包宁;张煜;张志国;曹慧茹;张文辉
目的 研究奥美拉唑对体外培养人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)基因表达谱的影响,探讨奥美拉唑对内皮细胞作用的分子机制.方法 10-5mol/L奥美拉唑与人脐静脉内皮细胞株共培养48h,运用Affymetrix U133 plus 2.0全基因组表达芯片,检测奥美拉唑对人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响,分子注释系统MAS3.0软件进行聚类分析.RT-PCR验证基因表达谱结果,Western blotting验证相关蛋白水平的变化.结果 奥美拉唑作用内皮细胞48h后,基因芯片分析筛选出差异表达大于1.5倍的基因282个,其中上调基因236个,下调基因46个,包括转录调节、炎症反应、免疫反应、细胞粘附、抗凋亡、信号转导等相关基因,RT-PCR和Western blotting结果与基因芯片结果一致.结论 奥美拉唑在基因水平通过多条通路调节内皮功能.
作者:刘先锋;卢学春;范利;高燕;马聪;罗芸 刊期: 2012年第04期
目的 初步探讨慢性脑缺血对大鼠睡眠钟基因表达的影响及乌龙丹对其的调控作用.方法 24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、乌龙丹给药组.采用改良式双侧颈总动脉永久性结扎法建立大鼠慢性脑缺血模型,造模3周后,灌胃给药3周,并持续监测各组大鼠体重,应用实时荧光定量PCR检测大鼠松果体钟基因Clock、Bmal1、Per1表达的变化.结果 模型组较假手术组Clock mRNA、PerlmRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05),Bmal1基因表达无显著差异(P>0.05);乌龙丹给药组的Clock基因水平高于模型组(P.<0.01),Bmall基因表达较假手术组降低(P.<0.05),Per1无显著变化(P>0.05).结论 慢性脑缺血可能成为睡眠障碍的潜在病因,乌龙丹对慢性脑缺血引起的睡眠障碍有一定的治疗作用.
作者:富祯祯;夏旸;彭康 刊期: 2012年第04期
目的 检测Peutz-Jeghers综合征患者STK11基因编码区序列,进一步明确STK11基因可能存在新的突变位点.方法 收集空军总医院2009年1月~2010年10月期间收治的20例Peutz-Jeghcrs综合征患者的血液样本,采用PCR扩增技术及DNA测序方法检测STK11基因编码区序列,与STK11基因的正常序列比对分析.结果 20例Peutz-Jeghers综合征患者中有14例患者检测到STK11基因的编码区发生突变,1例患者携带2个突变位点,13例患者携带单一突变位点.测序发现1例患者在3号外显子第460位发现—错义突变(460C→G),在第154密码子处形成另一种新的氨基酸,为一新的突变位点.2个家系中4例患者在同一位点发生突变;同一家系患者的突变位点一致.其余6例患者STK11基因编码区未见突变位点.结论 STK11基因突变是Peutz-Jeghers综合征发生的主要病因,3号外显子第460位错义突变,即460C→G,是导致Peutz-Jeghers综合征发生新的突变位点.
作者:赵晓;李玉霞;凌焱;陈惠鹏;张宝库;夏延毅;周平 刊期: 2012年第04期
目的 探讨血小板衍生生长因子A(PDGF-AA)/PDGF受体α(PDGFR-α)信号通路对系统性硬化症(SSc)患者皮损成纤维细胞(FB)增殖和转分化为MFB的作用.方法SSc患者皮损和正常皮肤原代FB体外培养、鉴定,用免疫细胞化学法检测其中的α-SMA;分别予两组FB不同浓度的PDGF-AA刺激,用MTT法检测其对FB增殖的作用;对两组FB分别予TGF-β1、PDGF-AA及两者联合刺激,用RT-PCR法检测其PDGFR-αmRNA、α-SMA mRNA的表达水平.结果 两组FB形态虽相似,但SSc FB中α-SMA呈阳性,正常皮肤则为阴性;SSc FB增殖的饱和浓度高于对照组,在一定浓度与饱和浓度间两组FB都呈剂量依赖方式增殖(P<0.05);不论有无PDGF-AA刺激及刺激浓度大小,SSc FB增殖程度均高于对照组(P<0.05);除单用TGF-β1对正常皮肤FB表达PDGFR-α mRNA无影响外,TGF-β1、PDGF-AA或两者联合刺激均可上调两组FB中PDGFR-α mRNA、α-SMA mRNA的表达水平,以两者联合刺激作用强;不论有无刺激或何种刺激,SSc FB中PDGFR-α mRNA、α-SMA mRNA表达水平均高于正常皮肤FB (P<0.05);PDGFR-α mRNA和α-SMA mRNA的表达水平依照未处理、PDGF-AA、TGF-β1及TGF-β1+PDGF-AA的顺序渐次增加,两者呈高度正相关(r=0.925,P<0.05).结论 SSc患者皮损来源的FB存在着向MFB转分化的显著特性,SSc FB胞膜表面过表达的PDGFR-α可结合较多的PDGF-AA配体,从而介导更强的促进FB增殖和转分化为MFB作用,TGF-β1则可增强此作用.
作者:刘彤;张静 刊期: 2012年第04期
目的 探讨术中胃镜定位全胸腔镜下食管平滑肌瘤手术的治疗经验.方法 2006年1月~2010年12月共施行食管平滑肌瘤摘除术75例,全胸腔镜下平滑肌瘤摘除术55例,胸腔镜下剥离摘除食管平滑肌瘤操作过程与开胸手术相同.术中使用胃镜对瘤体进行定位及检查瘤体剥除之后有无粘膜破损,特别是对于肿瘤直径小于2 cm病人.结果 75例食管平滑肌瘤中,55例在全胸腔镜下手术,54例均顺利完成,1例为胸腔镜下手术过程中出现室颤而中转开胸,54例全腔镜手术行术中胃镜38例;20例因早期未开展胸腔镜手术行开胸手术.使用胃镜在手术时间上优于未使用胃镜,无显著差异(P=0.064),开放手术与腔镜手术在出血量、术后禁食、住院时间对比均有显著差异(P<0.05),手术时间对比无显著差异(P=0.132),肿瘤长径平均2.7cm (0.5~9.0cm),术后症状均完全缓解,无食管瘘、食管憩室及官腔狭窄等并发症.75例随访8~59个月,平均23月,未见复发及狭窄等手术并发症.结论 术中胃镜定位全胸腔镜下食管平滑肌瘤摘除的方法微创、安全、有效,可作为食管平滑肌瘤外科治疗的首选术式.
作者:赵意;蔡开灿;刘德纲;吴华;熊刚;王昊飞;黄志勇;蔡瑞君;吴旭 刊期: 2012年第04期
目的 观察铜绿假单胞菌(PA-MSHA)注射液对人鼻咽癌细胞株5-8F及6-10B的生长抑制作用,初步探讨其作用机制.方法 MTT法检测鼻咽癌细胞体外增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Westem blotting检测细胞周期及凋亡相关蛋白.结果 MTT结果表明,与未加药组相比,加药组5-8F及6-10B细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),呈剂量和时间依赖性.细胞周期检测发现药物处理后的肿瘤细胞发生G1/S期阻滞(P<0.05).Westerm blotting检测发现药物处理后的两组细胞周期相关蛋白cyclinD1、CDK4、CDK6及凋亡促进蛋白Bax表达上调,凋亡抑制蛋白Bc1-2表达下调.结论 PA-MSHA能够抑制鼻咽癌5-8F及6-10B细胞株增殖,其机制可能是通过影响细胞周期调节并促进细胞凋亡.
作者:王剑;吴德华;陈龙华 刊期: 2012年第04期
目的 观察慢性乙型肝炎患者恩替卡韦治疗前后血清中乙型肝炎病毒(HBV DNA)载量与TGF-β1变化,分析其疗效,为临床合理应用恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎提供参考.方法 选取63例慢性乙型肝炎患者,将其按随机原则分为恩替卡韦试验组及对照组.试验组33例,其中轻度9例、中度17例、重度7例,分别口服恩替卡韦0.5 mg,1次/d,同时加用一般护肝药;对照组30例,其中轻度13例、中度12例、重度5例,单用一般护肝药.分别于治疗前、治疗3个月、治疗6个月,检测血清中HBV DNA、TGF-β1的含量.采用SPSS13.0系统软件进行统计分析.结果 恩替卡韦试验组轻度、中度和重度患者血清中HBV DNA载量治疗后呈下降趋势,治疗3个月、6个月与治疗前比较有统计学差异(P<0.05).试验组中度和重度患者血清TGF-β1水平治疗后呈下降趋势,重度患者治疗6个月与治疗前比较有统计学差异(P<0.05).结论 恩替卡韦试验组慢性乙型肝炎(轻度、中度、重度)治疗后患者血清中的HBV DNA载量明显下降,同时慢性乙型肝炎(中度、重度)患者血清中的TGF-β1均有下降趋势,其中慢性乙型肝炎重度TGF-β1水平明显下降.
作者:肖寒;马陈斌;张利霞;罗永燕;刘尹正泽;邵婕 刊期: 2012年第04期
目的 研究2型精尿病患者与健康个体之间肠道双歧杆菌是否存在差异.方法 收集50例2型糖尿病患者和30例健康志愿者的粪便样品,提取样品中细菌总DNA,根据细菌的16SrRNA序列设计双歧杆菌总菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌的属种特异性引物,并应用实时荧光定量PCR技术对两组人群粪便样品中的以上细菌进行定量检测和分析.结果 2型糖尿病患者组肠道双歧杆菌总菌和青春双歧杆菌的数量较健康对照组均显著减少(P<0.05).结论 2型糖尿病患者肠道双歧杆菌数量减少.
作者:许小津;惠宏襄;蔡德鸿 刊期: 2012年第04期
目的 探讨1,25二羟基维生素D3、5-氟尿嘧啶单独或联合作用对人食管癌Eca-109细胞裸鼠移植瘤胰岛素生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的影响.方法 体外培养人食管癌Eca-109细胞,BALB/c裸小鼠皮下接种荷瘤后随机分为对照组(A)、1,25二羟基维生素D3组(B)、5-氟尿嘧啶组(C)、联合用药组(D),2.5 μg/kg 1,25二羟基维生素D3、25 mg/kg 5-氟尿嘧啶单独或联合腹腔注射,对照组用等体积生理盐水腹腔注射,观察瘤体生长情况,运用免疫组织化学方法检测移植瘤组织中IGFBP-3蛋白表达,全自动生化分析仪检测血清钙离子水平、Von kossa染色观察肾脏钙沉积情况.结果 与A组比较,B、C、D组移植瘤生长缓慢,体积较小,IGFBP-3阳性蛋白染色较深,且表达量较多(P<0.05);而D组较B、C组移植瘤IGFBP-3蛋白表达显著升高(P<0.05).B、C、D组血清钙离子水平较A组稍有升高,但肾脏组织切片Von kossa染色未见钙沉积.结论 1,25二羟基维生素D3、5-氟尿嘧啶均能抑制移植瘤生长,且联合用药效果更为显著,可能与上调移植瘤组织IGFBP-3蛋白表达有关.肾脏Von kossa染色未见钙沉积.
作者:李钢;蒋迎九;吴庆琛;李强;余敏;汤为学 刊期: 2012年第04期
目的 明确海马胆碱能神经刺激肽(HCNP)对INS-1细胞胰岛素分泌影响,并对其可能作用的毒蕈碱样胆碱能受体途径进行分析.方法 INS-1细胞随机分为3组:对照组、HCNP组、HCNP+佛波酯(PMA)组.对照组给予RPMI 1640液培养,HCNP组给予人工合成HCNP(50 pg/ml)与RPMI 1640液共培养,HCNP+PMA组予人工合成HCNP 与RPMI 1640液共培养后,行胰岛素释放前18h加入PMA( 10 nmol/L);应用放射免疫方法检测各组不同浓度葡萄糖培养液中胰岛素含量.实时定量PCR检测对照组、HCNP组HCNP前体蛋白(HCNP-pp)、胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,CHAT)、3型毒蕈碱样受体(3-typemuscarinic receptor,M3R)基因水平表达情况.结果 浓度为3.3 mmol/L葡萄糖,三组间胰岛素含量无明显差异.浓度为5.6mmol/L、16.7 mmol/L葡萄糖作用下,HCNP组胰岛素含量均高于对照、HCNP+PMA组,差异具有统计学意义.HCNP组INS-1细胞HCNP-pp、ChAT、M3R三者mRNA含量均高于对照组,差异具有统计学意义.结论 HCNP通过提高ChAT活性,推测影响乙酰胆碱合成,进一步活化M3R,促进胰岛素分泌,PMA可阻断此作用.
作者:高飞;陈宏;张桦;郭南京;徐艳花;蔡德鸿 刊期: 2012年第04期
目的 对比分析广州管圆线虫幼虫排泄分泌抗原(LESA)与成虫抗原(AWA),探讨其诊断价值.方法 广州管圆线虫三期幼虫感染小鼠,21 d后取小鼠脑内幼虫进行体外培养,收集幼虫排泄分泌蛋白,并与广州管圆线虫成虫匀浆蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析,分别用两种抗原建立LESA-ELISA和AWA-ELISA以检测小鼠血清和不同人群血清.结果 SDS-PAGE和Western blot显示幼虫排泄分泌蛋白条带和抗原反应带较成虫少;LESA与小鼠感染血清和广州管圆线虫病患者血清在M,40000和Mr26000处均出现强反应带;感染小鼠血清中抗LESA和AWA的IgG和IgM抗体自感染后开始上升,5d后达到高峰,第10天后开始下降;LESA-ELISA用于检测广州管圆线虫病疑似病人血清阳性率低于AWA-ELISA;检测血吸虫和华支睾吸虫感染病人血清的交叉阳性率明显低于AWA-ELISA;检测献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数较AWA-ELISA少.结论 LESA的抗原反应带较AWA少,尽管对广州管圆线虫病疑似病例血清抗体阳性率略低于AWA,但其特异性高;具有潜在的广州管圆线虫病早期诊断和现症感染诊断价值.
作者:张鑫;刘敏;吴雅欣;莫泽珣;沈浩贤;陈代雄;李华 刊期: 2012年第04期
目的 了解蝙蝠乙脑病毒分离株GD1和HN2株对白纹伊蚊和致倦库蚊的易感性.方法 通过病毒液饲喂法使白纹伊蚊和致倦库蚊经口感染蝙蝠乙脑病毒GD1株和HN2株,采用TaqMan real-time RT-PCR方法,检测GD1株和HN2株感染白纹伊蚊及致倦库蚊后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天病毒存在情况与病毒载量的动态变化.结果两株蝙蝠乙脑病毒在感染白纹伊蚊、致倦库蚊后4~20 d内均能被检测到.Ct值的动态变化规律显示白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染乙脑病毒GD1株和HN2株,但致倦库蚊的易感性高于白纹伊蚊;两株毒株的毒力可能不同,HN2株毒力大于GD1株.结论 白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染蝙蝠乙脑病毒分离株.
作者:刘姗;张琼花;周军华;俞守义;郑学礼;陈清 刊期: 2012年第04期
目的 探讨人类胚胎期大脑额叶、脑室区(VZ)和脑室下区(SVZ)内代谢型谷氨酸受体5(mGluRS)的表达规律及细胞分布.方法 将收集的引产胎儿按胎龄分为4组:9~11周,14~16周,22~24周和32~36周.切取额叶及含VZ、SVZ的脑组织固定后切片,免疫组织化学染色后观察额叶、VZ和SVZ内mGuR5的表达及其细胞定位.结果 9~36周的胚胎额叶及VZ、SVZ都有mGluR5表达,边缘带和皮质板内的免疫反应程度强于VZ和SVZ,阳性产物主要位于细胞膜.表达mGluR5的细胞主要为VZ和SVZ内的神经干/祖细胞、边缘带和VZ内的成熟前神经元及皮质板内的大量成熟神经元.结论 人类胚胎额叶、VZ和SVZ内均有mGluR5表达,提示mGluR5可能参与了人类大脑皮质发生的调节过程.
作者:解武玲;杨蓬勃;张军峰;肖新莉;靳辉;石秦东;徐曦;刘勇 刊期: 2012年第04期
目的 应用脂肪组织来源干细胞(ASCs)在体外构建组织工程脂肪并与已构建的复合皮组装培育,试构建出含脂肪层的组织工程化皮瓣.方法 (1)构建组织工程脂肪从脂肪组织中分离培养ASCs并进行三系分化诱导鉴定.ASCs与胶原凝胶混合并进行体外成脂诱导,诱导15d后分别进行倒置显微镜、油红O染色及HE染色观察.(2)构建复合皮从包皮组织中分离培养表皮细胞(Kc)和成纤维细胞(Fb).Fb与胶原凝胶混合后培养5d,将Kc接种到含有Fb的凝胶表面,在液面下培养4d后移至气-液界面继续培养10d形成复合皮.(3)构建含皮下脂肪组织的3层结构的皮肤复合组织将培养的复合皮与脂肪组织按正常皮肤结构顺序组装后继续培养3d并行HE染色观察.结果 (1)ASCs具有成脂、成软骨和成骨分化能力.ASCs凝胶复合物体外成脂诱导15d后,可见细胞内充满圆形脂滴,呈单房或多房形,油红O染色及HE染色均显示为成熟脂滴.(2)经过气-液界面培养后,Kc成层分化,形成基底上层.(3)组装培育后的皮肤复合组织分3层,表层Kc成层分化并形成基底上层;中层和底层连接处细胞聚集;成脂分化的ASCs位于底层.结论 分别应用Kc、Fb和ASCs三种细胞,在体外构建出组织工程化脂肪和复合皮,且按序组装培育,可构建出组织工程化皮瓣.
作者:陈伟;姜平;陈晓炜;廖云君;高建华 刊期: 2012年第04期
主动脉弓离断是一种罕见的、婴幼儿期死亡率高的严重复杂畸形,能长大成人更为罕见.一位42岁男性高血压患者,经主动脉CT血管造影检查证实,降主动脉起始部血管与主动脉弓中断,邻近脊柱旁、肋间及胸背部皮下软组织内见多个扭曲紊乱血管团,并于降主动脉起始水平见数支血管汇人降主动脉CT血管造影.经降压治疗后,症状好转出院.本研究报道给我们的启示:对年轻高血压患者要仔细听诊,一旦前胸背部听到杂音,及时行CTA检查,避免漏诊和误诊.
作者:包宁;张煜;张志国;曹慧茹;张文辉 刊期: 2012年第04期
目的 探讨在靶向纳米微泡条件下,用高强度聚焦超声(HIFU)辐照后,声像图相关函数与HIFU辐照发生凝固性坏死的关系,以提高监控超声的判断灵敏度.方法 60只双侧第二乳腺建模成功的VX2移植性肿瘤兔随机分为90 W,120W,150W组,每组20只,采用HIFU定点辐照,辐照时间统一为3s,辐照左侧肿瘤时注射微泡造影剂,右侧作对照,观测靶区辐照前后声像图变化和灰度值变化,并对靶区声像图进行相关函数运算,比较灰度判别方式与相关函数判别方式的准确性与灵敏性.结果 对120个样本进行辐照前后声像图相关函数分析,总判对率为83.3%,高于灰度判对率68.3%,其差异有明显统计学意义(P<0.05);同一辐照条件下,微泡组坏死样本声像图相关函数平均值低于对照组,其差异有统计学意义(P<0.05).结论运用相关函数分析辐照前后靶区声像图,较灰度评价,其准确性、灵敏性更高,能有效提高HIFU疗效.
作者:郭宇;邹建中;闵加艳;王冬;郭海英 刊期: 2012年第04期
目的 在建立Wistar大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)动物模型基础上探讨多发性硬化的病理变化,尤其针对轴索损害的特点进行深入探讨.方法 对EAE大鼠的脑和脊髓进行HE染色、LFB髓鞘染色和Bielschowsky染色,分别以间接免疫荧光方法双染标记非磷酸化神经丝蛋白(SMI-32)和髓鞘碱性蛋白(MBP)MBP,以及轴索淀粉样前体蛋白(APP)和MBP.结果 脑和脊髓组织内可见大量炎细胞浸润形成典型的袖套改变,伴有大片状脱髓鞘,轴索结构排列紊乱,呈空泡样缺失.SMI-32染色证明发病14d脊髓白质内出现大量非磷酸化的神经丝蛋白,可见APP堆积形成轴突卵形体.表明发病早期即出现了明显的轴索损害,且髓鞘脱失和轴索损害的发生不同步.结论 EAE大鼠不同发病阶段出现不同程度的炎症反应,发病高峰期的炎症浸润明显.EAE的轴索损害开始于疾病的早期阶段,并不断进展.
作者:王圆圆;吕田明;刘晓加;方敏;梁彦珊 刊期: 2012年第04期
目的 探讨无功能型垂体腺癌的临床特点、诊断及治疗策略.方法 通过2例无功能型垂体腺瘤的诊断与治疗经过,并结合现有文献对本病进行探讨.结果 2例无功能型垂体腺瘤患者经过外科手术、立体定向放射治疗后肿瘤仍旧复发,分别在发病后3个月和5个月死亡.结论 垂体腺癌非常罕见,需要结合临床表现、影像学、细胞学、免疫组化等进行诊断,在进行常规治疗的同时需要寻找更为有效的办法控制肿瘤进展.
作者:宋烨;漆松涛;彭玉平;龙浩;刘华 刊期: 2012年第04期
目的 研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型鼠的营养状态和呼吸肌蛋白质分解代谢率的影响.方法将90只健康Wistar大鼠随机分为模型组(A)70只,对照组(B)20只.采用气管内注入猪胰弹性蛋白酶、熏香烟和限制营养的方法建立COPD鼠模型和COPD营养不良鼠模型.模型制作成功后,将A组分为COPD营养正常组(A1),COPD营养不良组(A2)和COPD营养不良干预组(A3).A3组采用尾静脉注射TNF-αMcAb 0.1 mg/kg,进行干预.酶联免疫吸附法测定大鼠血清、呼吸肌匀浆中TNF-α含量,自动生化仪测定血浆葡萄糖、白蛋白、甘油三酯含量,反相高效液相色谱荧光法测定呼吸肌中三甲基组氨酸(3-MH)、酪氨酸(Tyr)含量.结果 1:A2组血清和呼吸肌匀浆TNF-α含量和血浆葡萄糖、甘油三酯明显高于B、A1和A3组(P<0.01);A2组膈肌重量,白蛋白含量明显低于B、A1和A3组(P<0.01); 2:A2组呼吸肌匀浆中3-MH、Tyr含量均明显高于B、A1和A3组(P<0.01);3:A2组呼吸肌TNF-α含量与3-MH、Tyr含量呈明显正相关(R=0.866,P<0.01;R=0.883,P<0.01),TNF-αMcAb干预后,蛋白质分解代谢率降低.结论 TNF-α是引起COPD鼠发生营养不良和呼吸肌蛋白质分解代谢率增高的因素之一.
作者:刘建明;廖前德;唐文祥;孙圣华;刘备战;刘新民 刊期: 2012年第04期
目的 建立H2O2诱导氧化的L02人肝细胞模型,从细胞凋亡调控因子FAS、具有死亡功能区的Fas相关蛋白(fas associateddeath domain protein,FADD)和Caspase-8的表达变化来研究五味子乙素(Sch B)对L02细胞的可能作用机制.方法 用实时荧光定量PCR法检测FAS、FADD和Caspase-8 mRNA的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测FAS蛋白含量,Western blotting检测FADD蛋白变化和分光光度法检测Caspase-8活性.结果 在5~15.μmol/L剂量范围内,Sch B可剂量依赖性抑制H2O2引起的FAS、FADD的表达和Caspase-8的活化.结论 Sch B可部分抑制H2O2诱导的L02细胞凋亡,其作用机制可能是通过影响了FAS-FADD- Caspase-8通路.
作者:蔡晶;黄巧冰;迟德彪 刊期: 2012年第04期