学术投稿

幽门螺杆菌尿素酶A基因的克隆、表达及其抗原性的鉴定

李妍;宁云山;龙敏;董文其;李明

关键词:幽门螺杆菌, 尿素酶A, 克隆, 基因表达, 抗原性
摘要:目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)标准株NCTC11639尿素酶A(UreaseA,UreA)编码基因的重组质粒,测定、分析其核酸序列,并在E.coli中表达,研究其抗原性.方法应用PCR技术从Hp DNA染色体中扩增UreA编码基因片段,将其克隆至pMD18-T载体上进行序列测定,并与GenBank上公布的其它Hp菌株基因序列进行比较,再将目的基因克隆至表达载体pGEX-4T-1上进行表达和纯化,用Western-blot检测产物的抗原性并用于对24株抗Hp全菌小鼠单克隆抗体的鉴定.结果扩增的UreA基因全长675 bp(登录号为DQ141577),与GenBank上公布的其它Hp菌株的UreA核酸序列的同源性为95%~98%,表达的UreA融合蛋白分子量为52 000,表达产物可被病人血清和全菌免疫的小鼠血清识别,29株抗Hp小鼠单克隆抗体中有4株是针对UreA抗原的.结论重组UreA具有较好的抗原性,为Hp检测试剂和疫苗的研究奠定基础.
热带医学杂志相关文献
  • 樟树花粉泛变应原基因的克隆与序列分析

    目的从樟树花粉中克隆泛变应原基因.方法通过对多个植物泛变应原基因进行序列同源性比对,根据保守区域序列设计简并性引物,利用RT-PCR结合RACE技术对樟树花粉中的泛变应原基因进行克隆.结果从樟树花粉中克隆到一个新的基因.序列分析显示:所克隆到的基因与其它植物的泛变应原肌动蛋白结合蛋白基因有很高的同源性,因此认为该基因为泛致敏原基因,命名为Cin c1.其在GenBank数据库中的登录号为DQ335252.结论采用简并引物从樟树花粉中克隆到一泛变应原基因,为进一步研究该变应原奠定了理论基础.

    作者:宋娟娟;张红云;刘志刚;康敏雄 刊期: 2006年第04期

  • 中山市一起登革热局部爆发的流行病学调查

    目的分析中山市2004年一起登革热爆发的流行病学特征,为制定登革热预防控制措施提供科学依据.方法按登革热诊断标准进行回顾性流行病学调查,使用登革热IgM/IgG快速免疫色谱测试卡对疑似病例血清进行登革热抗体检测,用C6/36细胞对急性期病人血清进行病毒分离.使用布雷图指数(BⅠ)法进行蚊媒密度调查.结果本次疫情流行历时36 d,共发病37例,登革热抗体阳性37例,分离到登革Ⅰ型病毒4株.病例主要集中在城区城乡结合部,男性16例,女性21例,发病年龄小6岁,大63岁,其中10~39岁27例,占72.97%.疫情发生时布雷图指数67.0,经采取以快速杀灭成蚊和清除伊蚊孳生地为主的综合防治措施后,疫情很快得到控制.结论本次疫情是由Ⅰ型登革病毒引起,因早期病例误诊,未及时发现传染源,导致疾病传播.快速灭蚊和清除伊蚊孳生地是控制疫情的有效措施.针对该市的流行因素,今后应继续加强各项控制措施的执行落实,加强可疑病例的监测和杀灭蚊媒的工作,扩大原因不明发热病人血常规监测范围,特别是曾发生疫情的乡镇社区卫生服务站.

    作者:张瑞红;吴海东;周海;吴宝燕;吕海英;夏生林;罗乐;陈秀云 刊期: 2006年第04期

  • 猴血管缺血性脑损伤模型的建立及评价

    目的建立猕猴血管缺血性脑损伤模型,为干细胞移植治疗脑损伤的研究提供实验模型.方法用导管介入法将聚乙稀醇(PVA)栓子输送至大脑中动脉使大脑中动脉分支动脉栓塞,诱发缺血性脑损伤,连续CT扫描观察脑损伤变化和血管栓塞对侧神经功能评定分析缺血性脑损伤后的神经功能变化.结果脑血管栓塞前造影明显可观察到左侧大脑中动脉血管树及其分支分布情况,栓塞后血管造影证实额颞区无血管显示,连续24 h CT扫描发现栓塞后6 h内可见脑细胞水肿,但无明显可见梗死灶.12 h后见额颞叶区梗死灶,24 h可见明显梗死灶,1个月后见梗死灶面积减小,此后1年内梗死面积未见明显变化.行为学观察可见血管栓塞对侧前后肢运动功能严重障碍,1个月内神经功能评分为3~4级,3个月后为3级.结论用大脑中动脉介入法注入PVA栓子,成功建立了血管缺血性脑损伤模型.

    作者:潘兴华;贺斌;庞荣清;唐隆旺;李进领;陈系古 刊期: 2006年第04期

  • IFN-γ联合安珐特在慢性乙肝抗纤维化中的作用

    目的通过观察肝组织病理学指标,评价IFN-γ联合安珐特治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床疗效.方法住院治疗的35例慢性乙肝患者,经肝穿证实病理纤维化程度均在S2以上,随机分组.治疗组22例,用IFN-γ1MU,皮下注射,每日一次,12周后改隔日一次,同时口服安珐特,2粒/次,每日三次,总疗程36周.对照组13例,服用一般护肝药物,疗程36周.治疗后再行肝穿术并做肝组织病理分级分期诊断.结果治疗组治疗后肝组织纤维化明显下降,与治疗前有显著性差异(P<0.05),并与治疗后对照组亦有显著性差异(P<0.05).结论IFN-γ联合安珐特是抗肝纤维化的较好配伍治疗.

    作者:冼建中;唐小平;张复春;易俊卿 刊期: 2006年第04期

  • 雌激素影响卵巢癌细胞系COC1/DDP顺铂耐药的蛋白质双向凝胶电泳图谱分析

    目的顺铂对细胞DNA链作用具有选择性,它对增生活跃的细胞,特别是S期细胞杀伤力强.将雌激素先作用卵巢癌细胞一定时间后再加入顺铂,判断它能否作为促使癌细胞进入顺铂敏感期诱导剂并初步探讨雌激素协同顺铂的作用机制.方法选择人卵巢腺癌上皮细胞系COC1和顺铂耐药系COC1/DDP为研究对象.MTT法先测定预先加入雌激素16 h对10 μmol/L顺铂作用下的卵巢癌细胞生长影响.然后利用双向凝胶电泳分离预先加入50 μmol/L雌激素16 h与10 μmol/L顺铂共同培养COC1/DDP和COC1细胞48 h的总蛋白,银染显色,Imagemaster图像分析系统分析,从胶中选取部份分离较好的差异蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析获取肽质量指纹图谱,Peptident软件搜索数据库鉴定蛋白质.结果雌激素促进顺铂对卵巢癌细胞系COC1和COC1/DDP生长有抑制作用.获取了重复性和分辨率较好的50 μmol/L雌激素与10 μmol/L顺铂共同培养的COC1和COC1/DDP细胞双向凝胶电泳图谱.质谱分析了5个蛋白质点,获取了5张肽质量指纹图谱.4个可能参与雌激素促进顺铂效应蛋白质:COC1中有锌指蛋白多型2和FK506结合蛋白5;COC1/DDP中为微管β链蛋白和胞核包含颉酪肽蛋白相似蛋白.结论雌激素增加了卵巢癌细胞系COC1/DDP顺铂敏感性.雌激素协同顺铂抑制COC1和COC1/DDP细胞生长中出现差异蛋白质对理解雌激素提高卵巢癌顺铂敏感性机制提供了有价值的信息.

    作者:刘晓英;符淳 刊期: 2006年第04期

  • 人巨细胞病毒负荷量对细胞病变的影响

    目的探讨感染后人巨细胞病毒负荷量与细胞病变的关系.方法采用不同滴定度的人巨细胞病毒感染传代培养的人胚肺成纤维细胞,建立人巨细胞病毒梯度感染细胞模型,荧光定量PCR法测定感染细胞内及其维持液病毒DNA量,光镜观察致细胞病变作用,电镜检查其超微结构的改变.结果人巨细胞病毒感染后,细胞内与其维持液病毒DNA量成正相关(r=0.83,P<0.01).当细胞内病毒DNA量>105GE/106HEL时,病毒开始自细胞内释放;当维持液病毒DNA量>103GE/ml时,细胞出现病变.结论人巨细胞病毒感染后,受染细胞排放病毒致细胞外,且细胞内外病毒负荷量成正相关.细胞病变的发生情况与细胞内及其周围环境的病毒负荷量均密切相关.

    作者:左约维;赵杨;陈敦金;闻良珍 刊期: 2006年第04期

  • 解脲支原体和沙眼衣原体感染与女性不孕症发生的相关性分析

    目的探讨解脲支原体(Uu)、沙眼衣原体(Ct)感染与女性不孕症发生的相关性.方法98例女性不孕症患者作为观察组,79例有正常生育史育龄妇女作为对照组.取宫颈分泌物采用PCR方法检测两组标本中Uu和Ct的感染情况.结果不孕症组宫颈分泌物中Uu阳性率为52.04%(51/98),Ct 31.60%(31/98),Uu和Ct混合阳性率为15.30%(15/98);对照组中Uu阳性率为11.40%(9/79),Ct阳性率为6.33%(5/79),Uu和Ct混合阳性率为0.两组间比较差异均有极显著性(P<0.01).结论Uu和Ct感染与女性不孕症发生有密切关系.

    作者:林向容;魏萍;陈晓燕 刊期: 2006年第04期

  • 肺表面活性物质防治支气管肺发育不良的临床研究

    目的探讨肺表面活性物质(PS)对支气管肺发育不良(BPD)的预防和治疗意义.方法将20例早产儿呼吸窘迫综合征(RDS)机械通气的患儿按是否早期使用PS分两组,观察病情的转归及BPD的发生情况,并对8例BPD患者按是否使用PS治疗分两组,观察两组呼吸机依赖例数及转归,分析和对比使用PS前后的临床表现、动脉血气.结果早期使用PS组机械通气的时间及BPD的发生率均较对照组有显著差异(P<0.05),且BPD患者使用PS后的动脉血气、氧和指数较使用前明显改善,差异显著(P<0.05,P<0.01).结论PS可以改善肺的顺应性及氧和功能,对BPD的预防和治疗具有积极的意义.

    作者:乔萍;严越秀;莫伟雄;梁星群;汤鸣;肖力;汪江萍 刊期: 2006年第04期

  • 临床医学专业人体寄生虫学教学改革探讨

    目的探索培养二十一世纪需要的高素质医学人才的寄生虫学教学模式.方法从专业教学与思想教育结合、教学内容与寄生虫病流行情况及日常生活结合、传统教学方法与现代教学手段结合等方面入手,对本校2001~2003级临床医学本科生的人体寄生虫学课教学进行了改革.结果学生反映,结合专业教学开展思想教育,摆事实,讲道理,有说服力;结合寄生虫病流行情况及人们生活方式等变化,优化教学内容,所授的内容易接受、印象深;将传统教学方式如挂图、彩色图谱与多媒体等现代教学手段结合,利于掌握教学内容,提高了教学效果.结论培养高素质医学人才的教学改革取得了一定效果,是一种较好的教学模式.

    作者:王光西;王敏;陈文碧 刊期: 2006年第04期

  • 重症监护病房细菌感染连续监测和分析

    目的监测近年来医院中心重症监护病房(ICU)各种较常见的细菌感染的发生情况和耐药变迁.方法从2002年7月~2004年12月我院中心重症监护病房分离到的细菌,以美国CLSI/NCCLS文件为执行标准,采用K-B法作体外药敏分析.结果共分离临床细菌647株,革兰阴性杆菌占56.9%(368/647),革兰阳性菌占34.0%(220/647),非发酵菌占革兰阴性杆菌的71.4%(263/368).常见的细菌有凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、黄杆菌属、铜绿假单胞等.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离率有下降趋势,占革兰阴性杆菌的10.0%(35/368)和8.0%(30/368),产超广谱β内酰胺酶的大肠埃希菌占56.0%,肺炎克雷伯菌占77.0%.肠杆菌科细菌对亚胺培南耐药率低;铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药率为54.4%.结论ICU病房革兰阴性杆菌仍为主要病原菌,非发酵菌感染已成为较常见病原菌,多重耐药现象严重.强调根据药敏试验结果合理使用抗生素和控制感染.

    作者:肖柯玲;陈耀棠;魏衍超;陈文捷 刊期: 2006年第04期

  • 妊娠高血压疾病与TNF水平和TNF-βG252A基因多态性的相关性研究

    目的研究肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)水平和TNF-β G252A基因多态性与妊娠高血压疾病的关系.方法用放射酶联免疫法测定54例妊娠高血压疾病患者和60例健康对照者血清TNF水平,聚合酶链反应扩增TNF-β第一内含子含有1069位核苷酸A→G多态位点的基因片段,Nco Ⅰ内切酶进行限制性酶切反应.结果54例妊娠高血压疾病患者及60例正常对照者中TNF-β基因型及等位基因频率均无显著性差异(P>0.05),而血浆TNF水平妊娠高血压疾病组为(1.28±0.42)μg/L,显著高于对照组的(0.32±0.21)μg/L,两组之间比较差异有显著性意义(P<0.05).结论血清TNF水平显著升高提示炎性反应在妊娠高血压疾病病程中有重要作用,TNF-β G252A基因多态性与妊娠高血压疾病无关联.

    作者:何慧仪;陈盛强;柳息洪 刊期: 2006年第04期

  • 一宗预防接种后不良事件的调查

    目的阐明群体性预防接种反应与季节性呼吸道传染病的判别,为处理群发性事件提供借鉴.方法开展流行病学调查,进行临床诊断与血清学(病原学)分离鉴定,病原学采用MDCK法进行病毒分离.结果流行病学调查显示接种甲型肝炎疫苗与否和发病率无相关关系;患者临床症状、体征类似上呼吸道感染;从24例患者中分离到A型流感病毒8株,分离阳性率为33.3%.结论该宗群体性发热是流行性感冒的局部小流行,而非接种甲型肝炎疫苗反应.从而排除了一起接种甲型肝炎疫苗偶合群体性热病引起的纠纷,为今后鉴别预防接种后不良事件提供参考,消除该事件对计划免疫/扩大免疫接种的负面影响.

    作者:黄建晖;郭昕东;黄建云;林文生;黄少珊;李盛满;王小平;林泽群 刊期: 2006年第04期

  • 年轻妇女宫颈癌与HPV感染的关系

    目的探讨35岁以下年轻妇女宫颈癌的发生与人乳头状瘤病毒(HPV)感染的关系.方法对1996年10月至2005年11月在我院就诊的96例宫颈癌患者的发病年龄进行分析,并对其肿瘤组织或宫颈分泌物进行HPV检测.结果35岁以下年轻妇女宫颈癌与同期宫颈癌的构成比从1996年的11%上升至2005年的42%.≤35岁宫颈癌患者的HPV阳性率为65%,较>35岁者明显升高,后者为32%.宫颈癌患者的平均发病年龄逐年减小,HPV感染率逐渐升高.结论35岁以下年轻妇女宫颈癌的发病率呈上升趋势,与HPV感染有相关性.故应加强对HPV感染高危人群的监测、随访,做好宫颈癌的早期诊断和治疗.

    作者:梁莉;陈萍;陈晓 刊期: 2006年第04期

  • SRAP分子标记及其应用概述

    序列相关扩增多态性(SRAP)是近年来发展起来的一种新型分子标记系统,它具有简便、中等产量、高共显性、重复性、易于分离条带及测序等优点,大的特点是它针对的是基因的阅读框区域(ORFs).SRAP标记中,引物的设计是关键,它是基于两个引物的扩增,上游引物长17 bp,对外显子进行特异扩增,下游引物长18 bp,特异扩增的是内含子及启动子区域,由于个体不同以及物种之间的内含子、启动子之间间隔长度不同而产生多态性.两个引物均由5'端14~15 bp的核心序列,和3'端3个选择性碱基组成,其中核心序列又由长为10~11 bp的无特异性的填充序列以及CCGG(正向引物中),或AATT(反向引物中)组成.且正向和反向引物中的填充序列必须不同.扩增的过程采用复性变温法,前5个循环复性温度为35℃,后30~35个循环则为50℃,扩增后的DNA片段可用聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳分离,EB、银染或放射自显影检测.目前SRAP已开始在植物种质资源鉴定评价、种缘进化关系、遗传图谱构建、基因定位、重要性状标记以及比较基因组学方面得到成功应用.

    作者:李巧燕;林瑞庆;朱兴全 刊期: 2006年第04期

  • 广州管圆线虫特异性rRNA基因的PCR扩增

    目的探讨核酸诊断方法用于广州管圆线虫诊断的可能性.方法根据广州管圆线虫成虫rRNA大亚基基因部分序列设计引物,对广州管圆线虫成虫DNA进行PCR扩增,并对该方法的敏感性和特异性进行评价.结果经琼脂糖凝胶电泳和DNA序列测定证实:PCR产物的大小和序列结构与待扩增的广州管圆线虫目的基因完全一致.结论本方法有较好的敏感性和特异性,为将其用于人体广州管圆线虫病的诊断奠定了基础.

    作者:朱慧儿;周君华;李明月;陈代雄;张雪雁;李小敏 刊期: 2006年第04期

  • 腹腔内注射内皮素-1对硫酸镁引起腹痛的影响

    目的探讨腹腔内注射内皮素-1对硫酸镁引起腹痛的影响.方法对照组小鼠腹腔注射生理盐水0.2ml,实验组小鼠注射0.625μg ET-1,观察其行为学并记录扭体反应情况,30 min后两组均注射0.05 mol/L硫酸镁0.2 ml,并进行行为学观察.结果对照组腹腔注射硫酸镁后扭体次数为(4.5±3.7),实验组注射ET-1后的扭体次数为(2.7±2.6),注射硫酸镁后的扭体次数(7.2±5.4),与对照组相比差异显著(P<0.05).实验组注射ET-1后的扭体次数与注射硫酸镁后的扭体次数没有相关关系(P>0.5).结论ET-1可增加硫酸镁引起的扭体次数,但ET-1引起的扭体次数与随后硫酸镁引起的扭体次数并没有相关关系.

    作者:洪迅;梁杰贤;季文进;郭中敏 刊期: 2006年第04期

  • 清远市石灰岩地区农村居民高血压流行病学研究

    目的探讨清远市石灰岩地区农村居民高血压的流行趋势、主要危险因素及高血压患者知晓率、治疗率、控制率.方法采用分层随机抽样法,抽取清远市石灰岩地区780名18~69岁农村居民进行高血压流行特征及相关危险因素调查,应用EPI-Info 2002和SPSS11.0进行数据录入和统计分析.结果清远市石灰岩地区农村居民高血压总患病率为17.69%,标化患病率为14.01%.高血压患病率随年龄增长呈增高趋势,农村居民高血压危险因素为饮酒、吸烟、劳动强度大、精神心理因素(如精神紧张)、高体质指数(BMI)、高腰臀比(WHR)等.清远市石灰岩地区农村居民高血压患者知晓率、治疗率、控制率分别为25.36%,21.74%,8.80%.结论清远市石灰岩地区农村居民高血压患病率高、高血压防治知识匮乏、患者治疗率、控制率低的现状已对居民健康构成威胁,因此,应采取相应的干预措施预防控制农村居民高血压的发生.

    作者:叶浩风;刘晓明;苏耀安;李昌海;朱永坚;欧亮;孙小康 刊期: 2006年第04期

  • 噬菌体随机肽库技术及其应用

    噬菌体随机肽库是噬菌体呈现技术的重要分支,是应用噬菌体表面呈现技术将外源编码多肽基因随机克隆入噬菌体载体中而构建的噬菌体肽库.近年来,噬菌体随机肽库已成功地应用于基因治疗、表位研究、细胞信号传导与药物开发、寄生虫病研究、肿瘤导向治疗等领域,显示了广阔的应用前景.本文就针对以上几个方面做一综述.

    作者:杨海燕;李妍;董文其 刊期: 2006年第04期

  • RNAi技术及在乙型肝炎研究中的应用

    RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来发现的一种转录后基因沉默机制,能抑制特定基因的表达,是研究基因功能的有力工具,由于具有高效、特异、操作简单等特点,在乙型肝炎的研究中也得到了广泛的重视和应用.

    作者:唐永玮;吴晓蔓 刊期: 2006年第04期

  • 中性粒细胞体外杀伤旋毛虫肌幼虫的实验观察

    目的探讨感染旋毛虫大鼠中性粒细胞(Neu)在免疫血清协助下对旋毛虫肌幼虫的杀伤作用.方法采用体外CO2培养法,按分组设计在96孔细胞培养板的板孔中加入Wistar雄性大鼠血液中的Neu、旋毛虫肌幼虫、血清(对照血清或经不同条件处理的血清)及含有10%灭活小牛血清的R/MINI-1640培养液,连续培养2 d.显微镜下,在12、24、36、48 h等时相观察大鼠Neu、免疫血清及补体对旋毛虫肌幼虫的影响.结果无论是感染鼠或正常鼠的单纯Neu或正常血清对旋毛虫肌幼虫均无杀伤作用.在免疫血清及补体参与下,Neu对幼虫的杀伤作用明显增强,同时灭活补体和IgE与仅灭活补体的免疫血清效果相似.结论在体外培养的条件下,感染鼠或正常鼠的单纯Neu或正常血清均无杀伤旋毛虫肌幼虫的作用,感染旋毛虫大鼠的Neu在免疫血清及补体的协助下对旋毛虫肌幼虫具有较强的杀伤作用.免疫血清在灭活IgE前后对Neu杀伤靶虫作用不明显,说明Neu介导的ADCC效应主要依赖的是IgG,并非IgE.

    作者:闫玉文;李鹏;邢杰;马平;张旭 刊期: 2006年第04期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会