孙文泽；宋丽萍；张莹冰；艾婷；卢金利；任娟；高莹
目的 筛选和鉴定结直肠癌腹膜种植转移相关基因.方法 收集手术切除3例伴有腹膜种植转移的结直肠腺癌病人原发病灶和正常黏膜的新鲜组织标本,提取总RNA,经逆转录合成cDNA后经体外扩增合成aRNA,Cy3荧光分子标记后和人类全基因组表达谱芯片杂交,采用经验贝叶斯方法(P≤0.05)筛选出差异表达基因,并用RT-PCR实验对部分差异表达基因进行验证.结果 满足(P≤0.05)的基因共有105个.其中和正常组织相比,在肿瘤组织表达上调的基因有42个,表达下调的基因有63个.通过生物信息学分析,在表达上调基因中选择3条(S100P;PRDX1；SLPI)基因进RT-PCR行验证,结果与芯片结果完全相符.结论 基因芯片技术通过筛选结直肠癌腹膜转移过程中发挥关键作用的基因,为寻找结直肠癌腹膜转移的分子标志物提供依据和参考.
作者：刘峰；郭久冰；沈智勇；牟廷玉；智鹏柯；李国新 刊期： 2012年第03期
脂肪组织由于自身脂类含量丰富,采用常规扫描电镜生物样品制备法,很难达到预期效果.经过数次摸索,作者在常规制备样品基础上,增加了锇酸后固定,以使脂肪酸和磷脂蛋白得到稳定,即而稳定细胞膜结构；为使组织细胞内有机溶剂充分置换,又延长脱水时间.通过对这些具体操作细节进行改良,取得了较为满意的结果.
作者：崔芳；刘超；杨建民；王丽 刊期： 2012年第03期
目的 针对目前虚拟结肠镜导航观察方法中常见的观察视野窄、视区易形变等问题,开发新的导航观察模式.方法 本方法由结肠分段、结肠剖分和导航观察等3部分组成.首先将全结肠分割成连续的小段,再将每小段结肠进行剖分,剖成对称的两部分,后,放置虚拟摄像机于剖面上方进行俯瞰式观察.结果 本方法能实现结肠的正确分段,并具有大的观察视野,可有效观察结肠褶皱处的小病灶.结论 分段导航观察方法是一种宽视野、无形变、易调整的导航观察方法,适用于虚拟大肠镜诊断导航检查系统的开发.
作者：李云；江贵平；张煜 刊期： 2012年第03期
目的 从人脐带血中分选出CD133+造血祖细胞,并进行长时间干性维持培养.方法 通过免疫磁珠法分选出人脐带血中的CD133+造血祖细胞,经流式细胞仪检测免疫磁珠分选后的CD133+造血祖细胞.采用五种方法扩增培养该细胞,8周后,再通过细胞形态学、流式细胞术、免疫细胞化学和免疫荧光对细胞进行干性鉴定,探索佳干性维持培养方法.结果 通过免疫磁珠法可以从人脐带血中分选出80％以上的CD133+造血祖细胞.采用优化的无血清培养基培养8周之后,CD133+造血祖细胞可得到有效扩增.而其他的培养基会使CD133+造血祖细胞由半悬浮细胞分化为梭形贴壁细胞,并且细胞状态欠佳.结论 利用免疫磁珠法分选出的CD133+造血祖细胞,采用优化的无血清培养基能够有效扩增该细胞,并可长期有效的维持其干性.
作者：吴小金；陈芳；陆滟霞；杨慧；彭璠莉；袁理；刘国炳；李学农 刊期： 2012年第03期
目的 构建p38丝裂原激活蛋白激酶基因(MAPK)重组慢病毒载体并建立表达外源性p38基因的人前列腺癌稳定细胞株.方法 采用限制性内切酶酶切、T4 DNA连接酶连接等方法,将EGFP/p38融合基因插入慢病毒载体pTYF-EF1α-IRES-EGFP中,构建启动子EF1α调控的EGFP/p38共表达慢病毒载体pTYF-EF1α-EGFP/p38,经酶切鉴定后,利用慢病毒三质粒系统,通过脂质体法转染包装细胞HEK 293T细胞,收集病毒上清后转导人前列腺癌DU145细胞株,经有限稀释法筛选重组EGFP/p38稳定细胞株,用Western blotting检测细胞总p38的表达,用计数法绘制细胞的生长曲线.结果 经酶切鉴定,成功构建EGFP/p38重组慢病毒载体,并包装慢病毒,检测病毒悬液的滴度为4.7× 106 TU/ml,利用此病毒悬液感染DU145细胞,成功筛选到EGFP/p38稳定表达细胞株,Western blotting显示该细胞株能稳定表达外源性EGFP/p38融合蛋白,这种过表达p38的细胞株的生长速度明显低于对照组.结论 成功构建p38 MAPK重组慢病毒载体并建立了表达外源性p38 MAPK基因的稳定细胞株EGFP/p38-DU145,细胞内p38过表达能够抑制DU145细胞的增殖.
作者：荆玉明；罗杰；张艳玲；陈三三；万沛；颜仁和；王宏昌；陈白虹；谭万龙；李红卫 刊期： 2012年第03期
膝关节类风湿性关节炎比较常见,但受累关节出现麻疹孪生球菌所致的化脓性感染很少见.我们报道1例由麻疹孪生球菌导致膝关节类风湿性关节炎合并化脓性感染的病例.由于感染症状不典型,容易出现延误诊断.延迟诊断和基础病直接影响了治疗效果,值得我们注意.
作者：唐芳根；袁芬连；刘家开；龙泉 刊期： 2012年第03期
目的 构建过表达miR-335的稳定细胞株SW620并筛选和初步鉴定miR-335的靶基因.方法 扩增包含hsa-miR-335前体序列在内的基因片段,并将其亚克隆至PLVTHM慢病毒载体；扩增包含RASA1 3’UTR种子区域的基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体,并对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-RASA1-Mut;检测萤火虫荧光素值(F)和海肾荧光素值(R),以R/F表示相对荧光素酶活性.流式细胞仪筛选建立稳定表达miR-335的细胞株,利用荧光定量PCR检测miR-335及其靶基因RASA1的表达,Western Blot检测RASA1蛋白水平的表达.结果 质粒双酶切以及测序鉴定PLVTHM-miR335、psiCHECK-2-RASA1、psiCHECK-2-RASA1-Mut重组质粒构建成功.荧光定量PCR显示结直肠癌细胞中miR-335与RASA1表达趋势成负相关.双荧光素酶报告基因分析证实hsa-miR-335能够作用于RASA1的31UTR.稳定过表达miR-335的细胞中,miR-335的表达明显高于对照组和未处理组,蛋白质水平有所下降.结论 成功构建了PLVTHM-miR-335慢病毒重组质粒,构建过表达miR-335的细胞株SW620,初步证实RASA1是miR-335的靶基因.
作者：杨慧；张超；陆滟霞；吴小金；袁理；周畅；周春平；刘国炳；李学农 刊期： 2012年第03期
目的 制作家兔长时间腹腔内高压所致的腹腔筋膜室综合征(ACS)模型,研究较长时间的腹腔内高压征(IAH)对家兔循环功能、肝肾功能、抗氧化能力及血液电解质水平的影响,并观察生长抑素是否对ACS有防治作用.方法 将12只新西兰兔平均分为2组,分别为生理盐水对照组、生长抑素干预组.通过模拟兔腹部失血和注入氮气建立动物IAH/ACS模型.并在IAH15 mmHg后1～6h观察兔各项指标变化,包括动脉收缩压、心率、中心静脉压(CVP)、血液酸碱及电解质指标,同时测定代表肝肾功能的谷丙转氨酶和尿素氮(BUN),以及反映组织过氧化反应的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的变化情况.结果 长时间的IAH可使机体血压下降、CVP上升,且有严重酸中毒、高血钾和低血钙等不良影响(P均＜0.05).生长抑素处理组与生理盐水组的结果没有明显差异.结论 较长时间的IAH可使家兔心血管功能发生损害,并可能与组织缺血缺氧导致酸中毒、电解质紊乱和组织过氧化损伤有关.生长抑素的干预对ACS的发生发展没有明显的防治作用.
作者：陈煜；薛翔；王丽；金春华；邹衍泰 刊期： 2012年第03期
目的 探讨背长肌与腹外斜肌间隙入路纤维环穿刺法构建兔腰椎间盘退变模型的可行性.方法 新西兰大白兔6只,从兔子背长肌与腹外斜肌间隙入路暴露椎体和椎间盘,L2/3为对照组,不暴露也不穿刺椎间盘；L3/4为假手术组,剪断L4右侧横突后暴露椎间盘,但不进行穿刺；L4/5、L5/6为穿刺组,剪断L5、L6右侧横突后暴露椎间盘并用18G针穿刺构建模型.分别在术前及术后4周对实验动物进行X线和磁共振(MRI)检查,4周后处死实验动物,取材后行组织学及免疫组织化学检查.结果 术后4周,X线检查显示模型组L4/5、L5/6椎间盘高度明显降低、骨赘形成、终板硬化,MRI T2加权像亦见椎间盘高度下降,其椎间盘髓核信号明显减弱；大体观察见该组椎间盘髓核组织较少并组织松脆,呈淡黄色改变；组织学观察髓核脊索细胞数量减少,免疫组织化学观察到髓核Ⅱ型胶原表达比对照组和假手术组明显减少.结论 本研究为椎间盘退变的研究提供了一种较为理想的、相对可靠的动物模型.
作者：崔运能；周荣平；麦奇光；陆明；徐颂；王亮；李绍林；金大地 刊期： 2012年第03期
目的 观察乙醛脱氢酶2(ALDH2)在糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注凋亡发生中的作用.方法 大鼠分为正常组、糖尿病组和ALDH2激动剂乙醇+糖尿病组.4周后行离体心肌缺血/再灌注(I/R).测定复灌期间冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量.检测心肌组织细胞ALDH2、caspase-3的活性；RT-PCR测定左心室前壁心尖组织Bcl-2、Bax mRNA的表达.结果 与正常大鼠I/R相比,糖尿病大鼠复灌期冠脉流出液中LDH释放增加,心肌组织caspase-3活性增加,ALDH2活性降低,Bcl-2/Bax mRNA比值降低；与糖尿病大鼠心肌I/R相比,ALDH2激动剂乙醇使得心肌复灌期间冠脉流出液中LDH释放减少,心肌caspase,-3活性降低,ALDH2活性增高,Bcl-2/Bax mRNA比值增高.结论 增强ALDH2在糖尿病大鼠心肌中的表达对缺血/再灌注损伤有明显的保护作用；其机制可能与抑制细胞凋亡的发生有关.
作者：王洪巨；康品方；叶红伟；于影；王晓梅；高琴 刊期： 2012年第03期
目的 分析Ⅲ期不能手术非小细胞肺癌同步放化疗加巩固化疗与序贯放化疗的近、远期疗效及毒副反应.方法 回顾分析2007年2月～2010年6月收治的Ⅲ期不能手术的非小细胞肺癌患者93例,序贯组50例,同步加巩固组43例.序贯组:先行2～6周期(中位2周期)化疗后开始放疗,放疗后再行0～4周期(中位2周期)化疗.同步组:放疗同步2周期化疗(每隔3周),放疗后行2～4周期(中位2周期)同方案巩固化疗,均为第3代TP/NP/GP方案.放疗采用二维前后对穿野照射DT36～40 Gy/18～20f后三维适形放疗推量至DT56～70 Gy/28～35f(中位DT64Gy)或三维适形放疗DT50～74 Gy/25～37f(中位DT62 Gy).结果 同步加巩固与序贯组客观有效率分别为76.7％、54.0％(P＜0.05)；中位无进展时间、中位生存时间分别为16.0个月、18.0个月及10.0个月、12.5个月；1、2、3年生存率分别为83.7％、48.8％、20.9％及52.0％、20.0％、2.0％(P＜0.05).同步加巩固组远地转移率明显低于序贯组(P＜0.05),局部复发率两组无统计学差异.毒副反应主要为放射性肺炎、放射性食管炎、消化道反应及血液毒性,其中Ⅲ～Ⅳ级消化道反应及血液毒性同步加巩固组高于序贯组,有统计学差异.结论 对于Ⅲ期非手术NSCLC同步放化疗加巩固化疗与序贯放化疗相比,可以提高客观有效率、延长无进展生存及总生存时间、降低远地转移率,虽然消化道及血液学毒性增加,但患者可以耐受.
作者：孙文泽；宋丽萍；张莹冰；艾婷；卢金利；任娟；高莹 刊期： 2012年第03期
目的 研究不同胰腺癌细胞株对神经生长因子(NGF)刺激的反应性,以及各细胞株中Trk-A的表达情况,探讨NGF对胰腺癌细胞株作用的分子机制.方法 选取MIA-PaCa-2、PANC-1、SW-1990、AsPC-1、BxPC-3等5种不同转移性能及分化程度的胰腺癌细胞株,给予外源性NGF刺激,运用MTT方法观察各种细胞株的增殖情况；通过Matrigel实验观察NGF对细胞侵袭性的影响.运用PCR及Western blotting检测各种细胞株中Trk-A的表达情况,并观察NGF刺激作用与细胞TrK-A表达之间的关系.结果 用含有不同浓度NGF的培养液(0、4、20、100、500 ng/ml)对5种细胞进行培养及MTT检测,发现NGF浓度为100 ng/ml对细胞的刺激作用强.选用含100 ng/ml NGF的培养液对各组胰腺癌细胞进行培养及MTT检测,结果显示NGF对PANC-1细胞的刺激作用大,增殖快,对AsPC-1的刺激作用小.Matrigel实验显示NGF可明显增加PANC-1及MIA-PaCa-2细胞的侵袭能力,对AsPC-1细胞影响小.TrK-A抑制剂CEP701可抑制NGF对细胞侵袭的刺激功能.对细胞中TrK-A基因表达及蛋白水平检测显示,PANC-1细胞Trk-A水平高,AsPC-1细胞水平低.细胞内TrK-A表达水平与NGF对细胞增殖及侵袭的影响成正相关.结论 外源性NGF促胰腺癌细胞增殖与侵袭作用和细胞中Trk-A基因及蛋白表达水平一致,说明NGF对胰腺癌的作用机制可能是通过与Trk-A蛋白结合而促进胰腺癌细胞的增殖及转移.
作者：刁冬梅；宋永春；侯妮；徐海飞；汪建光；党诚学 刊期： 2012年第03期
目的 观察脑摄取动态平衡时不同麻醉深度丙泊酚对犬脑不同区域γ-氨基丁酸(GABA)的影响.方法 12只12～18月健康杂种犬,随机分为浅麻醉组和深麻醉组,每组6只.浅麻醉组:静脉注入丙泊酚5.5 mg/kg(时间15s),续以55 mg/kg/h恒速静脉输注.深麻醉组:静脉注入丙泊酚7.0 mg/kg(时间15 s),续以70 mg/kg/h恒速静脉输注.2组丙泊酚恒速输注50 min时取颈内动、静脉血各2 ml,同时断头处死,解剖犬脑取背侧丘脑、上丘脑、后丘脑、下丘脑、底丘脑、额叶、顶叶、颞叶、枕叶、海马、扣带回、小脑、中脑、脑桥、延髓、颈髓组织,采用高效液相色谱法(HPLC)检测颈内动、静脉血浆丙泊酚浓度和各区域脑组织GABA含量.结果 浅麻醉组:颈内动、静脉血浆丙泊酚浓度分别为3.00±0.31和3.10±0.51μg/ml,差异无统计学意义(P＞0.05)；深麻醉组:颈内动、静脉血浆丙泊酚浓度分别为6.41±0.05和6.40±0.11 μg/ml,差异无统计学意义(P＞0.05).深麻醉组各脑区GABA浓度均明显高于浅麻醉组(P＜0.05)；在两种麻醉深度下背侧丘脑和下丘脑GABA变化率分别为(83.83±2.23)％,(85.83±1.72)％,明显高于其它脑区(P＜0.05).结论 丙泊酚恒速静脉输注50 min时,两组犬脑颈内动、静脉血药浓度均达到平衡；深麻醉组各脑区GABA浓度均明显高于浅麻醉组,背侧丘脑和下丘脑GABA变化率高于其他脑组织,提示丙泊酚麻醉深度与GABA含量相关,背侧丘脑和下丘脑GABA的变化在丙泊酚麻醉中发挥重要的作用.
作者：汪燕；林春水；古妙宁；郭高锋；周枝凤；陈莺 刊期： 2012年第03期
目的 探讨MN/CAⅨ在肾细胞癌组织和血液中的表达情况和诊断价值.方法 采用RT-PCR技术检测62例肾细胞癌患者肿瘤组织和外周血液中MN/CA IX mRNA的表达,以32例正常肾组织和非肾癌患者外周血作为对照.采用免疫组化技术检测36例肾透明细胞癌,17例其它肾肿瘤,16例正常肾组织标本.结果 RT-PCR结果显示62例肾细胞癌患者MN/CAⅨmRNA阳性率在癌组织中为82.3％(51/62),在外周血中为54.8％(34/62),显著高于对照组(P＜0.05),在肾透明细胞癌患者癌组织和外周血中MN/CAⅨmRNA阳性率分别为98％(49/50)和66％(33/50),显著高于其它类型肾癌结果(P＜0.05).免疫组化结果显示MN/CAⅨ在肾透明细胞癌中表达阳性率为97.2％(35/36),明显高于其它类型肾肿瘤和正常肾组织(P＜0.05).结论 MN/CAⅨ在肾细胞癌尤其是透明细胞癌中有特异性的高表达,可以用于肾癌的诊断,尤其在预后和个体化治疗判断上有潜在价值.
作者：姜耀东；任非；郑少斌 刊期： 2012年第03期
目的 通过观察大鼠脊髓穿刺致不同损伤程度后病理生理、运动及电生理改变,寻找对脊髓损伤程度小的方法,为进一步研究局麻药脊髓毒性提供新的途径.方法 健康SD大鼠144只随机分为对照组和实验组,实验组又分为A组(29G)、B组(25G)和C组(21G).实验动物暴露L4-5节段间硬脊膜,直视下分别用21G、25G、29G刺伤L4-5节段脊髓,缝合切口.各组分别在术前进行双后肢运动功能评分,术后各时点记录运动功能评分(BBB评分)、电生理检测及脊髓病理观察.结果 对照组麻醉恢复后能站立行走,脊髓结构正常.实验组29G组行为学评分高,脊髓损伤区域无明显病理改变；21G组运动、脊髓电生理和组织病理的改变明显,2周时明显恢复.结论 应用29G穿刺针对脊髓进行针刺对大鼠脊髓功能影响小,具有穿刺损伤小、重复性好的优点,可为研究局麻药脊髓毒性提供新途径.
作者：谭永红；徐世元；范凤飞 刊期： 2012年第03期
目的 观察经尾静脉输注的骨髓间充质干细胞(MSCs)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠的早期治疗作用.方法 采用密度梯度单个核细胞分离培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,传至第4代时观察细胞形态、流式细胞仪检测细胞表面标志,定向诱导检测分化能力后备用.36只小鼠随机分为对照组,PBS治疗组,MSC治疗组.对照组气管内滴注生理盐水50 μl,PBS和MSC治疗组气管内滴注LPS制备急性肺损伤模型.造模后lh后经尾静脉输注MSC5× 106(MSCs治疗组)或PBS 100 μl(PBS治疗组或对照组).24h后处死小鼠,留取标本检测肺组织病理形态学、肺组织湿干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞数、蛋白含量、细胞因子水平和肺组织中的MPO表达量.结果 与对照组比较,PBS治疗组肺组织病理损伤严重,BALF中中性粒细胞数、蛋白含量、TNF-α、IL-6和IL-10水平、肺组织中的MPO含量及肺组织湿干重比均显著升高.与PBS治疗组比较,MSCs治疗组肺组织病理损伤程度减轻,BALF中中性粒细胞数、蛋白含量、TNF-α、IL-6水平、肺组织中的MPO含量及肺组织湿干重比均显著降低,但仍高于对照组水平,IL-10水平显著高于PBS治疗组和对照组.结论MSCs移植在LPS诱导的急性肺损伤早期阶段可有效改善肺组织病理损伤,减轻肺部炎症反应,降低肺水肿程度,这种治疗作用不依赖于MSCs移植后在肺内的定植数量.
作者：邰文琳；董昭兴；张丹丹；王殿华 刊期： 2012年第03期
目的 探讨蟾酥注射液(CHS)对人类白细胞多药耐药细胞系HL60/阿霉素细胞的逆转作用机制.方法 MTT法测定CHS预作用后HL60/阿霉素细胞对阿霉素的敏感性；流式细胞术考察CHS对HL60/阿霉素细胞周期的影响；免疫组化考察CHS对HL60/阿霉素细胞NF-κB、MRP、GST-π、iNOS蛋白表达的调节作用.结果 CHS可将阿霉素对HL60/阿霉素细胞的IC50值由34.1971 μmol/L降至17.4393 μmol/L,逆转倍数为1.9609倍；FCM显示CHS作用后HL60/阿霉素阻滞于G0/G1期、G2/M期,降低进入S期比例,并出现凋亡峰；免疫组化结果显示,CHS能下调HL60/阿霉素细胞中MRP、GST-π表达,上调NF-κ3、iNOS的表达.结论 蟾蜍注射液逆转HL60/阿霉素细胞的多药耐药性可能是通过下调MRP、GST-π的表达,上调NF-κB、iNOS的表达,促进HL60/阿霉素细胞凋亡,从而增加HL60/阿霉素细胞对药物的敏感性.
作者：熊新；周远大 刊期： 2012年第03期
目的 应用彩超观察正常小儿肠系膜淋巴结.方法 随机选择14岁以下儿童730例(男410例,女298例)近期无患病的儿童,使用HDI 5000彩色多普勒超声诊断仪探察小儿腹部淋巴结.结果 发现男性儿童腹部淋巴结检出率多于女性,健康儿童阶段腹腔内淋巴结的年龄分布多出现在1～4岁,并随着年龄的增长淋巴结大小逐渐减小.结论 彩超对儿童腹部淋巴结的评价有重要的价值.
作者：王文刚；田晖；闫记英；李涛；张彤迪；赵雅培；张丽艳；邢恒国 刊期： 2012年第03期
目的 探讨基于1H-NMR的模式识别方法应用于慢性心力衰竭(CHF)血清代谢组学研究的可行性.方法 应用1H-NMR技术对9例CHF患者和6例健康人血清进行检测,对所得数据分别采用主成分分析法(PCA)和正交信号校正偏小二乘法(OPLS)进行模式识别分析,确定CHF患者与健康人血清差异代谢物,比较两种模式识别方法判别能力.结果 CHF患者与健康人血清1H-NMR图谱有明显差异.其中PCA模式识别法未能将CHF组和健康对照组区分开,而用OPLS模式识别方法两组可明显区分.结论 1H-NMR技术是研究CHF代谢组学的有效技术手段,CHF患者血清代谢组与健康人存在明显差异.OPLS模式识别法明显优于PCA法,能够去除非实验因素的影响,提高分类效果.
作者：杜智勇；沈安娜；苏亮；梁健球；许顶立 刊期： 2012年第03期
我们收治1例严重电击伤并广泛肌肉坏死并于伤后6d死亡的患者,其住院期间心肌酶谱明显增高,血钾及其它电解质基本正常,肾功能亦无特别改变,血细菌培养阴性.分析其死亡原因,基本排除肾衰和高钾血症,可能与坏死分解物吸收相关.
作者：李松泽；荣新洲；苏元明 刊期： 2012年第03期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
