目的：研究蛋白激酶R样内质网激酶（ PERK）／核因子红系相关因子2（ Nrf2）途径介导的内质网应激反应在不同浓度的毒胡萝卜素（thapsigargin， TG）和衣霉素（tunicamycin， TM）诱导的H9c2细胞凋亡中的作用。方法：在不同浓度TG和TM诱导的H9c2细胞模型上，采用Annexin V／PI双标法和TUNEL法检测细胞凋亡，CCK－8法检测细胞活力；以Western blot检测磷酸化PERK、Nrf2及活化转录因子4（ ATF4）等蛋白水平，免疫荧光法检测Nrf2的核转位。结果：与对照组比较，TG浓度为20 nmol／L、TM浓度为160μg／L处理H9c2细胞48 h时可诱导H9c2细胞凋亡，增加PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4的表达；内质网应激抑制剂牛磺酸和熊去氧胆酸处理细胞后明显减轻TG和TM诱导的H9c2细胞凋亡，并下调PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4的表达。结论：PERK／Nrf2途径参与TG和TM诱导的H9c2细胞内质网应激相关细胞凋亡。
作者：陶天琪 刊期： 2015年第10期
目的：探讨Bax对黄芪注射液抑制缺氧缺糖／复氧复糖大鼠海马神经元caspase－3表达的影响。方法：取培养8 d的大鼠海马神经元，随机分为9组：正常对照组、模型组（缺氧缺糖／复氧复糖组）、黄芪注射液组、黄芪注射液溶剂对照组、Bax抑制剂（抑制肽V5）组、Bax激动剂（BAM7）组、Bax抑制剂＋黄芪注射液组和Bax激动剂＋黄芪注射液组。除正常对照组外，各组均进行缺氧缺糖0．5 h，再分别于复氧复糖后0、0．5、2、6、24、72和120 h采用Western blot法和RT－PCR法检测海马神经元caspase－3蛋白和mRNA的表达。结果：与模型组比，黄芪注射液组、Bax抑制剂组、Bax抑制剂＋黄芪注射液组和Bax激动剂＋黄芪注射液组caspase－3蛋白及mRNA表达均降低（P＜0．05），而黄芪注射液溶剂对照组和Bax激动剂组无明显变化（P＞0．05）。结论：黄芪注射液可通过减少Bax的表达发挥对缺氧缺糖／复氧复糖大鼠海马神经元凋亡抑制作用。
作者：董雅洁 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
Intermedin（ IMD）是2004年发现的肾上腺髓质素家系的新成员。 IMD具有抗氧化、抗炎、调节内分泌代谢、调节免疫等生物学效应，是新的内源性心血管、肾脏保护因子。我们及国外实验室均报道，IMD可以显著抑制动脉粥样硬化以及巨噬细胞向泡沫细胞的转变；IMD还可以通过抑制内质网应激以及上调基质Gla蛋白抑制血管钙化的发生发展。近期我们在ApoE－／－小鼠用微量渗透泵给予血管紧张素II（ Ang II）诱导的腹主动脉瘤（ AAA）及血管平滑肌细胞（ VSMC）上发现IMD可以降低腹主动脉瘤的发生率和腹主动脉大直径，抑制主动脉内活性氧（ ROS）的产生，降低NADPH氧化酶的活性及其亚单位Nox1、Nox2和Nox4的蛋白表达。另外，IMD显著抑制基质金属蛋白酶的激活，减轻CD68阳性巨噬细胞的浸润和炎症因子表达，抑制VSMC凋亡。 IMD抑制Nox1和Nox4蛋白表达的作用可被IMD特异性受体抑制剂IMD17－47和cAMP／PKA通路阻断剂H89所阻断。这些结果提示IMD可能通过cAMP／PKA通路抑制Nox4介导的氧化应激抑制AAA的发生发展。
作者：齐永芬 刊期： 2015年第10期
目的：探究补体C1q／肿瘤坏死因子相关蛋白6（CTRP6）对大鼠心肌梗死后心功能和心室重塑的影响及可能的分子机制。方法：结扎大鼠冠状动脉左前降支构建心肌梗死模型；天狼星红染色检测心肌纤维化水平；免疫印迹和免疫组化等方法检测CTRP6及纤维化相关分子的表达变化；采用腺病毒注射的方法过表达心肌局部CTRP6；原代培养成年大鼠心脏成纤维细胞，探究可能的分子机制。结果：CTRP6主要表达于心肌细胞胞浆中，心肌梗死后CTRP6表达显著降低。过表达CTRP6可缓解大鼠心肌梗死后心功能障碍和心室重塑；外源性CTRP6可抑制转化生长因子（ TGF－β1）诱导的肌成纤维细胞转化；CTRP6可抑制TGF－β1诱导的RhoA活化及心肌素相关转录因子－A（ MRTF－A）的核转位，预孵育RhoA抑制剂可逆转TGF－β1诱导的MRTF－A核转位及肌成纤维细胞转化。结论：CTRP6通过抑制TGF－β1诱导的RhoA活化及MRTF－A核转位，进而发挥抑制肌成纤维细胞转化及减轻心肌梗死后的心肌纤维化的作用。
作者：张城林 刊期： 2015年第10期
目的：为了解外周血肿瘤标志物检测结果与胃癌患者长期生存的关系。方法：对获得随访的78例胃癌患者复习临床病理资料，用SPSS 12．0统计软件进行Kaplan－Meier （ K－M）法和log－rank检验的单因素分析及Cox回归多因素分析。结果：K－M法分析CEA＜5μg／L与≥5μg／L比较胃癌长期生存有显著差异（ P＜0．05）。临床I－II期与III－IV期比较胃癌长期生存有显著差异（P＜0．01）。胃癌无脉管瘤栓与有瘤栓比较长期生存有显著差异（P＜0．01）。肿瘤所占分区（A胃窦，M胃体，C贲门）：占一个区、占2个区和占3个区比较胃癌长期生存有显著差异（ P＜0．01）。 Cox分析表明CEA正常（ P＜0．01）、临床I～II期（P＜0．01）、肿瘤占1个分区（P＜0．05）和无脉管瘤栓（P＜0．01）是胃癌患者长期生存的独立预后因素。结论：胃癌患者CEA正常、I～II期、无瘤栓和肿瘤占1个分区是长期生存的独立预后因素。
作者：许沈华；凌雨田；朱赤红；刘翔；凌志强 刊期： 2015年第10期
目的：研究亚硝胺类致癌物引起DNA损伤反应中组蛋白H3S10磷酸化改变及其上游调控机制。方法：分析N－甲基－N’－硝基－N－亚硝基胍（MNNG）和 N－甲基－N－亚硝基脲（MNU）暴露后胃黏膜上皮细胞GES－1的组蛋白磷酸化改变。通过上游激酶、磷酸酶及相关信号通路的分析明确调控机制。结果：MNNG和MNU暴露后组蛋白H3S10磷酸化下调呈双相动态改变，与细胞周期变化无关。致癌物暴露后15 min即出现第1次下调，早于γH2AX反应，进一步研究发现该下调效应受PARP－1及Aurora－B通路调控。第2次下调发生较晚，在DNA损伤修复阶段持续存在，且不依赖于PARP－1，可能与p53信号通路相关。结论：亚硝胺类致癌物暴露后组蛋白H3S10磷酸化可出现复杂的动态改变，其上游调控机制分别与PARP－1／Aurora－B和p53信号通路相关。 H3S10磷酸化下调参与致癌物诱导的DNA损伤反应。
作者：陈凯琳；沈静 刊期： 2015年第10期
目的：探讨Clock蛋白通过对前脂肪细胞3T3－L1增殖的调节来促进细胞成脂的作用和机制。方法：利用RNAi或Clock的高表达病毒载体，分别在3T3－L1中低表达或高表达Clock基因。 CCK－8检测细胞增殖，利用RT－PCR和Western blot技术检测相关细胞周期蛋白和Clock蛋白的表达情况。利用染色质免疫共沉淀技术检测Clock蛋白对Wnt信号通路关键因子的转录调节作用。结果：Clock蛋白可以促进3T3－L1细胞的增殖；同时在Clock基因低表达的3T3－L1细胞和ClockΔ19小鼠脂肪组织中，促进细胞周期进行的关键调控因子细胞周期蛋白D1、c－Myc和增殖细胞核抗原（ PCNA）的表达受抑制。低表达Clock基因的3T3－L1细胞中，β－连环蛋白（β－catenin）表达量降低；ChIP结果发现Clock蛋白可与β－catenin、Dvl2（dishevelled 2）和c－Myc上游启动子结合，调控其转录激活，Wnt信号通路抑制剂可以抑制Clock蛋白促进细胞增殖的作用。结论：Clock蛋白可以通过调控Wnt信号通路来促进前脂肪细胞增殖，并进一步抑制脂肪分化程序的启动，抑制细胞成脂。
作者：朱珠；袁功盛；许利荣；陆超；李晓波；孙宁；钱睿哲 刊期： 2015年第10期
目的：观察博莱霉素（ BLM）致肺纤维化时肺组织中内源性的气体信号分子二氧化硫（ SO2）生成及催化产生SO2的关键酶是天冬氨酸氨基转移酶（ AAT）－1、－2表达的变化。方法：将36只健康雄性Wistar大鼠（体重170～200 g）随机分为对照组和BLM组。采用一次性气管内滴注BLM－A5（5 mg／kg）的方法复制大鼠肺纤维化动物模型，对照组大鼠气管内滴注等体积无热原生理盐水。两组大鼠分别于气管内滴注后7 d、14 d、28 d处死动物。光镜下观察肺组织纤维化（ Masson染色）的程度；采用生化法测定肺组织中胶原蛋白、SO2含量及AAT活性；Western blot法检测肺组织中AAT蛋白表达的变化。结果：BLM可引起肺组织炎症反应和肺纤维化，肺组织中羟脯氨酸含量呈时间依赖性地增高。与对照组相比，BLM组肺组织中AAT mRNA表达减少、酶的活性降低，同时肺组织中SO2含量下降。结论：AAT／SO2下调可能参与了BLM致肺纤维化的发生。
作者：黄新莉 刊期： 2015年第10期
目的：探索指导性预习在实验教学中的合理应用方法。方法：五年制本科中施行教师指导性预习、学生普通预习两种方法，在教学中期及结束后，进行问卷调查。指导性预习由教师设计预习方案，学生以组为单位进行预习。内容由易到难，后阶段，学生能够在方案指导下，完成全部预习，自主完成实验。结果：学生对指导性预习满意度98％，提高学习积极性100％，教学效果满意度95％。结论：指导性预习可提高课堂教学效率和效果，提高学生的自主学习能力。需要设计合理方案，循序渐进，逐步训练学生预习的能力，才能达到预期目的。
作者：胡海 刊期： 2015年第10期
目的：观察Bcl－2－modifying factor （ BMF）在氧化应激致心肌细胞损伤中的作用和机制。方法：在培养的乳鼠心肌细胞氧化应激模型上，采用LDH活性检测和TUNEL法观察细胞损伤，荧光染色技术观察线粒体分裂和BMF在细胞中定位， RT－PCR和Western blot方法观察BMF mRNA和蛋白表达。结果：正常生理状态下，BMF定位在胞浆的细胞骨架，当用过氧化氢处理心肌细胞后，BMF mRNA和蛋白水平增加（P＜0．05），同时BMF从胞浆转位至线粒体，伴随着线粒体分裂增加（P＜0．05），细胞凋亡增多（P＜0．05）。用BMF－siRNA腺病毒感染心肌细胞后进行过氧化氢处理，心肌细胞凋亡率明显下降（P＜0．05），线粒体分裂明显减少（ P＜0．05）。用adBMF感染心肌细胞，发现随着感染时间的延长，心肌细胞培养液中LDH活性和心肌细胞凋亡率明显增加（P＜0．05），线粒体分裂明显增多（P＜0．05）。进一步研究发现BMF可以明显增加细胞色素C在胞浆中的表达。结论：BMF参与氧化应激诱导的心肌细胞损伤，其机制与线粒体分裂和线粒体凋亡途径有关。
作者：李玉珍；宋丹丹；刘秀华 刊期： 2015年第10期
目的：PPARγ激动剂被证实可限制动脉粥样硬化的进展，然而其潜在的病理机制仍不清楚。我们通过研究PPARγ下游AMPK分子对ox－LDL诱导的内皮细胞损伤和功能障碍的保护作用。方法：取4周龄SD大鼠心肌左室组织，分离微血管内皮细胞。 DMEM培养24 h后，再经ox－LDL刺激24 h，检测细胞eNOS蛋白、NO释放以及AMPK磷酸化变化，并比较GW9662或PPARγ－siRNA预处理前后的差异。通过细胞成管实验，检测抑制AMPK或PPARγ对于血管新生的影响。结果：ox－LDL诱导24 h后，eNOS、NO和磷酸化AMPK水平明显下调，抑制PPARγ有类似结果。 ox－LDL刺激血管内皮细胞24 h后，细胞凋亡和老化加重，血管新生减弱。在环格列酮预处理后，eNOS、NO和磷酸化AMPK的水平都明显上调，血管新生能力增强，然而此效应可以被PPARγ－siRNA或GW9662逆转。结论：我们的结果提示环格列酮等PPARγ激动剂有效拮抗ox－LDL诱导的血管内皮细胞损伤，其分子机制是通过AMPK磷酸化激活，进一步上调eNOS和VEGF表达，NO释放，从而减少内皮细胞凋亡和老化，促进血管新生和内皮舒张功能。
作者：王时俊 刊期： 2015年第10期
目的：我们的前期研究发现，敲除FKBP12．6基因可导致成年雄性小鼠心肌肥大。本研究旨在探讨FKBP12．6缺失导致性别差异性心肌肥大的分子机制。方法：手术摘除FKBP12．6基因敲除小鼠睾丸以观察对心肌肥大的影响；放射性免疫检测法（RIA）和ELISA法检测FKBP12．6敲除小鼠17β－estradiol （E2）、testosterone （T）、LHβ和FSHβ分泌变化情况；建立垂体神经元LβT2 FKBP12．6shRNA载体稳定干扰细胞系，采用Fluo3－AM荧光探针检测［ Ca2＋］ i；real－time PCR检测LHβ、FSHβ、calci－neurin（CaN）等mRNA表达变化；分离胞浆胞核蛋白，Western blot法检测CaN、MCIP1．4、NFAT3、Nur77、Pin1等蛋白表达和核浆分布情况。结果：摘除雄性FKBP12．6基因敲除鼠的睾丸可显著抑制心肌肥大的发生；FKBP12．6敲除小鼠心脏中可能促进心肌肥大的通路CaN和CaMKⅡ的表达和活性并未发生明显变化；血清E2、T、LHβ及FSHβ水平与WT相比显著上调，表明敲除小鼠性腺轴调控增强；LβT2 FKBP12．6干扰后［ Ca2＋］ i 显著上升；性腺轴相关基因LHβ、SF－1、Nur77和钙离子相关基因CaN、MCIP1．4、SERCA2的mRNA表达显著上调；胞浆中CaN和MCIP1．4蛋白水平上调；NFAT3、Nur77和Pin1核转位明显增加。结论：FKBP12．6缺失后垂体细胞内钙离子水平上调，激活CaN／NFAT3通路，进而促进LHβ和FSHβ转录，导致下丘脑－垂体－性腺轴激活，从而诱发性别差异性心肌肥大。
作者：肖云飞；邓柯玉；王婵娟；曾智雄；管小卉；汪玲芳；姬广聚；寿伟年；辛洪波 刊期： 2015年第10期
目的：探讨纤连蛋白／整合素β对短期高脂饮食诱导的脂肪肝的作用及其机制。方法：ATN161为整合素β的拮抗剂。将雄性C57BL／6小鼠分为4组，正常饮食（ND）组，ND＋ATN161组，高脂饮食（HFD）组，HFD＋ATN161组，处理5 d后检测脂肪肝表型及脂代谢相关基因的表达。并用纤维连接蛋白（ FN）和ATN161处理HepG2细胞后检测相关基因的表达。结果：HFD组小鼠肝脏甘油三酯（ TG）和胆固醇（ CHO）含量增加；HFD＋ATN组肝脏TG和CHO含量进一步增加。 HFD组小鼠肝脏FN表达量升高，肝脏X受体（ LXR）下游靶基因（ CHREBP、SREBP1、SCD1、ACC和FAS）表达量下降；HFD＋ATN组小鼠上述基因表达量均有所回升。予FN处理的HepG2细胞中，LXR下游靶基因表达量下降，表明LXR活性被抑制；ATN处理可恢复FN导致的LXR活性抑制。结论：FN与整合素β结合可抑制LXR活性，抑制整合素β可进一步增加高脂饮食诱导的肝脏脂质沉积。
作者：张菲菲；张学娇；姚柳；王春炅；艾玎 刊期： 2015年第10期
目的：探讨亚甲蓝（ MB）对大鼠百草枯中毒诱导的急性损伤肝脏的保护作用并对保护机制进行研究。方法：24只清洁级雄性成年SD大鼠随机分为正常组、MB组、百草枯（ PQ）组和PQ＋MB组，每组6只。腹腔注射PQ 35 mg／kg建立大鼠中毒模型，PQ＋MB组大鼠于造模2 h后腹腔注射给予MB 2 mg／kg，正常组大鼠给予等量无菌生理盐水。治疗后48 h收集大鼠血清检测ALT、AST和ALP，肝脏组织用于病理学分析、血红素加氧酶1（ HO－1）免疫组化、MPO活性、MDA含量、SOD活性和ATP含量试剂盒检测。另取40只大鼠，按照上述分组方法评估72 h内死亡时间和死亡率。结果：与正常组和MB组比较，PQ组ALT和ALP活性增高，MPO活性增强，MDA含量增加，HO－1表达增加，SOD活性降低和ATP含量降低（ P＜0．05）；MB治疗后能够改变上述生化指标，减轻肝脏病理形态学变化，与PQ组相比，PQ＋MB组HO－1表达量增高，同时大鼠生存时间延长，差异均具有统计学意义（ P＜0．05）。结论：MB能够减轻氧化损伤和抑制炎症反应，对PQ诱导的急性肝损伤大鼠肝脏发挥保护作用。
作者：陈俊良；戴利；张鹏；翁平；柴高尚；庞庆丰 刊期： 2015年第10期
目的：针对脓毒症（ sepsis）发病机制的复杂性和非线性特点，采用多种组学技术与系统生物学整合研究策略，以发现脓毒症新的生物标志物群，揭示脓毒症的组学／网络机制，探讨脓毒症多靶点整合性干预的新思路。方法：采用大鼠盲肠结扎穿刺脓毒症模型和选用部分脓毒症病人，采用GEO数据库查询和iTRAQ蛋白质组学技术分析其血清蛋白质组学变化，采用亚网络富集分析揭示重要节点蛋白和可能的干预靶点。结果：通过iTRAQ蛋白质组学技术，在脓毒症大鼠中发现47个差异蛋白，其中PTX3、MMRN1、FCN1、CPN2、PRSS1和PF4可用于脓毒症的诊断；MMRN1、PPBP、FGα和FGβ这4个生物标志物的组合可用于脓毒症的预后预测；PTX3在临床脓毒症患者的诊断和预后预测方面优于传统的降钙素原（ PTC）和C反应蛋白（ CRP）， IL－1R2是诊断脓毒症和鉴别G－和G＋菌脓毒症的新的血清生物标志物；采用亚网络富集分析发现CCAAT增强子结合蛋白（ C／EBP）和内皮抑制素（ endostatin）是脓毒症的重要节点蛋白和潜在干预靶点。结论：组学技术和系统生物学整合研究策略为脓毒症机制阐明和多靶点整合性干预带来新希望。
作者：肖献忠；王慷慨；张华莉；焦京；高敏；彭玥；蒋宇 刊期： 2015年第10期
丝切蛋白（ cofilin）为肌动蛋白分子结合蛋白，通过其特定的上、下游信号转导通路在神经元轴突、树突及树突棘的迁移、定位、生长、改造出新棘突等过程中发挥着重要的调控作用，参与神经突触可塑性调节，特别是Rho GTPases家族Rho、Rac和Cdc42是cofilin基因上游重要的调控分子，通过介导突触重塑，与缺血缺氧性脑损伤、癫痫、帕金森病、阿尔茨海默病、学习记忆和认知等高级脑功能异常均密切相关。对cofilin信号通路及与神经突触可塑性关系的分子机制研究将为神经系统疾病防治提供新思路。
作者：赵爽；徐志卿 刊期： 2015年第10期
目的：从血管内皮细胞（ VEC）通透性角度探讨肺炎衣原体（ C．pn）感染促进单核细胞跨内皮迁移的机制。方法及结果：单核细胞跨内皮迁移实验和TEER结果表明，C．pn感染可促进单核细胞跨内皮迁移，且这种作用可能与C．pn感染增加VEC通透性有关；免疫荧光结果显示，C．pn感染后，细胞膜上的VE－钙黏素向胞浆转移，并使细胞间连接处出现缝隙；Western blot实验结果进一步证实C．pn感染可促使VE－钙黏素（Y658）发生酪氨酸磷酸化。液闪计数仪检测结果显示，C．pn感染可使Src激酶的活性明显增强。 Src激酶选择性抑制剂PP2可抑制C．pn感染诱导的VE－钙黏素（ Y658）酪氨酸磷酸化，减少感染引起的VE－钙黏素由胞膜向胞浆转移，并使细胞间连接处的缝隙减小，进而降低C．pn感染增加VEC通透性的作用，终削弱感染对单核细胞跨内皮迁移的促进作用。结论：C．pn感染可能通过激活Src激酶促使VE－钙黏素（ Y658）发生酪氨酸磷酸化以增加VEC通透性，进而诱导单核细胞跨内皮迁移。
作者：马路；张利军 刊期： 2015年第10期
目的：探讨短期适碘（ NI）、10倍高碘（10 HI）和100倍高碘（100 HI）摄入7 d、14 d、28 d后，对大鼠甲状腺线粒体超氧化物生成及peroxiredoxin 3（Prx 3）表达的影响。方法：流式细胞术、Western blot及免疫荧光染色。结果：7 d、14 d和28 d后，与NI组比较，100 HI组线粒体超氧化物和Prx 3蛋白表达显著增加（P＜0．05）；10 HI组线粒体超氧化物生成和Prx 3蛋白表达无显著差别（ P＞0．05）；与7 d和14 d相比，在28 d时100 HI组大鼠甲状腺线粒体超氧化物生成和Prx 3蛋白表达显著增多（ P＜0．05）。甲状腺上皮细胞存在线粒体超氧化物和Prx 3的免疫荧光共表达，100 HI组甲状腺滤泡间质处Prx 3表达更显著。结论：线粒体超氧化物生成与抗氧化蛋白Prx 3参与了短期高碘引起的氧化应激。
作者：段琦；王婷婷；姚小梅 刊期： 2015年第10期
目的：本实验旨在探究甘氨酸对STZ诱导的Ⅰ型糖尿病的降血糖作用及其作用机制。方法和结果：我们采用链脲佐菌素（ STZ，50 mg／kg）腹腔注射（连续5 d） C57小鼠建立Ⅰ型糖尿病模型，造模完成后腹腔注射给予小鼠80 mg／kg、400 mg／kg和800 mg／kg甘氨酸，每周检测各组小鼠空腹血糖值。实验结果显示，80 mg／kg甘氨酸对Ⅰ型糖尿病小鼠血糖无明显保护作用，400 mg／kg和800 mg／kg甘氨酸能显著降低Ⅰ型糖尿病小鼠血糖，且随着检测周数增加呈现剂量依赖性。此外，我们检测了各组小鼠糖耐量、胰岛素耐量及GSIS，400 mk／kg和800 mg／kg甘氨酸能有效保护Ⅰ型糖尿病小鼠胰岛功能。提取各组小鼠胰岛细胞蛋白，检测其凋亡情况，800 mg／kg甘氨酸组小鼠caspase－3表达明显降低。接着我们检测各组小鼠胰岛细胞内Ca2＋浓度及ROS水平，检测结果显示800 mg／kg甘氨酸组胰岛细胞内Ca2＋浓度和ROS水平明显较低。结论：甘氨酸能显著降低STZ诱导的Ⅰ型糖尿病小鼠血糖，其作用机制是降低胰岛细胞内Ca2＋浓度和ROS水平，从而减少胰岛细胞的凋亡。
作者：李科学 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
