岁以下儿童占2.8%(35/1265);农民和学生发病分别占发病总数的73.4%(928/1265)和23.3%(294/1265).暴发主要在8月下旬到10月上旬,出现31个暴发点,占暴发点总数的86%.暴发点调查漏报率为5%.年终全民普查发现417例疑似疟疾病例.结论 永城市2006年出现疟疾暴发,疟疾疫情形势严峻.

    作者:周广超;张红卫;苏云普;周水森;黄芳 刊期: 2008年第04期

  • 输尿管镜联合硅胶尿管在治疗尿道球部损伤中的应用

    目的 探讨经尿道输尿管镜下行腔内会师术及术后留置硅胶尿管在治疗尿道球部损伤中的临床意义.方法 回顾分析2004年1月至2006年9月本院的20例球部尿道损伤患者,采用局麻或腰麻下行输尿管镜腔内会师术及术中、术后放置硅胶尿管2~3周.结果 20例中16例经尿道输尿管镜下会师成功,4例会师失败后改行开放性尿道吻合术,留置硅胶尿管,无1例并发局部感染,拔管后排尿通畅.随访3~24月,其中1例开放手术者拔管1周后尿流变细,予行5次尿道扩张后维持正常排尿,1例开放手术者并发阴茎勃起功能障碍.结论 输尿管镜下尿道会师术具有手术时间短、操作方便、创伤小的特点,尤其适合于球部尿道部分断裂的患者;而采用硅胶尿管,则更易于插管及可以减少尿路感染及局部瘢痕增生,降低尿道狭窄的发生几率.

    作者:胡祎民;倪梁朝;吴雄辉;李贤新;陈泽波;周锦棠;刘运初 刊期: 2008年第04期

  • 电离辐射影响成纤维细胞基因调控网络的初步研究

    目的 探讨电离辐射影响人成纤维细胞基因表达的转录调控机制,并构建基因与相应转录因子的调控网络.方法 先对前期研究已经获得的差异表达基因进行功能注释,选择结合功能类基因(数量多)进人研究:再用MaxLAPS,TFME和SCOPE 3种软件预测这些基因的转录因子和转录因子结合位点;利用Bibliosphere软件构建转录因子与基因的转录调控网络.结果 获得25条Gene Symbols,基因本体功能注释集中于结合功能(共19条),2种程序预测得到14个相同的转录因子,得分高的6个转录因子结合位点对应的转录因子与预测的基本一致.按照高水平标准构建的转录调控网络,显示CASPASE-3位于网络的核心.结论 电离辐射很可能经转录因子TP53介导CASPASE-3激活而致人成纤维细胞凋亡.

    作者:廖之君;马文丽;梁爽;陈霞;商涛;董云巧;郑文岭 刊期: 2008年第04期

  • 长托宁治疗有机磷农药中毒的临床研究

    目的 探讨长托宁在治疗有机磷农药中毒中的作用.方法 将急性有机磷农药中毒患者随机分为长托宁试验组和阿托品对照组,采用推荐剂量按轻、中、重组治疗,严密观察用药后M样症状、N样症状、中枢神经系统症状持续时间,阿托品和长托宁用量的总量和次数的变化以及阿托品化时间及治愈时间的变化.结果 长托宁试验组,重度患者M样症状与中枢神经系统症状消失时间明显缩短(P<0.01),用药总量和用药次数明显减少(P<0.01),阿托品化时间及治愈时间明显缩短(P<0.01).结论 长托宁治疗有机磷农药中毒明显优于阿托品.

    作者:邱朝霞;孙远;张先杰;罗永彪;罗志敏;王海斌;陈宇祥 刊期: 2008年第04期

  • 低钾性周期性瘫痪生化指标变化分析及治疗对策

    目的 探讨生化指标变化在低钾性周期性瘫痪(hypokalemic periodic paralysis,HOPP)中的发生机制、变化规律及治疗对策.方法 病例组33例,病人来诊后,立即采静脉血检验血钾、血磷、血钠、血氯、血糖和血钙,选择同期其他内科病例33例作为对照组,两组结果进行统计学分析.结果 在HOPP 33例中,生化检测值的变化具有一定规律性,血钾、血磷以降低、严重降低为主,血钾降低占100%,其中严重降低占48.5%;血磷降低占78.8%.其中严重降低占15.2%.血糖、血钠、血氯以升高为主,血糖升高占66.7%,高达24.77mmol/L;血钠升高占75.8%,高达149 mmol/L;血氯升高占39.4%,高达117 mmol/L.各组生化检测构成比与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).血钙大部分在正常范围内约81.8%.与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).各项生化指标检测值水平,血钾、血磷明显降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).血糖、血钠、血氯检测值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).血钙检测值与对照组比较P>0.05,两组患者血钙水平差异无显著性意义.结论 剧烈运动或劳累、酗酒、上呼吸道感染、治疗中应用地塞米松、静滴葡萄糖是导致HOPP发生及生化指标变化的主要诱因,尤其是低磷血症,在临床上应注意监测,及时纠正.上呼吸道感染患者的治疗,应尽量避免使用地塞米松和葡萄糖.

    作者:杨珠江;李春华;赵有春;阮营辉;韩杰辉 刊期: 2008年第04期

  • 临床免疫学和免疫检验实验教学资源网站的建设与应用

    临床免疫学和免疫检验是重要的医学检验基础课程,建设临床免疫学和免疫检验教学资源网站,对提高检验医学教学的质量、提高学生学习的兴趣将有重要的作用.通过网络和多媒体的特性使实验教学更灵活、主动,从而提高实验教学的效率和质量.本文介绍临床免疫学和免疫检验教学资源网站的建设过程中的主要内容及其在实验教学中的应用.

    作者:袁广卿;黄小荣;曹开源;徐霖;骆晓枫 刊期: 2008年第04期

  • 胎盘早剥32例母儿结局分析

    目的 探讨不同临床类型胎盘早剥与病因关系及对母儿结局的影响.方法 回顾性分析我院8年中住院分娩发生胎盘早剥32例患者.结果 胎盘早剥发生率为0.41%,其中Ⅰ度21例(65.62%).Ⅱ度8例(25.00%),Ⅲ度3例(9.38%);宫缩过强、过频及重度子痫前期为其主要病因,各占40.63%、15.62%;产前B超诊断符合率为83.33%;剖宫产率为59.38%;产后出血11例(34.38%),子宫胎盘卒中5例(15.62%),失血性休克、DIC合并子宫次全切除术3例(9.38%);围生儿死亡5例,病死率为15.62%.结论 胎盘早剥发生临床类型与病因密切相关,不同临床类型早剥导致不同的母儿结局.

    作者:张小兰;陈晓艳 刊期: 2008年第04期

  • 抗菌肽的研究进展

    与传统抗生素相比,抗菌肽通过改变细菌的膜结构杀死细菌,具有低抗原性,易于合成,作用迅速,不易产生耐药性等优点.本文对抗菌肽的提取、应用等研究作一综述.

    作者:司菡;陆家海 刊期: 2008年第04期

  • 抗HSPC238单克隆抗体的制备和初步鉴定

    目的 制备抗HSPC238的单克隆抗体,为HSPC238的功能研究奠定基础.方法 以纯化的重组蛋白HSPC238为抗原,免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备HSPC238单克隆抗体,并用问接ELISA法和Westem-blot法对单克隆抗体的特性进行鉴定.结果 成功建立两株稳定分泌抗HSPC238的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为E001和E002.ELISA检测抗HSPC238单克隆抗体的腹水效价为1:12800和1:25600.两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为Ig异G1.通过Western-blot实验证实,两株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性HSPC238蛋白.结论 成功制备了两株效价高、特异性好的抗HSPC238单克隆抗体,制备的抗HSPC238单克隆抗体可用于HSPC238蛋白的鉴定,为HSPC238蛋白的生物学功能研究奠定了基础.

    作者:黄湘;王穗海;潘华政;赵玉梅;牟霞;李明 刊期: 2008年第04期

  • 白纹伊蚊诱蚊诱卵器应用效果的现场研究

    目的 评价白纹伊蚊诱蚊诱卵器现场应用效果.方法 在地下停车场布放诱蚊诱卵器,7d后收回,连续3次.结果 每杯诱蚊数在0~8只之间.90.80%的诱蚊诱卵器进蚊数不超过3只;所有布放的诱蚊诱卵器均没有蚊虫产卵;诱捕的蚊虫以白纹伊蚊为主,占有率为80.17%.其中雌性伊蚊47.42%,雄性伊蚊52.58%;3次试验的平均诱蚊指数为63.22%,平均诱蚊密度指数为(1.98±1.24);布放地点的光照强度和距离下水道的远近对诱蚊结果没有显著影响.结论 诱蚊诱卵器对白纹伊蚊具有较好的诱捕效果,适合用于登革热的常规监测,但在不同环境条件下的应用还需进一步研究.

    作者:于德宪;任旭琦;周文;廖玉学;陈清;俞守义 刊期: 2008年第04期

  • 加味四逆散抗大鼠肝纤维化的实验研究

    目的 探讨加味四逆散抗大鼠肝纤维化的作用.方法 采用二甲基亚硝胺(DMN)致肝纤维化的方法对健康雄性SD大鼠进行造模,以秋水仙碱为阳性对照组.经加味四逆散治疗4周后测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GGT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、透明质酸(HA)及Ⅳ型胶原(CIV)水平,并检测肝组织羟脯氨酸(HyP),同时观察肝组织的病理改变.结果 加味四逆散治疗后,可显著降低血清ALT(P<0.01)、ALP(P<0.01)、GGT(P<0.05)、HA(P<0.01)、C-IV(P<0.05)及肝组织HyP(P<0.01),升高TP(P<0.05)及ALB(P<0.01).肝组织病理切片表明,用药后病理改变明显减轻.结论 加味四逆散对实验性大鼠有明显的抗肝纤维化作用.

    作者:朱彩平;袁冬生;石磊;黄慧芬 刊期: 2008年第04期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会