王沛珍;顾金保;罗军;彭鸿娟
目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在人类退变腰椎间盘髓核组织中的表达变化情况.方法 对照组为取自青壮年腰椎爆裂性骨折患者的正常椎间盘髓核组织;实验组为腰椎间盘突出症患者的退变椎间盘髓核组织,依据术前MRI影像表现分为3组.分别进行免疫组织化学染色,比较4组椎间盘组织中HIF-1α、MMP-2表达.结果 HIF-1α在对照组、轻度退变组、中度退变组、重度退变组椎间盘髓核组织中的表达分别为(8.92±3.411%、(46.81±3.63)%、(66.88±4.60)%、(89.63±2.27)%;MMP-2在对照组、轻度退变组、中度退变组、重度退变组椎间盘髓核组织中的表达分别为(9.61±3.03)%、(47.31±4.4)%、(69.54±5.96)%、(90.05±3.16)%.HIF-1α、MMP-2在实验组退变的椎间盘中的表达显著高于对照组(P<0.05),而且不同退变程度的表达也不同(P<0.05),统计学分析均有显著差异,HIF-1α和MMP-2在退变的椎间盘组织中的表达呈正相关关系.结论 HIF-1α、MMP-2均可能参与了人类腰椎间盘组织的退变过程,且HIF-1α、MMP-2在人类退变腰椎间盘组织中有相同的增高趋势,HIF-1α可能作为MMP-2的一个重要调节因素,与MMP-2相互协调、共同促进椎间盘退变.
作者:吴伟平;江建明;瞿东滨;魏清柱;蒋晖 刊期: 2010年第05期
目的 采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库.方法 分离肾癌患者的外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法 扩增抗体全长Kappa型轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,分别插入载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOP010,构建轻、重链抗体基因库,然后将轻、重链抗体基因库联合转染293T细胞,流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达.结果 成功构建IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库,随机挑选的克隆经DNA序列分析显示轻、重链库的序列正确性达90%(9/10)和80%(8/10),流式细胞仪分析显示来自轻、重链库的上述克隆各有7个可检测到相应基因在293T细胞表面的表达,可表达抗体库库容量高达7.5×1010.结论 IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,抗体的多样性为下一步筛选特异性抗体奠定良好的基础.
作者:陈振瑞;李长征;贺微;周烨;张哲欢;刘淑文;谭万龙;周辰 刊期: 2010年第05期
目的 观察初始血透患者血清胎球蛋白A水平与冠脉钙化(CAC)的关系.方法 29例初始透析患者(透析龄<6月)接受血清胎球蛋白A及CAC相关危险因子的检测,根据胎球蛋白A平均浓度分胎球蛋白A高水平组和胎球蛋白A低水平组;CAC通过多层螺旋CT检测.钙化积分采用Agaston修正方法 ;对所有29例患者进行心血管事件评价随访,时间为18个月.结果 29例初始透析患者血清胎球蛋白A平均浓度(0.71 g/L):胎球蛋白A低水平组中11/14例(78.57%)发生CAC,高于胎球蛋白A高水平组(7/15例,46.67%),P<0.05;CAC积分与血清胎球蛋白A水平呈负相关(Pearson-0.734,P=0.001).回归分析显示:CAC与胎球蛋白A(标化beta=-0.568,P=0.003)和年龄(标化beta=0.416,P=0.019)有关;钙化的传统危险因素如:CRP,Ca,P,iPTH,Chol,TG,HDL-C,LDL-C,BMI及血压未能进入回归方程.P>0.05.血清胎球蛋白A水平与心血管事件发生呈相关关系(Spearman's rho -0.758,P<0.01),但Kaplan-Meier生存分析显示两组无心血管事件生存率无显著差异(Log Rank,P=0.065).结论 血清胎球蛋白A水平下降或能是导致初始透析患者CAC的危险因素,也可能是心血管事件高发的原因之一.
作者:章斌;史伟;何朝生;梁馨苓;刘双信;梁永正 刊期: 2010年第05期
目的 检测前列腺癌组织中骨桥蛋白(OPN)及survivin的表达,以探讨OPN和survivin在肿瘤的浸润转移中的作用及二者之间的关系.方法 对前列腺癌、良性前列腺增生与正常前列腺组织标本应用半定量RT-PCR和免疫组织化学技术检测OPN及survivin的表达.结果 46例前列腺癌组织中OPN mRNA及survivin mRNA的表达阳性率分别为76.1%(35/46)和67.4%(31/46),OPN及survivin蛋白的表达阳性率分别为69.6%(32/46)和67.4%(31/46),两者表达呈正相关(P<0.05),并且两者在前列腺癌不同分期和分级之间差异有统计学意义(P<0.05).前列腺增生及正常前列腺组织中均未见阳性表达.结论 OPN和survivin与前列腺癌分化程度、分期呈正相关,可能在前列癌的进展中起协同作用
作者:于洪波;韩小兵;梁宜骞;刘建刚;王灏 刊期: 2010年第05期
目的 分离培养并鉴定人骨髓间充质干细胞(hMSC),观察不同剂量蜕皮甾酮(EDS)对hMSC增殖的影响.方法 密度梯度离心法获取hMSC,检测第2代细胞CD44、CD105、CD34及CD29的表达以鉴定其为hMSC.设不同浓度EDS的细胞培养体系(10、25、50和100μg/ml)与对照组(单纯hMSC培养基,无EDS)作对比,MTT比色法测定hMSC的增殖活力,并行流式细胞周期观察.结果 EDS各浓度组hMSC的MTT吸光度值与对照组比较均有明显差异(P<0.01);EDS浓度为25 μg/ml时hMSC MTT吸光度值显著高于其余各组(P<0.01);在EDS浓度为10、50、100 μg/ml时,组间吸光度值未见明显差异(P>0.05),但显著高于对照组(P<0.01).流式细胞周期显示EDS浓度为25μg/ml时hMSC培养体中细胞S期细胞所占比例、增殖指数均明显高于对照组.结论 EDS在一定浓度范围内对体外培养条件下的hMSC具有生长促进作用,该作用在EDS浓度为25 μg/ml时为显著,但是EDS促进hMSC增殖的作用不随剂量的增加而增加.
作者:吴昌昊;吴旭;付小兵;周云峰;张元中;张子良 刊期: 2010年第05期
介绍T型胎粪吸引管的主要特点与使用方法 ,总结分析了胎粪吸引管的使用效果及体会.
作者:肖春芳;张军;黄晓莉 刊期: 2010年第05期
目的 化学遗传学方法 大规模筛选并初步鉴定所获得具有不同红系造血缺陷表型的斑马鱼突变体.方法 乙基亚硝基脲(ENU)诱导雄性斑马鱼突变(founder),将其与野生型AB雌性斑马鱼交配产生F1代,源自不同来源的founder的F1代杂交产生F2家族.在F2代同家族内自交所产生的F3代胚胎中,用以βe1为探针,实施整体原位杂交实验,进行红系造血缺陷突变体筛选,并针对所筛选到的突变体在不同造血过程缺陷表型进行分类研究.结果 和结论 筛选得到4个βe1基因表达缺失突变体,其中2个为红系特异性造血缺陷突变体,另外2个突变体同时存在红系和淋系造血缺陷.
作者:霍中军;温宗华;刘靖;王鹍;黄志斌;戴朝霞;马宁;颜广;陈英华;陈小辉;刘伟;马品芸;罗伟豪;赵颖;樊淑;赵嘉佳;黄红辉;温子龙;张文清 刊期: 2010年第05期
目的 采用专利组织处理技术将猪肌腱制备成新型异种材料,探讨其作为组织充填材料的可能性.方法 取新鲜屠宰猪的肌腱为原料,应用环氧化物作为交联剂加上专门的除抗原技术及蛋白修饰技术制作异种充填材料.光镜及扫描电镜观察材料的超微结构,行理化性能检测测定材料的力学性能、蛋白含量、环氧化物残留量及稳定性.选用NCTCL929小鼠成纤维细胞进行体外急性细胞毒性试验,于培养24、48、72 h测定OD值、计算相对增殖率(RGR).结果 光镜下新型异种材料为红染纤维束样物,未见细胞碎屑及蓝染的核物质.电镜检查显示材料为走向一致的发状纤维样物紧密平行排列,表面有棉絮样物附着,未见细胞.材料的拉伸强度为11~16 MPa,拉断伸长率为52%~67%,蛋白含量为94%,环氧化物残留量为5 μg/ml,材料在PBS溶液中的pH值稳定.细胞毒性结果 示该材料的相对增殖度较高,RGR>89%.结论 采用专利组织处理技术研制的异种充填材料,具有良好的理化性能和生物相容性,有望成为理想的组织充填材料.
作者:夏学颖;姜平;张伟;徐国风 刊期: 2010年第05期
目的 利用Mimics和Unigraphics NX软件进行股骨转子间骨折虚拟手术,为术前精确设计手术方案提供真实可靠依据.方法 选取5例股骨转子间骨折患者,利用 Mimics软件对股骨转子间骨折病人的CT扫描数据进行三维重建并虚拟复位,利用Unigraphics NX软件的建模功能对测量的动力髋螺钉(DHS)手术器械数据进行三维重建.然后利用Unigraphics NX软件模拟股骨转子间骨折DHS固定手术,初步指导临床应用.结果 虚拟手术过程真实逼真,立体可视化效果好,DHS螺钉进钉方向和角度准确,可充分预测骨折复位状态及手术效果.结论 利用Mimics和UnigraphicsNX软件进行虚拟手术,对于个体化手术方案制定、风险评估、临床教学训练等方面都有很大的价值,对于提高股骨转子间骨折手术的安全性和准确性具有重要作用.
作者:王丹;谢叻;裴国献;刘永刚;金丹;赵志球;姜晓锐 刊期: 2010年第05期
目的 探讨特布他林对肺泡Ⅰ型细胞(AT Ⅰ)和Ⅱ型细胞(ATⅡ)上Na+转运机制的影响.方法 分离ATⅡ,采用膜片钳全细胞记录模式,应用全细胞钠通道(ENaC)阻断剂amiloride和环核苷酸门控阳离子通道(CNG)阻断剂ZnCl2观察ATⅡ ENaC和CNG电流及特布他林对两者的影响.结果 ATⅡ全细胞电流主要为amiloride敏感电流和Zn2+敏感电流,两者比例无差别(P>0.05);特布他林可使amiloride敏感电流和Zn2+敏感电流明显增加(P<0.05),amiloride敏感电流所占比例约为Zn2+敏感电流的1.7倍(P<0.05).结论 急性分离ATⅡ上存在功能性ENaC和CNG,并且Na+转运以两者为主.特布他林增强肺水吸收主要通过增加AT Ⅰ和ATⅡ上ENaC和CNG通道的Na+转运实现.
作者:徐建光;李涛平;王沛;申海燕 刊期: 2010年第05期
目的 分析各种不同的心肾疾病与心肾生物标记物的相关性,探讨心肾综合征的发病机制以及心肾综合征分型的合理性.方法 自2008年1月1日至2008年5月31日,入本院并做过NT-ProBNP和肌酐测量的住院患者共841例,其中男性600例,女性241例.根据入院临床诊断进行分类,并与心肾标记物进行相关分析.结果 男性NT-proBNP和肌酐较高,eGFR较女性为低,心肾乘积较高,差异显著(P<0.01).心肾疾病的临床诊断和心肾生物标记物有很高的相关性,而且与病情的严重程度密切相关.按照Ronco的分型标准分组,可见从Ⅳ型到Ⅰ型NT-proBNP逐次升高,但差异不显著(P<0.05).慢性原发肾脏继发心脏病血肌酐高,急性原发心脏病继发肾脏病肌酐增高也很明显,eGFR也是同样变化趋势.Ⅲ型心肾综合征主要是急性冠脉综合征、左心衰和肾动脉狭窄,NT-proBNP、肌酐、eGFR呈中度的变化.改良分型分为3型.心.肾综合征主要以NT-proBNP增高为主,而肾心综合征主要以肌酐增高和eGFR下降为主,差异显著(P<0.05).急性冠脉综合征、左心衰和肾动脉狭窄是一特殊的心肾综合征,心肾的损害都比较轻,差异显著(P<0.05),心肾乘积差异不显著(P>0.05).结论 心肾生物标记物与临床诊断在质和量上都密切相关,心肾乘积能更准确地反映心肾功能的联动量变.改良的心肾综合征分型能更好地反映心肾标记物的分级变化,心肾综合征以心为主,肾心综合征以肾为主,冠脉综合征、左心衰和肾动脉狭窄只有轻度的心肾功能损害.
作者:盖兢泾;盖鲁粤;刘宏斌;王志国;陈练;孙志军;陈韵岱 刊期: 2010年第05期
目的 观察丹参注射液直流电离子导入治疗颈性失眠的临床疗效.方法 将76例符合入选条件的颈性失眠患者随机分为治疗组和对照组,治疗组采用丹参注射液直流电离子导入治疗、心理辅导和西药治疗,对照组只采用心理辅导和西药治疗.分别评定治疗前、治疗第2周和治疗结束后2周患者的匹兹堡睡眠质量指数及国际上统一睡眠效率值(简称睡眠率).结果 入选时治疗组与对照组的各项差异无统计学意义(P<0.05),经过2周治疗后,治疗组患者睡眠质量指数和睡眠率明显大于对照组(P<0.05),治疗结束后2周,对照组与治疗前差异无统计学意义(P>0.05),而治疗组疗效明显(P<0.05).结论 丹参注射液直流电离子导入治疗颈性失眠临床疗效显著并无副作用.
作者:欧阳辉;王玉苹;贾艳滨 刊期: 2010年第05期
目的 荷瘤裸鼠瘤内注射RNA干扰(RNAi)表皮生长因子受体(EGFR)基因表达载体shRNA-EGFR,探讨其对肿瘤放射敏感性的影响.方法 用shRNA-EGFR结合脂质体转染人鼻咽癌细胞系CNE1,收集转染后细胞的总RNA和蛋白质,利用RT-PCR和Western blotting检测EGFR表达水平的变化.用CNE1细胞建立裸鼠肿瘤动物模型,荷瘤裸鼠瘤内注射shRNA-EGFR脂质体混合物,观察肿瘤体积变化.经放射治疗后第16天处死裸鼠剥离瘤体称重,评价其对放射敏感性的影响.结果 shRNA-EGFR成功转染CNE1细胞.RT-PCR和Western blotting检测结果 表明shRNA-EGFR可显著下调EGFR mRNA和蛋白质的表达(P<0.05).shRNA-EGFR联合放射治疗组与对照组、单独放射治疗组、shRNA-EGFR治疗组之间的肿瘤体积变化和质量存在显著性差异(P<0.05).结论 shRNA-EGFR基因放射治疗能显著抑制鼻咽癌移植瘤的生长,增加其对放射治疗的敏感性.
作者:张永胜;卜俊国;张积仁 刊期: 2010年第05期
目的 总结肝移植供肝获取和修整的临床经验.方法 分析2004年8月~2007年12月共126例快速肝肾联合获取及105个供肝修整的资料,105个供肝均用于原位肝移植术.结果 126例供肝、肾热缺血时间为1~8.5 min,平均4min.肝肾联合切取手术时间19~28 min,平均22.5 min.105个供肝修整时间38~102 min,平均51 min;冷缺血时间5.5~13 h,平均8 h;有8例供肝存在动脉变异.结论 供肝获取和修整应强调器官灌注和动脉修整技术,预防供体因素导致的出血,注意与受体手术组配合.
作者:林艺雄;周杰;林建华;王宇;张国伟;崔忠林;李湘竑;谭永法 刊期: 2010年第05期
目的 分析重大突发事件时机体主动应激与被动应激状态下所导致的机体代谢的差异,并讨论其影响因素.方法 采集我院57名赴汶川抗震救灾医疗队队员和13名经历地震受灾群众清晨空腹血液标本,用日立Hitachi 7600全自动生化分析仪检测肝功能、糖代谢及肾功能、血清酶类、血清离子、血清脂类等38项生化指标.并用CHISS软件分析所获得的数据.结果 应激对血清生化指标具有不同程度的影响,与抗震救灾医疗队队员相比,受灾群众组ADA、ALP和TG明显升高,而TP、ALB、MAO、Cr、UA、K、Na、Cl、Ca、ApoAl和HDL等指标显著下降.结论 两组血液样本的生化指标由于应激程度的不同呈现一定的变化趋势,并且主动应激情况下机体的各项功能及状况明显优于被动应激.
作者:郭广宏;谷峰;董振南;原新红;王玲;田亚平 刊期: 2010年第05期
目的 探讨冠心病患者循环内皮微颗粒(EMPs)与血流介导的内皮舒张功能(FMD)之间的关系以及EMPs损伤内皮细胞功能的机制.方法 选择2009年3~6月在中山大学附属第一医院高血压血管病科住院的冠心病患者及冠心病高危患者各15名,检测血生化指标、循环内皮微颗粒水平及血流介导的内皮舒张功能,分析各项指标之间的关系;培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),制备内皮细胞来源的微颗粒,用内皮微颗粒刺激培养的人脐静脉内皮细胞,检测活性氧产物(ROS)及一氧化氮(NO)的水平.结果 冠心病患者硝酸酯类的使用比率高于冠心病高危患者,冠心病患者循环内皮微颗粒水平高于高危患者,而血流介导的内皮舒张功能低于高危患者,在所有患者中,循环内皮微颗粒水平与血流介导的内皮舒张功能之间呈负相关;EMPs呈浓度依赖性地增加脐静脉内皮细胞活性氧产物的产生,并降低NO的生成,应用20 μmol/l NADPH氧化酶抑制剂Apocyine能显著抑制EMPs导致的ROS增加和NO的降低.结论 在冠心病患者中,循环EMPs可以损伤内皮细胞舒张功能,NADPH氧化酶参与EMPs导致内皮细胞功能障碍的损伤过程.
作者:程飞;陶军;冯鉴强;杨春涛;王妍;张媛媛;张晓琳 刊期: 2010年第05期
目的 探讨P53、P16在宫颈病变组织的表达及临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测66例官颈上皮内瘤变(CIN)和36例宫颈鳞癌P53、P16的表达,另选取20例正常宫颈组织作为对照.结果 P53在正常宫颈组织、CIN和宫颈鳞癌中阳性率分别为5.00%、60.61%及86.11%,差异有统计学意义(P<0.05);P53表达强度随宫颈CIN分级增加而增加,表达有统计学意义(P<0.05).P16在正常宫颈组织、CIN和宫颈鳞癌中阳性率分别为5.00%、89.39%及100.00%,差异有统计学意义(P<0.05);P16表达强度随宫颈CIN分级增加而增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 P53和p16与宫颈癌前病变发生机制及病变进展相关,其检测可作为宫颈CIN分级与鳞癌诊断的重要辅助指标.
作者:顾昕;戴珍珍;李萍;方来福;钟国平 刊期: 2010年第05期
目的 探讨应用RNA干扰靶向抑制P13K p85α表达对5-FU诱导大肠癌LoVo细胞凋亡的影响.方法 培养已成功沉默P13K p85α表达的大肠癌LoVo细胞(P13K p85α/RNAi-LoVo)及LoVo对照组细胞,MTT法计算两组细胞5-FU的半数抑制率(IC50),JC-1染色检测线粒体膜电位(△ψm)的变化.Western blotting检测凋亡蛋白Bcl-6和Bim的表达.结果 P13K p85α/RNAi-LoVo细胞组5-FU的IC50值(1.056±0.03562μmol/L)显著低于LOVo对照组(2.796±0.10947μmol/L)(P=0.000),JC-1染色显示5-FU刺激48 h后,P13K p85α/RNAi-LoVo细胞线粒体膜电位较LoVo对照组细胞显著降低,表明P13K p85α/RNAi-LoVo细胞对5-FU更敏感.5-FU刺激48 h后,P13K p85α/RNAi-LoVo细胞组凋亡蛋白Bcl-6和Bim的表达较LoVo对照组细胞显著增加(P=0.000).结论 应用RNA干扰靶向抑制PI3K p85α表达可促进5-FU诱导大肠癌细胞LoVo的凋亡.
作者:杨慧;倪丽;马豫茜;宋于刚 刊期: 2010年第05期
目的 研究Hath1基因对结肠癌细胞增殖的影响.方法 将重组质粒pcDNA3.1(+)-Hath1转化至HT29结肠癌细胞中,随机挑选3个过表达Hath1的HT29细胞克隆,通过定量实时RT-PCR方法 检测Ham1 mRNA、Muc2 mRNA的表达:Western blotting检测Hath1、Muc2、cyclinD1和p27表达;通过软琼脂克隆形成实验和裸鼠移植实验,观察Hath1基因对HT29细胞增殖能力的影响.结果 Hath1基因可上调p27和下调cyclinD1的表达,抑制HT29细胞的增殖.结论 Hath1基因可能在结肠癌的发病中扮演抗癌基因的作用.
作者:朱代华;龚建平;任柯;孙建明;魏思东 刊期: 2010年第05期
目的 探讨全肺切除术后支气管胸膜瘘的早期手术治疗方法 .方法 1998年3月~2009年2月我科采用早期手术治疗全肺切除术后支气管胸膜瘘12例,男9例,女3例,年龄(58.6±5.7)岁;12例均无脓性胸液,支气管胸膜瘘确诊时间为术后4~17 d.本组病例均在确诊后72 h内再次手术,术中采用器械闭合支气管近端,术后配合胸腔冲洗使之无菌化.结果 10例痊愈出院,1例开放引流后出院,长期换药,1例因多脏器功能衰竭死亡.二次手术后住院时间18~49d,平均31 d.结论 全肺切除术后合并支气管胸膜瘘,如无脓性胸液,心肺功能良好,应早期积极手术,配合术后胸腔持续冲洗,可获得良好疗效.
作者:张宝石;于长海;刘颖;夏晖;李英杰;郭楠楠 刊期: 2010年第05期