蒋碧梅；吕青兰；李媛彬；刘梅冬；刘可；涂自智；肖献忠
目的：研究巨噬细胞移动抑制因子（ MIF）缺失对皮下注射苯肾上腺素（ PE）诱导的小鼠心肌肥厚的影响。方法：利用MIF敲除（ MIF－KO）小鼠及其野生型对照小鼠，分别建立皮下注射PE诱导的小鼠心肌肥厚模型。小动物心脏B超检测小鼠心脏的结构功能改变。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记（ TUNEL）法检测小鼠心肌细胞凋亡。分别用荧光定量PCR和Western blot方法分别检测SOD1、SOD2和Trx2的表达。结果：连续3 d皮下注射20 mg? kg－1? d－1 PE可诱导小鼠发生心肌肥厚，注射PE诱导MIF－KO小鼠发生心肌肥厚的程度高于野生型对照小鼠。 TUNEL结果显示，注射PE诱导MIF－KO小鼠心肌发生凋亡的程度高于野生型对照小鼠。注射PE诱导MIF－KO小鼠心肌中SOD1和Trx2表达降低，而且MIF－KO小鼠心肌中Trx2水平显著低于野生型对照小鼠。结论：MIF缺失降低SOD1和Trx2表达，进而加重苯肾上腺素诱导的小鼠心肌细胞凋亡和心肌肥厚。
作者：林秋雄；朱杰宁；肖珍；唐春梅；胡志琴；张灼；符永恒；张梦珍；单志新 刊期： 2016年第08期
目的：探讨棕榈酸激活上皮细胞钠通道（ epithelial sodium channel ， ENaC）的分子机制，以及H2 S对抗棕榈酸引起的ENaC异常激活的作用和机制。方法：应用肾皮质集合管上皮细胞，采用膜片钳技术研究H2 S对抗棕榈酸引起ENaC异常激活的保护作用和分子机制；应用激光共聚焦显微镜技术观察棕榈酸能否调节细胞内钙水平和细胞内ROS水平变化。结果：棕榈酸引起的细胞ENaC活性升高可以被NaHS抑制；棕榈酸引起的细胞内ROS水平升高可以被NaHS抑制，且应用NADPH抑制剂APO可以抑制棕榈酸引起的ENaC活性升高；棕榈酸可以引起细胞内钙的升高；应用钙离子螯合剂BAPTA／AM或IP3受体抑制剂APB可以抑制棕榈酸引起的ENaC活性升高；胰岛素受体抑制剂HNMPA和PI3K抑制剂LY204002也可以抑制棕榈酸引起的ENaC活性升高；DTT可以模拟NaHS对棕榈酸引起ENaC异常激活的保护作用。结论：棕榈酸通过诱导胰岛素受体磷酸化，引起细胞内钙释放，进而激活NADPH升高细胞内活性氧水平，引起ENaC异常激活。气体信号分子H2 S通过氧化还原反应抑制棕榈酸引起的ENaC异常激活。
作者：王秋石；梁辰 刊期： 2016年第08期
目的：观察中电导钙激活钾离子通道（intermediate－conductance Ca2＋－activated K ＋channel， KCa3．1）在软脂酸（palmitic acid， PA）诱导的单核细胞跨内皮迁移中的作用及其调控机制。方法：分离2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus， T2DM）患者外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells ， PBMCs）并培养人单核细胞株（THP－1 cells），以PA刺激，通过Western blotting、RT－PCR、ELISA及细胞迁移实验观察PA对PBMCs及THP－1细胞跨内皮迁移的影响及其与KCa3．1的关系、KCa3．1与MCP－1之间的关系并探讨其信号转导通路。结果：100μmol／L PA上调体重指数（body mass index， BMI）位于20～27．9 kg／m2的T2DM患者PBMCs KCa3．1的表达并促进其跨内皮迁移，对BMI≥28 kg／m2的T2DM患者PBMCs无影响；KCa3．1特异性阻滞剂TRAM－34、NF－κB阻滞剂PDTC（100μmol／L）和Bay11－7082（10μmol／L）抑制PA诱导的BMI位于20～27．9 kg／m2的T2DM患者PBMCs跨内皮迁移；TRAM－34和KCa3．1特异性siRNA显著减少PA（200μmol／L）诱导的THP－1细胞跨内皮迁移及THP－1细胞中MCP－1的分泌和表达，anti－TLR2／4（4 mg／L）、p38MAPK抑制剂SB203580（10μmol／L）及 SB202190（10μmol／L）、PDTC（100μmol／L）和Bay11－7082（10μmol／L）显著减少PA诱导的THP－1细胞中KCa 3．1和MCP－1的表达。结论：PA通过TLR2／4－p38MAPK－NF－κB通路上调KCa3．1促进MCP－1的表达，进而诱导单核细胞的跨内皮迁移。
作者：马晓真；赵丽梅；庞正达；邓秀玲 刊期： 2016年第08期
AIM:There is little evidence proving the molecular mechanism of WenxinKeli ( WXKL) .This study tried to explore the gene ex-pression profile and pathology alteration of WXKL-treated rabbits with myocardial infarction .METHOD: Twenty male adult rabbits were randomly divided into 4 groups:sham, model, WXKL and captopril groups .Model, WXKL and captopril groups underwent the ligation of the left anterior descending coronary artery , while sham group went through an identical procedure without ligation .WXKL (817 mg? kg-1? d-1), captopril (8 mg? kg -1? d-1) and distilled water (model and sham) were administered orally to the rabbits. 4 weeks later, hearts were taken out for expression chip and pathological staining (HE, Masson and TUNEL) after echocardiography. RESULT:WXKL could down-regulate genes associated with inflammation (CX3CR1, MRC1, and FPR1), apoptosis (cathepsin C and TTC5) and neuro-hormonal system (ACE and EDN1), and up-regulate angiogenesis promoting gene like RSPO 3, which explained why WXKL group represented with better cardiac function , less histopathological injury and slighter apoptosis .CONCLUSION:WXKL plays an important role in suppressing inflammation , inhibiting renin-angiotensin system and alleviating apoptosis , and might be a promising Chinese medicine in treating patients with myocardial infarction .
作者： 刊期： 2016年第08期
目的：心脏干细胞移植治疗急性心梗的机制不明，而新研究发现外泌体（ exosomes ）是干细胞与心肌细胞信号交流的重要媒介。本研究通过解析心脏干细胞分泌外泌体的成分，阐明其中参与心肌保护作用的物质以及调控机制。方法：采用体外分离成年小鼠心脏的Sca－1＋心脏干细胞（ Sca－1＋CPCs ），从Sca－1＋CPCs的培养上清中分离提取其分泌的exosomes ，用Nano－sight、投射电镜、Western blot等对exosomes进行鉴定，qPCR解析exosomes中的内容物，找出关键调控的miRNA，并且通过转染以及萤光素酶报告基因的实验证实其调控的靶基因；后，细胞加入exosomes预保护后，检测其关键miRNA及其靶蛋白的表达，流式细胞术检测凋亡细胞比例的变化。结果：Sca－1＋CPCs细胞上清中提取的物质是直径在80 nm左右的双分子层囊泡，且表达CD9、CD63和Alix 3种exosome标志蛋白。氧化应激可以促进CPCs分泌exosomes，这种exosomes中miR－21表达明显增加，并且被心肌细胞摄取，miR－21通过与PDCD4靶向结合抑制心肌细胞在氧化应激损伤下的凋亡，加入exosomes对细胞进行保护后，在同样环境下可明显上调细胞内miR－21，且发现PDCD4及cleaved caspase－3的表达明显下调，凋亡细胞的比例明显减少。结论：心脏干细胞通过分泌的exosomes，将其包裹的miR－21进入到心肌细胞中抑制PDCD4的表达，从而抗心肌细胞凋亡。本研究为阐明干细胞治疗心肌梗死的作用机制提供了新的视野。
作者：肖静；潘宇；李晓红；杨翔宇；姜霖；冯娟；余细勇 刊期： 2016年第08期
目的：探讨转录因子心肌缺血预处理上调蛋白1（ myocardial ischemic preconditioning upregulated protein 1， MIPU1）促进血管新生的分子机制。方法：mRNA测序分析MIPU1过表达人脐静脉内皮细胞（ HUVEC ）的mRNA差异表达；染色质免疫沉淀（chromatin immunoprecipitation， CHIP）检测MIPU1与基质金属蛋白酶14（matrix metalloproteinase 14， MMP14）启动子区结合情况；采用Matrigel、划痕和Transwell分析HUVEC管型形成和迁移；采用Western blot和定量PCR分别检测MIPU1和MMP14蛋白质和mRNA表达；采用LAD建立慢性心肌缺血小鼠模型，采用HE染色和CD31免疫组化分析缺血心肌组织形态学变化及微血管形成。结果：免疫组化和HE染色显示与假手术组相比，缺血心肌中组织损伤加重伴随有CD31＋微血管数目增加，同时心肌组织中MMP14和MIPU1蛋白和mRNA表达增加。 RNA测序显示与对照组相比MIPU1过表达HUVEC中MMP14 mR－NA增加约4倍。 MMP14特异性siRNA转染显著下调MMP14蛋白表达后，可抑制MIPU1促HUVEC管型形成和迁移作用；相反，MMP14过表达可增加MIPU1的上述作用。生物信息学分析显示MMP14启动子区含有2个MIPU1结合元件核心序列（“CTTA”），CHIP结果显示MIPU1与MMP14启动子区－217～－221 bp和－110～－106 bp处的“CTTA”有结合。结论：MIPU1通过上调MMP14促进HUVEC的管型形成和迁移作用，这一调节机制可能参与缺血心肌中微血管新生过程。
作者：邹江；陈亦菲；蔡思明；王念；刘可；张华莉；王慷慨；肖献忠 刊期： 2016年第08期
目的：比较柠檬酸镁与乳糖用于建立SD大鼠慢性渗透性腹泻模型的可行性和实验适用性，为大鼠慢性渗透性腹泻模型的建立提供方法学基础。方法：5周龄SPF级SD大鼠31只，随机分为正常对照（ Con ）组、柠檬酸镁腹泻（ Mg）组以及乳糖腹泻（ Lac）组。 Lac组用高乳糖饲料喂养，自由饮水；Mg组用基础饲料喂养，自由饮用柠檬酸镁溶液（镁离子浓度为4．77 g／L），不另外给予普通饮用水；Con组用基础饲料喂养，自由饮水。每天观测大鼠的一般情况和腹泻情况，腹泻14 d后测试肌力和自主活动度。随后处死全部大鼠，取结肠中段检测肠黏膜跨肠上皮电阻；取小肠下段和结肠中段，HE染色观察肠黏膜病理学变化。结果：两腹泻组大鼠均出现体重增长缓慢、毛发稀疏无光泽、乏力、活动减少等临床表现，腹泻率和腹泻指数均显著高于Con组（ P＜0．05）；Lac组腹泻指数明显高于Mg组（P＜0．05），但Mg组小肠黏膜破坏程度较Lac组稍严重。结论：两种腹泻模型均能达到慢性腹泻的要求，但存在各自的优势，需根据实验需求选择恰当的模型。
作者：刘舒；高媛；肖露；杨亭；李廷玉；陈洁 刊期： 2016年第08期
AIM:Mitochondrial DNA (mtDNA) copy number variation (CNV), which reflects the oxidant-induced cell damage, has been observed in a wide range of human diseases .However, whether it correlates with heart failure , which is closely related to oxidative stress, has never been elucidated before .We aimed to systematically investigate the association between leukocyte mtDNA CNV and heart failure risk and prognosis .METHODS: A total of 1 700 hospitalized patients with heart failure and 1 700 age-and gender-matched community population were consecutively enrolled in this observational study , as well as 1 638 ( 96.4%) patients were fol-lowed prospectively for a median of 17 months (12~24 months).The relative mtDNA copy number in leukocyte of peripheral blood or cardiac tissue was measured in triplicate by quantitative real-time PCR method .RESULTS:Patients with heart failure possessed much lower relative mtDNA copy number compared with control subjects (P<0.01), especially for the patients with ischemic etiology (P<0.01).Patients with lower mtDNA copy number exhibited 1.7 times higher risk of heart failure ( P<0.01).Long-term follow-up (median 17 months) showed that decreased mtDNA copy number was significant associated with both increased cardiovascular deaths (P<0.01) and cardiovascular rehospitalization (P<0.01).After adjusted for the conventional risk factors and medications , lower mtDNA copy number were still significantly associated with 50% higher cardiovascular mortality (P <0.05).CONCLUSION:mtDNA copy number depletion is an independent risk factor for heart failure and predicted higher risk of cardiovascular deaths in patients with heart failure .
作者： 刊期： 2016年第08期
目的：探讨重组融合蛋白TAP－SSL5对ApoE基因敲除（ ApoE－／－）小鼠动脉血管粥样硬化斑块形成的影响。方法：21只12周龄ApoE－／－小鼠随机分为3组，每日分别给予TAP－SSL5（3 mg／kg）、SSL5（2 mg／kg）及同等剂量的PBS，高脂饮食饲养12周后，石蜡切片观察主动脉根部粥样硬化斑块形成情况，并应用油红O染色法观察大体动脉标本斑块情况；后应用小鼠细胞炎症因子芯片检测TAP－SSL5对40种炎症因子在动脉组织内的表达情况。结果：高脂饲养12周后，TAP－SSL5组小鼠体重增长明显低于单纯喂食高脂饮食而不进行药物干预组，血清胆固醇（ Tch）水平明显低于对照组，而甘油三酯（ TG）、低密度脂蛋白胆固醇（ LDL）及高密度脂蛋白胆固醇（ HDL）水平无明显变化。TAP－SSL5可以减轻ApoE－／－小鼠动脉血管粥样硬化斑块形成（P＜0．05）。炎症因子芯片表达分析显示，与对照组相比较，TAP－SSL5组GM－CSF、IL－3、IL－10、IL－1β、IL－12p40p70、IL－9、IL－12p70、KC、Lymphotactin、Leptin、MCP－1、MIG、MCSF、MIP－1α、 sTNF RI、RANTES和sTNF RII共17种细胞因子下调明显。结论：重组融合蛋白TAP－SSL5能够在一定程度上抑制ApoE－／－小鼠动脉粥样硬化斑块的形成，其机制与其抗炎、抗凝及抗血小板特性有关，其对细胞因子表达调控的影响有待深入研究。
作者：曲小龙；胡厚源 刊期： 2016年第08期
目的：构建人食管鳞状细胞癌组织来源的移植瘤模型，并了解其病理学特征和增殖相关的信号通路活化情况。方法：将人食管癌组织移植于重度联合免疫缺陷（ SCID）小鼠皮下，待移植瘤长成后对其进行鼠间连续传代。观察第1、第2、第3代移植瘤的生长特性。并对患者肿瘤组织、第1代和第3代移植瘤进行HE染色和CK5／6、p63、p40免疫组织化学染色分析。 Western blot实验检测4例所建立的移植瘤中mTOR、p－mTOR、p70S6K、p－p70S6K、Akt1、p－Akt （ Ser473）、Erk1／2和p－Erk1／2的表达情况。结果：成功建立移植瘤模型，移植瘤生长稳定并能连续传代。各移植瘤组织病理组织类型和CK5／6、p63、p40表达阳性与患者肿瘤组织一致。而在不同病人来源的移植瘤组织中信号转导通路蛋白的活化程度差异有统计学意义。结论：成功建立了人食管鳞状细胞癌组织来源的食管癌移植瘤模型，初步论证该模型能够反映患者的病理特征。
作者：金玉茜；李珂；尹学善；谢祎飞；王艳红；赵四敏；江亚南；赵继敏；赵松；田芳；路静；刘康栋；董子明 刊期： 2016年第08期
目的：肺血管重构（PVR）是缺氧性肺动脉高压（HPH）的重要病理特征，机制不详。钙敏感受体（CaSR）是G蛋白耦联受体，多胺（ PA）是小分子生物胺，均具有重要生理功能，并参与许多疾病的发生。本文拟观察CaSR和PA在大鼠缺氧性PVR和HPH中的作用并探讨其机制。方法：建立大鼠缺氧在体模型和细胞模型（氮气或氯化钴诱导），检测CaSR、多胺代谢、PVR相关参数及其信号通路分子。结果：与正常组相比，缺氧组在肺动脉压升高的同时，肺动脉平滑肌细胞（ PASMCs ）的CaSR、SSAT（多胺降解关键酶）、增殖细胞核抗原（ PCNA）和骨桥蛋白（ OPN）的表达上调，细胞内钙、细胞存活率和细胞增殖指数（PI）显著升高，而ODC（多胺生物合成关键酶）、α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA）和肌钙蛋白的表达明显下调，精胺含量降低。CaSR激动剂（氯化钆和新霉素）可增强但CASR拮抗剂（ NPS2390）可减弱缺氧效应。 PD98059（ MEK1抑制剂）和LY294002（PI3K抑制剂）可逆转PCNA表达上调和缺氧诱导的PI增加。低浓度外源性精胺能显著抑制缺氧诱导的PASMCs增殖，使细胞周期阻滞在G1／G0期，抑制cyclin D1表达，增加p27蛋白表达，抑制ERK1／2、PI3K和Akt蛋白磷酸化。结论：CaSR激活和多胺失衡通过活化MEK1／ERK1／2和PI3K／Akt通路，参与缺氧诱导PASMCs增殖、表型转换、肺血管重构和HPH。这些为HPH预防和治疗提供了新思路。
作者：魏璨；彭雪；李光伟；徐长庆 刊期： 2016年第08期
目的：房室传导阻滞是心脏电激动传导过程中，发生在心房和心室之间的电激动传导异常，可导致心律失常。前期，我们发现一个遗传性房室传导阻滞伴肥厚型心肌病家系，本次工作主要对其致病基因及机制进行研究。方法：采用候选基因测序的方法对已经确诊为房室传导阻滞的心脏病患者进行致病基因分析，对报道与心脏病相关的 TRP4、 SCN5A、 SCN1B、NKFX2．5、CLCA2和LMNA共6个基因测序并确定致病基因；构建致病基因的野生型和突变型质粒；克隆野生型和突变型，激光共聚焦显微镜检测野生和突变型蛋白在细胞定位，利用Western blot检测目的蛋白的表达情况对该突变功能进行分析。结果：遗传学分析显示在家系中患者LMNA基因第10号外显子缺失，并与疾病共分离。 Western blot结果显示突变型lamin蛋白表达水平正常，定位结果显示，野生型蛋白位于细胞核核膜，而突变型蛋白在核膜上和核内均有表达。 LMNA异常可引起房室结细胞死亡与纤维化，导致房室传导速率降低，并发生房室传导阻滞。自噬和凋亡是细胞死亡的重要形式，LC3－II是检测自噬的标志蛋白。应用Western blot检测LC3－II，结果显示LMNA突变不影响该蛋白表达。结论：本次研究中，我们发现了一个新的导致遗传性房室传导阻滞伴肥厚型心肌病的LMNA基因突变，该突变可使其编码的蛋白不能正确定位于细胞核膜，导致细胞核核纤层结构异常。核纤层在细胞分裂中呈现周期性的变化，因此核纤层的异常会对细胞正常周期产生重要影响从而导致细胞的异常死亡。这可能是导致该家族成员发生房室传导阻滞的原因。
作者：曹祝兵；李思思；臧小彪；凃欣 刊期： 2016年第08期
目的：IL－37是白细胞介素－1家族成员，可调节血管生成，抑制肿瘤生长，对I／R损伤、炎症性肠道疾病和类风湿性关节炎等有保护作用。由于炎症反应能导致组织氧供应失衡，使局部组织细胞处在缺氧的微环境，因而，本实验主要针对IL－37是否在缺氧环境中发挥细胞保护作用进行研究。方法：分别给予1％和21％ O2培养上皮细胞。通过瞬时转染使细胞过表达IL－37，24 h后提取RNA和蛋白质。利用RT－PCR检测IL－37、TNF－α、IL－1、IL－6和CXCL2 mRNA的表达；利用Western blot 检测PARP的总蛋白和剪切蛋白的表达量。利用流式细胞术检测细胞凋亡。结果：缺氧时，细胞凋亡增加1．63倍，内源性IL－37和促炎因子mRNA水平的表达均显著增加，PARP总蛋白表达增加2．1倍。 IL－37可显著抑制缺氧诱导的细胞凋亡，并显著降低IL－6和CXCL2的mRNA水平，但其对可以修复DNA的PARP总蛋白的表达在缺氧时无明显作用， caspase－3剪切的PARP也无显著差异。结论：在缺氧环境中，IL－37作为固有免疫调节因子，可以通过抑制细胞凋亡，炎性因子IL－6和CXCL2的表达抑制局部的过度炎症反应。但TNF－αmRNA的表达和caspase－3剪切底物PARP的剪切蛋白无显著变化，提示IL－37不是通过减少TNF－α的表达、进而减少FADD和caspase－8的募集、再减少活化caspase－3的途径抑制细胞凋亡的。其具体抑制凋亡的机制有待进一步研究。
作者：周梦晨；姜桂青；李倩倩；王孟茹；廖玉华；凃欣 刊期： 2016年第08期
目的：观察AMPK对血管内皮细胞中电导和小电导钙激活钾离子通道（KCa3．1和KCa2．3）表达和功能的影响。方法：应用人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells ， HUVECs）细胞系CRL－1730，通过Western blotting和real－time PCR等方法检测AMPK激活和下调对内皮细胞上KCa3．1和KCa2．3通道蛋白和mRNA表达的影响；分离大鼠肠系膜三级动脉，加入AMPK的激动剂或（和）抑制剂，应用微血管张力测定仪观察KCa3．1和KCa2．3通道介导的血管内皮舒张功能的变化。结果：激活AMPK可以上调血管内皮细胞KCa3．1和KCa2．3通道蛋白和mRNA的表达，其作用可被AMPK抑制剂逆转；应用RNA干扰技术下调AMPKα1亚基可以抑制KCa3．1和KCa2．3通道蛋白的表达。激活AMPK可以增强KCa3．1和KCa2．3介导的血管舒张功能，其作用可被AMPK抑制剂逆转。结论：AMPK对HUVECs上KCa3．1和KCa2．3通道的表达具有上调作用，该作用至少部分涉及转录水平的调节；AMPK对KCa3．1和KCa2．3通道介导的舒张功能具有上调作用。
作者：宋征；王燕；庞正达；马晓真；王晓静；赵丽梅；邓秀玲 刊期： 2016年第08期
AIM:To investigate the effect of miR-214 on cardiomyocyte hypertrophy and the expression of the potential target genes . METHODS:A cell model of hypertrophy was established based on angiotensin-Ⅱ( Ang-Ⅱ)-induced neonatal mouse ventricular car-diomyocytes (NMVCs).Dual luciferase reporter assay was performed to verify the interaction between miR-214 and the 3’ UTR of MEF2C.The expression of MEF2C and hypertrophy-related genes at mRNA and protein levels was determined by RT-qPCR and Wes-tern blotting, respectively.RESULTS:The expression of ANP, ACTA1,β-MHC and miR-214 was markedly increased in Ang-Ⅱ-in-duced hypertrophic cardiomyocytes .Dual luciferase reporter assay revealed that miR-214 interacted with the 3’ UTR of MEF2C, and miR-214 was verified to inhibit MEF2C expression at the transcriptional level .The protein expression of MEF2C was markedly in-creased in the hypertrophic cardiomyocytes .Moreover, miR-214 mimic, in parallel to MEF2C siRNA, inhibited the expression of hy-pertrophy-related genes in Ang-Ⅱ-induced NMVCs.CONCLUSION:MEF2C is a target gene of miR-214, which mediates the effect of miR-214 on attenuating cardiomyocyte hypertrophy .
作者： 刊期： 2016年第08期
目的：很多长链非编码RNA（lncRNA）在心血管系统中具有重要作用，其中某些lncRNA参与血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖与迁移的调控。方法：通过分析多例高血压病人与健康人群血浆lncRNA表达谱，筛选出在高血压病人与正常人群中差异表达的lncRNA进行深入分析研究。结果：通过比较高血压病人与正常人群血浆中lncRNA表达的不同，发现一条新的ln－cRNA———LncVSM，其在高血压病人的 VSMCs 中高表达。用腺病毒诱导 LncVSM 过表达能够增加由血小板源生长因子（PDGF）刺激引起的人主动脉平滑肌细胞（ HASMCs）的增殖，敲低LncVSM能够引起相反的效应。体外趋化实验表明过表达LncVSM后，HASMCs的迁移能力增强，若敲低LncVSM，无论PDGF或者AngII刺激，HASMCs的迁移能力均减弱。同时，研究发现过表达LncVSM后，α－SMA表达减少，OPN和collagen I表达升高；敲低LncVSM出现相反变化。 LncVSM能够直接与MYH11和FN－1结合，过表达或敲低LncVSM，其表达水平出现不同的变化。构建过表达LncVSM的转基因大鼠，与野生型大鼠比较，转基因鼠在10周龄出现自发性高血压，并且蛋白表达水平变化与细胞实验一致。结论：LncVSM是新发现的一条能够调控VSMCs表型转换并且与高血压相关的lncRNA。
作者：耿彬；林宪娟；金翎；范晓芳；王文洁；李晶；刘晓艳；鲍明慧；王怡丹；崔晓；杨磊；崔庆华；蔡军 刊期： 2016年第08期
目的：我们的前期实验发现，腺病毒中介的peroxiredoxin II （ Prx II）过表达可保护心肌细胞防止氧化应激所致的损伤，尽管这样，Prx II在器官和整体动物水平是否具有心肌保护作用，而且这一保护作用是否通过内质网应激发挥作用尚不清楚。方法：应用Langendorff系统构建离体心肌缺血再灌注损伤模型；结扎冠状动脉左前降支，缺血30 min再灌注30 min／3 h／24 h构建体内心肌缺血再灌注损伤模型。结果：离体心肌缺血再灌后，Prx II过表达小鼠心肌收缩大速率（＋dp／dtmax ）和心肌舒张大速率（－dp／dtmax ）恢复较正常对照组明显得到改善；Prx II心肌特异性过表达小鼠与野生型相比，离体和在体心肌缺血再灌后，心肌梗死面积均分别降低了69．13％和60．86％；体内心肌缺血再灌注，与野生型小鼠相比，Prx II心肌特异性过表达小鼠心肌细胞凋亡率降低了52．10％±5．32％；与野生型小鼠相比，Prx II心肌特异性过表达小鼠中内质网通路伴侣分子Hsp90、GRP94、PDI和p－eIF2α的表达量均明显降低（P＜0．05），但cleaved ATF6和XBP－1的表达量在2组小鼠中无明显差异。 p－Akt （Ser473）和p－Akt（Thr308）水平在野生型小鼠明显降低，在Prx II过表达小鼠中仍维持高表达水平（P ＜0．05）。结论：Prx II对缺血再灌注损伤心肌具有保护作用，其机制可能与拮抗p－eIF2α表达、增加p－Akt表达、阻断内质网应激启动的凋亡通路有关。
作者：王慧敏；石晓静；周文娟；耿雪鹏；姬亚歌；肖悦；黄欣；刘宏民；赵文 刊期： 2016年第08期
目的：Mip2是心肌缺血后适应的一个分子靶点，其表达能抑制氧化应激诱导的心肌细胞凋亡。基于MIP2为WD蛋白，本科室冯衍生博士利用大鼠心肌缺血再灌注动物模型，对MIP2可能的相互作用蛋白进行了筛选，质谱鉴定了若干个蛋白质，其中包括VDAC，但VDAC包括VDAC1、VDAC2和VDAC3，它们与MIP2的关系尚不清楚。本研究在此基础上进一步深入探讨MIP2的心肌细胞保护机制。方法：首先构建了MIP2和VDAC真核表达载体，利用了基因共转染探讨MIP2与VDAC可能的相互作用；然后采用不同的抗体免疫共沉淀加Western blot免疫印迹技术，主要探讨MIP2与VDAC1的相互作用；利用免疫荧光定位探讨MIP2与VDAC1在H9c2细胞内的分布；采用MIP2的结构突变，研究MIP2与VDAC1相互作用的结构域；后通过MIP2的全长与突变体探讨其对H9c2心肌细胞膜电位与细胞死亡率的影响，观察MIP2及其与蛋白相互作用对氧化应激损伤心肌细胞的保护作用。结果：MIP2与VDAC基因共转染后免疫共沉淀加Western blot 鉴定，结果显示MIP2与VDAC1和VDAC2有相互作用关系，与VDAC3无相互作用；GFP与VDAC1抗体免疫共沉淀进一步证明了这种相互作用；细胞免疫共定位显示，MIP2与VDAC1分布于细胞同一区域，支持其在细胞中存在相互作用；MIP2结构突变显示，位于其C端的WD40是与其它蛋白相互作用的结构域。心肌细胞转染基因后施以氧化应激处理，结果显示，虽然MIP2全长能抑制氧化应激诱导的H9 c2心肌细胞线粒体膜电位降低和细胞死亡，但其蛋白结合结构域不能有效抑制这种诱导性的膜电位降低与细胞死亡。结论：VDAC1是MIP2的一个作用靶点，MIP2 C端的WD40是其与VDAC1相互作用的一个结构域。 MIP2能抑制氧化应激诱导的心肌细胞线粒体膜电位降低与细胞死亡，其机制可能与调节VDAC1有关。
作者：蒋磊；陈广斌；王浩；刘可；张华莉；肖献忠 刊期： 2016年第08期
目的：探讨儿茶酚抑素（ CST）对间歇低氧高血压大鼠的作用及机制。方法：健康雄性SD大鼠随机分为3组：control组、IH （间歇低氧组）组和IH＋CST组（于低氧前3 d皮下埋植含CST 20 nmol? kg －1? d－1的微量渗透泵）。后2组置于间歇低氧舱中，舱内氧浓度为（5±0．5）％～（21±0．5）％，低氧－复氧循环时间为120 s（60 s＋60 s），8 h／d，共3周。颈总动脉插管测收缩压（SP）、舒张压（DP）和平均压（MP），检测血浆中氧化／抗氧化损伤指标，Western blot 法检测主动脉和肾组织中核因子E2相关因子2（Nrf2）蛋白表达的变化。结果：SP、DP及MP，IH组均比control 组高（P＜0．01），而IH＋CST 组则显著低于IH 组（P＜0．01）。 IH组的MPO和MDA含量显著高于control组（P＜0．05），而SOD和羟自由基抑制率显著低于control组（P＜0．01）；IH＋CST组的MPO和MDA明显低于IH组（P＜0．05），SOD和羟自由基抑制率显著高于IH组（P＜0．01）。与control组相比， IH组大鼠主动脉和肾组织胞浆、胞核中Nrf2蛋白的表达均显著下调（P＜0．05）；IH＋CST组与IH组相比，胞浆中Nrf2蛋白的表达显著下调（P＜0．05），而胞核中Nrf2蛋白的表达显著上调（P＜0．05）。结论：CST有减轻间歇低氧致大鼠高血压的作用，该作用可能与其通过Nrf2－ARE信号通路调节氧化应激反应有关。
作者：陈然；范小芳；郑青青；丁露；薛峰；王永煜；龚永生 刊期： 2016年第08期
目的：PKG在血管硝酸甘油（nitroglycerin， NTG）耐受形成中起重要作用，PI3K／Akt信号通路与血管张力调节关系密切，本研究旨在探讨该通路在NTG耐受形成中的作用及其机制。方法：通过猪离体冠状动脉孵育NTG（10－5 mol／L，24 h）建立离体NTG耐受模型；通过皮下注射NTG（20 mg／kg体重，每天3次，连续3 d）建立小鼠在体NTG耐受模型；运用离体血管环灌流、Western blot、实时定量PCR及免疫荧光等方法进行研究。结果：离体和在体研究表明，耐受组血管对硝酸甘油的舒张反应较对照组显著减弱，并且耐受组血管的p－Akt （Ser473）蛋白水平显著增加。 PI3K的特异阻断剂LY294002与NTG共孵育冠状动脉24 h，可显著抑制耐受组引起的p－Akt （Ser473）蛋白水平升高，同时部分改善了血管对NTG的反应性。耐受组冠状动脉PKG的蛋白和mRNA水平较对照组明显降低，且均可被LY294002所反转。耐受组血管的p－FoxO1（ Ser256）蛋白水平较对照组显著升高，且出现由胞核向胞浆的转位，以上现象均可被LY294002所阻断。结论：活化的PI3K／Akt通过促进FoxO1的出核，抑制了PKG的表达，从而导致NTG耐受。
作者：安苑铭；李妍静；张城林；丛馨；吴立玲；窦豆 刊期： 2016年第08期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
