崔芳;刘超;杨建民;王丽
目的 构建p38丝裂原激活蛋白激酶基因(MAPK)重组慢病毒载体并建立表达外源性p38基因的人前列腺癌稳定细胞株.方法 采用限制性内切酶酶切、T4 DNA连接酶连接等方法,将EGFP/p38融合基因插入慢病毒载体pTYF-EF1α-IRES-EGFP中,构建启动子EF1α调控的EGFP/p38共表达慢病毒载体pTYF-EF1α-EGFP/p38,经酶切鉴定后,利用慢病毒三质粒系统,通过脂质体法转染包装细胞HEK 293T细胞,收集病毒上清后转导人前列腺癌DU145细胞株,经有限稀释法筛选重组EGFP/p38稳定细胞株,用Western blotting检测细胞总p38的表达,用计数法绘制细胞的生长曲线.结果 经酶切鉴定,成功构建EGFP/p38重组慢病毒载体,并包装慢病毒,检测病毒悬液的滴度为4.7× 106 TU/ml,利用此病毒悬液感染DU145细胞,成功筛选到EGFP/p38稳定表达细胞株,Western blotting显示该细胞株能稳定表达外源性EGFP/p38融合蛋白,这种过表达p38的细胞株的生长速度明显低于对照组.结论 成功构建p38 MAPK重组慢病毒载体并建立了表达外源性p38 MAPK基因的稳定细胞株EGFP/p38-DU145,细胞内p38过表达能够抑制DU145细胞的增殖.
作者:荆玉明;罗杰;张艳玲;陈三三;万沛;颜仁和;王宏昌;陈白虹;谭万龙;李红卫 刊期: 2012年第03期
目的 探讨基于1H-NMR的模式识别方法应用于慢性心力衰竭(CHF)血清代谢组学研究的可行性.方法 应用1H-NMR技术对9例CHF患者和6例健康人血清进行检测,对所得数据分别采用主成分分析法(PCA)和正交信号校正偏小二乘法(OPLS)进行模式识别分析,确定CHF患者与健康人血清差异代谢物,比较两种模式识别方法判别能力.结果 CHF患者与健康人血清1H-NMR图谱有明显差异.其中PCA模式识别法未能将CHF组和健康对照组区分开,而用OPLS模式识别方法两组可明显区分.结论 1H-NMR技术是研究CHF代谢组学的有效技术手段,CHF患者血清代谢组与健康人存在明显差异.OPLS模式识别法明显优于PCA法,能够去除非实验因素的影响,提高分类效果.
作者:杜智勇;沈安娜;苏亮;梁健球;许顶立 刊期: 2012年第03期
目的 观察脑摄取动态平衡时不同麻醉深度丙泊酚对犬脑不同区域γ-氨基丁酸(GABA)的影响.方法 12只12~18月健康杂种犬,随机分为浅麻醉组和深麻醉组,每组6只.浅麻醉组:静脉注入丙泊酚5.5 mg/kg(时间15s),续以55 mg/kg/h恒速静脉输注.深麻醉组:静脉注入丙泊酚7.0 mg/kg(时间15 s),续以70 mg/kg/h恒速静脉输注.2组丙泊酚恒速输注50 min时取颈内动、静脉血各2 ml,同时断头处死,解剖犬脑取背侧丘脑、上丘脑、后丘脑、下丘脑、底丘脑、额叶、顶叶、颞叶、枕叶、海马、扣带回、小脑、中脑、脑桥、延髓、颈髓组织,采用高效液相色谱法(HPLC)检测颈内动、静脉血浆丙泊酚浓度和各区域脑组织GABA含量.结果 浅麻醉组:颈内动、静脉血浆丙泊酚浓度分别为3.00±0.31和3.10±0.51μg/ml,差异无统计学意义(P>0.05);深麻醉组:颈内动、静脉血浆丙泊酚浓度分别为6.41±0.05和6.40±0.11 μg/ml,差异无统计学意义(P>0.05).深麻醉组各脑区GABA浓度均明显高于浅麻醉组(P<0.05);在两种麻醉深度下背侧丘脑和下丘脑GABA变化率分别为(83.83±2.23)%,(85.83±1.72)%,明显高于其它脑区(P<0.05).结论 丙泊酚恒速静脉输注50 min时,两组犬脑颈内动、静脉血药浓度均达到平衡;深麻醉组各脑区GABA浓度均明显高于浅麻醉组,背侧丘脑和下丘脑GABA变化率高于其他脑组织,提示丙泊酚麻醉深度与GABA含量相关,背侧丘脑和下丘脑GABA的变化在丙泊酚麻醉中发挥重要的作用.
作者:汪燕;林春水;古妙宁;郭高锋;周枝凤;陈莺 刊期: 2012年第03期
目的 研究不同胰腺癌细胞株对神经生长因子(NGF)刺激的反应性,以及各细胞株中Trk-A的表达情况,探讨NGF对胰腺癌细胞株作用的分子机制.方法 选取MIA-PaCa-2、PANC-1、SW-1990、AsPC-1、BxPC-3等5种不同转移性能及分化程度的胰腺癌细胞株,给予外源性NGF刺激,运用MTT方法观察各种细胞株的增殖情况;通过Matrigel实验观察NGF对细胞侵袭性的影响.运用PCR及Western blotting检测各种细胞株中Trk-A的表达情况,并观察NGF刺激作用与细胞TrK-A表达之间的关系.结果 用含有不同浓度NGF的培养液(0、4、20、100、500 ng/ml)对5种细胞进行培养及MTT检测,发现NGF浓度为100 ng/ml对细胞的刺激作用强.选用含100 ng/ml NGF的培养液对各组胰腺癌细胞进行培养及MTT检测,结果显示NGF对PANC-1细胞的刺激作用大,增殖快,对AsPC-1的刺激作用小.Matrigel实验显示NGF可明显增加PANC-1及MIA-PaCa-2细胞的侵袭能力,对AsPC-1细胞影响小.TrK-A抑制剂CEP701可抑制NGF对细胞侵袭的刺激功能.对细胞中TrK-A基因表达及蛋白水平检测显示,PANC-1细胞Trk-A水平高,AsPC-1细胞水平低.细胞内TrK-A表达水平与NGF对细胞增殖及侵袭的影响成正相关.结论 外源性NGF促胰腺癌细胞增殖与侵袭作用和细胞中Trk-A基因及蛋白表达水平一致,说明NGF对胰腺癌的作用机制可能是通过与Trk-A蛋白结合而促进胰腺癌细胞的增殖及转移.
作者:刁冬梅;宋永春;侯妮;徐海飞;汪建光;党诚学 刊期: 2012年第03期
目的 观察经尾静脉输注的骨髓间充质干细胞(MSCs)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠的早期治疗作用.方法 采用密度梯度单个核细胞分离培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,传至第4代时观察细胞形态、流式细胞仪检测细胞表面标志,定向诱导检测分化能力后备用.36只小鼠随机分为对照组,PBS治疗组,MSC治疗组.对照组气管内滴注生理盐水50 μl,PBS和MSC治疗组气管内滴注LPS制备急性肺损伤模型.造模后lh后经尾静脉输注MSC5× 106(MSCs治疗组)或PBS 100 μl(PBS治疗组或对照组).24h后处死小鼠,留取标本检测肺组织病理形态学、肺组织湿干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞数、蛋白含量、细胞因子水平和肺组织中的MPO表达量.结果 与对照组比较,PBS治疗组肺组织病理损伤严重,BALF中中性粒细胞数、蛋白含量、TNF-α、IL-6和IL-10水平、肺组织中的MPO含量及肺组织湿干重比均显著升高.与PBS治疗组比较,MSCs治疗组肺组织病理损伤程度减轻,BALF中中性粒细胞数、蛋白含量、TNF-α、IL-6水平、肺组织中的MPO含量及肺组织湿干重比均显著降低,但仍高于对照组水平,IL-10水平显著高于PBS治疗组和对照组.结论MSCs移植在LPS诱导的急性肺损伤早期阶段可有效改善肺组织病理损伤,减轻肺部炎症反应,降低肺水肿程度,这种治疗作用不依赖于MSCs移植后在肺内的定植数量.
作者:邰文琳;董昭兴;张丹丹;王殿华 刊期: 2012年第03期
目的 观察阿托伐他汀对老年大鼠心肌缺血再灌注过程中心脏的影响,并进一步关注此过程中肝、肾功能的变化.方法 10月龄Wistar大鼠饲养至20月龄,阿托伐他汀灌胃至24月龄,分为大剂量他汀组、小剂量他汀组、老年对照组,并设立青年对照组.采用结扎冠状动脉方法建立心肌缺血再灌注模型,纪录缺血再灌注过程中大鼠死亡率、血流动力学变化、心肌梗塞面积变化,及肝肾功能指标.结果 与老年对照组相比,青年对照组及大剂量他汀组在缺血再灌注过程中死亡率明显降低(P<0.05)、血流动力学紊乱减少、心梗面积减小(P<0.05);青年对照组及大剂量他汀组在缺血再灌注后,肝肾功能无明显恶化,小剂量他汀组肝脏功能显著恶化(P<0.05),老年对照组肝肾功能均出现显著恶化(P<0.05).结论 阿托伐他汀对老年大鼠心肌缺血再灌注过程中的心、肝、肾多器官产生保护作用.
作者:张今尧;王浩;叶平 刊期: 2012年第03期
目的 分析Gitelman综合征的临床特点和实验室特点,进一步提高诊疗水平.方法 对解放军总医院近5年来17例(男/女:11/6)患者进行回顾性研究,对其临床症状、实验室、影像学检查结果及诊治情况进行分析.结果 17例患者中15例均有不同程度的下肢乏力,其中软瘫8例;实验室检查表现为低血钾(17/17),低血镁(17/17)、低尿钙(17/17);血肾素活性(17/17)、血管紧张素Ⅱ(14/17)及醛固酮(7/17)明显升高;单纯补钾或联合消炎痛、安体舒通和门冬氨酸钾镁片等药物治疗后症状缓解,但血钾、血镁未升至正常水平.结论 Gitelman综合征以双下肢乏力为主要临床表现,并伴有低血钾、低血镁等,治疗应以补钾、补镁、醛固酮拮抗剂等多种药物联合应用,预后良好.
作者:曲玲;张婷婷;母义明 刊期: 2012年第03期
目的 探讨NOB1在结直肠癌中的表达及其意义.方法 用免疫组织化学SP法对60例结直肠癌和癌旁正常组织(距癌组织大于3.0cm)中NOB1的表达进行检测;并分析其与结直肠癌临床病理因素的关系.结果 NOB1在结直肠癌组织中表达阳性的有32例(53.3%),NOB1在癌旁正常组织中表达阳性有10例(16.7%),差异有统计学意义(P<0.05).在结直肠癌组织中NOB1的表达与患者性别、年龄、肿瘤组织的分级和淋巴结转移均无关(P>0.05).结论 NOB1在结直肠癌中表达升高,可能在结直肠癌的发生发展过程中起重要作用.NOB1能否成为结直肠癌治疗的新靶点,有待进一步研究.
作者:吴东平;贺孝文 刊期: 2012年第03期
目的 明确萎缩性骨不连组织水平表达上调的hsa-miR-654-5p在人骨髓基质干细胞(hBMSCs)中对其预测靶基因骨形态发生蛋白2(BMP2)mRNA和蛋白的抑制作用,探索其在成骨分化过程中的生物学调控功能.方法 分离培养hBMSCs,将第4代hBMSCs培养16 h后分别按相应体系转染细胞,再培养48 h后取六孔板内细胞提取总RNA和总蛋白,进行实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting,取24孔板内细胞进行双荧光素酶报告基因检测.结果 当hBMSCs中hsa-miR-654-5p过表达时,BMP2的mRNA和蛋白表达水平均发生明显下调;双荧光素酶报告基因检测提示,BMP2的预测靶位点直接受hsa-miR-654-5p的抑制调控,该靶位点被突变后hsa-miR-654-5p对BMP2的抑制作用消失.结论 hsa-miR-654-5p可通过作用于BMP2的特定靶位点而直接抑制BMP2的mRNA和蛋白表达.hsa-miR-654-5p的变化在成骨分化调控过程中具有重要作用.
作者:魏均强;陈华;郑晓飞;张伯勋;王岩;唐佩福;余飞;宋青;黎檀实 刊期: 2012年第03期
目的 比较改良Schiff染液热配方与3种常见Schiff液配方对肾穿刺活检组织切片糖原染色(periodic Acid Schiff,PAS)染色的影响,以确定自制改良配方的应用效果.方法 笔者经历了5843例肾穿刺组织染色的摸索,改良了Schiff染液的热配方.将该配方与传统热配法、Lyon's欧洲标准冷配法、渡边恒彦冷配法的应用效果进行比较.分别将上述4种配方应用于50例肾穿刺病理常规的PAS染色法和微波快速PAS染色法中,使用IPP图像分析系统进行光密度分析.结果 Schiff染液改良热配方对肾脏组织阳性部位的着色鲜艳程度、清晰程度和重复使用率均优于其他3种配法(P,<0.05).结论 改良的Schiff染液热配方,比传统热配法、Lyon's欧洲标准冷配法、渡边恒彦冷配法更适合肾穿刺活检组织切片的PAS染色.
作者:周展眉;杨芳;曹维 刊期: 2012年第03期
目的 观察宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响.方法 采用荧光示踪实验检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能,及药物(油酸酰胺,维甲酸)对其功能的影响;采用标准细胞集落形成分析法检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞生长抑制作用的影响;采用Hoechst33258荧光染色检测缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞诱导凋亡作用的影响.结果 荧光示踪实验结果显示油酸酰胺可显著降低缝隙连接通讯功能,而维甲酸则可增强该功能;标准细胞集落形成实验结果表明,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞生长的抑制作用,而维甲酸则增强依托泊苷的细胞生长抑制作用;Hoechst 33258荧光染色结果显示,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞的诱导凋亡作用,而维甲酸则增强依托泊苷的诱导凋亡作用.结论 宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能降低,依托泊苷的抗肿瘤作用下降;而当通讯功能增强时,其抗肿瘤作用则增加.
作者:童旭辉;董淑英;蒋国君;范高福 刊期: 2012年第03期
目的 通过观察大鼠脊髓穿刺致不同损伤程度后病理生理、运动及电生理改变,寻找对脊髓损伤程度小的方法,为进一步研究局麻药脊髓毒性提供新的途径.方法 健康SD大鼠144只随机分为对照组和实验组,实验组又分为A组(29G)、B组(25G)和C组(21G).实验动物暴露L4-5节段间硬脊膜,直视下分别用21G、25G、29G刺伤L4-5节段脊髓,缝合切口.各组分别在术前进行双后肢运动功能评分,术后各时点记录运动功能评分(BBB评分)、电生理检测及脊髓病理观察.结果 对照组麻醉恢复后能站立行走,脊髓结构正常.实验组29G组行为学评分高,脊髓损伤区域无明显病理改变;21G组运动、脊髓电生理和组织病理的改变明显,2周时明显恢复.结论 应用29G穿刺针对脊髓进行针刺对大鼠脊髓功能影响小,具有穿刺损伤小、重复性好的优点,可为研究局麻药脊髓毒性提供新途径.
作者:谭永红;徐世元;范凤飞 刊期: 2012年第03期
目的 观察乙醛脱氢酶2(ALDH2)在糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注凋亡发生中的作用.方法 大鼠分为正常组、糖尿病组和ALDH2激动剂乙醇+糖尿病组.4周后行离体心肌缺血/再灌注(I/R).测定复灌期间冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量.检测心肌组织细胞ALDH2、caspase-3的活性;RT-PCR测定左心室前壁心尖组织Bcl-2、Bax mRNA的表达.结果 与正常大鼠I/R相比,糖尿病大鼠复灌期冠脉流出液中LDH释放增加,心肌组织caspase-3活性增加,ALDH2活性降低,Bcl-2/Bax mRNA比值降低;与糖尿病大鼠心肌I/R相比,ALDH2激动剂乙醇使得心肌复灌期间冠脉流出液中LDH释放减少,心肌caspase,-3活性降低,ALDH2活性增高,Bcl-2/Bax mRNA比值增高.结论 增强ALDH2在糖尿病大鼠心肌中的表达对缺血/再灌注损伤有明显的保护作用;其机制可能与抑制细胞凋亡的发生有关.
作者:王洪巨;康品方;叶红伟;于影;王晓梅;高琴 刊期: 2012年第03期
目的 评价开窗术后负压引流治疗大型牙源性颌骨囊肿疗效.方法 2008~2011年,针对我科就诊的大型的牙源性颌骨囊肿24例,采用开窗术后负压引流对其进行治疗,观察术后1、6个月囊肿的变化情况.结果 术后随访1~3年,所有患者囊腔基本消失,无1例复发,病变区域骨质生长修复良好,临床症状消除.结论 开窗术后负压引流可以显著缩小甚至消除颌骨囊肿,改善患者面部膨隆畸形,是治疗大型牙源性颌骨囊肿切实可行的方法,值得临床推广应用.
作者:殷学民;任晓旭;吕晓智;张磊涛;张君伟 刊期: 2012年第03期
目的 通过监测未抗病毒治疗的处于免疫清除期的慢性乙型肝炎患者的HBV DNA载量,评价其HBVDNA短期自发波动情况及影响其波动的相关因素.方法 入选123例ALT>2×ULN的未抗病毒治疗的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者,收集首次就诊的HBV DNA定量(罗氏COBAS)、HBsAg定量、ALT、AST结果,第二次就诊(间隔4周以内)的HBV DNA定量结果;对于首次就诊4周内行肝脏穿刺的受试者评价其肝组织学结果(Knodell坏死炎症评分和Ishak组织纤维化评分).结果 93例(75.6%)受试者HBV DNA波动≤0.5 Log IU/ml,30例(24.4%)受试者HBV DNA波动>0.5 Log IU/ml.应用二元Logistic多因素回归分析提示,HBV DNA的波动程度与Knodell坏死炎症评分及HBV DNA载量相关.Knodell坏死炎症评分≥10的患者其发生HBV DNA显著波动的概率显著高于Knodell坏死炎症评分<10的患者(50.0%vs 18.3%,P=0.042);HBV DNA载量<7 Log IU/ml的患者,其发生HBV DNA显著波动的概率显著高于HBV DNA载量≥7 Log IU/ml的患者(42.9%vs20.6%,P=0.030).结论 慢性乙型肝炎患者在免疫清除期,其HBV DNA在短期内存在波动,其中约25%的受试者的HBV DNA波动在0.5 LogIU/ml以上;HBV DNA波动的程度与肝脏炎症程度以及HBV DNA载量相关.
作者:樊蓉;尹军花;杨淑玲;李小溪;余高扬;孙剑;侯金林 刊期: 2012年第03期
目的 提取牛鼻HA软骨链蛋白(HA-CLP),确定其对化学致癌小鼠模型肿瘤边界的指示情况,为肺肿瘤影像学感兴趣区(ROI)边界的勾画提供实验依据.方法 建立化学致癌小鼠肺肿瘤模型,用亲和层析法从牛鼻软骨分离纯化HA-CLP,后以125I标记HA-CLP行放射性自显影显像研究,并对肺肿瘤行免疫组织化学分析及蛋白免疫印迹分析.结果 实验收获HA-CLP(241.8±63.4)mg(n=5),抽提蛋白率为2.42%;肺肿瘤放射性自显影在2h显像清晰;免疫组织化学在2h能清晰区分肿瘤边界,其HA-CLP免疫信号强;肿瘤HA-CLP蛋白免疫印迹均在2h条带显示清晰.结论 自提物HA-CLP具HABP家族免疫原性,通过应用自提物HA-CLP放射自显影实验以及组织免疫组织化学提示HA-CLP对肺肿瘤边界有良好的指示作用.
作者:梁智欣;强永刚;廖永华 刊期: 2012年第03期
目的 探讨蟾酥注射液(CHS)对人类白细胞多药耐药细胞系HL60/阿霉素细胞的逆转作用机制.方法 MTT法测定CHS预作用后HL60/阿霉素细胞对阿霉素的敏感性;流式细胞术考察CHS对HL60/阿霉素细胞周期的影响;免疫组化考察CHS对HL60/阿霉素细胞NF-κB、MRP、GST-π、iNOS蛋白表达的调节作用.结果 CHS可将阿霉素对HL60/阿霉素细胞的IC50值由34.1971 μmol/L降至17.4393 μmol/L,逆转倍数为1.9609倍;FCM显示CHS作用后HL60/阿霉素阻滞于G0/G1期、G2/M期,降低进入S期比例,并出现凋亡峰;免疫组化结果显示,CHS能下调HL60/阿霉素细胞中MRP、GST-π表达,上调NF-κ3、iNOS的表达.结论 蟾蜍注射液逆转HL60/阿霉素细胞的多药耐药性可能是通过下调MRP、GST-π的表达,上调NF-κB、iNOS的表达,促进HL60/阿霉素细胞凋亡,从而增加HL60/阿霉素细胞对药物的敏感性.
作者:熊新;周远大 刊期: 2012年第03期
目的 探讨糖尿病足溃疡的超声造影灌注动态变化.方法 研究16例糖尿病足溃疡的常规及超声造影图像,分析其造影增强的图像特点,并对部分病例进行病理检查.结果 注射SonoVue后,16个病灶超声造影动脉期清晰显示随时间推移呈缓慢增强,平均开始增强时间为(30.02+2.35)s,达峰时间为(37.54-4.13)s.5例呈均匀增强区域,11例呈周边较均匀增强,内部可见片状无增强区域,即液化坏死区.造影提示病灶范围较常规超声范围大.结论 超声造影能有效地对糖尿病足溃疡进行范围评估和治疗随访.
作者:张瑕;刘宏伟;吕雅赐;黄君;钟兴;邵建立 刊期: 2012年第03期
目的 应用血管回声跟踪(ET)技术评价血压对血管内皮功能的影响.方法 选择高血压组(HP)30例、正常高值血压组(HN)30例和正常血压对照组(NC)30例,常规二维超声测量颈动脉内膜中层厚度(IMT)和应用ET技术检测颈动脉弹性(Eρ、β、AC、AI、PWVβ),并进行统计学分析.结果 随着血压的升高,IMT、Eρ、β、AI、PWVβ升高而AC值降低,排除混杂因素之前,各硬化参数在HN和NC组、HP和NC组、HP和HN组间的差异均有统计学意义,排除混杂因素之后,HN和NC组间仅PWVβ有统计学意义,HP和NC组、HP和HN间各参数比较仍有显著性差异,其中收缩压对IMT、Eρ、AC、AI、PWVβ有显著影响,舒张压对AI有显著影响,脉压差对Eρ、β显著影响.结论 正常高值血压对血管并没有明显影响,高血压早期血压本身才是血管内皮功能损伤的独立危险因素;在动脉硬化早期,收缩压对血管内皮功能影响明显,其次为脉压差和舒张压.
作者:覃月秋;陈爱华;唐晓明 刊期: 2012年第03期
目的 探讨异基因造血干细胞移植术治疗阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)合并地中海贫血的临床疗效.方法 给1例23岁女性诊断PNH合并α-地中海贫血的患者行非亲缘外周血造血干细胞移植术.预处理方案采用环磷酰胺、白消安、氟达拉滨、塞替派、抗人T-淋巴细胞兔免疫球蛋白.预防移植物抗宿主病采用环孢素A、骁悉、甲氨蝶呤.输注单个核细胞数8× 108/kg,CD34+细胞数1.45× 106/kg.结果 中性粒细胞绝对数>0.5×109/L的天数为移植后25 d(+25 d),血小板>20×109/L的天数移植后21 d(+21 d),+24 d采用短串重复序列聚合酶链反应查植人证据:供者独立植入.结论 非亲缘外周血干细胞移植可以有效治疗PNH合并地中海贫血.
作者:李春富;鲁灵龙;刘璇;李娜;吴学东 刊期: 2012年第03期