金玉茜；李珂；尹学善；谢祎飞；王艳红；赵四敏；江亚南；赵继敏；赵松；田芳；路静；刘康栋；董子明
目的：PKG在血管硝酸甘油（nitroglycerin， NTG）耐受形成中起重要作用，PI3K／Akt信号通路与血管张力调节关系密切，本研究旨在探讨该通路在NTG耐受形成中的作用及其机制。方法：通过猪离体冠状动脉孵育NTG（10－5 mol／L，24 h）建立离体NTG耐受模型；通过皮下注射NTG（20 mg／kg体重，每天3次，连续3 d）建立小鼠在体NTG耐受模型；运用离体血管环灌流、Western blot、实时定量PCR及免疫荧光等方法进行研究。结果：离体和在体研究表明，耐受组血管对硝酸甘油的舒张反应较对照组显著减弱，并且耐受组血管的p－Akt （Ser473）蛋白水平显著增加。 PI3K的特异阻断剂LY294002与NTG共孵育冠状动脉24 h，可显著抑制耐受组引起的p－Akt （Ser473）蛋白水平升高，同时部分改善了血管对NTG的反应性。耐受组冠状动脉PKG的蛋白和mRNA水平较对照组明显降低，且均可被LY294002所反转。耐受组血管的p－FoxO1（ Ser256）蛋白水平较对照组显著升高，且出现由胞核向胞浆的转位，以上现象均可被LY294002所阻断。结论：活化的PI3K／Akt通过促进FoxO1的出核，抑制了PKG的表达，从而导致NTG耐受。
作者：安苑铭；李妍静；张城林；丛馨；吴立玲；窦豆 刊期： 2016年第08期
目的：利用Sprague－Dawley（ SD）大鼠AMI模型评价Rho激酶抑制剂法舒地尔对心梗后心室重构的改善作用及其相关机制。方法：通过结扎左前降支冠脉法制备大鼠急性心梗（ AMI）模型40只，随机分为AMI组，法舒地尔低、中、高剂量治疗组和卡维地洛治疗组，另设假手术组。连续给药4周后，进行超声心动图检测心功能指标，同时留取大鼠心肌组织标本检测Rho激酶、TGF－β1、Bax、Bcl－2、MMP－9表达和Smad2／Smad3信号通路的激活状态。结果：（1）超声心动图检测显示：与AMI组比较，法舒地尔3个治疗组对AMI后心室重构均有明显抑制作用，以中剂量组佳。（2）与AMI组比较，治疗组Rho激酶和TGF－β1的mRNA水平、Bax和MMP－9蛋白表达水平明显降低，Bcl－2水平升高，Smad2／Smad3信号通路激活程度明显降低（P＜0．05）。结论：法舒地尔可抑制大鼠心梗后的心室重构。
作者：符永恒；李桃；杨敏；林秋雄；王映辉；张梦珍；朱杰宁；李怡；刘晓颖；单志新 刊期： 2016年第08期
目的：房室传导阻滞是心脏电激动传导过程中，发生在心房和心室之间的电激动传导异常，可导致心律失常。前期，我们发现一个遗传性房室传导阻滞伴肥厚型心肌病家系，本次工作主要对其致病基因及机制进行研究。方法：采用候选基因测序的方法对已经确诊为房室传导阻滞的心脏病患者进行致病基因分析，对报道与心脏病相关的 TRP4、 SCN5A、 SCN1B、NKFX2．5、CLCA2和LMNA共6个基因测序并确定致病基因；构建致病基因的野生型和突变型质粒；克隆野生型和突变型，激光共聚焦显微镜检测野生和突变型蛋白在细胞定位，利用Western blot检测目的蛋白的表达情况对该突变功能进行分析。结果：遗传学分析显示在家系中患者LMNA基因第10号外显子缺失，并与疾病共分离。 Western blot结果显示突变型lamin蛋白表达水平正常，定位结果显示，野生型蛋白位于细胞核核膜，而突变型蛋白在核膜上和核内均有表达。 LMNA异常可引起房室结细胞死亡与纤维化，导致房室传导速率降低，并发生房室传导阻滞。自噬和凋亡是细胞死亡的重要形式，LC3－II是检测自噬的标志蛋白。应用Western blot检测LC3－II，结果显示LMNA突变不影响该蛋白表达。结论：本次研究中，我们发现了一个新的导致遗传性房室传导阻滞伴肥厚型心肌病的LMNA基因突变，该突变可使其编码的蛋白不能正确定位于细胞核膜，导致细胞核核纤层结构异常。核纤层在细胞分裂中呈现周期性的变化，因此核纤层的异常会对细胞正常周期产生重要影响从而导致细胞的异常死亡。这可能是导致该家族成员发生房室传导阻滞的原因。
作者：曹祝兵；李思思；臧小彪；凃欣 刊期： 2016年第08期
目的：淋巴细胞表达胱硫醚γ裂解酶（ cystathionine γ－lyase， CSE）／硫化氢（ hydrogen sulfide ， H2 S），但其是否参与高血压发病尚不清楚。本课题旨在探讨淋巴细胞CSE／H2 S拮抗高血压的免疫调节机制。方法：收取高血压患者及匹配的健康对照纳入研究。亚甲基蓝法检测外周淋巴细胞H2 S产率，Western blot 检测蛋白表达及磷酸化，RT－qPCR检测mRNA表达，biotin－switch法检测蛋白质硫氢化修饰。结果：高血压组外周血淋巴细胞CSE蛋白表达、H2 S产率及IL－10水平明显低于正常血压组，药物治疗血压恢复后CSE蛋白表达、H2 S产率及IL－10水平也恢复至正常水平。 SHR大鼠给予NaHS治疗4周后，动脉血压显著下调，同时Th17细胞亚群下调，而Treg亚群上调。分离小鼠脾脏CD4＋T细胞，siRNA下调CSE或PAG均可抑制Treg的分化，减少IL－10的分泌。反之CSE过表达或H2 S供体可促进Treg分化和IL－10分泌。提示CD4＋T细胞内源性CSE／H2 S可促进其向Treg亚群分化。 Treg细胞的分化受到能量代谢的调节。 CSE下调或PAG可抑制AMPK Thr172位点磷酸化，促进mTOR Ser2448位点磷酸化。反之CSE过表达或H2 S供体促进AMPK磷酸化，抑制mTOR磷酸化。 AMPK Thr172位点磷酸化受LKB1激酶调控，H2 S可促使LKB1 Cys430位点发生硫氢化修饰进而增加LKB1的磷酸化水平。结论：淋巴细胞内源性H2 S可使LKB1 Cys430位点硫氢化修饰并激活LKB1／AMPK通路，促使Treg细胞的分化，并使Treg募集到肾脏、血管周淋巴节，局部分泌IL－10增加，发挥其抗高血压作用。
作者：杜从阔；范静慧；徐文静；林宪娟；郑凤娇；耿彬 刊期： 2016年第08期
目的：探讨转录因子心肌缺血预处理上调蛋白1（ myocardial ischemic preconditioning upregulated protein 1， MIPU1）促进血管新生的分子机制。方法：mRNA测序分析MIPU1过表达人脐静脉内皮细胞（ HUVEC ）的mRNA差异表达；染色质免疫沉淀（chromatin immunoprecipitation， CHIP）检测MIPU1与基质金属蛋白酶14（matrix metalloproteinase 14， MMP14）启动子区结合情况；采用Matrigel、划痕和Transwell分析HUVEC管型形成和迁移；采用Western blot和定量PCR分别检测MIPU1和MMP14蛋白质和mRNA表达；采用LAD建立慢性心肌缺血小鼠模型，采用HE染色和CD31免疫组化分析缺血心肌组织形态学变化及微血管形成。结果：免疫组化和HE染色显示与假手术组相比，缺血心肌中组织损伤加重伴随有CD31＋微血管数目增加，同时心肌组织中MMP14和MIPU1蛋白和mRNA表达增加。 RNA测序显示与对照组相比MIPU1过表达HUVEC中MMP14 mR－NA增加约4倍。 MMP14特异性siRNA转染显著下调MMP14蛋白表达后，可抑制MIPU1促HUVEC管型形成和迁移作用；相反，MMP14过表达可增加MIPU1的上述作用。生物信息学分析显示MMP14启动子区含有2个MIPU1结合元件核心序列（“CTTA”），CHIP结果显示MIPU1与MMP14启动子区－217～－221 bp和－110～－106 bp处的“CTTA”有结合。结论：MIPU1通过上调MMP14促进HUVEC的管型形成和迁移作用，这一调节机制可能参与缺血心肌中微血管新生过程。
作者：邹江；陈亦菲；蔡思明；王念；刘可；张华莉；王慷慨；肖献忠 刊期： 2016年第08期
目的：研究树鼩脑缺血及缺血后适应（postconditioning，PC）对酸敏感性离子通道（acid－sensing ion channel，ASIC）2a表达及海马微环境离子稳态性的影响，探讨ASIC2a在PC脑保护效应中的作用机制。方法：建立光化学诱导的树鼩血栓性脑缺血模型及PC模型，在观察脑组织病理形态学改变的基础上，利用单泵等速微灌流系统对海马离子微环境进行动态监测，并通过免疫组化、RT－PCR及Western blotting技术对树鼩海马组织内ASIC2a的表达进行定位和定量研究。结果：树鼩皮层脑血栓形成后引起了同侧海马神经元的继发性损伤及海马神经元微环境的紊乱；PC处理可减轻海马神经元缺血损伤性改变，并使海马微环境离子稳态失衡得以明显改善；脑缺血诱导树鼩海马ASIC2a蛋白及mRNA表达一过性增强，PC处理使得ASIC2a表达水平更高、持续时间延长（P＜0．05）。结论：神经元微环境内离子稳态性异常是海马神经元继发性损伤的重要原因；PC可通过诱导ASIC2a表达上调，以强化机体内源性损伤防御机制，这也是其改善神经元微环境离子稳态性、提高缺血耐受性的关键所在。
作者：陈静；李树清 刊期： 2016年第08期
目的：观察辛伐他汀（Sim）及缺血后处理（IPO）对肾缺血再灌注损伤（RI／RI）的影响。方法：采用夹闭双侧肾动、静脉45 min后松夹再灌的方法制RIRI模型。成年健康雄性SD大鼠，体重180～220 g，随机分为5组：假手术（ sham）组、溶剂对照（ sham＋V）组、缺血再灌注（ I／R）组、Sim组和IPO组。 Sim组每日给予辛伐他汀20 mg／kg灌胃，持续2周。 IPO组用无创动脉夹，夹闭双侧肾动、静脉45 min去夹后，行6个循环夹闭10 s／再灌10 s后处理。再灌注24 h后取腹主动脉血，测定血肌酐（SCr）和尿素氮（BUN）。取血后迅速摘取双侧肾脏，观察肾组织损伤程度，检测丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（eNOS）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果：I／R组大鼠肾功能明显受损，BUN和SCr含量均明显高于sham组和sham＋V组（ P＜0．01）。与I／R组相比，Sim和IPO组BUN和SCr含量均明显降低（ P＜0．01）。 RI／RI后，I／R组SOD活性较sham组和sham＋V组显著降低（P＜0．05），MDA含量显著升高（P＜0．05）；与I／R组相比，Sim和IPO组SOD活性明显增加（P＜0．05），MDA含量则明显降低（P＜0．05）。 RI／RI后，I／R组NO及eNOS含量均明显低于sham组和sham＋V组（P＜0．05）；与I／R组相比，Sim和IPO组NO及eNOS含量均明显增加（P＜0．05）。 Sham组和sham＋V组Bcl－2与Bax蛋白无明显表达，I／R组Bax蛋白表达明显增多，而Bcl－2蛋白表达较少；与I／R组相比，Sim和IPO组Bax蛋白表达减少，而Bcl－2蛋白表达增加。结论：Sim和IPO减轻大鼠RI／RI的作用可能与清除氧自由基，抑制脂质过氧化和提高肾组织的抗氧化能力有关。
作者：谢怡华；牛丽静；王慧娟；苗智慧；夏晓红 刊期： 2016年第08期
AIM:Heart failure is characterized by immune activation leading to production and release of proinflammatory cytokines .Inter-leukin 17A (IL-17A) is a proinflammatory cytokine and multiple lines of evidence from animal and human studies suggest crucial roles of IL-17A in heart failure.Therefore, we investigated whether common polymorphisms of genes IL17A and IL17RA (coding interleukin 17 receptor A) gene contribute to genetic predisposition to heart failure and adverse clinical outcomes associated with it .METHODS AND RESULTS:A total of 1713 adults patients with congestive heart failure and 1713 age-and sex-matched controls were genotyped for promoter SNPs, rs2275913 and rs8193037 in IL17A and rs4819554 in IL17RA, to assess the relationship between individual SNPs and the risk of congestive heart failure .Results showed that rs8193037 in IL17A was associated with the risk of congestive heart failure (P<0.01) after adjustment for multiple cardiovascular risk factors including age , sex, smoking status, diabetes, hypertension and dyslipidemia.This association was evident in both ischemic and non-ischemic heart failure (P<0.05).Furthermore, prospective fol-low-up of 12.7 months for the occurrence of adverse clinical outcomes showed that rs 4819554 in IL17RA was significantly associated with cardiovascular mortality (P<0.05) after adjustments for multiple cardiovascular risk factors and New York Heart Association functional class.CONCLUSION:This study demonstrated associations of rs8193037 in the promoter of IL17A with the risk of conges-tive heart failure, and of rs4819554 in the promoter of IL17RA with the risk of cardiovascular mortality in patients with congestive heart failure.These data lend further support to the notion that immune activation and genetic polymorphisms contribute to heart failure path -ogenesis and progression .
作者： 刊期： 2016年第08期
目的：比较柠檬酸镁与乳糖用于建立SD大鼠慢性渗透性腹泻模型的可行性和实验适用性，为大鼠慢性渗透性腹泻模型的建立提供方法学基础。方法：5周龄SPF级SD大鼠31只，随机分为正常对照（ Con ）组、柠檬酸镁腹泻（ Mg）组以及乳糖腹泻（ Lac）组。 Lac组用高乳糖饲料喂养，自由饮水；Mg组用基础饲料喂养，自由饮用柠檬酸镁溶液（镁离子浓度为4．77 g／L），不另外给予普通饮用水；Con组用基础饲料喂养，自由饮水。每天观测大鼠的一般情况和腹泻情况，腹泻14 d后测试肌力和自主活动度。随后处死全部大鼠，取结肠中段检测肠黏膜跨肠上皮电阻；取小肠下段和结肠中段，HE染色观察肠黏膜病理学变化。结果：两腹泻组大鼠均出现体重增长缓慢、毛发稀疏无光泽、乏力、活动减少等临床表现，腹泻率和腹泻指数均显著高于Con组（ P＜0．05）；Lac组腹泻指数明显高于Mg组（P＜0．05），但Mg组小肠黏膜破坏程度较Lac组稍严重。结论：两种腹泻模型均能达到慢性腹泻的要求，但存在各自的优势，需根据实验需求选择恰当的模型。
作者：刘舒；高媛；肖露；杨亭；李廷玉；陈洁 刊期： 2016年第08期
Exosomes secreted by mesenchymal stem cells have shown great therapeutic potential in regenerative medicine .In this study, we performed meta-analysis to assess the clinical effectiveness of using exosomes in ischemia /reperfusion injury based on the reports pub-lished between January 2000 and September 2015 and indexed in the PubMed and Web of Science databases .The effect of exosomes on heart function was evaluated according to the following parameters:the area at risk as a percentage of the left ventricle , infarct size as a percentage of the area at risk , infarct size as a percentage of the left ventricle , left ventricular ejection fraction , left ventricular frac-tion shortening , end-diastolic volume , and end-systolic volume .Our analysis indicated that the currently available evidence confirmed the therapeutic potential of mesenchymal stem cell-secreted exosomes in the improvement of heart function .However , further mechanis-tic studies, therapeutic safety and clinical trials are required for optimization and validation of this approach to cardiac regeneration after ischemia/reperfusion injury .
作者： 刊期： 2016年第08期
目的：本研究拟探讨平滑肌蛋白22α（ SM22α）对血管平滑肌细胞（ VSMC）表面血小板源性生长因子受体β（ PDGFR－β）胞吞的影响，进而揭示SM22α对PDGFR－β活性调控的关键步骤———胞吞和泛素化动态平衡的影响及其对血管重构过程的调控作用。方法：PDGF刺激体外培养大鼠VSMC，考察siRNA敲低SM22α蛋白后不同时点的细胞中，激光共聚焦显微镜观察PDGFR－β在细胞膜分布的异同；利用活细胞工作站实时观察SM22α的表达对PDGFR－β在细胞内内吞体和溶酶体分布的异同；SM22α对c－Cbl或TRAF6等E3泛素连接酶活性的影响；siRNA敲低早期内吞体标志蛋白Rab5、再循环内吞体标志蛋白Rab4和Rab11、多泡体（ MVB）标志蛋白Rab7，观察SM22α对PDGFR－β亚细胞定位的变化及其与血管重构的关系。结果：研究发现，SM22α表达下调促进细胞表面的PDGFR－β的再循环过程，使PDGFR－β在细胞表面的分子数显著减少，激活信号分子Akt和p42／44磷酸化，促进PDGF诱导的VSMC生长、增殖和迁移过程，SM22α对PDGFR－β再循环的调控与血管重构过程密切相关。结论：PDGFR－β调控异常诱发的生物学行为改变是心血管疾病的主要细胞和分子生物学基础，我们的结果表明， SM22α可能通过影响PDGFR－β胞吞和泛素化动态平衡而影响其活性的调控，进而参与血管重构的病理生理过程，阐明其分子机制可为发掘基于影响PDGFR－β功能的心血管疾病药物设计提供新靶点。
作者：麻晓婷；窦永青；李晓坤；孟泽祺；韩梅；聂磊 刊期： 2016年第08期
AIM:To investigate the effect of miR-214 on cardiomyocyte hypertrophy and the expression of the potential target genes . METHODS:A cell model of hypertrophy was established based on angiotensin-Ⅱ( Ang-Ⅱ)-induced neonatal mouse ventricular car-diomyocytes (NMVCs).Dual luciferase reporter assay was performed to verify the interaction between miR-214 and the 3’ UTR of MEF2C.The expression of MEF2C and hypertrophy-related genes at mRNA and protein levels was determined by RT-qPCR and Wes-tern blotting, respectively.RESULTS:The expression of ANP, ACTA1,β-MHC and miR-214 was markedly increased in Ang-Ⅱ-in-duced hypertrophic cardiomyocytes .Dual luciferase reporter assay revealed that miR-214 interacted with the 3’ UTR of MEF2C, and miR-214 was verified to inhibit MEF2C expression at the transcriptional level .The protein expression of MEF2C was markedly in-creased in the hypertrophic cardiomyocytes .Moreover, miR-214 mimic, in parallel to MEF2C siRNA, inhibited the expression of hy-pertrophy-related genes in Ang-Ⅱ-induced NMVCs.CONCLUSION:MEF2C is a target gene of miR-214, which mediates the effect of miR-214 on attenuating cardiomyocyte hypertrophy .
作者： 刊期： 2016年第08期
目的：平滑肌蛋白22α（ smooth muscle protein 22α，SM22α）被视为是细胞衰老的标志物，但是其在血管平滑肌细胞（ vascu－lar smooth muscle cell ，VSMC）衰老过程中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨SM22α在VSMC衰老和血管老化进程中的作用。方法：利用angiotensin II（Ang II，10－7 mol／L）慢性刺激诱导VSMC衰老；用野生型和SM22α基因敲除小鼠皮下植泵，持续灌注Ang II（1μg? kg－1? min－1）4周，复制高血压模型。通过敲低和过表达SM22α观察其对VSMC衰老及调控通路蛋白表达和活性的影响。结果：Ang II持续刺激可诱导VSMC衰老，伴随着SM22α的表达增高。敲低SM22α可减弱Ang II诱导的VSMC衰老，过表达则反之。在Ang II诱导VSMC衰老条件下，SM22α表达上调抑制Mdm2与p53的结合，上调p53含量。 SM22α表达增加抑制Akt与Mdm2的磷酸化活化，导致Mdm2与p53的结合减弱。 SM22α基因敲除改善Ang II诱导的主动脉VSMC衰老和血压升高。结论：SM22α表达上调抑制Akt／Mdm2通路激活，进而减弱Mdm2与p53的结合，上调p53的表达量，促进衰老。
作者：苗穗兵；谢肖立；尹亚娟；赵丽丽；舒亚南；陈荣；陈鹏；董丽华；林燕玲；吕品；张丹丹；聂茜；薛震颖；韩梅 刊期： 2016年第08期
AIM:To investigate regulatory roles of Apelin in adventitial remodeling and fibrosis in rats with transverse aortic constriction ( TAC) .METHODS:The male Sprague-Dawley rats with TAC were randomized to daily deliver either pyroglutamyl Apelin-13 ( 50μg/kg) or saline for 4 weeks.RESULTS:Histomorphometric analysis by HE and Masson Trichrome staining revealed increased medi -al and adventitial thicknesses , especially in the adventitia , in ascending aortas in rats with TAC when compared with the sham-operated rats.Downregulation of APJ receptor and elevations in phosphorylated mTOR and ERK 1/2 levels were observed in rats with TAC . There are marked increases in heart weight ( HW) , HW/body weight ratio , and aortic fibrosis in rats with TAC .The pressure over-load-mediated pathological adventitial remodeling was strikingly rescued by Apelin-13, associated with attenuation of aortic fibrosis and reduced mRNA expression of TGF-β1, fibronectin and collagen I .CONCLUSION:Our results demonstrate the importance of Apelin-13 in amelioration of aortic adventitial remodeling and fibrosis in rats with TAC via modulation of the mTOR /ERK signaling , thus indi-cating potential therapeutic strategies by enhancing Apelin /APJ action for preventing pressure overload-and fibrosis-associated cardio-vascular disorders .
作者： 刊期： 2016年第08期
目的：探究心脏心肌细胞与成纤维细胞间通过远距离连接———膜纳米管直接传输线粒体的生理学意义以及具体的传输机制。方法：通过激光共聚焦仪器的活细胞追踪功能，实时观测线粒体的运动及传输；利用免疫荧光双染的方法，观察线粒体与微管、微丝等结构的共定位，并使用微管抑制剂Nocodazole ，阻断微管的存在，以观察微管对线粒体传输的作用；使用West－ern blot、real－time PCR方法检测KIF5B蛋白的表达，继而通过使用转染KIF－5B－siRNA慢病毒方法敲减细胞中KIF5B，探究KIF5B的作用；运用TUNEL染色及高内涵检测的方法，检测心肌细胞的凋亡。结果：原代乳大鼠心肌细胞与成纤维细胞间形成的膜纳米管可以传输线粒体，线粒体在其中的平均运动速度（17．5±2．1） nm／s。在膜纳米管中，线粒体与微管存在共定位，线粒体的传输依赖于微管，并且KIF5B是膜纳米管中推动线粒体传输的马达蛋白，使线粒体可以从成纤维细胞中传输到心肌细胞中。在心肌细胞的缺氧－复氧模型的病理模型中，成纤维细胞通过将自身的线粒体传输到心肌细胞中，起到减少心肌细胞凋亡的保护作用。结论：作为一种新型的细胞连接，心肌细胞与成纤维细胞间形成的膜纳米管可以通过直接传输线粒体，从而减少受损心肌细胞的凋亡，这种传输依赖于微管及马达蛋白KIF5B。
作者：张江晖；沈静；吴济民；肖晗；何康敏；吕志珍；李子健；徐明；张幼怡 刊期： 2016年第08期
目的：探究张应变条件下microRNA－33（miR－33）调控移植静脉内膜增生的机制，为缓解静脉移植内膜增生提供潜在治疗方法。方法：SD大鼠进行“套管法”自体静脉移植，Elastin－van Gesion染色观察内膜增生情况。使用FX4000细胞应力加载装置（ Flexcell International ）对静脉平滑肌细胞加载频率1．25 Hz、幅度10％的张应变以模拟静脉在动脉环境受到的张应变力学刺激。 qRT－PCR检测miR－33表达，Western blotting检测相关蛋白，BrdU增殖实验和CCK－8试剂盒检测细胞增殖。双萤光素酶报告基因验证miR－33与靶基因的作用关系。骨形态发生蛋白3（BMP3）特异性siRNA干扰片段、重组蛋白以及miR－33 in－hibitor和mimics用于研究细胞功能和相关信号通路。在体局部注射miR－33 agomir和antagomir来验证miR－33在静脉移植内膜增生中的作用。结果：移植静脉出现明显内膜增生，miR－33显著降低，而BMP3、p－Smad5和p－Smad2表达明显上升；牵拉条件下得到与移植静脉中相同的结果。双萤光素酶报告基因实验证明BMP3是miR－33的靶基因。 miR－33 mimics抑制BMP3及下游信号分子p－Smad2、p－Smad5表达和细胞增殖； miR－33 inhibitor 或者BMP3重组蛋白得到类似结果。在体注射miR－33 agomir降低BMP3及下游信号分子表达，亦可缓解静脉移植内膜增生。结论：miR－33－BMP3－Smad信号通路参与移植静脉平滑肌细胞增殖；miR－33可以缓解静脉移植内膜增生过程，具有潜在临床应用前景。
作者：黄凯；包晗；严志强；王璐；张萍；姚庆苹；施茜；陈小虎；王凯旋；沈宝荣；齐颖新；姜宗来 刊期： 2016年第08期
目的：探讨携带降钙素基因相关肽（ CGRP）的慢病毒体外转染对大鼠c－kitpos心脏干细胞（ c－kit ＋CSCs）活力的影响。方法：无菌条件下取出SD大鼠的心耳，采用酶消化法结合免疫磁珠法获取c－kit＋CSCs，并通过流式细胞术鉴定；将携带目的基因的重组慢病毒载体（ Lv－EGFP－CGRP ）及空病毒载体（ Lv－EGFP ）分别转染至c－kit＋CSCs，实验分为3组：Lv－EGFP－CGRP－CSCs组、Lv－EGFP－CSCs组和CSCs组；在荧光显微镜下观察转染情况，采用流式细胞技术测定其转染率，采用ELISA测定各组培养上清液中CGRP的浓度，采用CCK－8法检测慢病毒转染对c－kit＋CSCs 活力的影响。结果：成功分离培养获取 c－kit＋CSCs，流式细胞术鉴定显示其高表达 c－kit （为91．0％），低表达CD45及CD34；成功转染慢病毒的大鼠c－kit＋CSCs可表达绿色荧光，48 h后可稳定表达，感染复数（MOI）值为20时，荧光显微镜观察及流式细胞术结果均显示转染率达80％以上；ELISA结果示，Lv－EGFP－CGRP－CSCs组细胞上清液CGRP分泌量较Lv－EGFP－CSCs组和CSCs组增加（ P＜0．01）； CCK－8检测细胞活力的结果显示，慢病毒转染不影响c－kit＋CSCs的活力。结论：携带CGRP的慢病毒载体可成功转染至c－kit ＋CSCs，转染Lv－EG－FP－CGRP后的c－kit＋CSCs可合成和分泌CGRP蛋白至上清液中，且转染后c－kit＋CSCs的活力未受影响。这为基因工程细胞疗法治疗心肌梗死提供了新的理论及实验依据。
作者：荣季冬；李玲；龙仙萍；邓文文；石蓓 刊期： 2016年第08期
目的：IL－37是白细胞介素－1家族成员，可调节血管生成，抑制肿瘤生长，对I／R损伤、炎症性肠道疾病和类风湿性关节炎等有保护作用。由于炎症反应能导致组织氧供应失衡，使局部组织细胞处在缺氧的微环境，因而，本实验主要针对IL－37是否在缺氧环境中发挥细胞保护作用进行研究。方法：分别给予1％和21％ O2培养上皮细胞。通过瞬时转染使细胞过表达IL－37，24 h后提取RNA和蛋白质。利用RT－PCR检测IL－37、TNF－α、IL－1、IL－6和CXCL2 mRNA的表达；利用Western blot 检测PARP的总蛋白和剪切蛋白的表达量。利用流式细胞术检测细胞凋亡。结果：缺氧时，细胞凋亡增加1．63倍，内源性IL－37和促炎因子mRNA水平的表达均显著增加，PARP总蛋白表达增加2．1倍。 IL－37可显著抑制缺氧诱导的细胞凋亡，并显著降低IL－6和CXCL2的mRNA水平，但其对可以修复DNA的PARP总蛋白的表达在缺氧时无明显作用， caspase－3剪切的PARP也无显著差异。结论：在缺氧环境中，IL－37作为固有免疫调节因子，可以通过抑制细胞凋亡，炎性因子IL－6和CXCL2的表达抑制局部的过度炎症反应。但TNF－αmRNA的表达和caspase－3剪切底物PARP的剪切蛋白无显著变化，提示IL－37不是通过减少TNF－α的表达、进而减少FADD和caspase－8的募集、再减少活化caspase－3的途径抑制细胞凋亡的。其具体抑制凋亡的机制有待进一步研究。
作者：周梦晨；姜桂青；李倩倩；王孟茹；廖玉华；凃欣 刊期： 2016年第08期
AIM:The 50-Hz magnetic field (MF) is a potential health-risk factor.Its effects on the cardiovascular system have not been fully investigated .This study was conducted to explore the effects of long-term exposure to 50-Hz MF on the cardiovascular system . METHODS:In the study , an exposure system was constructed and the distribution of 50-Hz MF was detected .Sixty-four Sprague-Dawley (SD) rats were exposed to 50-Hz MF at 100 μT for 24 weeks, 20 hours per day, while another 64 rats were sham exposed. During the exposure, blood pressure was measured every 4 weeks, and 24 weeks later, echocardiography, cardiac catheterisation and electrocardiography were performed .Moreover , heart and body weight were recorded , while haematoxylin-eosin staining and real-time PCR were conducted .RESULTS:The results showed that compared with the sham group , exposure to 50-Hz MF did not exert any effect on blood pressure, pulse rate, heart rate and cardiac rhythm.Further, echocardiography and cardiac catheterisation showed that there were no significant differences in the cardiac morphology and haemodynamics .In addition , histopathological examination showed that 50-Hz MF exposure had no effect on the structure of hearts .Finally, the expression of the cardiac hypertrophic relative genes did not show any significant differences between 50-Hz MF exposure group and the sham group .CONCLUSION: Taken together , in SD rats, exposure to 50-Hz/100-μT MF for 24 weeks did not show any obvious effects on the cardiovascular system .
作者： 刊期： 2016年第08期
AIM:We investigated how AT 1-R stimulated by mechanical stresses induces cardiac fibrosis .METHODS:We produced in vivo cardiac pressure overload model in angiotensinogen knockout ( ATG-/-) mice and in vitro mechanically-stretched cell model in cultured neonatal cardiac cells of ATG-/-mice both lack the participation of Ang II .RESULTS: Pressure overload for 4 weeks in ATG-/-mice induced myocardial hypertrophy accompanied by the significant interstitial fibrosis , however , the TGF-β, a key regulatory factor of fibrosis, was not significantly increased in these ATG-/-mice.Meanwhile, the inhibitor for AT1-R significantly inhibited mechani-cal stress-induced cardiac fibrosis in these ATG-/-models whereas inhibition of TGF-βdid not.CONCLUSION:The results showed that mechanical stress-induced fibrotic responses through AT 1-R required the phosphorylation of Smad 2 but not the involvement of TGF-β.
作者： 刊期： 2016年第08期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
