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血管内皮生长因子受体启动子驱动双自杀基因联合survivin反义寡核苷酸对结直肠癌细胞及血管内皮细胞的特异性杀伤作用

姚航;黄宗海;历周;苏国强;贺蓉;高峰;崔大祥

关键词:结直肠肿瘤, 血管内皮细胞, 基因, 转基因, 自杀, survivin, 寡核糖核苷酸类, 反义
摘要:目的 探讨腺病毒介导血管内皮生长因子受体(KDR)启动子驱动的CDglyTK融合基因(AdKDR-CDglyTK)体系联合survivin反义寡核苷酸(ASODN)对结直肠癌细胞(SW620)及血管内皮细胞(ECV304)的特异性杀伤作用.方法 将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增产生重组腺病毒.体外感染表达KDR的SW620、ECV304细胞株,同时用survivin ASODN转染同一细胞株,观察腺病毒的感染效率和ASODN的转染情况.应用RT-PCR和Western印迹检测CDglyTK和survivin基因的表达,MIT法测定两者联合应用对细胞株的杀伤效应和旁观者效应.结果 survivin ASODN可转染重组腺病毒感染的细胞,并且两者的转染及感染效率无明显变化.CDglyTK可在SW620、ECV304细胞株高效表达.survivin ASODN可明显降低survivin蛋白表达.各基因治疗组细胞存活率明显低于阴性对照组(P《0.001).survivin ASODN与AdKDR-CDglyTK基因联用后,随着前药浓度的增加,细胞存活率迅速下降,两者联合作用与单一基因作用相比,差异具有统计学意义(P《0.05).但在GCV 100μg/ml、5-FC 2000μg/ml时,联合基因治疗组细胞存活率略低于单用AdKDR-CDglyTK,两者间差异无统计学意义(P》0.05).Survivin ASODN和AdKDR-CDglyTK联合作用,在前药浓度较低时表现为协同效应,并具有更明显的旁观者效应.结论 KDR启动子调控的AdKDR-CDglyTK体系和survivin ASODN基因联合,较单一基因具有更强的特异性杀伤结直肠癌细胞及血管内皮细胞的作用.
中华胃肠外科杂志相关文献
  • 血管内皮生长因子受体启动子驱动双自杀基因联合survivin反义寡核苷酸对结直肠癌细胞及血管内皮细胞的特异性杀伤作用

    目的 探讨腺病毒介导血管内皮生长因子受体(KDR)启动子驱动的CDglyTK融合基因(AdKDR-CDglyTK)体系联合survivin反义寡核苷酸(ASODN)对结直肠癌细胞(SW620)及血管内皮细胞(ECV304)的特异性杀伤作用.方法 将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增产生重组腺病毒.体外感染表达KDR的SW620、ECV304细胞株,同时用survivin ASODN转染同一细胞株,观察腺病毒的感染效率和ASODN的转染情况.应用RT-PCR和Western印迹检测CDglyTK和survivin基因的表达,MIT法测定两者联合应用对细胞株的杀伤效应和旁观者效应.结果 survivin ASODN可转染重组腺病毒感染的细胞,并且两者的转染及感染效率无明显变化.CDglyTK可在SW620、ECV304细胞株高效表达.survivin ASODN可明显降低survivin蛋白表达.各基因治疗组细胞存活率明显低于阴性对照组(P《0.001).survivin ASODN与AdKDR-CDglyTK基因联用后,随着前药浓度的增加,细胞存活率迅速下降,两者联合作用与单一基因作用相比,差异具有统计学意义(P《0.05).但在GCV 100μg/ml、5-FC 2000μg/ml时,联合基因治疗组细胞存活率略低于单用AdKDR-CDglyTK,两者间差异无统计学意义(P》0.05).Survivin ASODN和AdKDR-CDglyTK联合作用,在前药浓度较低时表现为协同效应,并具有更明显的旁观者效应.结论 KDR启动子调控的AdKDR-CDglyTK体系和survivin ASODN基因联合,较单一基因具有更强的特异性杀伤结直肠癌细胞及血管内皮细胞的作用.

    作者:姚航;黄宗海;历周;苏国强;贺蓉;高峰;崔大祥 刊期: 2008年第01期

  • 大鼠小肠转化生长因子β1重组腺病毒载体的构建和表达

    目的 构建可调控性大鼠小肠TGF-β1表达的重组腺病毒载体.方法 按RNA提取试剂(TRIzol Reagent)说明书步骤从大鼠小肠组织抽提总RNA,克隆TGF-β1基因;经穿梭载体与可调控性腺病毒载体骨架连接,鉴定后在HEK293细胞包装.获得高滴度病毒后,取上清检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,观察目的 基因的表达情况.结果 扩增出与预期大小一致的cDNA片段,其中TGF-β1大小为1173 bp;其基因序列与GenBank登录的大鼠TGF-β1基因序列完全一致.重组TGF-β1腺病毒获得的滴度约为1012 PFU/ml;病毒包装后绿色荧光蛋白表达的检测结果显示,绿色荧光蛋白随着时间的延长,表达量逐渐增高;与预期结果一致.结论 构建的可调控性大鼠小肠TGF-β1重组腺病毒载体得到了正确表达,为进一步研究TGF-β1干扰树突状细胞分化成熟诱导小肠移植免疫耐受提供了依据.

    作者:李纪鹏;黄怡;王为忠;董光龙;杜建军;陈冬利;季刚;刘骥 刊期: 2008年第01期

  • 胃肠外科手术预防和治疗2型糖尿病

    2型糖尿病(type 2 diabetes,T2D)已经成为世界范围的流行病,全球约有1.6亿T2D患者.临床上在同一个个体内,糖、脂等的代谢紊乱常共同存在,表现为高血压、高血脂、胰岛素抵抗甚至T2D,称为代谢紊乱综合征(MS).

    作者:李际辉;郑成竹 刊期: 2008年第01期

  • 食管癌和贲门癌患者术后早期鼻饲匀浆膳并发症分析

    食管癌、贲门癌术后早期进行肠内营养既安全可行又可减少患者并发症,促进康复[1,2].但术后十二指肠营养管的管理是肠内营养成功的必要保证.我院自2001年1月至2004年12月共施行食管癌、贲门癌切除术1631例,在术中均放置十二指肠营养管(以下简称营养管),于术后第2天鼻饲匀浆膳进行肠内营养.

    作者:侯建彬;耿明飞;梅平;曹景峰;师晓天 刊期: 2008年第01期

  • 原发性食管胃肠道间质瘤术后相继转移一例

    患者,女,54岁.进食梗阻感进行性加重2月于2001年9月6日入院.查体:无明显异常体征.食管钡餐造影及胸部CT检查示:食管中下段不规则充盈缺损,管腔狭窄,管壁僵硬,黏膜中断破坏及肿块影,近端食管扩张,病变长约15 cm.

    作者:李国仁;戴建华;邵仲凡 刊期: 2008年第01期

  • 重组人生长激素联合低热量营养支持对胃肠外科术后氮平衡和血糖的影响

    目的 观察重组人生长激素(rhGH)联合低热量营养对胃肠外科择期手术后患者的营养支持效果及对血糖的影响.方法 将48例择期胃肠外科术后患者随机分为rhGH组和对照组.两组治疗和营养支持方案相同,rhGH组于术后第3-9天给予rhGH.在术前1 d、术后3 d和10d分别测定两组患者的体质量、血常规、肝肾功能和血浆蛋白指标,并每日检测氮平衡和血糖水平,观察并发症及不良反应,同时记录每日胰岛素用量.结果 术后第10天,rhGH组累计氮平衡(13.21 g)和血浆纤连蛋白水平[(104.77±19.94)mg/L]优于对照组[-6.88 g和(93.03±16.03)mg/L](P《0.05);术后第4天和第6-9天,rhGH组每日氮平衡均优于对照组(P《0.05);rhGH组治疗期间血糖水平升高[术后6 a(7.68±2.15)mmol/L 比(5.95±2.34)mmol/L,P《0.05],可为胰岛素有效控制,未发生严重并发症.结论 rhGH联合低热量营养支持可以安全地促进蛋白合成和维持正氮平衡,改善营养状况和预后.

    作者:张明鸣;郑亚民;何涛;周勇;钱昆;伍晓汀 刊期: 2008年第01期

  • 胆石性肠梗阻7例影像学诊断分析

    目的 探讨影像学手段在胆石性肠梗阻的诊断价值.方法 对7例经手术或临床诊断证实的胆石性肠梗阻患者的临床及影像学资料进行回顾性分析.结果 本组7例胆石性肠梗阻直接征象有:(1)肠腔内同心圆状低信号灶或密度灶3例,类圆形低密度灶2例,高密度2例;(2)肠梗阻7例;(3)胆囊塌陷及胆囊与十二指肠之间边界不清7例;(4)胆囊或胆管积气2例;(5)显示瘘管2例.结论 影像学诊断胆石性肠梗阻的直接征象有:肠腔内胆结石:胆囊与消化道之间瘘管.有第1直接征象加上下列任何2种间接征象:(1)肠梗阻;(2)胆囊塌陷及胆囊与十二指肠之间边界不清;(3)胆囊和胆管积气均可以确诊为胆石性肠梗阻.

    作者:纪建松;邵初晓;涂建飞;王祖飞;卢陈英;赵中伟;徐民;范晓希 刊期: 2008年第01期

  • 食管癌外科治疗的研究进展和共识

    目前,以外科为主的食管癌综合治疗方案大体分为手术加辅助化疗或化放疗、化放疗加或减解救手术和术前化放疗加手术3种,但这3种不同治疗手段治疗食管癌的随机试验至今疗效不一.

    作者:赫捷 刊期: 2008年第01期

  • 左侧卧位在中晚期妊娠孕妇阑尾切除中的应用

    急性阑尾炎是妊娠期常见的外科急腹症,其发生率为0.1%~3.0%,随孕期的进展其发病率不断增高,约80%以上发生于妊娠中晚期[1].由于妊娠期特殊的生理特点,诊治有其特殊性,若处理不当不仅会形成腹腔内感染,还会引发流产或早产,因此,妊娠期阑尾炎应引起临床医生的高度重视.

    作者:孙成宏;徐恒爱;张宏中;杜奎玲 刊期: 2008年第01期

  • 食管癌手术径路的评价

    尽管食管癌的外科治疗被认为已步入成熟阶段,但迄今对食管癌外科治疗的手术方式包括手术径路仍存在较大的争议.在肿瘤外科领域,还没有其他任何一种肿瘤的外科治疗像食管癌那样对于手术径路的选择和手术范围存在如此多的争议.

    作者:王群;谭黎杰 刊期: 2008年第01期

  • 胸上段食管癌临床病理与预后分析

    目的 探讨胸上段食管癌的临床病理特征及其与预后的关系.方法 回顾性分析1996年1月至2001年12月65例胸上段食管癌患者的临床病理特征及其预后影响因素.结果 患者1、3、5年生存率分别为72.30%、36.9%、21.5%.单因素分析显示患者预后与肿瘤浸润深度、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移、肿瘤根治程度等因素有关(P《0.05);多因素分析显示,肿瘤根治程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度为影响食管癌切除术后预后的重要因素(P《0.05).结论 肿瘤根治程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度是影响预后的独立因素.

    作者:叶凯;许建华;郭启祥;许双塔;杨钟波 刊期: 2008年第01期

  • 食管癌手术淋巴结清扫的研究进展

    根治性切除目前仍是治愈食管癌为有效的手段,但患者术后总体5年生存率与胃癌、结直肠癌等其他消化道肿瘤相比偏低.淋巴结转移与否是影响食管癌预后的重要标志.

    作者:方文涛;陈文虎 刊期: 2008年第01期

  • 乙状结肠血管平滑肌脂肪瘤一例

    患者女性,49岁.间断便血伴大便次数增多18 d于2006年6月28日入院.排新鲜血便,血未与大便混合,大便次数增多,每日10多次,大便变细,伴腹痛、腹胀、里急后重,无发热等.

    作者:陆君阳;林国乐;邱辉忠 刊期: 2008年第01期

  • 持续低氧血症对食管重建术后吻合口狭窄的影响

    目的 分析食管重建术后吻合口瘢痕狭窄的相关因素,尤其相关的全身性因素.方法 回顾性分析中山大学附属肿瘤医院收治的1111例食管癌切除、消化道重建术患者的病例资料,对可能导致吻合口瘢痕狭窄的全身及局部因素进行logistic单因素、多因素回归分析,并对筛选出的因素进行相关分析.结果 单因素回归分析显示:术后持续低氧血症(P=0.003)、胸部并发症(P=0.000)、吻合口瘘(P=0.000)、糖尿病史(P=0.019)、慢性阻塞性肺病病史(P=0.046)和心血管并发症(P=0.015)6项因素有统计学意义;而多因素回归分析则显示仅持续低氧血症(P=0.044)、胸部并发症(P=0.009)、吻合口瘘(P=0.001)和糖尿病史(P=0.036)4项因素有统计学意义:相关分析显示:持续低氧血症与胸部并发症及吻合口瘘三者之间呈正相关.结论 持续低氧血症是食管重建术后吻合口瘢痕狭窄的重要全身性因素.

    作者:王耿;傅剑华;胡袆;林鹏;杨名添;戎铁华 刊期: 2008年第01期

  • 喉后移并结肠间置重建上消化道

    结肠代食管常作为不能以胃代食管或胃代食管失败的首选术式,而合并有喉损伤者重建消化道则面临新的挑战.

    作者:林慧庆;黄杰;詹汉章;程邦昌;胡浩 刊期: 2008年第01期

  • 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因导入T细胞克隆治疗溃疡性结肠炎大鼠

    目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因导入T细胞克隆治疗溃疡性结肠炎(UC)大鼠的作用.方法 将HSV-TK基因导入T细胞克隆回输至27只UC大鼠,观察刺激指数(SI)、CD4+、CD8+及白细胞介素(IL)-13和IL-4水平的变化,并比较治疗前后结肠病变的情况.结果 uc大鼠结肠壁病变于tk+细胞克隆回输治疗2-3 d出现炎性反应吸收改变,7-10 d后结肠炎性反应基本消失;回输前SI值为7.39±1.24,回输后为2.67±0.87(P《0.05),CD4+、CD8+水平、IL-13和IL-4水平明显下降,差异有统计学意义(P《0.05).结论 T细胞克隆疫苗诱导和tk基因导入后杀伤效应的双重作用导致结肠自身抗原特异性免疫耐受的终形成,HSV-TK自杀基因导入T细胞克隆回输方案是UC基因治疗研究和靶点设计的有效手段.

    作者:周军;徐鋆耀;兰平;王磊;黄美近;汪建平 刊期: 2008年第01期

  • 肥胖与结直肠癌关系的研究进展

    当前,肥胖已成为重要的社会问题.由于生活方式的改变和不合理的饮食结构,导致高脂肪、高蛋白和高碳水化合物饮食的增加,世界各地超重和肥胖人数明显增加.

    作者:江波;张鑫;韩存芝 刊期: 2008年第01期

  • 颈段食管癌的外科治疗

    目的 总结外科治疗颈段食管癌的经验体会.方法 综合分析1993年12月至2005年12月在河南省肿瘤医院胸外科和头颈外科接受外科治疗的82例颈段食管癌患者的临床资料.结果 本组患者1997年以前以单纯手术治疗为主(27例);1997年后,除5例早期癌患者外,50例常规采用半量放疗后再手术的综合治疗模式.非开胸食管切除73例,开胸食管切除9例;同期行单侧或双侧区域性颈淋巴结清扫14例;联合脏器切除12例.单纯手术组和综合治疗组保喉率分别为81.3%和95.8%,差异无统计学意义(P》0.05).无术中或术后大出血、气管和(或)支气管撕裂及围手术期死亡者;并发症发生率为19.5%;术后病理证实上切缘阳性5例,均为单纯手术组;淋巴结转移14例(17.1%).全组5年总生存率43%;其中综合治疗组50.2%,高于单纯手术组的33.9%(χ2=7.17;P=0.007);开胸食管切除者、同期行单侧或双侧区域性颈淋巴结清扫者和联合脏器切除者的5年生存率分别为36.5%、45.80%和33.3%.结论 颈段食管癌患者半量放疗后再手术,可明显减少肿瘤上切缘阳性的发生率,提高保喉率和5年生存率.手术方式以非开胸游离食管为首选,联合脏器切除或双侧颈部淋巴结清扫应非常谨慎.

    作者:王文光;李进东;齐金星;罗瑞华;高宗人;邵令方 刊期: 2008年第01期

  • 高生活质量与长期生存是食管癌外科治疗中需要并重的问题

    外科手术仍是食管癌现有治疗手段中好和首选的方法.食管癌手术的历史大致经历了3个阶段:1877-1912年只切除不重建;1913-1938年切除与重建分期进行;

    作者:陈克能 刊期: 2008年第01期

  • 功能性便秘患者结肠黏膜水通道蛋白3和水通道蛋白9的表达及意义

    目的 研究功能性便秘患者结肠黏膜水通道蛋白3(AQP3)和水通道蛋白9(AQP9)的表达与分布情况,并探讨其与便秘的关系.方法 采用免疫组化技术和Western印迹半定量检测法检测45例功能性便秘患者(试验组)和21例无便秘患者(对照组)结肠黏膜AQP3和AQP9,把AQP3和AQP9与相应内参蛋白β-actin的灰度值之比视为AQP3和AQP9的相对含量.结果 免疫组化检测显示:AQP3主要表达在结肠黏膜顶部的吸收细胞,且主要分布于细胞膜的基底侧和腔面,杯状细胞少见阳性染色,AQP9主要表达在黏膜腔面的杯状细胞,且主要分布于细胞膜的基底侧.Western印迹检测结果:试验组和对照组升结肠AQP3灰度比平均值分别为0.905和0.798(P《0.05),AQP9灰度比平均值分别为0.544和0.543(P》0.05);试验组和对照组降结肠AQP3灰度比平均值分别为0.697和0.701(P》0.05),AQP9灰度比平均值分别为0.575和0.732(P《0.05).结论 功能性便秘患者升结肠黏膜AQP3表达高于非便秘者,而其降结肠AQP9表达则低于非便秘者;AQP3和AQP9含量的增减可能在便秘的发生发展过程中发挥了重要作用.

    作者:袁维堂;杨会锋;张志永;刘金波 刊期: 2008年第01期

中华胃肠外科杂志

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