学术投稿

P43基因在造血干细胞移植患者弓形虫感染诊断中的应用

周永安;余新炳;徐劲;郑焕钦;吴忠道;陈观今;乔振华

关键词:造血干细胞移植, 弓形虫, PCR, ELISA, P43基因
摘要:目的建立快速、特异、敏感诊断造血干细胞移植(HSCT)患者弓形虫感染情况的DNA检测方法,并讨论其临床意义.方法利用ELISA和PCR方法对56例造血干细胞移植受者及20例正常供者同时进行检测.结果检测造血干细胞移植受者56例,PCR和ELISA方法检测弓形虫P43基因片段和其抗原,阳性各为10及7例;其阳性率分别为17.86%和14.3%.作为阴性对照的20名正常者同时进行弓形虫的检测,其结果均为阴性.结论体外扩增弓形虫P43基因的方法具有准确、快速、特异和敏感的优点,可以作为造血干细胞移植患者弓形虫感染诊断的有价值的方法之一.
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    作者:吴旭光;潘波;林荣幸;朱泰华;阮峰;吴军 刊期: 2003年第01期

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    作者:陈海峰;郑焕钦;徐劲;高世同;李华文;郭虹;周永安;陈观今 刊期: 2003年第01期

  • 丙型肝炎病毒包膜蛋白E2与CD81关系的研究进展

    丙型肝炎病毒(HCV)是慢性肝炎的主要病因之一,其基因组为单股正链RNA,包膜蛋白E2在HCV入侵宿主细胞中起重要作用,CD81可能是HCV的受体或共同受体,进一步研究CD81和HCV E2的相互作用,有助于HCV的治疗和预防.

    作者:代志琰;李刚 刊期: 2003年第01期

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    目的观察肝炎患者中抗凝剂与全血比例对PTA测定值的影响.方法 36例病毒性肝炎患者血液与抗凝剂分别按9∶1和6∶1混合,测定凝血酶原活动度(PTA).结果在不同临床类型的肝炎患者中,抗凝剂与全血比例为1∶9时测出的PTA与抗凝剂与全血比例为1∶6时测出的PTA值有显著性差异.在轻度慢性肝炎组分别为95±15.2和54±5.6;在中、重度慢性肝炎组分别为54±6.1和37±3.5;在重型肝炎组分别为28±6.4和18±7.2.结论抗凝剂与全血比例为1∶9时测出的PTA值比1∶6时测出的PTA值为高,与临床符合率更好.

    作者:梅咏予;姚春斓;赵志新;张晓红;李刚;杨林 刊期: 2003年第01期

  • P43基因在造血干细胞移植患者弓形虫感染诊断中的应用

    目的建立快速、特异、敏感诊断造血干细胞移植(HSCT)患者弓形虫感染情况的DNA检测方法,并讨论其临床意义.方法利用ELISA和PCR方法对56例造血干细胞移植受者及20例正常供者同时进行检测.结果检测造血干细胞移植受者56例,PCR和ELISA方法检测弓形虫P43基因片段和其抗原,阳性各为10及7例;其阳性率分别为17.86%和14.3%.作为阴性对照的20名正常者同时进行弓形虫的检测,其结果均为阴性.结论体外扩增弓形虫P43基因的方法具有准确、快速、特异和敏感的优点,可以作为造血干细胞移植患者弓形虫感染诊断的有价值的方法之一.

    作者:周永安;余新炳;徐劲;郑焕钦;吴忠道;陈观今;乔振华 刊期: 2003年第01期

  • 华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库的构建及鉴定

    目的构建华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础.方法提取华支睾吸虫囊蚴总RNA;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒并按其操作方法进行,进行反转录合成双链cDNA.PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后,进行SfiⅠ酶切;用ChromaSpin 400柱将酶切产物进行分级分离,经1.1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收0.4~4kb的组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库滴度和重组效率后,进行文库的扩增,并测定扩增文库的滴度;随机挑取9个噬菌斑,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量.结果未扩增文库滴度达7.0×107pfu/ml,扩增文库滴度达2.5×108pfu/ml;用载体两端的引物进行PCR鉴定,结果显示:扩增文库中,含1kb以上的占30%左右,1kb~500bp占69%.结论已成功地获得一高质量的华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库.

    作者:陈守义;余新炳;徐劲;虢国泰;蒋忠军;吴德;胡旭初;李军涛 刊期: 2003年第01期

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    作者:高雨藩;任文锋;郭荣同 刊期: 2003年第01期

  • 细粒棘球蚴Eg95全长基因的克隆与在甲醇酵母中的表达

    目的了解我国新疆细粒棘球绦虫表膜蛋白Eg95的全长基因结构及尝试其在甲醇酵母中表达.方法PCR从细粒棘球蚴头节DNA中扩增含有全长编码区序列(cds)的基因,克隆到T载体中测序.再亚克隆到pMETαA中,构建不带6个组氨酸标签的重组质粒,转化甲醇酵母,分析Eg95全长基因的表达.结果成功扩增了细粒棘球蚴绦虫1262bp的Eg95全长基因,含有两个内含子,外显子核苷酸序列与Genbank中细粒棘球绦虫Eg95 cds完全一致,但扩增的基因与已知的其他Eg95全长基因存在差别.1μg重组质粒的表达盒转化甲醇酵母PMD16,获得了Eg95基因重组工程酵母10个,其中非同源重组子3个.甲醇诱导非同源重组酵母特异表达出了分子量约为17kDa与Eg95cds编码蛋白接近的蛋白.酵母培养上清SDS-PAGE未见该蛋白条带出现,表达的蛋白可能主要位于酵母表面.结论克隆到Eg95属于一个基因家族的成员之一,其基因编码区高度保守,含有内含子的全长基因同样可在酵母中进行表达.

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    作者:赖延东;郑小英;黄炯烈;詹希美 刊期: 2003年第01期

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