徐美兰；刘金星
目的：小鼠进行重组蛋白与树突状细胞（DC）联合免疫，观察其对系统性白假丝酵母菌免疫保护效果。方法原核表达并诱导表达白假丝酵母菌Sap2蛋白；将白假丝酵母菌孢子、菌丝混悬液致敏小鼠DC后，分5组小鼠行3次免疫接种重组蛋白及致敏DC、致敏DC、DC、Sap2、PBS，再造系统性白假丝酵母菌感染模型观察小鼠生存期、肾病理切片、肾负菌量、检测CD4+、CD8+百分率观察保护性。结果成功构建pET32a-Sap2原核表达载体，目的蛋白被诱导表达并收集纯化。重组蛋白与致敏DC、DC、Sap2蛋白均能有效延长系统性白假丝酵母菌感染小鼠生存期、保护小鼠肾脏、增强小鼠的免疫力，其中多组分联合免疫效果更佳。结论多组分联合免疫能很好地抵抗系统性白假丝酵母菌感染，这为研究新型多组分联合疫苗奠定基础。
作者：徐美兰；刘金星 刊期： 2014年第07期
目的：探讨沉默Bmi-1表达在逆转人肺癌顺铂耐药性的作用及机制。方法以siRNA沉默Bmi-1表达，MTT法检测细胞顺铂敏感性，流式细胞术检测细胞周期分布与凋亡，β-半乳糖酐酶染色法检测细胞的衰老，Western blot法检测Bmi-1、P14ARF、P16INK4a、P53、P21、Rb、ubi-H2AK119蛋白表达。结果肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞的Bmi-1表达明显高于A549细胞；沉默Bmi-1的表达显著增加耐药株对顺铂的敏感性（IC50从40.3±4.1μmol/L降到18.3±2.8μmol/L，P<0.01），细胞G0/G1期比值显著升高[从（48.9±2.3）%升到（78.7±7.6）%，P<0.01]；细胞β-半乳糖酐酶染色阳性，呈衰老特征。细胞衰老通路的P14ARF、P16INK4a、P53、P21、Rb表达上调，ubi-H2AK119表达下调。结论沉默Bmi-1表达能诱导A549/DDP细胞衰老，逆转对顺铂的耐药性，其作用机制可能与降低ubi-H2AK119表达、调节INK4a/ARF/Rb衰老通路有关。
作者：毛楠；何关生；饶进军；吕琳 刊期： 2014年第07期
目的：研究曲古抑菌素（TSA）对HepG2细胞凋亡的影响及可能的机制。方法取对数生长期HepG2细胞，TSA（50~500 nmol/L）诱导，同时设空白对照组，用CCK-8检测细胞增殖影响；流式细胞术检测细胞周期；Annexin V-FTIC/PI双染细胞检测凋亡；倒置显微镜观察细胞形态并采图；Western blot检测HepG2细胞中β-catenin、HDAC1、HDAC3、H3K9、CyclinD1、Bax等蛋白的表达。定量PCR方法检测HDAC1，HDAC3基因的表达。结果 CCK-8检测结果显示TSA对肝癌HepG2细胞生长抑制呈剂量和时间依赖性；流式细胞术检测细胞周期表明，药物组细胞G0/G1期所占比例增加，S期所占比例下降，G2/M所占比例增加；细胞凋亡检测表明，空白对照组凋亡率（6.22±0.25）%；250 nmol/L组凋亡率（7.17±0.20）%；500 nmol/L组凋亡率（18.14±0.42）%；倒置显微镜下观察可见，随着时间推移空白对照组细胞生长良好；而药物组细胞则出现变形，有大量漂浮细胞；Western blot检测结果显示β-catenin、H3K9和Bax蛋白表达水平均明显升高，CyclinD1、HDAC1、HDAC3的表达水平则呈下降趋势；定量PCR结果显示：HDAC1、HDAC3基因的表达无明显变化。结论 TSA可通过抑制HDAC的活性，促进组蛋白乙酰化，活化Wnt/β-catenin信号通路来发挥其抑制HepG2细胞增殖，诱导周期阻滞及凋亡的作用。
作者：石庆强；左国伟；冯子强；赵绿翠；罗念；游智梅；夏菁；李丹阳；李静；陈地龙 刊期： 2014年第07期
目的：利用siRNA抑制CDK6表达后对鼻咽癌细胞生长及细胞周期的影响及分子基础。方法实时荧光定量PCR检测CDK6在30例鼻咽癌与18例鼻咽组织中的表达差异。siRNA转染鼻咽癌细胞CNE2，靶向抑制CDK6表达。利用MTT和流式细胞仪分别检测细胞增殖和细胞周期改变。Western blot检测细胞周期相关因子的表达改变。结果与鼻咽组织相比，CDK6基因mRNA在鼻咽癌组织中表达明显增高。siRNA在鼻咽癌细胞中靶向抑制CDK6表达后，细胞生长能力明显降低，且细胞周期也明显阻滞在G1期，S期细胞减少。机制分析显示在抑制CDK6表达后，细胞周期促进因子CDK4、CCND1和E2F1表达显著下降，而细胞周期抑制因子p21表达明显提升。结论 CDK6在鼻咽癌中表达升高。siRNA靶向抑制CDK6之后通过下调CDK4、CCND1和E2F1以及上调p21表达后，能明显抑制鼻咽癌细胞增殖能力及细胞周期转化。
作者：罗小鹏；夏琼；覃继新；黄永秩；刘津；王莹；王怀飞；陈家军 刊期： 2014年第07期
目的：构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株并鉴定mir-101的靶基因。方法运用荧光定量PCR技术检测结直肠癌细胞株中mir-101的表达水平。利用GV209-mir101慢病毒感染SW620细胞，建立稳定过表达mir-101的细胞株。扩增包含mir-101结合位点的RAC13'UTR基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体，对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-Rac1-Mut；并用双萤光素酶报告实验检测RAC13'UTR相对荧光素酶活性。结果稳定过表达mir-101的细胞株中，mir-101的表达明显高于对照组。双萤光素酶报告实验证实mir-101 inhibitors可以上调3'UTR相对荧光素酶活性。稳定过表达mir-101， RAC1表达下调；而干扰mir-101之后RAC1表达上调。结论成功构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株。RAC1是mir-101的靶基因。
作者：刘燕；陆滟霞；周敏；张超；李学农 刊期： 2014年第07期
目的：探讨改良主动固定起搏电极导线塑型行右室流出道间隔部起搏的可行性与安全性。方法136例需要植入人工心脏起搏器，且需要植入心室主动固定起搏电极导线的患者，随机分为两组，传统电极塑型组（CRVOTP）将电极导线内芯钢丝塑型为双弯三维形状进行右室流出道间隔部电极固定；改良电极塑型组（MRVOTP）将电极导线内芯钢丝塑型为J弯进行右室流出道间隔部电极固定。结果两组均100%成功行右室流出道间隔部起搏，无严重并发症，术中电极固定次数、起搏阈值、阻抗、R波高度及QRS波宽度比较，两组间均无显著统计学差异。由于MRVOTP组塑型简单，容易通过三尖瓣环及直接到达右室流出道间隔部，X线曝光、植入时间较CRVOTP组明显缩短，有显著统计学意义（P<0.05），并较少损伤起搏电极导线。术后随访，无一例发生主动固定起搏电极导线脱位，复测心室电极起搏阈值、阻抗、R波高度及QRS波宽度，两组间均无显著统计学差异。结论改良主动固定起搏电极导线塑型行右室流出道间隔部起搏，方法简单，安全可靠，较传统电极塑型右室流出道间隔部起搏显著减少X线曝光、植入时间，较少损伤起搏电极导线。
作者：曾智桓；陈泗林；赵艳群；周万兴；张卫；朱桂平；李博维；周玉良 刊期： 2014年第07期
目的：研究中国人群乳腺癌患者发生真空辅助旋切系统活检（VABB）针道种植转移的几率及新辅助化疗对其产生的影响。方法将通过VABB诊断为乳腺癌的病人分为两组，一组直接进行外科开放性手术（直接手术组），一组先进行新辅助化疗后再进行外科开放性手术（新辅助化疗组）。分析两组病人发生针道种植转移的几率，以及两组病人的无病生存（DFS）和总生存（OS），并采用相应的统计学方法进行两组间的比较。结果共有214名患者入组，其中直接手术组94名，新辅助化疗组120名，中位随访时间为29.2月，两组发生针道转移的几率分别为3.2%和0.8%，两者相比无显著性差异（P=0.206，χ2检验）；DFS和OS亦无显著差异（DFS P=0.221，OS P=0.531，Log-rank检验）。结论经VABB后两组乳腺癌患者的针道种植转移率低，新辅助化疗不会导致VABB后的针道种植转移率的增加。
作者：任重阳；廖宁；张国淳；安胜利；温灵珠；钱学珂；吕海通 刊期： 2014年第07期
目的：探讨人胚胎源性人绒毛促性腺激素（HCG）在第3天胚胎培养液中的表达及其与早期胚胎发育间的关系。方法收集IVF-ET患者体外第3天单个培养胚胎培养液，通过ELISA方法检测培养液中HCG浓度，比较其与胚胎数目、分级、碎片等传统评分间的关系。结果在60个病人的163份第3天胚胎培养液标本中，胎源性HCG的检测率是93.8%（153/163），表达浓度是0.85±0.43 mIU/ml。HCG浓度与胚胎卵裂球细胞数呈正相关。随着细胞数增加，培养液中HCG表达也提高（P<0.05）。随着胚胎形态评分级别的下降，培养液中HCG表达下降（P<0.05）。结论 ELISA方法能检测出第3天胚胎培养液中胎源性HCG的微量表达。胚胎培养液中胎源性HCG水平与传统胚胎形态评估有相关性，提示它有可能作为新的评估胚胎发育的无创性方法。
作者：王海英；张仁礼；韩冬；刘彩霞；蔡佳杰；毕燕玲；闻安民；全松 刊期： 2014年第07期
目的：探讨低相对分子质量肝素（LMWH）联合多柔比星（DXRB）对肝癌细胞迁移能力的影响及其作用机制。方法实验分为阴性对照组、LMWH组、DXRB组、LMWH与DXRB联合应用组。用MTT法检测药物对HepG2细胞增殖的影响；用细胞划痕实验和Transwell小室法检测HepG2细胞的迁移能力；Western-blot和实时RT-PCR法检测基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的表达；ELISA法检测肿瘤细胞培养液中乙酰肝素酶的表达。结果 MTT结果显示，LMWH和DXRB对肝癌HepG2细胞均有显著的增殖抑制作用。LMWH与DXRB联合用药时，对肝癌HepG2细胞的迁移抑制作用明显高于单用DXRB组。LMWH和DXRB均可下调MMP-9、MMP-2和乙酰肝素酶的表达，且合用时对乙酰肝素酶表达的抑制作用更明显。结论 LMWH具有增强DXRB抑制肝癌HepG2细胞迁移的作用，其机制可能与下调MMP-9、MMP-2和乙酰肝素酶的表达有关。
作者：杨克红；马琳艳；程秀；陈超；张梦晓；刘浩；蒋志文 刊期： 2014年第07期
目的：系统评价他汀类药物能否降低感染的风险及降低感染相关死亡率。方法检索Cochrane图书馆、MEDLINE、EMBASE、PubMed、Elsevier数据库和中国生物医学文献数据库等从建库至2013年9月已完成的有关他汀的随机对照试验（至少100位参与者，持续时间至少4周）。由2位研究者按照纳入标准独立筛选文献、提取资料和评价质量后，应用Stata 12.0软件进行荟萃分析。结果纳入16个随机对照研究，共包括48973例研究对象。荟萃分析结果显示：与安慰剂组比较，他汀类药物能显著降低感染风险（OR=0.93，95%可信区间0.89-0.98，P=0.004）。但是在改善感染相关死亡率方面，两组间无显著性差异（OR=0.96，95%可信区间0.82-1.12，P=0.592）。结论他汀类药物可显著降低感染的风险，但是不能降低感染相关死亡率。
作者：王贵佐；张永红；谢新明；韩冬；吴媛媛；李少军；李凤娟；李满祥 刊期： 2014年第07期
目的：通过全细胞膜片钳技术研究新生SD乳鼠耳蜗核前腹核（AVCN）中丛细胞在发育过程中的电生理特性变化。方法运用全细胞膜片钳记录出生后5~21 d的SD乳鼠耳蜗核前腹核中丛细胞的动作电位（AP）反应及微小兴奋性突触后电流（mEPSC），再通过相关数据采集及分析软件分析动作电位半峰宽和mEPSC的10%~90%上升时间（10%~90%Risetime）及时间常数，并对此做进一步统计分析处理，进而比较不同年龄段新生SD乳鼠的耳蜗核前腹核中丛细胞的电生理反应特性。结果在丛细胞动作电位半峰宽的统计分析中发现，丛细胞动作电位的时间精确性随着出生后年龄的增加而增加，在听觉建立（出生后12 d）附近变化停止。丛细胞mEPSC的时间精确性也随着出生后年龄的增加而增加，在听觉建立附近变化停止。结论耳蜗核前腹核中丛细胞功能的修饰先于听觉的建立。
作者：钟圣辉；张正刚；傅鸣宇；杨娟；肖中举 刊期： 2014年第07期
目的：研究预输注坏死细胞对脓毒症小鼠模型Treg/Th17细胞平衡的影响。方法将34只C57BL/6小鼠随机分成4组：正常对照组（PBS组，n=5）、假手术对照组（Sham组，n=5）、脓毒症组（CLP组，n=12）及坏死细胞处理组（Nec组，n=12）。PBS组为正常小鼠，腹腔注射200μl PBS一次，Sham组小鼠手术分离盲肠末端后，不进行结扎穿孔；CLP组小鼠用盲肠结扎穿孔法（CLP）建立脓毒症模型；Nec组小鼠预先腹腔注射2×107个坏死细胞，第5天再行盲肠结扎穿孔。所有小鼠于制备CLP模型后2周处死，流式细胞仪检测外周血、脾脏和胸腺中CD4+Foxp3+Treg细胞以及CD4+IL17A+Th17细胞比例。结果 CLP组脾脏中Th17比例及Treg/Th17比值均显著高于PBS组及sham组（P<0.01）；CLP组小鼠胸腺内Treg比例显著低于Sham组（P<0.01）；而预输注坏死细胞，可逆转上述CLP手术后小鼠体内Th17比例、Treg比例及Treg/Th17的比例失衡（P<0.05）。结论预输注坏死细胞可以逆转脓毒症小鼠体内Treg/Th17细胞亚群的失衡。
作者：顾冬生；熊露；韩艳萍；孙尔维 刊期： 2014年第07期
作者： 刊期： 2014年第07期
目的：构建肝外胆管供血动脉三维可视化模型，研究基于亚毫米CT数据精细管道分割新方法。方法把基于体绘制交互的图像分割新算法作为一个分割插件整合到医学图像三维可视化系统（MI-3DVS）中，再将10名受检者的腹部64层亚毫米CTA数据导入MI-3DVS，程序化构建肝外胆管及供血动脉的3D模型。然后对3D模型进行缩放、旋转、融合拆分以及透明化显示等操作，观察、分析3D模型中的肝外胆管供血动脉来源、走行、分布特点。结果10例肝外胆管血供3D模型立体感强，可精确显示肝动脉的4到5级分支、胆囊动脉的2级分支、胰十二指肠动脉弓及门静脉后动脉；胆道3D模型可清晰显示肝内胆管、左右肝管、胆囊、肝总管、胆总管等胆道各部分。结论基于体绘制交互的分割方法能够对肝外胆管供血小动脉进行分割、提取；使用MI-3DVS重建的3D模型能够真实反映个体化的肝外胆管及供血动脉立体解剖结构。
作者：杨剑；方驰华；范应方；彭戈；项楠；祝文；刘军；鲍苏苏 刊期： 2014年第07期
目的：3-三氟甲基苯甲酰胺类衍生物作为新的抗流感药物能否抑制H5N1流感病毒进入靶细胞。方法对先导化合物进行改构，发现并合成具有进入抑制活性的3个化合物，同时从Specs公司化合物库挑选购买了一些化合物，同样发现了4个有抑制活性的化合物，利用建立在细胞水平的H5N1假病毒活性检测方法测试了这些化合物的抑制活性。结果和结论化合物1a，1b，1e和1f对源自A/AnHui/1/2005的H5N1假病毒毒株有明显的抑制作用。化合物1a的活性好，其IC50达到4.7±0.3μmol/L。
作者：朱志博；蔡云；杨洁；李湘潋；李润明；刘叔文 刊期： 2014年第07期
目的：回顾性分析鼻咽癌各种临床因素与Ⅰb区淋巴结肿大的相关性，为确定鼻咽癌Ⅰb区预防照射指征提供参考。方法选取近3年来在南方医院诊断为鼻咽癌的初治患者影像资料435例，研究其T分期、N分期、Ⅱ区肿大淋巴结直径、下颌下腺侵犯、鼻腔侵犯、口咽侵犯、≥4个淋巴结引流区转移等临床高危因素与ⅠB区淋巴结肿大的相关关系。结果单因素分析显示N分期（P=0.023）、下颌下腺侵犯（P=0.045）、Ⅱ区淋巴结直径与Ⅰb区淋巴结肿大呈正相关关系。Logistic多因素分析结果显示，仅Ⅱ区淋巴结直径具有统计学意义（P=0.013)。结论鼻咽癌Ⅰb区淋巴结肿大与同侧Ⅱ区淋巴结大小呈显著正相关关系。
作者：元龚骏；郑小康；朱晓霞；王哲；宋文；张弘；沙舟 刊期： 2014年第07期
目的：比较大肠杆菌K1株E44敲除ppk1基因后与野生株之间差异并探讨ppk1基因在E.coli K1株致脑膜炎机制中的作用。方法（1）将野生株与敲除株置于56℃2、4、6 min，以比较二者对热刺激的抵抗力差异；（2）利用电子显微镜直接观察以及采用经典的粘附、侵袭率定量实验比较二者对脑微血管内皮细胞（HBMEC）的粘附和侵袭能力；（3）将细菌与脑微血管内皮细胞共同孵育后，利用激光共聚焦观察二者诱导脑微血管内皮细胞的细胞骨架重排现象。结果与野生株E44相比，ppk1敲除株对于56℃热刺激的抵抗力明显下降；电子显微镜可以观察到，敲除株粘附和侵袭入HBMEC的数量均少于野生株，定量粘附、侵袭实验也进一步证实；借助激光共聚焦发现敲除株诱导HBMEC细胞骨架重排的能力要弱于野生株。结论 ppk1对于脑膜炎大肠杆菌K1株抵抗热刺激、粘附和侵袭HBMEC以及诱导HBMEC的细胞骨架重排具有重要作用。
作者：彭亮；潘嘉韵；罗苏；杨正慧；黄慕芳；曹虹 刊期： 2014年第07期
目的：观察穗花杉双黄酮对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡相关因子caspase-3、β-catenin的影响，初步探讨其诱导结肠癌细胞凋亡的作用机制。方法 MTT细胞增殖试验检测穗花杉双黄酮对SW480细胞活力的影响，流式细胞术检测其对SW480细胞凋亡的诱导作用，Western blot法检测穗花杉双黄酮作用细胞后caspase-3、β-catenin蛋白的表达。结果穗花杉双黄酮对SW480细胞生长有抑制作用，具有剂量依赖性。150μmol/L穗花杉双黄酮明显促进其凋亡，凋亡率显著高于对照组（P<0.01）。Western bolt结果表明，穗花杉双黄酮干预可以使caspase-3表达明显增强，β-catenin表达明显减弱。结论穗花杉双黄酮可诱导人结肠癌细胞SW480凋亡，并影响凋亡相关因子caspase-3、β-catenin的表达，从而达到抗肿瘤作用。
作者：杨雨；徐文娟；彭康；孙学刚 刊期： 2014年第07期
目的：探讨不同剂量丙泊酚对大鼠MADB106细胞肺转移及肿瘤组织中MTA1和Wnt1表达的影响。方法 Fischer344雄性大鼠40只，随机分为：生理盐水组（S组）；脂肪乳剂组（F组）；丙泊酚30 mg/kg组（P30组）和50 mg/kg组（P50组），每组10只。1%戊巴比妥钠50 mg/kg腹腔注射经股静脉分别泵入等容量上述药物，1 h后均静注0.5 ml MADB106肿瘤细胞（2×105个）。3周后处死，计数肺转移瘤数目；免疫组化检测肺肿瘤组织中MTA1和Wnt1的表达，IPP软件定量分析。结果 F组和S组肺转移瘤数目及肿瘤组织中MTA1和Wnt1的表达无显著差异（P>0.05）。与S组相比，P30和P50组的肺转移瘤数目及肿瘤组织中MTA1和Wnt1的表达均显著减少（P<0.01），肺转移瘤数目及MTA1和Wnt1的表达与丙泊酚的剂量负相关，Pearson相关系数分别为-0.879、-0.980和-0.916（P<0.01）。MTA1和Wnt1的表达呈正相关，Pearson相关系数为0.902（P<0.01）。结论丙泊酚呈剂量依赖性抑制MADB106肿瘤细胞肺转移，并下调转移瘤中MTA1和Wnt1的表达。
作者：张雅静；林春水；汪威；陈莺 刊期： 2014年第07期
目的：通过评估亚甲蓝单独和联合99mTc-硫胶体核素示踪法在早期非小细胞肺癌（NSCLC）前哨淋巴结（SLN）定位的可行性，探讨SLN概念在NSCLC中的适用性。方法选择我院2008年3月~2011年5月收治的早期NSCLC 61例为研究对象，术中行SLN示踪剂注射并切除，其中注射亚甲蓝35例，亚甲蓝联合99mTc-硫胶体26例，并行肺叶切除+肺门及纵隔淋巴结清扫术，术后所有淋巴结均石蜡切片，行HE染色和抗细胞角蛋白抗体免疫组化检查。结果单独使用亚甲蓝组的SLN检出率60.0%，准确性76.19%，灵敏度58.33%，阴性预测值和假阴性率分别为90.0%和8.33%；亚甲蓝联合99mTc-硫胶体组在检出率96.15%，准确性96.0%，灵敏度92.86%，阴性预测值和假阴性率分别为91.67%和7.14%。结论（1）SLN的状态能够反映NSCLC肺门纵隔淋巴结是否转移；（2）亚甲蓝联合99mTc-硫胶体核素示踪法较单独使用亚甲蓝在前哨淋巴结导航中具有更高的检出率、准确性及灵敏度，是较好的肺癌SLN示踪方法，可能运用于临床。
作者：洪斌；沈学远；陈江勇 刊期： 2014年第07期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
