张伟华；卢方浩；孙爱丽；刘佳琦；徐长庆
目的：通过RNA－Seq技术探讨人体急进高原早期的转录特征。方法：对从平原快速进入高原（5300 m）的19名青年健康男性志愿者，于进入高原前后采集静脉血。提取总RNA进行测序，获取原始序列数据，对原始序列数据进行质量控制处理后，将其比对到人类参考基因组（ hg19）。统计相关读段数计算不同转录本的表达量。对急进高原前后转录本表达谱进行转录本差异表达分析，针对差异表达转录本，对其进行基因本体及通路分析。结果：从37908个转录本中筛选出836个差异转录本，其中274个转录本表达上调，562个转录本表达下调。人体急进高原早期多个生物学过程及信号通路参与了人体对高原低氧环境的反应。结论：面对高原低氧环境，人体在基因整体水平表现出了特有的差异表达谱特征，参与其中的生物学过程及信号通路对理解人体对高原低氧环境反应的分子机制具有重要的参考价值。
作者：陈建；刘宝；崔建华；张龙；徐刚；梁颜；梁羽；汪健；高钰琪 刊期： 2015年第10期
目的：Seipin突变或缺失可导致患者肥厚性心肌病和心衰，但机制不明。本课题研究seipin基因缺失（ seipin－／－）对小鼠心肌重塑的影响及机制。方法：用2月龄的雄性seipin－／－及野生型（WT）小鼠主动脉缩窄手术（TAC）后12周（n＝8）研究seipin缺失对心肌重塑的影响及机制。同时体外检测 seipin－／－及WT 小鼠心肌细胞钙流。结果：和 WT TAC 组相比， seipin－／－TAC组出现了更加严重的心腔扩大、心肌肥厚和左室舒张功能障碍；心肌胶原沉积，炎症细胞浸润和凋亡小体增加；有更为明显的心肌细胞内质网扩张，微管和线粒体变形病变；心肌内质网应激相关基因、心衰和心肌肥厚因子及炎症基因表达增加，钙流相关基因（SERCA2a、RyR和NCX）下降。 Seipin－／－小鼠和WT小鼠相比，心肌细胞出现慢钙瞬变衰减和肌浆网钙离子含量增加。结论：Seipin缺陷加重小鼠TAC术后心肌肥厚和舒张性心力衰竭，可能与心肌钙离子通道的受损并促进心肌细胞内质网应激、炎症和细胞凋亡相关。
作者：刘雪静；吴晓月；王欢；杨诚志；李子健；张幼怡；刘国庆；杨宏远；黄薇 刊期： 2015年第10期
目的：观察氢饱和盐水对脂多糖（LPS）刺激的大鼠肺间质巨噬细胞（PIMs）分泌促炎细胞因子的影响。方法：应用胶原酶消化法结合肺泡耗竭灌洗和肺循环灌洗技术分离纯化SD大鼠PIMs，在用常规RPMI－1640培养基或含氢RPMI－1640培养基的情况下，用LPS（1 mg／L）刺激细胞一定时间，ELISA法检测细胞培养上清中TNF－α和IL－1β的含量，用RT－PCR技术分析细胞中TNF－α和IL－1βmRNA的表达。结果：各细胞因子的浓度随着LPS刺激时间的延长而升高，培养上清中TNF－α和IL－1β的浓度分别于LPS刺激后3和6 h达到高峰；选取各细胞因子表达高峰的时点观察含氢培养基对其表达的影响，发现含氢培养基可抑制LPS诱导的TNF－α和IL－1β。 LPS刺激PIMs后，TNF－α和IL－1βmRNA的表达也增高，分别于LPS刺激后2和3 h达到高峰，含氢培养基对TNF－α和IL－1βmRNA的表达也具有负向调节作用。结论：在体外培养的大鼠PIMs，含氢培养基可抑制LPS诱导的TNF－α和IL－1βmRNA表达及其蛋白合成释放。
作者：黄新莉 刊期： 2015年第10期
目的：研究辣椒素对tau蛋白磷酸化的作用及机制。方法：40只小鼠随机分为4组：饲料＋自来水饲养组、饲料＋20％蔗糖水饲养组、含0．01％辣椒素的饲料＋20％蔗糖水饲养组和含0．01％的辣椒素饲料＋自来水饲养组。24周造模成功后，水迷宫实验检测学习记忆能力的改变；电生理技术检测长时程增强（ LTP）的改变；免疫印迹和免疫组化检测GSK－3β、tau蛋白多个AD相关位点的磷酸化水平变化；检测GSK－3β活性。结果：长期高糖饮食造成：（1） tau蛋白的多个AD相关磷酸化位点的磷酸化水平升高；（2）LTP诱导障碍、突触可塑性减弱；（3）GSK－3β活性升高；（4）空间学习记忆障碍。同时长期给予辣椒素饮食，可减轻高糖饮食引起上述AD样变化。结论：长期高糖饮食可通过激活GSK－3β引起tau蛋白多个AD相关位点的磷酸化；长期给予辣椒素缓解AD样病理变化和症状。
作者：王林；周新文 刊期： 2015年第10期
目的：通过对人附红细胞体（ eperythrozoon，EH）重度感染患者的血浆中CD35、CD58、CD59免疫相关因子和IgM的测定，观察人附红细胞体对红细胞免疫功能的影响。通过对NO、SOD和MDA指标的检测，观察人附红细胞体对机体抗氧化能力的影响。方法：采集内蒙古国际蒙医院患者的血液，用光学显微镜、透射电镜观察以及PCR 检测的方法，鉴定并筛选出30名重度感染附红细胞体的患者，以30例健康人作对照。用ELISA试剂盒对2组血样分别检测。结果：附红细胞体感染患者SOD活性下降，NO和MDA含量升高，血浆中CD35、CD58、CD59和IgM含量升高，差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论：（1）自由基产生增多而清除减少，是人附红细胞体重度感染时机体组织细胞损伤因素之一；（2）附红细胞体感染破坏红细胞，红细胞膜上的CD35、CD58和CD59脱落致血浆含量增高，使红细胞天然免疫功能和特异性免疫失平衡，可能是该病易引起其它病原体继发感染的免疫学理论依据之一。
作者：赵文军；陈瑶；刘志跃；邰秀珍；杨殿相 刊期： 2015年第10期
目的：通过测定乳腺癌组织中调节性T淋巴细胞（ regulatory T cells，Treg）的计数，探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系，阐明在乳腺癌中Treg的分布表达与其临床预后的相关性。方法：应用免疫组织化学方法检测60例乳腺癌组织中Treg表达。结果：CD127＋染色颗粒主要定位于Treg的胞膜和／或胞浆，细胞外形呈卵圆形，主要分布在肿瘤间质。 Treg的计数随着乳腺癌组织分化程度增高而减少，且高分化组与中分化组、高分化组与低分化组、中分化组与低分化组之间的Treg计数相比具有显著差异（P＜0．05）。无淋巴结转移组Treg计数低于淋巴结转移组，两者相比具有显著差异（P＜0．05）。但Treg计数在患者年龄、绝经状况及乳腺癌的病理学分类无显著差异。 Treg计数与患者生存期的相关性分析显示乳腺癌中Treg与患者预后呈负相关（ P＜0．05）。结论：Treg的计数随着乳腺癌组织分化程度增高而减少，Treg在乳腺癌淋巴结转移组的数目高于无淋巴结转移组，其数目与乳腺癌患者生存期呈负相关。
作者：成媛 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
目的：自1976年人类间充质干细胞（ mesenchymal stem cells， MSCs）首次被分离，MSCs的增殖与分化、分泌与调节及其免疫原性低的生物学特性逐渐被发现，并被广泛地应用于临床试验研究。2009年第一个MSCs药品prochymal正式上市，用于急性移植物抗宿主病（ GVHD）和Crohn病治疗。本实验室从人不同组织提取MSCs，检测MSCs生物学特性，并探讨其在组织修复中的作用机制。方法：组织贴壁及消化法，从人胎盘、脐带、脐血、脂肪和牙髓组织提取MSCs；应用流式细胞术鉴定MSCs；通过诱导与共培养方法，检测MSCs分化能力；应用Western blot、免疫荧光、ELISA、组织芯片等技术检测MSCs的分泌功能。结果：不同组织来源的MSCs具有分化成内皮细胞、脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞和神经细胞的能力，并分泌VEGF、FGF、IGF－1、laminin 10、fibronectin、TGFβ1等生物活性蛋白，促进损伤血管、皮肤和神经修复。结论：MSCs及其分泌的生物活性蛋白可以作为种子细胞和（或）改善细胞微环境因素，被应用于临床疾病损伤修复、组织工程与再生医学领域。
作者：于艳秋 刊期： 2015年第10期
目的：探讨Bax对黄芪注射液抑制缺氧缺糖／复氧复糖大鼠海马神经元caspase－3表达的影响。方法：取培养8 d的大鼠海马神经元，随机分为9组：正常对照组、模型组（缺氧缺糖／复氧复糖组）、黄芪注射液组、黄芪注射液溶剂对照组、Bax抑制剂（抑制肽V5）组、Bax激动剂（BAM7）组、Bax抑制剂＋黄芪注射液组和Bax激动剂＋黄芪注射液组。除正常对照组外，各组均进行缺氧缺糖0．5 h，再分别于复氧复糖后0、0．5、2、6、24、72和120 h采用Western blot法和RT－PCR法检测海马神经元caspase－3蛋白和mRNA的表达。结果：与模型组比，黄芪注射液组、Bax抑制剂组、Bax抑制剂＋黄芪注射液组和Bax激动剂＋黄芪注射液组caspase－3蛋白及mRNA表达均降低（P＜0．05），而黄芪注射液溶剂对照组和Bax激动剂组无明显变化（P＞0．05）。结论：黄芪注射液可通过减少Bax的表达发挥对缺氧缺糖／复氧复糖大鼠海马神经元凋亡抑制作用。
作者：董雅洁 刊期： 2015年第10期
目的：探讨硫化氢在低剪切应力诱导的人脐静脉内皮细胞（ HUVECs）自噬障碍中的作用。方法：HUVECs经培养传代分为3组：对照组、低剪切应力组（5 dyn／cm2）和正常剪切应力组（15 dyn／cm2）。在平板流动腔上对内皮细胞进行剪切应力处理，Western blot检测CSE蛋白水平，RT－PCR检测CSE的mRNA含量，荧光显微镜MDC染色观察自噬表泡，免疫荧光检测LC3表达，Western blot检测Beclin1＼LC3＼p62蛋白水平，以评估不同剪切应力下，诱导HUVECs自噬障碍过程中内源性H2 S生成的变化。接下来用CSE干扰siRNA及CSE过表达质粒分别转染HUVECs后，再分别用5／15 dyne／cm2处理1 h，测自噬表达情况。结果：WB结果显示，与正常剪切应力组相比，低剪切应力组CSE表达明显减少。 Beclin1及LC3表达减少，p62表达增高，免疫荧光结果显示低剪切应力组LC3表达减少。提示低剪切应力组自噬障碍。结论：低剪切应力诱导的人脐静脉内皮细胞存在自噬障碍，其与CSE表达降低相关。
作者：唐蕙；唐志晗；任重；彭娟；危当恒；任晓晴；肖卫晋；刘录山；姜志胜 刊期： 2015年第10期
目的：探讨血栓素A2（ TXA2）受体TP拮抗剂对2种多发性骨髓瘤细胞系RPMI－8226及U266细胞增殖的影响及其作用机制。方法：利用多种抑制剂及激动剂刺激RPMI－8226及U266后，采用试剂盒检测细胞的增殖率及caspase－3活性；采用流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期；通过real－time PCR检测DP1－2、EP1－4、FP、IP、TP及CDK1、cyclin B1的mRNA变化；采用Western blot检测COX－1、COX－2、CDK1、cyclin B1、p－JNK、T－JNK、p－p38 MAPK、T－p38 MAPK的蛋白表达；LC／MS／MS方法检测PG产量。结果：（1）在COX下游受体中，只有TP拮抗剂能够明显抑制2种骨髓瘤细胞的增殖（P＜0．05）。（2）同时，其还能够促进细胞停滞在G2／M期，并导致cyclin B1／CDK1的mRNA和蛋白水平明显下调（P＜0．05）。（3） p38 MAPK及JNK抑制剂能够明显抑制TP激动剂导致的细胞增殖增加，并下调其导致的p38 MAPK／JNK磷酸化及cyclin B1／CDK1的蛋白增加（ P＜0．05）。（4）TP拮抗剂能够提高骨髓瘤细胞凋亡率，并显著增加caspase－3活性（P＜0．05）。结论：（1） TP拮抗剂能够抑制2种骨髓瘤细胞的增殖。（2）这种抑制是通过p38 MAPK／JNK通路下调cyclin B1／CDK1蛋白表达从而使细胞阻滞在G2／M期实现的。（3）也可通过促进细胞凋亡实现。
作者：刘倩；余鹰；于昱；熊红 刊期： 2015年第10期
目的：探讨intermedin（ IMD）1－53在apoE－／－小鼠心肌纤维化中的作用和机制。方法：同型半胱氨酸（ Hcy）处理apoE－／－小鼠和心脏成纤维细胞。结果：IMD1－53显著抑制Hcy处理apoE－／－小鼠心肌间质胶原沉积、I型和III型胶原mRNA和蛋白表达，直接抑制Hcy诱导的心脏成纤维细胞I型和III型胶原的蛋白表达，抑制心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞分化。此外， IMD1－53抑制Hcy处理的apoE－／－小鼠心脏组织及心脏成纤维细胞内质网应激标志分子如葡萄糖调节蛋白78（ GRP78）、GRP94、激活转录因子6（ATF6）、ATF4、蛋白激酶受体样内质网激酶、真核翻译起始因子2α、肌醇需求酶1α和剪切的X盒结合蛋白1的激活。 IMD1－53抑制Hcy处理的apoE－／－小鼠心脏组织及成纤维细胞炎症相关分子如肿瘤坏死因子α、单核细胞趋化蛋白1、白细胞介素6、白细胞介素1、核因子κB、转化生长因子α1和c－Jun氨基末端激酶的激活。结论：IMD1－53显著抑制心肌纤维化，其机制可能与IMD减轻内质网应激和炎症反应有关。
作者：张金胜；侯跃龙；陆薇薇；倪先强；林帆；鱼艳荣；唐朝枢；齐永芬 刊期： 2015年第10期
目的：已知低氧可以激活巨噬细胞，进而参与低氧导致的炎症反应。 RhoB是小G蛋白Rho家族的成员，其表达能被基因毒应激等诱导，但是RhoB是否参与低氧诱导的炎症反应还不清楚。本研究探讨了低氧对巨噬细胞RhoB表达的影响及在炎症反应中可能的作用。方法：用real－time PCR和Western blot方法研究基因的表达；用ELISA法检测促炎细胞因子的分泌；用Boyden小室检测细胞的迁移；用报告基因的方法检测NF－κB的活性。结果：低氧可在原代培养的小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264．7巨噬细胞中上调RhoB的表达。低氧诱导因子1（HIF－1）和激活的JNK和ERK与低氧上调RhoB有关。干扰RhoB的表达可以明显抑制低氧时RAW264．7细胞NF－κB的转录活性和促炎细胞因子IL－1、IL－6和TNF－α的产生，并可抑制细胞黏附和增加细胞迁移，表明低氧上调RhoB参与了低氧增加巨噬细胞促炎细胞因子的生成，促进其黏附和抑制其迁移的作用。结论：Rho－NF－κB通路在低氧激活巨噬细胞及低氧诱导的炎症反应中发挥重要作用。
作者：黄高翔；张明焯；王燕；苏杰；卢建 刊期： 2015年第10期
目的：探讨急性低血压兴奋清醒大鼠前庭内侧核（ MVN）的5－羟色胺（5－HT）及其受体机制。方法：利用脑部微量透析法和免疫组织化学法观察了MVN区5－HT含量及其受体表达。结果：静脉注射硝普钠诱发急性低血压时，对照组和单侧前庭器官破坏对侧MVN区5－HT含量明显增加（P＜0．05），而单侧前庭器官破坏同侧MVN区5－HT含量无明显变化。在前庭器官完整大鼠诱发急性低血压后双侧MVN区5－HT及5－HT1A受体表达均明显增多，但是在对照组无明显表达，组间比较均具有显著差异（ P＜0．05）。破坏单侧外周前庭器官2周后，诱发急性低血压时双侧MVN区5－HT及5－HT1A受体均不对称表达，损伤侧表达均明显少于损伤对侧（ P＜0．01）。结论：清醒动物诱发急性低血压影响MVN功能活动过程中可能有5－HT及其受体的参与。
作者：江艺鑫；李香兰 刊期： 2015年第10期
目的：研究铁超载对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响以初步证实铁超载对肝纤维化的促进作用。方法：大鼠肝星状细胞HSC－T6给予硫酸亚铁2μmol／L负载24 h，正常对照组给予DMSO 2μmol／L。免疫荧光染色法观察铁在HSC－T6中的分布面积，流式细胞术检测HSC－T6增殖， TUNEL法检测HSC－T6凋亡，Western blot检测HSC－T6基质金属蛋白酶1（MMP－1）和金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP－1）蛋白表达水平。结果：与正常对照组相比，铁超载组HSC－T6内铁染色阳性的平均面积为39．02％±2．03％，平均增殖率为61．02％±2．21％，平均凋亡率为13．01％±0．95％，MMP－1和TIMP－1的蛋白平均表达水平分别增加了38．82％±7．62％和179．88％±17．52％。结论：铁超载导致肝星状细胞的增殖率大于其凋亡率，并且肝星状细胞基质金属蛋白酶抑制剂的表达水平高于其基质金属蛋白酶的水平，因此推断铁超载促进了肝星状细胞的活性，从而促进了肝纤维化的进程。
作者：张颖 刊期： 2015年第10期
目的：I型糖尿病的发病与自身免疫反应有关，本研究旨在制备一种抗自身抗体的抗血清，用以验证对I型糖尿病小鼠的治疗作用。方法和结果：我们用亲和层析方法提取纯化6～8周龄I型糖尿病（ NOD）小鼠血清中的总IgG。以此总IgG作为抗原与免疫佐剂混合，免疫BALB／c小鼠，制备出抗总IgG的抗血清，我们将它命名为NIgG抗血清。将此抗血清一次性注入发病前的6～8周龄的NOD小鼠体内，观察至32周，发现此抗血清能有效地控制NOD小鼠血糖的增高，降低发病率和死亡率，延迟糖尿病的发生以及控制胰腺中胰岛体积的萎缩。 NIgG治疗的NOD小鼠，32周龄时胰岛体积、胰岛周围炎症浸润和血糖浓度与未经治疗的6～8周龄的NOD小鼠相比，均无显著差异，说明NIgG治疗阻止了NOD小鼠的病情进展。 NIgG抗血清治疗组和对照组脾脏中分泌自身抗体的B淋巴细胞占总B淋巴细胞的百分比在治疗组中下降。结论：NIgG抗血清一次性静脉注射治疗能有效防治NOD小鼠的糖尿病。
作者：栾丽娟；薛蓉；陆超；催安凤；全晶；向萌；王新红；孙宁；孟丹；陈思峰 刊期： 2015年第10期
目的：针对脓毒症（ sepsis）发病机制的复杂性和非线性特点，采用多种组学技术与系统生物学整合研究策略，以发现脓毒症新的生物标志物群，揭示脓毒症的组学／网络机制，探讨脓毒症多靶点整合性干预的新思路。方法：采用大鼠盲肠结扎穿刺脓毒症模型和选用部分脓毒症病人，采用GEO数据库查询和iTRAQ蛋白质组学技术分析其血清蛋白质组学变化，采用亚网络富集分析揭示重要节点蛋白和可能的干预靶点。结果：通过iTRAQ蛋白质组学技术，在脓毒症大鼠中发现47个差异蛋白，其中PTX3、MMRN1、FCN1、CPN2、PRSS1和PF4可用于脓毒症的诊断；MMRN1、PPBP、FGα和FGβ这4个生物标志物的组合可用于脓毒症的预后预测；PTX3在临床脓毒症患者的诊断和预后预测方面优于传统的降钙素原（ PTC）和C反应蛋白（ CRP）， IL－1R2是诊断脓毒症和鉴别G－和G＋菌脓毒症的新的血清生物标志物；采用亚网络富集分析发现CCAAT增强子结合蛋白（ C／EBP）和内皮抑制素（ endostatin）是脓毒症的重要节点蛋白和潜在干预靶点。结论：组学技术和系统生物学整合研究策略为脓毒症机制阐明和多靶点整合性干预带来新希望。
作者：肖献忠；王慷慨；张华莉；焦京；高敏；彭玥；蒋宇 刊期： 2015年第10期
医学留学生教育已成为我国高等医学教育的重要组成部分，如何提高留学生教育教学质量的改革是当前形势所需，病理生理实验教学评价体系是实验教学改革的重要内容之一。目前对留学生病理生理实验教学的评价方式仅限于单一、主观的终极性评价，这不符合留学生积极主动、思维活跃的特点，使学生忽视实验课的学习，纵容了学生懒惰、被动学习的不良情绪，压抑了他们探求知识的欲望和能力，而且评价范围窄，代表性差，难以客观、全面地评价教学效果和学生的学习质量，使能力培养这一环节的作用不能充分发挥出来。新评价体系的构建与实施，强化形成性评价在整个评价体系中的比重，不但使实验课程的评价更加科学、客观，而且对于培养学生的知识应用能力、信息获取和选择能力、动手实践能力、创新能力，都起到了积极的促进作用，是监督和检查学生学习效果及应用能力，提高实验教学质量的有效手段，值得全面推广。
作者：张彩华；邢嵘 刊期： 2015年第10期
主线式PBL（ main－problem－based learning， M－PBL）是我们在多年教改实践中探索出以PBL为基础的一种创新的组合教学模式，包括主线式PBL，主线式单元串讲和病例讨论。主线PBL突出病理生理学课程内容的整体性和连贯性，主线单元串讲则强调各病理过程间的内在联系，病例讨论重在培养学生的临床综合思维能力。授课后对本校临床专业2012级1155名中国和外国本科生的问卷调查结果显示：80％的中国学生和78％的国外留学生喜欢并支持M－PBL组合教学模式，95％的中国学生和90％国外留学生认为该教学模式对病理生理学的学习和复习考试有很好的帮助。该年级《病理生理学》期末理论考试成绩分析结果亦表明，国内学生的及格率85％，优秀率30％，平均分75，外国留学生的及格率77％，优秀率45％，平均分80。国内学生，尤其留学生的成绩较往年提高。
作者：胡贞贞；周晓燕；蔡震宇；熊丽霞；朱俊；晏浩；黄永红；徐方云 刊期： 2015年第10期
杂色曲霉素（ sterigmatocystin， ST）是一种致癌性真菌毒素，在人类食物中污染非常广泛。我们前期研究发现，ST可诱导人胃黏膜上皮细胞G2期阻滞。普遍认为各种理化因素引发的DNA损伤与细胞周期阻滞和细胞凋亡关系密切。为了进一步探讨ST诱发GES－1细胞G2期阻滞的机制，本实验研究了ST诱导的DNA损伤及损伤下游的ATM／p53信号通路的激活情况。我们通过彗星实验检测到了ST引发的GES－1细胞的DNA损伤；同时发现了ATM及其下游分子Chk2和 p53的激活；通过ATM阻断剂咖啡因的预处理，我们发现咖啡因可以阻断ST诱导的GES－1细胞G2期阻滞和p53及下游分子的激活；另外，我们发现p53 siRNA转染至GES－1细胞可有效阻断ST诱导的GES－1细胞G2期阻滞的作用；ST还能诱导GES－1细胞凋亡。因此，通过实验我们得出结论，ST能够引起GES－1细胞的DNA损伤，并激活损伤下游由ATM／p53依赖的信号通路，进而影响G2／M期相关调控因子及凋亡相关蛋白的表达，终诱导GES－1细胞发生G2期阻滞和凋亡。
作者：张东辉 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
