马路；张利军
目的：Seipin突变或缺失可导致患者肥厚性心肌病和心衰，但机制不明。本课题研究seipin基因缺失（ seipin－／－）对小鼠心肌重塑的影响及机制。方法：用2月龄的雄性seipin－／－及野生型（WT）小鼠主动脉缩窄手术（TAC）后12周（n＝8）研究seipin缺失对心肌重塑的影响及机制。同时体外检测 seipin－／－及WT 小鼠心肌细胞钙流。结果：和 WT TAC 组相比， seipin－／－TAC组出现了更加严重的心腔扩大、心肌肥厚和左室舒张功能障碍；心肌胶原沉积，炎症细胞浸润和凋亡小体增加；有更为明显的心肌细胞内质网扩张，微管和线粒体变形病变；心肌内质网应激相关基因、心衰和心肌肥厚因子及炎症基因表达增加，钙流相关基因（SERCA2a、RyR和NCX）下降。 Seipin－／－小鼠和WT小鼠相比，心肌细胞出现慢钙瞬变衰减和肌浆网钙离子含量增加。结论：Seipin缺陷加重小鼠TAC术后心肌肥厚和舒张性心力衰竭，可能与心肌钙离子通道的受损并促进心肌细胞内质网应激、炎症和细胞凋亡相关。
作者：刘雪静；吴晓月；王欢；杨诚志；李子健；张幼怡；刘国庆；杨宏远；黄薇 刊期： 2015年第10期
传统的课程考试都是根据教师所讲授的内容出题，局限于教材、课堂笔记。这类考试主要考查学生对知识点的记忆情况，无法真正考查学生综合应用所学知识发现问题、解决问题的能力。为改变“一考定成绩”的状况，应该加强平时考核在总成绩中的权重，将考核贯穿平时课程教学的全过程。我们已经连续3年利用学校网络平台进行案例分析测验。根据讲授内容，将课程分成4个阶段，在每个阶段的学习之后，对相应的理论知识进行阶段性考核。具体的考核形式是选择一个临床真实病例，提出相应问题（如病例中所涉及的病理过程、发病机制等），让学生进行综合分析。学生在规定时间内提交报告，由老师判阅，4次报告成绩以20％计入总成绩。在学生提交完报告后，我们在网上公布正确答案及学生的报告，便于学生对相应知识正确理解，同时也利于学生相互监督、防止抄袭。这种形式测验要求学生首先对学习过的病理生理学知识有很好的理解和记忆，其次具备运用所学知识分析及解决问题的能力，让学生充分体会病理生理学与临床知识的紧密联系，从而使学生在平时的学习中对病理生理学产生浓厚的兴趣。
作者：徐海；刘利梅；窦豆；向若兰；吴立玲 刊期： 2015年第10期
目的：探讨N－乙酰半胱氨酸（ NAC）是否通过影响心肌细胞内抗氧化通路蛋白的氧化还原状态从而在心肌细胞氧化应激中发挥保护作用。方法：用H2 O2刺激H9c2心肌细胞导致氧化应激损伤。采用CM－H2 DCFDA荧光染料检测细胞内ROS变化情况；谷胱甘肽试剂盒检测细胞内GSH和GSSG的水平；非还原Western blot技术检测Trx1、GR、Prx1和PTEN的氧化还原状态；还原Western blot检测ASK1和AKT的磷酸化。结果：NAC预处理组明显增加心肌细胞氧化应激时的细胞活力和GSH／GSSG比值，并且降低细胞内ROS水平。非还原Western blot显示H2 O2刺激使还原型Trx1明显减少，氧化型GR、Prx1和PTEN显著增多，NAC预处理可以增加还原型Trx1，减少氧化型GR、Prx1和PTEN。还原Western blot发现，NAC预处理之后， H2 O2诱导的ASK1磷酸化明显减少，而H2 O2诱导的AKT磷酸化明显增加。结论：NAC通过减少胞浆内抗氧化蛋白的氧化从而保护心肌细胞氧化应激损伤。
作者：刘协红；蔡姣迪；肖献忠；张华莉 刊期： 2015年第10期
目的：研究miRNA－630（miR－630）在乳腺癌中的表达水平及在乳腺癌发生发展中的功能。方法：采用反转录实时定量PCR方法对其在乳腺癌病人标本及乳腺癌细胞系中的表达进行检测；利用克隆形成实验、划痕实验、细胞迁移能力检测等方法对其在乳腺癌高转移细胞株MDA－MB－231及 BT549中的功能进行研究；利用慢病毒感染方法构建稳定表达miR－630的MDA－MB－231细胞株，研究其在小鼠体内转移能力；通过生物信息学分析、萤光素酶报告基因分析和Western blot方法对miR－630的靶基因进行筛选和鉴定。结果：miR－630在乳腺癌病人癌组织以及乳腺癌细胞株中的表达显著降低；在 MDA－MB－231和BT549细胞中过表达miR－630显著抑制细胞的克隆形成能力及迁移侵袭能力。在体内实验中，稳定过表达miR－630抑制MDA－MB－231细胞的肺转移能力。后， MTDH被鉴定为miR－630的靶基因，参与miR－630赋予细胞的各种功能。结论：miR－630通过靶向MTDH在乳腺癌的转移过程中发挥重要功能。
作者：周佽想；王辰龙；于安路；陈国强；赵倩 刊期： 2015年第10期
目的：脓毒症时常伴有组织因子（ TF）表达增加，致凝血功能异常。血小板与白细胞相互作用可促进白细胞表达TF，增强凝血活性。以往研究表明热休克因子1（HSF1）能减轻脓毒症时组织器官的损伤并降低死亡率。本研究探讨内毒素血症时小鼠HSF1对血小板激活、血小板与白细胞相互作用和白细胞TF表达的影响。方法：采用HSF1基因敲除（ HSF1－／－）和野生型（ HSF1＋／＋）小鼠复制内毒素血症模型，应用流式细胞术检测外周血血小板与白细胞黏附和白细胞TF表达。结果：（1）与生理盐水组相比，内毒素血症小鼠血小板P－选择素表达、血小板－白细胞黏附和白细胞TF表达显著升高，出血时间明显缩短；（2）内毒素血症时，HSF1－／－小鼠血小板P－选择素表达、血小板－白细胞黏附和白细胞TF表达均显著高于HSF1＋／＋小鼠，出血时间比HSF1＋／＋小鼠显著缩短。结论：HSF1能抑制小鼠内毒素血症时血小板激活、血小板与白细胞相互作用和白细胞组织因子表达。
作者：肖子辉；冯宇鹏；肖献忠 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：采用Urotensin II（ UII）体外诱导法建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型，并探讨其机制。方法：采用含不同UII浓度的DMEM培养基培养HepG2细胞，后半小时与1×10－7 mol／L insulin共孵育，葡萄糖－己糖激酶法检测不同时点培养基中葡萄糖含量，以HepG2细胞蛋白进行定量，确定胰岛素抵抗佳作用浓度及时间；多功能酶标仪检测UII诱导hepG2细胞内活性氧（ ROS）变化；Western blot法检测胰岛素受体结合物IRS－1及Akt蛋白的表达。结果：hepG2细胞产生胰岛素抵抗的佳作用时间为24 h，佳UII浓度为1×10－7 mol／L。与空白对照相比，UII刺激hepG2细胞后ROS增高明显（ P＜0．05）；且UII孵育组IRS－1及Akt蛋白的表达明显降低（P＜0．05），提示UII可能通过增高hepG2细胞中ROS而使hepG2细胞产生胰岛素抵抗。结论：采用UII体外诱导的方法，UII浓度为1×10－7 mol／L，作用24 h后，可建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型，且UII可能通过诱导HepG2细胞ROS的增高而引起胰岛素抵抗。
作者：李莹莹；禹晓童；王学江 刊期： 2015年第10期
目的：探讨成纤维细胞生长因子2（FGF－2）抗缺氧（H／R）／复氧诱导心肌细胞凋亡的新机制。方法：对各实验组分别检测心肌细胞活力与凋亡，p－Akt、p－GSK－3β、Bcl－2、Bax、caspase－3前体（32 kD）和活性体（17 kD）蛋白表达变化。结果：与control相比，H／R能明显抑制心肌细胞活力，诱导心肌细胞凋亡，下调p－Akt、p－GSK－3β、Bcl－2和caspase－3前体蛋白表达，上调Bax和caspase－3活性体蛋白表达；FGF－2可显著改善H／R对心肌细胞的损伤及对相关蛋白表达的影响，其作用能被PI3K特异性抑制剂LY294002和PKB／Akt特异性抑制剂SH－5拮抗。结论：FGF－2抗缺氧／复氧诱导心肌细胞凋亡，其机制与激活PI3K－PKB／Akt－GSK－3β信号通路有关。
作者：李国华；姜志胜 刊期： 2015年第10期
目的：通过使用自噬激动剂、自噬抑制剂、凋亡抑制剂以及蛋白阻滞剂处理或预处理已由β1－肾上腺素受体自身抗体（β1－AA）造模的H9c2细胞，探讨能否通过人为因素调控细胞自噬从而下调心肌细胞凋亡，改善心功能受损。方法：采用不含ED－TA的0．25％胰蛋白酶消化传代H9c2心肌细胞，用含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基进行培养，主动免疫Wistar大鼠获得的β1－AA对细胞进行24 h造模处理，或用自噬激动剂雷帕霉素、自噬抑制剂3－甲基腺嘌呤、自噬抑制剂氯喹、凋亡抑制剂、蛋白阻滞剂分别单独给予或者联合处理细胞，采用Western blot以及RT－PCR对自噬的变化进行检测；对自噬变化组采用流式细胞术以及线粒体跨膜电位检测法对凋亡进行检测。结果：H9c2细胞约90％满时可传代并每隔约2天传代一次；β1－AA可诱导H9 c2细胞发生自噬和凋亡；自噬和凋亡在一定范围内彼此影响，协同决定细胞死亡的发生。结论：β1－肾上腺素受体自身抗体诱导的自噬和凋亡在一定范围内彼此之间相互调节。
作者：李杨；王丽；刘慧荣 刊期： 2015年第10期
目的：探讨促红细胞生成素（ EPO）对压力超负荷大鼠心肌NADPH氧化酶的影响。方法：SD雄性大鼠，腹主动脉结扎复制高血压模型。随机分成3组：模型组（ model）；假手术组（ sham）：除不缩窄腹主动脉外，其余操作同腹主动脉缩窄组；重组人促红细胞生成素治疗组（ rhEPO，腹腔注射4000 U／kg，每周2次）。8周后，心动超声和血流动力学评价心功能； Masson染色观察心肌纤维化程度；实时荧光定量PCR检测Nox2和Nox4 mRNA 表达， Western blot 观察心肌Nox2、Nox4和炎性因子CD45、F4／80、TGF－β蛋白表达。结果：与模型组比较，EPO治疗组LVEF、LVFS、LVESP及±dp／dtmax升高， LVESD、LVEDD及LVEDP下降；同时，EPO可降低压力超负荷所致的心肌纤维化，降低心室肌中NADPH氧化酶活性及心肌炎性反应。结论：EPO通过降低NADPH氧化酶活性，抑制心肌氧化应激水平，减少心肌炎性反应，抑制压力超负荷所致大鼠心肌重构，改善心功能。
作者：王丽萍 刊期： 2015年第10期
目的：观察Bcl－2－modifying factor （ BMF）在氧化应激致心肌细胞损伤中的作用和机制。方法：在培养的乳鼠心肌细胞氧化应激模型上，采用LDH活性检测和TUNEL法观察细胞损伤，荧光染色技术观察线粒体分裂和BMF在细胞中定位， RT－PCR和Western blot方法观察BMF mRNA和蛋白表达。结果：正常生理状态下，BMF定位在胞浆的细胞骨架，当用过氧化氢处理心肌细胞后，BMF mRNA和蛋白水平增加（P＜0．05），同时BMF从胞浆转位至线粒体，伴随着线粒体分裂增加（P＜0．05），细胞凋亡增多（P＜0．05）。用BMF－siRNA腺病毒感染心肌细胞后进行过氧化氢处理，心肌细胞凋亡率明显下降（P＜0．05），线粒体分裂明显减少（ P＜0．05）。用adBMF感染心肌细胞，发现随着感染时间的延长，心肌细胞培养液中LDH活性和心肌细胞凋亡率明显增加（P＜0．05），线粒体分裂明显增多（P＜0．05）。进一步研究发现BMF可以明显增加细胞色素C在胞浆中的表达。结论：BMF参与氧化应激诱导的心肌细胞损伤，其机制与线粒体分裂和线粒体凋亡途径有关。
作者：李玉珍；宋丹丹；刘秀华 刊期： 2015年第10期
目的：研究了不同tau亚型对神经细胞增殖的影响及机制。方法：采用脂质体法分别将6种表达tau亚型的质粒瞬时转染N2a细胞，pEGFP空载体为对照。48 h后Western blot检测转染效率。48 h后用CCK－8检测细胞活性，BrdU掺入法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期。结果：与对照质粒比，表达1N3R－tau降低细胞活性，其BrdU阳性细胞数显著减少，提示1N3R－tau亚型可抑制细胞增殖。进一步的研究显示，表达1N3R－tau亚型诱导细胞周期S期阻滞，促使Cyclin E从胞核向胞浆转移。结论：过表达1N3R－tau亚型通过诱导cyclin E从胞核向胞浆转移，使细胞出现S期阻滞，从而抑制细胞增殖。
作者：李立；徐诚；王群；柯丹；张少华；曹福源；王建枝 刊期： 2015年第10期
目的：研究腺苷A2A和A2B受体是否参与NECA的抗心肌缺血再灌注损伤作用及其相关机制。方法：利用H9c2心肌细胞建立模拟缺血／再灌注损伤模型，给予非选择性腺苷受体激动剂5’－N－乙基酰胺基腺苷及选择性腺苷A2A、A2B受体拮抗剂，采用CCK－8法测定细胞活性，JC－1染色检测细胞线粒体膜电位（ΔΨm ），Amplex Red过氧化氢／过氧化物酶试剂盒测定细胞内H2O2水平，活性氧试剂盒检测细胞内活性氧（ROS）水平，MitoSox Red超氧化物指示剂检测线粒体内活性氧水平。结果：5’－N－乙基酰胺基腺苷明显改善缺血／再灌注损伤引起的细胞活性和线粒体膜电位的降低，显著抑制缺血／再灌注损伤导致的细胞和线粒体内活性氧含量的升高，腺苷A2A及A2B受体拮抗剂均可阻断5’－N－乙基酰胺基腺苷的上述作用。结论：5’－N－乙基酰胺基腺苷可减轻H9c2心肌细胞的缺血／再灌注损伤，腺苷A2A和A2B受体共同参与5’－N－乙基酰胺基腺苷的心肌保护作用，其机制可能与调节线粒体通透性转换孔（ mPTP）的开放及线粒体活性氧的产生有关。
作者：赵萌 刊期： 2015年第10期
丝切蛋白（ cofilin）为肌动蛋白分子结合蛋白，通过其特定的上、下游信号转导通路在神经元轴突、树突及树突棘的迁移、定位、生长、改造出新棘突等过程中发挥着重要的调控作用，参与神经突触可塑性调节，特别是Rho GTPases家族Rho、Rac和Cdc42是cofilin基因上游重要的调控分子，通过介导突触重塑，与缺血缺氧性脑损伤、癫痫、帕金森病、阿尔茨海默病、学习记忆和认知等高级脑功能异常均密切相关。对cofilin信号通路及与神经突触可塑性关系的分子机制研究将为神经系统疾病防治提供新思路。
作者：赵爽；徐志卿 刊期： 2015年第10期
嗅觉受体是生物体感知外界气味的第一级反应元件。本课题组之前发现铜离子参与的小鼠嗅觉受体MOR244－3的活化反应，报导了嗅觉受体是金属蛋白的假设。然而，嗅觉受体的金属效应是否在哺乳动物中具有普遍意义以及在人类中是否也存在具有金属离子效应相关的嗅觉受体，目前还尚未获得证实。本课题组利用嗅觉受体的异源表达系统筛选获得人类嗅觉受体ORXXX为叔丁基硫醇（ TBM；IUPAC：2－methyl－2－propanethiol）的特异性受体，且在ORXXX与TBM的反应体系中加入铜离子会大大地提高ORXXX对TBM的反应。接着，通过检测各含硫化合物在ORXXX上的反应，我们发现只有短链硫醇类化合物在铜离子参与的情况下可以活化ORXXX。为了进一步比较金属离子参与ORXXX与MOR244－3活化的异同，我们在MOR244－3上检测了上述短链单硫醇类化合物的反应，发现MOR244－3与ORXXX具有明显的反应图谱差异，表明由铜离子介导的气味分子活化MOR244－3与ORXXX的反应机理是截然不同的。这一研究首次证实了金属离子在人类嗅觉感知中发挥着不可或缺的作用。
作者：李生菊 刊期： 2015年第10期
目的：探讨红花黄色素注射液对急性心肌梗死大鼠的梗死边缘区血管生成的影响。方法：采用结扎SD大鼠冠状动脉左前降支的方法复制急性心肌梗死动物模型，腹腔注射花黄色素注射液（2．5 mg? kg－1? d－1）3 d、7 d、14 d，末次给药24 h后称取体重处死，测心指数；观察心电图的变化；Masson染色法测定心肌梗死边缘区微血管数；免疫组化法检测血管内皮生长因子蛋白的表达情况。结果：与模型组比较，治疗7 d组和14 d组心指数下降（ P＜0．05）。7 d和14 d治疗大鼠的心电图基本恢复正常。各组的梗死边缘区血管数均明显增长（ P＜0．05）。心肌梗死边缘区VEGF蛋白在给药组表达逐渐增多，14 d组（ P＜0．05）具有统计学差异。结论：红花黄色素注射液能促进梗死边缘血管的生成，其作用机理可能是促进VEGF蛋白增高有关。
作者：王晓敏 刊期： 2015年第10期
异位胰腺又被称为迷走胰腺，是一种先天性畸形，出现在正常胰腺位置以外，且与正常胰腺组织之间无位置、血管、神经及解剖关系的联系；食道憩室较为罕见，是食道管壁薄弱处形成一个向外突出的与食道相连的盲管状内有开口的腔隙，食道下段憩室又称为隔上食管憩室，发生较为罕见；在食道下段出现憩室并在憩室内伴发异位胰腺更极为罕见，而异位胰腺合并食道憩室因缺乏特异性的临床表现，对其诊断有一定的难度，由于对该疾病认识不足使我们误认为是食道瘘，结合影像、内镜检查并在手术后病理检查得以明确。两者都被认为是一种先天性畸形，因为此二者合并起来发生实属罕见，且容易误诊，我们将收治的食道下段巨大憩室内伴发异位胰腺病例做出报道。若出现症状的食道憩室合并肿块通常采取手术切除的治疗方法，然而手术因有如纵隔粘连等因素具有较大的创伤性，甚至给病人带来一些较大风险的并发症，如吻合口瘘等。对于无法耐受较大创伤的患者来说，不妨采取经口内镜下切除的治疗方法，虽然也有可能会有些不确定的因素，但是目前医疗水平的不断发展，还可以联合胸腹腔镜来进行操作，以大限度减少患者的创伤。当然，这项操作和内镜操作者的技能和熟练程度及也许需要使用胸腹腔镜的操作者娴熟的操作技巧相关。若不能单独在内镜下切除，也许在不久的将来，医疗诊断能力的不断提高，综合性治疗创伤小，并发症少，且术后恢复快，将会减轻患者更多的痛苦。
作者：詹玮；廖欣 刊期： 2015年第10期
目的：我们前期研究证实，肢体缺血预处理（ limb ischemic preconditioning， LIP）能诱导大鼠的脑缺血耐受并且上调海马CA1区p38 MAPK和ERK的表达。然而，进行缺血预处理的肢体与遭受缺血打击的大脑相隔较远，由LIP启动的内源性保护信号如何作用于大脑尚不完全清楚。本研究旨在探讨自由基在LIP诱导的大鼠脑缺血耐受和p38 MAPK和ERK表达上调中的作用。方法：采用大鼠全脑缺血模型，硫堇染色观察神经病理学变化，免疫组化和Western blot观察p38 MAPK和ERK的表达。结果：硫堇染色结果表明，自由基清除剂DMTU能部分逆转LIP的脑保护作用， DMTU也部分阻断了LIP引起的p38 MAPK和ERK表达的上调。结论：自由基在肢体缺血预处理脑保护及p38 MAPK和ERK表达上调中发挥着重要的作用。
作者：袁强；吴勇娟；贾会贤；张晓；李文斌；孙晓彩 刊期： 2015年第10期
目的：探讨上转化纳米颗粒包覆的二氢卟吩（ UCNPs－Ce6）介导的光动力治疗对THP－1巨噬细胞凋亡机制。方法：通过DCFH－DA检测光动力治疗后细胞内活性氧（ ROS）的变化，通过钙黄绿素探针检测光动力治疗之后线粒体通透性转换孔（ MPTP）开放。通过免疫荧光与Western blotting检测光动力治疗后Bax蛋白与细胞色素C蛋白在胞浆和线粒体的表达。结果：光动力治疗后巨噬细胞内活性氧明显升高，线粒体膜电位下降，MPTP开放。免疫荧光与Western blotting结果显示光动力治疗后Bax蛋白发生了胞浆到线粒体的转位变化，细胞色素C从线粒体释放入胞浆，引起caspase级联反应诱导细胞凋亡。NAC阻断光动力治疗后ROS的产生，有效减少了巨噬细胞凋亡发生。结论：UCNPs－Ce6介导的光动力治疗能通过活性氧爆发激活线粒体－caspase通路引起THP－1巨噬细胞凋亡。
作者：朱兴；仲昭宇；姜月晴；田野；杨力明 刊期： 2015年第10期
目的：利用IL－2型肺离体灌流系统研究还原型谷胱甘肽（ GSH）对缺血再灌注损伤离体肺的保护作用。方法：建立大鼠离体肺缺血再灌注损伤模型，分为正常对照组（ control组）、缺血再灌注组（ I／R组）和还原型谷胱甘肽治疗组（ GSH组），每组各8只。 Control组只进行1 h的肺离体灌流；I／R组缺血45 min，复灌60 min；GSH组灌流液中加入4 mmol／L GSH，缺血45 min，复灌60 min。灌流过程中，通过IL－2型灌流系统检测潮气量、顺应性、气道阻力。灌流结束后，检测肺组织湿／干比、丙二醛含量、髓过氧化物酶活性、超氧化物歧化酶活性；苏木精－伊红（ HE）染色观察肺组织病理形态变化。结果：在复灌20、40和60 min时，与I／R组相比， GSH组潮气量、顺应性均增高；湿／干比和气道阻力均下降。同时，与I／R组相比，GSH组超氧化物歧化酶活性增加，髓过氧化物酶和丙二醛含量降低与I／R组相比， GSH组肺组织损伤程度明显减轻，差异均具有统计学意义（ P＜0．05）。结论：GSH能有效减轻肺缺血再灌注损伤。
作者：张鹏；胡明珠；翁平；孙洁芸；陈俊良；柴高尚；庞庆丰 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
