张竞之；邓波；江小梨；张双伟；蔡敏；刘彬
目的:基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌(NPC)细胞株,并对该细胞株的增殖特性进行分析.方法:采用RT-PCR及Western blot检测永生化鼻咽黏膜细胞系NP-69及不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z和C666-1中SETD2的表达情况,筛选出SETD2高表达细胞系CNE1.应用CRISPR/Cas9技术敲除CNE1细胞中的SETD2基因,筛选SETD2稳定敲除细胞株.采用CCK-8和平板集落形成实验分析SETD2基因敲除前后CNE1细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达.结果:与NP-69细胞相比,随着细胞分化程度的降低,SETD2在CNE1、CNE2Z和C666-1细胞中的表达逐渐下降(P<0.01).基于CRISPR/Cas9方法成功地从15个转染了小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)的CNE1细胞单克隆中筛选出2个SETD2稳定敲除的细胞株CNE1-SETD2-KO-#5和#9.CCK-8及平板集落形成实验结果证实,相对于CNE1-WT细胞,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞的增殖能力增强(P<0.05);流式细胞术分析表明,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞G1期减少而G2/M和S期均增加(P<0.05);Western blot证实,SETD2敲除后增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(cyclin D1)、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)和CDK4表达增加,p21表达减少(P<0.05).结论:基于CRISPR/Ca9技术成功构建SETD2基因敲除NPC细胞株.NPC细胞中SETD2表达与细胞分化程度有关;SETD2表达缺失通过上调cyclin D1、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、CDK2和CDK4并下调p21表达而促进细胞增殖.
作者：王思思；廖晓敏；邵钟铭；袁建玲；封慕茵；哈艳平；李汝佳；申志华；揭伟 刊期： 2018年第12期
目的:研究成纤维细胞生长因子21(FGF-21)对博莱霉素(BLM)诱导的小鼠肺纤维化炎症应答及氧化应激的影响,并探讨其抗肺纤维化的作用机制.方法:建立BLM诱导的小鼠肺纤维化的模型,40只小鼠随机分为对照组、BLM组及FGF-21(1、2及5 mg/kg)+BLM组.Western blot检测I型胶原蛋白(collagen I)、纤连蛋白(fibronectin)和核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达水平.DCFH-DA染色检测活性氧簇(ROS)的生成.ELISA用于测定肺组织炎症因子的表达.试剂盒检测各组小鼠肺组织中的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性和羟脯氨酸(HYP)含量.结果:FGF-21处理显著降低BLM诱导的肺组织炎症介质肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6的表达水平,减少ROS及MDA的含量,并增加抗氧化酶系统SOD和GPx的活性(P<0.05).同时,FGF-21下调BLM诱导的collagen I和fibronectin,并减少TGF-β1及HYP的含量.Nrf2沉默能够逆转FGF-21的抗纤维化作用.结论:FGF-21通过激活Nrf2信号抑制炎症应答进程,减轻氧化损伤,减少细胞外基质沉积,从而缓解BLM诱导的肺纤维化.这可能为肺间质纤维化治疗提供新的靶点.
作者：周淼；李风雷；孙俊波 刊期： 2018年第12期
目的:研究KDM5 B基因在乳腺癌组织中的表达情况,并探讨其表达差异与患者临床病理资料和预后的关系.方法:从肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中收集113例正常乳腺组织和1090例乳腺癌数据集,下载KDM5B mRNA表达谱资料;收集中山大学附属第三医院甲乳外科2015年～2016年乳腺癌切除标本共90例,采用real-time PCR的方法检测乳腺癌及其癌旁组织中KDM5B mRNA的表达量,取中位数分为高表达组与低表达组,分析其与临床资料及病例特征的关系;利用Kaplan-Meier plotter分析KDM5B mRNA表达与乳腺癌患者预后的相关性.结果:KDM5B在乳腺癌中的表达均显著高于正常乳腺组织(P<0.01).在TCGA的乳腺癌数据中,KDM5B的表达与人表皮生长因子受体2(HER2)、雌激素受体(ER)、年龄、病理组织类型及淋巴结转移显著相关(P<0.01),与孕激素受体(PR)、绝经及远处转移无显著相关.在我们收集的乳腺癌样本中,KDM5B的表达与HER2、年龄及淋巴结转移显著相关(P<0.05),而与ER、PR、绝经、病理组织类型和远处转移无显著相关.KDM5B表达越高,乳腺癌患者总生存时间(HR=1.39,P=0.005)和无病生存时间(HR=1.32,P<0.001)越短.结论:在乳腺癌组织中KDM5B高表达,且与患者的预后相关;KDM5B的表达与乳腺癌患者HER2表达、年龄和淋巴结转移显著相关.
作者：熊志勇；吴珏堃；林良奕 刊期： 2018年第12期
目的:观察亮蓝G(BBG)对急性一氧化碳中毒(ACMP)引起的大鼠海马组织损伤的影响,探讨配体门控离子通道嘌呤能P2X7受体(P2X7R)在一氧化碳中毒脑损伤中的作用.方法:80只8～10周龄SD大鼠分为对照(control)组、ACMP组、ACMP+BBG组和BBG组.采用腹腔注射CO(100 mL/kg)的方法制备大鼠ACMP模型.检测静脉血中的碳氧血红蛋白(HbCO)浓度来判断CO中毒程度.RT-qPCR检测大鼠海马组织P2X7R的mR-NA表达.干湿称重法检测海马组织水肿程度.ELISA法检测海马组织促炎因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-6的含量.Morris水迷宫实验评价学习记忆能力.HE染色观察海马CA1区细胞形态学改变.结果:与control组(100％)相比,染毒6 h后ACMP组大鼠的存活率降低至55％;海马组织P2X7 R的mRNA表达及促炎因子IL-1β、TNF-α和IL-6的含量均明显增加(P<0.05);含水量升高到80.72％±0.93％;大鼠逃避潜伏期明显延长,在目标象限探索时间明显缩短.值得注意的是,BBG预处理可以明显改善ACMP诱导的这些海马损伤.另外,大鼠染毒后3 d,海马CA1区的神经元排列紊乱稀疏,细胞形态不完整,细胞核深染、固缩.而BBG预处理能够显著改善CA1区的细胞形态.结论:P2X7 R与ACMP诱导的海马损伤相关.BBG能够增加ACMP大鼠的存活率,减少促炎因子的释放,减轻海马水肿,改善学习记忆能力,减轻ACMP引起的CA1区神经元损伤.
作者：杨坤丽；沈慧；李璐；张利彬；李秀娟；魏林郁；黄亚迪；赵红岗；江林华；李东亮 刊期： 2018年第12期
目的:研究传统中药提取物nodosin对人肝细胞癌HepG2细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:将nodosin设置为1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L不同浓度组,作用于HepG2细胞24 h后,用Hoechst 33258染色和电镜观察不同浓度的药物对细胞形态学的影响,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用RT-qPCR检测凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)mRNA的表达,用Western blot检测caspase-3及其前体和活化体的蛋白水平.结果:形态学结果显示,随着用药剂量的增加,细胞皱缩和细胞核偏移越明显,凋亡小体在5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L剂量组明显增多.Apaf-1 mRNA的表达增加,caspase-3及其前体的表达和cleaved caspase-3的蛋白水平随着用药剂量的增加逐渐增加(P<0.01).结论:Nodosin能够诱导HepG2细胞凋亡.该作用可能是通过增加Apaf-1 mRNA的表达继之激活caspase-3实现的.
作者：海广范；张慧；马敬；郭兰青；王海燕 刊期： 2018年第12期
目的:研究紫薯花色苷提取物对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化和高脂血症的作用.方法:将8周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为对照组、高脂饮食组、花色苷低剂量组、花色苷高剂量组和立普妥组,共5组(n=10),除对照组小鼠饲喂普通饲料外,其它4组在饲喂高脂饲料8周后,再给予蒸馏水、紫薯花色苷提取物(1.67 mg·kg-1·d-1和8.35 mg·kg-1·d-1)或立普妥(阿托伐他汀钙,2 mg·kg-1·d-1)灌胃8周.心脏取血检测小鼠血清的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;油红O和HE染色评估主动脉根部斑块面积和肝脏的脂肪变性程度;RT-q PCR方法检测主动脉和肝脏中炎症因子的表达.结果:与对照组比较,高脂饮食组小鼠血清的TC、LDL-C和HDL-C水平明显升高(P<0.01),动脉的斑块面积明显增大(P<0.01),肝脏的脂肪变性明显,白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达增加(P<0.01),而过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)的表达降低(P<0.05);高剂量紫薯花色苷提取物可以明显降低TC、TG和LDL-C水平(P<0.01),减少动脉的斑块面积(P<0.01),减轻肝脏的脂肪变性程度,同时还可以降低IL-1β、IL-6和MCP-1的表达(P<0.05),提高PPAR-α的表达(P<0.05).结论:紫薯花色苷提取物可调节血脂,降低炎症细胞因子表达,从而抑制动脉粥样硬化的发展和高脂血症引起的肝组织脂肪变性.
作者：韦永芳；刘寒英；严艳花；朱柳 刊期： 2018年第12期
目的:研究过表达吞蛋白A2(endophilin A2,EndoA2)对异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导的心肌肥大的影响.方法:取健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、Ad-EndoA2组、ISO模型组及ISO+Ad-EndoA2组,其中Ad-EndoA2组和ISO+Ad-EndoA2组于给药前1 d左心室壁注射Ad-EndoA2腺病毒,假手术组和ISO组注射磷酸缓冲盐溶液,然后分别连续7 d皮下注射生理盐水或ISO.7 d后用小动物超声测定心功能指标,然后处死大鼠,收集心脏,以心脏重量指数、HE染色及胚胎基因表达水平评价心肌肥大情况,Western blot法检测自噬相关蛋白LC3和P62的表达.结果:小动物超声结果显示,与假手术组相比,ISO组大鼠处于心肌肥大代偿期(左室收缩期前壁厚度、左室收缩期后壁厚度、射血分数和短轴缩短率升高,左室收缩内径及心输出量下降,均P<0.05),心脏重量指数、HE染色及RT-qPCR结果也均显示心脏发生了明显肥大(P<0.05),过表达EndoA2可明显减轻ISO诱导的心肌肥大,改善心功能(P<0.05).Western blot结果显示,过表达EndoA2明显逆转ISO引起的自噬水平降低(P<0.05).结论:过表达EndoA2可减轻ISO诱导的大鼠心肌肥大,可能与加强自噬有关.
作者：王昕秋悦；湛青平；刘芸 刊期： 2018年第12期
目的:采用分子模拟技术及细胞实验研究BRAF蛋白在10-姜酚(10-G)抗黑色素瘤中的作用.方法:将10-G(10、20和40μmol/L)刺激人皮肤黑色素瘤A375细胞24 h,采用MTS法和细胞计数检测细胞活力.采用分子对接及分子动力学模拟分析10-G与BRAF蛋白之间的相互关系.采用Western blot技术检测p-BRAF、总BRAF、p-MEK1/2、p-ERK1/2和p-P38的蛋白水平.结果:10-G可剂量依赖性地降低A375细胞活力和数量,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).10-G与野生型BRAF之间的结合能为-7.358 kcal/mol,与V600E突变型的BRAF之间的结合能为-8.255 kcal/mol.分子动力学模拟证实BRAFV600E与10-G之间的结合是稳定的.10-G能显著抑制A375细胞中p-BRAF、p-MEK1/2和p-P38的蛋白水平(P<0.01),对p-ERK1/2的蛋白水平没有影响.结论:10-G能够抑制黑色素瘤细胞的生长,其机制可能与抑制BRAF激活有关.
作者：张竞之；邓波；江小梨；张双伟；蔡敏；刘彬 刊期： 2018年第12期
目的:探讨Ku70对人嗜T淋巴细胞病毒1(HTLV-1)阳性T细胞中HTLV-1病毒蛋白表达的影响.方法:Western blot实验检测不同的HTLV-1阳性T细胞系中Ku70的表达水平;构建Ku70基因沉默siRNA并通过Western blot实验检测其敲减Ku70表达的效率;采用siRNA在HTLV-1阳性的T细胞中敲减Ku70表达后,通过real-time PCR和Western blot实验分别检测HTLV-1病毒蛋白在mRNA和蛋白水平上的表达量,并通过real-time PCR实验检测干扰素和促炎因子的表达量.结果:HTLV-1阳性T细胞系MT2、MT4及C8166中的Ku70均呈高表达;采用siRNA敲减Ku70的表达后,MT2细胞及MT4细胞中的HTLV-1病毒蛋白表达量上升;采用siRNA敲减Ku70的表达后,MT2细胞及MT4细胞中干扰素α、干扰素γ及肿瘤坏死因子α的表达下降.结论:Ku70在HTLV-1阳性T细胞中高表达;在HTLV-1阳性T细胞中,Ku70促进干扰素和促炎因子的表达,抑制HTLV-1病毒蛋白的表达.
作者：宋迪；马玲玲；郭志祥；刘月；崔钰晗；关宇鹤；杨波；王洁 刊期： 2018年第12期
目的:建立分析CD3+、CD4+和CD8+T细胞Vβ亚家族中免疫抑制性受体程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)分子免疫表型的方法,从而了解人体外周血T细胞谱系中PD-1表型细胞的分布频率.方法:收集健康个体(HI)外周血10例,利用抗CD45、CD3、CD4、CD8、PD-1等多色荧光流式单抗,以及T细胞受体(TCR)Vβ谱系试剂盒[IOTest?Beta Mark TCR VβRepertoire Kit,共8管,每一管均为FITC和PE偶联的复合抗体(A～H),每一管复合抗体包含3个TCR Vβ亚家族的抗体],检测T细胞亚群TCR Vβ亚家族中PD-1的分布情况.结果:在10例HI的检测中,CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞亚群中检测的24个TCR Vβ亚家族总和符合试剂盒所提供的Quick Reference Card数据,初步结果显示,HI中CD3+T细胞主要优势TCR谱系是Vβ2、Vβ3、Vβ8、Vβ9、Vβ5.1、Vβ13.1和Vβ13.2;而在CD3+CD4+T细胞中的优势利用主要集中在Vβ2、Vβ3、Vβ8、Vβ9、Vβ5.1和Vβ13.1;在CD3+CD8+T细胞中则主要为Vβ1、Vβ2、Vβ3、Vβ9、Vβ13.1和Vβ13.2等亚家族.进一步分析显示PD-1+细胞在HI的CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞24个TCR Vβ亚家族中均可以检测到,PD-1+细胞在T细胞各亚群中分布频率有个体差异,在CD4+T细胞中,以Vβ5.2+T细胞的分布频率较高,而在CD8+T细胞中,以Vβ11+和Vβ13.6+T细胞的分布频率较高.结论:本项工作利用健康人样本成功建立了多色荧光流式细胞术检测T细胞亚群TCR Vβ谱系中免疫抑制性受体PD-1分子免疫表型的方法,为进一步应用于分析白血病等病人TCR Vβ谱系的免疫抑制特点提供了新方法.
作者：陈少华；黄静颖；谭家雄；陈友纯；钟隽；卢育洪；郁志；李扬秋 刊期： 2018年第12期
目的:探讨白细胞介素17A(IL-17A)对RAW264.7巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响.方法:用不同浓度及的IL-17A处理小鼠RAW264.7细胞6 h或24 h,或用同一浓度IL-17A处理RAW264.7细胞不同时间;采用RT-qPCR及Western blot法检测细胞ABCA1的mRNA和蛋白表达情况;采用NBD-胆固醇法检测细胞胆固醇流出情况;采用油红O染色法测定细胞脂质蓄积情况.结果:与对照组相比,IL-17A可以增加RAW264.7巨噬细胞ABCA1蛋白的表达水平,但不影响ABCA1 mRNA的表达.经IL-17A干预,RAW264.7巨噬细胞内胆固醇向ApoA-1流出增多,同时细胞脂质蓄积显著减少(P<0.01).结论:IL-17A可以增加RAW264.7巨噬细胞ABCA1的表达水平,其机制并不是通过转录水平实现的,这种影响可能与其抗动脉粥样硬化作用有关.
作者：马望歌；周栋；王丽君；刘艳；陈小莉；郭宁；周娟 刊期： 2018年第12期
目的:探讨低压低氧暴露对小鼠海马CA1区神经元树突棘形态及细丝蛋白A表达的影响.方法:6～8周龄C57BL/6雄性小鼠分为常氧暴露7 d组、常氧暴露14 d组、低压低氧暴露7 d组和低压低氧暴露14 d组.低压低氧暴露组置于低压舱模拟6000 m海拔高原进行低压低氧暴露.Golgi染色法观察小鼠海马CA1区树突的分支数,以及基树突棘和顶树突棘长度和密度的变化;Western blot方法检测小鼠海马细丝蛋白A表达水平的变化;免疫组织荧光染色法检测小鼠海马CA1区细丝蛋白A的表达及分布变化.结果:与常氧暴露组相比,低压低氧暴露后,小鼠海马CA1区树突分支数的差异无统计学显著性,但基树突棘和顶树突棘的长度显著增加(P<0.05),密度显著降低(P<0.01).低压低氧暴露后,小鼠海马细丝蛋白A表达水平低于常氧暴露组(P<0.01或P<0.05).免疫组织荧光染色显示细丝蛋白A在小鼠海马CA1区表达,低压低氧暴露后,海马CA1区细丝蛋白A表达水平降低(P<0.05).结论:慢性低压低氧暴露可影响小鼠海马CA1区细丝蛋白A表达,并导致海马CA1区神经元树突棘形态发生改变.
作者：周杨；赵再华；沈学锋；骆文静；曹子鹏 刊期： 2018年第12期
目的:检测程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)在肺纤维化模型中的表达水平及对细胞活力和肺纤维化指标的影响及其机制.方法:Western blot和RT-qPCR检测PDCD4、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原蛋白(COL-I)在人胚肺成纤维细胞系HFL-1组和HFL-1+TGF-β1组的表达水平.将质粒pEZ-M03-PDCD4和空质粒pEZ-M03转染进肌成纤维细胞(MB),应用Western blot检测PDCD4的蛋白表达水平;应用Western blot检测空白对照组、pEZ-M03-PDCD4组、pEZ-M03组和LY294002组PI3K/AKT信号通路相关分子p-AKT和AKT的蛋白水平及周期相关蛋白c-Myc和cyclin D1的表达情况;CCK-8法检测PDCD4对MB活力的影响;羟脯氨酸消化法检测HFL-1细胞和转染后MB上清液羟脯氨酸含量.Western blot检测小鼠模型组与对照组中肺组织PDCD4的表达水平.结果:与HFL-1组比较,HFL-1+TGF-β1组α-SMA和COL-I的mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.01),PDCD4 mRNA表达无明显变化,PDCD4的蛋白表达明显下调(P<0.01).与空白对照组及pEZ-M03组比较,pEZ-M03-PD-CD4组的PDCD4蛋白表达水平明显上调(P<0.05),c-Myc和cyclin D1的蛋白表达都显著减少(P<0.05),细胞活力明显受到抑制(P<0.01),上清液中羟脯氨酸的含量显著减少(P<0.05).与空白对照组相比,pEZ-M03-PDCD4组及LY294002组中的p-AKT蛋白水平显著减少(P<0.05),pEZ-M03组的差异无统计学显著性.在小鼠体内模型实验中,与对照组相比,模型组的PDCD4表达减少(P<0.01).结论:PDCD4在肺纤维化过程中低表达.过表达PDCD4可抑制MB活力,减少羟脯氨酸含量,抑制PI3K/AKT信号通路.
作者：向莱；江涛 刊期： 2018年第12期
目的:探索二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞活力和凋亡的影响及其可能的机制.方法:采用不同浓度(2、5、10、20、40和80 mmol/L)二甲双胍作用于体外培养的MCF-7细胞,MTT法检测细胞的活力.采用2 mmol/L二甲双胍和2.4 mg/L紫杉醇单独或联合处理细胞,并加入一磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)信号转导通路抑制剂compound C.实验分为对照组、二甲双胍组、紫杉醇组、联合组和联合+compound C组;流式细胞术检测细胞的凋亡率,采用RT-qPCR和Western blot法检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA和蛋白表达量,Western blot检测AMPK和P21蛋白的表达量.结果:不同浓度二甲双胍(2、5、10、20、40和80 mmol/L)显著抑制乳腺癌细胞的活力(P<0.05),且具有一定浓度依赖性.与对照组相比,2 mmol/L二甲双胍和2.4 mg/L紫杉醇单独或联合均可显著抑制细胞活力并诱导其凋亡(P<0.05),显著下调Bcl-2水平(P<0.05),上调Bax和caspase-3水平(P<0.05),促进AMPK和P21蛋白表达.联合使用的效果优于单独使用.加入AMPK抑制剂可削弱此作用.结论:二甲双胍联合紫杉醇可抑制乳腺癌MCF-7细胞活力,诱导其凋亡.此作用与激活AMPK信号转导通路并调节细胞凋亡信号通路有关.
作者：梁君伟；方志华；李青山 刊期： 2018年第12期
目的:研究微小RNA-497(miR-497)抑制甲状腺乳头状癌(PTC)细胞活力、侵袭和迁移的作用机制.方法:采用TargetScan 6.0软件预测miR-497的靶基因,通过萤光素酶报告基因检测法、RT-qPCR和Western blot进行靶基因验证,再通过RT-qPCR检测PTC组织中miR-497及其靶基因的表达,并通过基因转染研究miR-497及其靶基因对PTC细胞活力、侵袭和迁移的影响.结果:TargetScan 6.0软件预测、萤光素酶报告基因检测法、RT-qPCR和Western blot均证明AKT3是miR-497的直接靶基因.此外,PTC组织中的AKT3表达水平较正常组织高(P<0.05),且与miR-497表达呈负相关(r=-0.5737,P<0.01).下调AKT3可以抑制PTC细胞的活力、迁移和侵袭,与miR-497过表达在PTC细胞中具有相似的作用.结论:miR-497通过直接靶向调节AKT3抑制甲状腺乳头状癌细胞的活力、侵袭和迁移.
作者：张莉君；叶颖；张遂亮；庄菊花；夏伟 刊期： 2018年第12期
目的:对(+)-2-(1-羟基-4-环己酮)乙基咖啡酸酯(HOEC)在大鼠关节炎模型上进行药效学评价,并利用大鼠全血花生四烯酸(AA)代谢模型,探究引起HOEC对关节炎的非剂量依赖性治疗作用的可能机理.方法:(1)采用大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型,研究3个不同剂量的HOEC对CIA的治疗情况,并用免疫组化方法检测关节组织中胞质磷脂酶A2(cPLA2)、5-脂氧合酶(5-LOX)和环氧合酶2(COX-2)的表达水平;(2)ELISA检测HOEC和其体内代谢物咖啡酸对大鼠全血AA代谢模型中代谢产物的作用.结果:(1)HOEC对大鼠CIA有治疗作用,但高剂量(10 mg/kg)组的治疗效果不如低(1 mg/kg)和中剂量(3 kg/kg)组;(2)HOEC对大鼠关节组织中cPLA2、5-LOX和COX-2的表达水平均有抑制作用;(3)HOEC对大鼠全血AA代谢模型中LOX和COX通路的代谢产物均有抑制作用,而咖啡酸对这些代谢产物的抑制作用弱于HOEC.结论:HOEC对大鼠CIA模型的抗炎作用可能与抑制关节组织中cPLA2、5-LOX和COX-2的表达有关;HOEC对治疗大鼠CIA的非剂量依赖现象可能与其代谢产物咖啡酸对AA代谢产物生成的抑制作用弱于HOEC有关.
作者：杨文；刘远儒；李洪林；王蕊 刊期： 2018年第12期
目的:探讨抑制骨髓间充质干细胞外泌体的释放对其生物学特性的影响及其机制.方法:利用TALEN技术靶向性敲除Rab27a基因构建外泌体释放缺失小鼠模型,随后分离、培养并鉴定骨髓间充质干细胞,用外泌体提取试剂盒提取培养基中的外泌体,并用纳米颗粒跟踪分析(NTA)计数外泌体的数量,透射电镜观察外泌体的大小及形态.利用EdU实验及检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达来评价间充质干细胞的增殖能力.通过TUNEL染色及MTS实验检测间充质干细胞对缺氧的耐受能力.结果:敲除Rab27a的间充质干细胞释放外泌体的数量明显减少,抑制间充质干细胞外泌体的释放能显著降低其增殖及对缺氧的耐受能力.结论:抑制间充质干细胞外泌体的释放可导致其增殖能力及对缺氧的耐受能力明显降低.
作者：郭贵显；成传访；顾杰蕾；周文怡；汤晓燕；钟赟；陈颜芳；刘世明 刊期： 2018年第12期
目的:探讨Krüppel样因子4(KLF4)对结直肠癌细胞活力、凋亡及顺铂化疗敏感性的影响.方法:Western blot法检测KLF4在结直肠癌Caco2、SW480和HCT116细胞中的表达.将SW480细胞分为pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1空质粒)、pcDNA3.1-KLF4组(转染构建的pcDNA3.1-KLF4过表达质粒)和pcDNA3.1-KLF4+顺铂组(转染pcDNA3.1-KLF448 h后用1 mg/L顺铂处理细胞48 h),Western blot检测KLF4、p-IκBα、细胞周期素D1(cyclin D1)和生存素(survivin)的蛋白水平;CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;DCFH-DA探针检测活性氧簇(ROS)含量.结果:KLF4在结直肠癌细胞中的表达均显著低于在人结肠黏膜上皮NCM460细胞的表达(P<0.05).与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-KLF4组的KLF4蛋白表达显著增高(P<0.05),细胞活力及cyclin D1和survivin的蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα的蛋白表达均显著增高;而pcD-NA3.1-KLF4+顺铂组细胞活力及cyclin D1和survivin的蛋白表达均显著低于pcDNA3.1-KLF4组,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα的蛋白表达均显著高于pcDNA3.1-KLF4组(P<0.05).结论:上调结直肠癌细胞KLF4基因表达可降低肿瘤细胞活力,诱导细胞凋亡,增强顺铂化疗敏感性,其机制可能与提高细胞内ROS含量及下调NF-κB信号关键分子IκBα的磷酸化水平有关.
作者：杨洲；刚海菊；覃先蓬；贾贵清；王波；杨春；赵高平 刊期： 2018年第12期
目的:分析鲍曼不动杆菌标准株ATCC 19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)对RAW264.7细胞的自噬诱导作用.方法:建立OmpA刺激RAW264.7细胞的模型,通过细胞免疫荧光染色、Western blot和透射电子显微镜检测OmpA对RAW264.7细胞自噬的影响.结果:OmpA可以引起自噬蛋白LC3B-II表达升高,并抑制Akt/mTOR/p70S6K的磷酸化水平;雷帕霉素可以进一步降低mTOR和p70S6K磷酸化,并提高OmpA引起的LC3B-II表达升高.结论:鲍曼不动杆菌OmpA通过Akt/mTOR/p70S6K信号通路引起RAW264.7细胞自噬.这为将来进一步研究鲍曼不动杆菌引起自噬的分子机制及找到对抗其感染的新方法提供理论依据.
作者：安志远；丁文一；郑春明；黄骁舾 刊期： 2018年第12期
目的:探究乌骨藤提取物(Marsdenia tenacissima extract,MTE)对黑色素瘤细胞活力及凋亡的作用及机制.方法:用不同浓度(0、50、100和200 mg/L)MTE处理小鼠皮肤黑色素瘤B16-F10细胞24 h或不同浓度MTE处理不同时间(0、24、48、72和96 h),MTT法检测细胞活力.流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞增殖、凋亡和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达,同时检测通路激动剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)处理细胞后p-PI3K及细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达.结果:根据预实验结果,选择MTE作用时间为72 h.MTE浓度为100 mg/L和200 mg/L时能明显抑制B16-F10细胞活力及增殖相关蛋白Ki67和PCNA的表达,并且还可诱导B16-F10细胞凋亡,提高凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白水平;同时,MTE还可显著降低p-PI3K、p-AKT和mTOR的蛋白水平;此外,激动剂IGF-1可明显减弱MTE抑制细胞活力及诱导细胞凋亡的作用.结论:MTE可通过下调PI3 K/AKT/mTOR通路活性抑制黑色素瘤细胞活力,诱导细胞凋亡.
作者：贺新伟；郭贵龙；陈积贤；吴伟力 刊期： 2018年第12期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
