学术投稿

人绒毛外细胞滋养层细胞与蜕膜基质细胞共培养模型的建立

秦立赟;陈士岭;张曦倩;王炎秋

关键词:绒毛外细胞滋养层细胞, 蜕膜基质细胞, 共培养, 侵袭, Transwell
摘要:目的模拟体内环境,建立可保持绒毛外细胞滋养层细胞(EVCT)与蜕膜基质细胞(DSC)生物学特性的共培养细胞模型,应用于研究滋养细胞的侵袭行为.方法利用胰酶消化和BSA、Percoll梯度沉降,收集纯化人早孕绒毛组织的EVCT和DSC,分别放入Transwell的上下小室,观察该模型下细胞形态变化及侵袭特性,免疫组化、免疫荧光染色检测细胞的纯度.结果免疫组化显示EVCT的细胞角蛋白7阳性表达的细胞数占95%以上,阳性表达转化生长因子β2的细胞数占95%以上,DSC泌乳素阳性表达的细胞数也超过95%,证实共培养系统中EVCT和DSC纯度均在95%以上,且生物学特性得以维持.上室中的EVCT保持了其侵袭能力,在Matrigel包被的滤膜上EVCT的侵袭指数为3.22±0.04.结论适当的培养方法可获得高纯度的EVCT和DSC,并使其维持特有的生物学活性,成功地建立了共培养系统模型,便于研究滋养细胞侵袭和胚胎着床的机制.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 肾静脉肾素水平与肾动脉介入治疗疗效的相关性研究

    目的探讨肾静脉肾素活性,血浆内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、钙素基因相关肽(CGRP)水平对肾动脉狭窄介入治疗疗效的预测价值.方法60例冠心病合并高血压患者经肾动脉造影,证实为肾动脉狭窄,予肾动脉支架植入术;测定所有病例介入治疗前后的肾静脉肾素活性和血浆ET、NO、CGRP水平.并对病人的血压进行2年随访.结果60例患者根据术前肾素水平分为肾素比值(RVRR)>1.5组和RVRR<1.5组.所有患者肾动脉狭窄侧肾静脉肾素活性高于对侧[(3.89±3.14)nmol/L/h和(2.01±1.93)nmol/L/h,P<0.05],介入治疗后患侧肾静脉肾素浓度明显下降,RVRR>1.5组低于RVRR<1.5组[(1.92±2.15)nmol/L/h和(2.42±0.56)nmol/L/h,P<0.05],血浆ET和NO水平与RVRR<1.5组相比有统计学差异(P<0.05),术后血压明显下降,血压有效率75.68%,与RVRR<1.5组比P<0.05.结论测定肾静脉肾素活性,血浆ET、NO的水平对肾动脉血管成形术近期疗效有预测价值.

    作者:冯颖青;周颖玲;罗建方;余丹青;陈纪言 刊期: 2006年第07期

  • 血清胰岛自身抗体在肝源性糖尿病诊断中的价值

    目的探讨血清胰岛自身抗体一谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)和胰岛细胞抗体(ICA)在肝源性糖尿病诊断中的价值.方法采用酶联免疫吸附实验测定217例慢性乙型肝炎(CH)、肝硬化(LC)患者血清GADA和ICA,观察GADA、ICA在CH、LC阶段的阳性率及其与糖尿病的关系.结果CH、LC合并糖尿病的患者72%(56/77)循环中存在一种胰岛自身抗体,而血糖正常的CH、LC患者胰岛自身抗体的阳性率为30%(42/140),两组比较差异有显著性(x2=36.620,P=0.000).CH合并糖尿病患者胰岛自身抗体阳性率52%(13/25)明显高于2型糖尿病(NIDDM)合并肝损害的患者8%(2/25)(P<0.05).C肽水平下降的CH、LC患者中胰岛自身抗体阳性率70%(24/34)亦明显高与C肽水平正常的患者40%(74/183)(P<005).结论GADA、ICA在肝源性糖尿病的诊断中有重要参考价值,可作为肝源性糖尿病和2型糖尿病的实验室鉴别诊断指标.

    作者:张玲;石亚玲;洪文昕;贾卫东;李凌华 刊期: 2006年第07期

  • 经尿道等离子体切除术治疗前列腺增生症的临床观察

    目的探讨前列腺增生症经尿道等离子体切除术的临床效果及安全性.方法采用经尿道等离子体前列腺切除术治疗BPH68例.结果前列腺质量30~75g,手术时间45~110min,无前列腺电切综合征发生,术后留置尿管4~6d,术后住院时间6~8d,术后3个月大尿流率由术前平均9.2ml/s升至19.6ml/s.前列腺症状评分由术前平均30.8分降至8.2分(P<0.05).结论经尿道等离子体前列腺切除术效果好,并发症少,手术安全,易于推广.

    作者:李学;陈新;廖国强;罗建军;王志远 刊期: 2006年第07期

  • 肾上腺髓质素原N端20肽对血管紧张素刺激心肌成纤维细胞生成NO的影响

    目的探讨肾上腺髓质素原N端20肽(PAMP)对血管紧张素Ⅱ刺激心肌成纤维细胞(CFs)生成NO的影响及意义.方法采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠CFs,以硝酸还原法测定细胞培养液中NO的浓度,分别观察不同浓度AngⅡ、PAMP、及AngⅡ+PAMP对CFs生成NO的影响.结果(1)10-9、10-8、10-7、10-6μmol/LAngⅡ组细胞培养液中的浓度是:(73.88±2.23)、(64.34±3.02)、(54.12±2.82)、(40.21±1.45)μmol/L,各组之间有显著性差异(P<0.01).(2)10-9、10-8、10-7、10-6μmol/LPAMP组细胞培养液中NO的浓度分别为(74.40±3.42)、(74.91±2.66)、(75.77±3.31)、(74.23±2.43)μmol/L,而空白组为(74.57±2.49)μmol/L.各组之间无显著性差异(P>0.05).(3)10-7μmol/LAngⅡ+(10-9、10-8、10-7、10-6μmol/L)PAMP组培养液中NO合成浓度分别为(66.15±2.95)、(80.58±3.77)、(88.67±1.46)、(96.22±2.96)μmol/L,各组间有显著性差异(P<0.01).结论随AngⅡ浓度增加可显著抑制CFs分泌NO,而PAMP对CFS合成NO无明显影响,但PAMP与AngⅡ共同培养时,随PMAP浓度增加,NO的合成呈依从性增多.

    作者:薛世荣;李志樑;徐春生;严全能;江海龙;吴宏超;唐朝枢 刊期: 2006年第07期

  • 广州儿童秋冬腹泻中人类杯状病毒感染的分子流行病学研究

    目的了解广州某医院秋冬季儿童腹泻中人类杯状病毒(HuCV)感染的分子流行病学特点.方法连续2个秋冬季腹泻流行季节收集临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便标本.采用ELISA检测轮状病毒,RT-PCR检测HuCV.部分阳性标本PCR产物进行纯化、测序,结合参考株相应核苷酸序列进行进化分析.结果诺瓦克样病毒(Norwalk-like virus,NLVs)阳性率为12.35%(80/648),扎幌样病毒(Sapporo-like virus,SLVs)阳性率为0.31%(2/648).NLVs各月阳性率无显著性差异,主要感染2岁以下患儿.2003年流行株为GⅡ-3群和GⅡ-4群,2004年为GⅡ-4群.2株SLVs均为GI-1群.结论NLVs是广州地区秋冬季节儿童腹泻的重要病原体,其流行株为GⅡ-3群、GⅡ-4群病毒株,但在不同的时间段可能存在不同的流行优势株;广州地区存在SLVs所致感染,与我国报告的SLV基因型不同.

    作者:詹惠春;聂军;刘翼;唐亚丽;戴迎春;李建栋;陈清;俞守义 刊期: 2006年第07期

  • 中国小型猪原位肝移植的实验研究

    目的总结中国小型猪非转流条件下原位肝移植的手术特点,探索建立成熟、稳定的移植模型.方法通过18例次非转流条件下中国小型版纳猪原位肝脏移植术,结合手术特点进行技术改进,观察围手术期血液动力学及重要代谢指标的变化,观察手术技术改进及术后处理对存活率的影响.结果所有手术无术中死亡,术后7d存活率88.9%.平均手术时间(179.6±14.3)min,平均无肝期(27.3±3.4)min.无肝期血液动力学及生化代谢波动明显.术后当天麻醉清醒,术后3~5h左右开始自行排出小便,术后第3天正常进食.结论无肝期手术时间的缩短及血液动力学的相对稳定是非转流条件下猪原位肝移植成功的关键.

    作者:潘明新;李爱辉;高毅;谢金敏;张翌;张新建;张鸿飞;郭跃虎;张会迎 刊期: 2006年第07期

  • 培养的人癌细胞株(系)pot1基因exon12突变筛选

    目的对培养的人癌细胞株(系)中pot1(protectiom of telomeres1)基因exon12进行突变筛选.方法从27株培养的人癌细胞株(系)提取染色体组DNA,用PCR方法扩增hpot1基因exon12,PCR产物纯化后直接测序,测序结果与GenBank和NCBI数据库中pot1基因的数据比较,对培养的人癌细胞株(系)中hpot1基因exon12进行突变分析.结果测序结果显示,人宫颈癌Hela细胞株和人卵巢癌细胞株(高转移)HO8910-PM等5个来源于女性生殖系统癌细胞株中的4个,在hpot1基因exon12区有相同的置换突变(G17722→C),为错义突变,对应于cDNA的G1385→C,多肽链的Leu454→Phe;而其余23个不同来源的癌细胞株(系)均无突变.结论提示hpot1基因exon12(17722碱基)是突变热点区,并且这种突度可能具有女性生殖系统肿瘤特异性.

    作者:侯敢;黄迪南;姜英华 刊期: 2006年第07期

  • 半枝莲提取物抗人肝癌Hep-G2细胞增殖及其机制研究

    目的探讨半枝莲提取物(ESB)对人肝癌Hep-G2细胞体外增殖的影响及其作用机制.方法以MTT法检测ESB对Hep-G2细胞增殖的影响;光镜、电镜观察ESB作用后Hep-G2细胞形态的变化;流式细胞仪检测ESB作用后Hep-G2凋亡细胞、细胞周期的变化及凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Fas表达.结果ESB能明显抑制Hep-G2细胞的增殖,并有剂量效应及时间效应关系.ESB作用Hep-G2细胞72h后,呈现凋亡早期的形态学改变;凋亡细胞增多;S期细胞减少,G0/G1期细胞增多;Fas表达增强,Bcl-2及Bax表达变化不明显.结论ESB可抑制Hep-G2细胞增殖,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡,可能与激活FNFR超家族有关.

    作者:林敬明;刘煜;罗荣城 刊期: 2006年第07期

  • PCR介导嗜肺军团菌疫苗候选基因lvgA和Hsp60的融合及其在大肠杆菌中表达的初步研究

    目的采用PCR法进行嗜肺军团菌lvgA和Hsp60二基因的拼接融合,克隆并检测该融合基因在原核系统中表达情况,为进一步研究其免疫性能作必要的准备.方法采用重组聚合酶链反应,设计引物首先分别从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得待融合端互补的军团菌毒力基因(lvgA)和热休克蛋白60基因(Hsp60),经琼脂糖电泳纯化回收,再以适量lvgA和Hsp60为模板变性、退火、重叠延伸,实现二基因的PCR水平融合,随后采用外引物进行新一轮扩增,扩得足量lvgA/Hsp60融合基因的PCR产物,继而将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒,转化宿主菌BL21,经PCR、酶切及测序鉴定后,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析等鉴定.结果扩增出了约2292bp的lvgA/Hsp60融合基因,构建了原核表达重组质粒pGlvgA/Hsp60,并检测到Mr约117000的GST-lvgA-Hsp60融合蛋白表达条带.结论采用PCR法实现了嗜肺军团菌lvgA和Hsp60二基因的融合,构建了其原核表达重组质粒,并使该融合蛋白在原核系统中得到了有效的表达,为进一步研究该融合基因的免疫学特性奠定了基础.

    作者:刘明杰;陈建平;王涛;廖涛;陈宪;芦殿香;田玉 刊期: 2006年第07期

  • 磷酸化细胞外信号调节激酶和P21ras在高血压血管平滑肌细胞中表达增强

    目的探讨高血压血管平滑肌细胞增生和ERK激活的机制.方法采用免疫组织化学和Westernblotting技术,对比观察肾血管性高血压和自发性高血压大鼠肾细小动脉平滑肌细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和P21ras表达.结果实验期间,Wistar肾血管性高血压组动脉血压从(104±18)mmHg升高到实验结束时的(198±33)mmHg,自发性高血压大鼠16周龄时的血压为(163±23)mmHg.肾血管性高血压组肾小球发生了明显的纤维化(P<0.05),自发性高血压大鼠肾小球纤维化等与对照组无显著性差异.肾血管性高血压组入球动脉、小叶间动脉、叶间动脉和弓形动脉血管平滑肌细胞中磷酸化ERK1/2染色阳性率分别为7.09%、14.57%、29.44%和13.63%,均明显高于对照组(P<0.01).自发性高血压大鼠入球动脉、小叶间动脉、叶间动脉和弓形动脉血管平滑肌细胞中磷酸化ERK1/2染色阳性率分别为16.09%、24.17%、32.44%和18.61%,均明显高于对照组(P<0.01);肾血管性高血压组和16周龄自发性高血压大鼠入球动脉、小叶间动脉和弓形动脉平滑肌细胞中P21ras的阳性率明显高于对照组(P<0.01);Westembloting检测可见高血压组和16周龄自发性高血压大鼠肾组织磷酸化ERK1/2和P1ras蛋白含量明显高于对照组(P<0.01).结论在大鼠两肾一夹型高血压和自发性高血压时,P21ras基因表达增加使部分血管平滑肌细胞丝裂原激活蛋白激酶系统激活,导致部分小动脉血管平滑肌细胞增生.

    作者:景丽;张建忠;王一理;郭风英 刊期: 2006年第07期

  • Avastin对肺癌诱导的肺微血管生成的影响

    目的建立肺微血管内皮三维培养系统,观察抗血管内皮生长因子(VEGF)的人源化单克隆抗体Avastin对肺癌诱导的肺微血管生成的效应,并探讨其作用机制.方法通过血管生成抑制实验和采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的变化,观察Avastin对肺微血管内皮细胞的影响.结果随着Avastin作用浓度的增加,无血管结构区域的面积亦增加,由25μg/ml时的(0.944±0.073)cm2增加为100μg/ml的(5.189±0.192)cm2,凋亡率亦由(32.5±1.5)%增加为(39.2±1.6)%,并阻滞LVEC于G0/1期边界,造成细胞周期停滞,同时引起S期和G2/M期细胞比例显著降低.结论Avastin可抑制肺癌诱导的肺微血管内皮细胞的生长,并诱导细胞凋亡的发生,可能与Avastin阻滞LVEC于G0/1期边界,造成细胞周期停滞有关.

    作者:刘锦新;王晓光;傅军;罗荣城 刊期: 2006年第07期

  • 图像分类数的自适应估计准则与优分割算法

    在图像分割算法中,将图像灰度分为多少类是首先需要决定的问题,它将直接影响分割的终结果.因此,必须合理地估计图像分类数,它在理论分析和应用上都是很重要的一步.本文提出了一种基于马尔可夫场的图像分类数的自适应估计准则.当该准则达到小时对应的类数就是图像正确分割所要求的分类数.准则中各参数由期望大法和大伪似然法来估计.试验表明,本文的算法能通过自适应的调整参数而正确地找到图像的分类数,并且在此分类数下能自动得到图像的大后验分割.

    作者:颜刚;陈武凡 刊期: 2006年第07期

  • 以抗体竞争结合抗原测定单抗亲和力常数的研究

    目的在Friguent方法基础上建立更加稳定可靠的基于抗原/抗体竞争结合原理的单抗亲和力常数(Kd)检测方法.方法以抗体对抗原进行竞争结合,通过双抗体夹心法检测在一定抗体浓度竞争下抗原的结合率计算Kd值.结果用改良方法在两次不同条件下检测抗IL-8单抗的Kd值分别为:2.61×10-12mol/L和2.39×10-12mol/L,而使用Friguent方法在两次不同条件检测抗IL-8单抗的Kd值分别为:5.57×10-10mol/L和1.41×10-10mol/L.结论相对于Friguent方法,本研究计算出的Kd值更能反映抗原/抗体结合的真实情况,而且在不同实验条件下检测结果重现性强.

    作者:郭杰标;郭锐;刘艳华 刊期: 2006年第07期

  • 从噬菌体随机十二肽库中筛选乙酰胆碱酯酶的抑制肽

    目的从随机肽库中筛选乙酰胆碱酯酶(AChE)的抑制性多肽.方法以人AChE作为靶标,应用噬菌体随机12肽库进行筛选,经过3轮筛选,对阳性克隆进行测序并进行序列分析及抑酶活性测定.结果筛选得到6个能与人AChE较强结合的噬菌体克隆,其中有4个克隆可以抑制AChE的酶活性,其保守序列为W(S/P)HY.结论通过噬菌体肽库技术能够筛选到抑制人AChE活性的多肽,为进一步研究AChE的多肽抑制剂奠定了基础.

    作者:张兴梅;石玉生;王春霞 刊期: 2006年第07期

  • 葡萄糖-6-磷酸酶多克隆抗体对大鼠血管源性脑水肿的治疗作用

    目的观察葡萄糖-6-磷酸酶多克隆抗体(G-6-PpAb)对大鼠血管源性脑水肿(VBE)的治疗作用.方法将60只Wistar大鼠随机分为正常、脑水肿、脑水肿甘露醇、脑水肿G-6-PpAb共4组.Wistar大鼠腹腔注射苯肾上腺素造成VBE模型,然后分别股静脉注射甘露醇、腹腔注射G-6-PpAb,用Evansblue(EB)法测定血脑屏障(BBB)的通透性,并以远红外水分分析仪分别测定各组脑灰、白质水分含量百分比.结果G-6-PpAb组同甘露醇组相比对降低BBB通透性及大脑白质水分含量均有显著效果(P<0.01),对灰质的脱水作用无显著性差异(P>0.05).结论G-6-P活性与VBE中BBB的通透性改变有关,G-6-PpAb对VBE尤其是脑白质水肿有选择性治疗作用.

    作者:陶珍;陆兵勋;张运周;程岗 刊期: 2006年第07期

  • 体外反搏提高切应力调节NO和cGMP机制的探讨

    目的观察体外反搏对心肌梗死犬头背干切应力和信号转导物质一氧化氮(NO)和环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,探讨体外反搏保护缺血心肌的机制.方法19只健康杂种犬随机分为对照组、缺血组和缺血+反搏组(反搏组)3组,采用开胸结扎冠状动脉左前降支的方法建立心肌缺血模型,观察体外反搏前后头背干切应力的变化,用改良硝酸还原酶法测定体外反搏前后心肌缺血犬血浆和主动脉NO含量,采用放免法检测心肌缺血前后血浆和主动脉cGMP的含量.结果体外反搏可提高因心肌缺血而造成的切应力降低,并使之恢复正常.同时也发现体外反搏可提高缺血组犬血浆和主动脉NO和cGMP水平.结论体外反搏能提高切应力,促进NO和cGMP的产生,这可能是其抗心肌缺血损伤的重要机制之一.

    作者:钱孝贤;陈燕铭;吴伟康;刘勇;周彬;陈璘;郑振声 刊期: 2006年第07期

  • 医学图像数据网格的实现

    根据现有医学影像归档及通信系统(PACS)应用需求,分析探讨了建立医学图像数据网格的必要性.并提出了医学图像数据网格的软件基本框架,深入研究了医学图像数据网格中用户验证、元数据目录和存储代理三个关键组件的实现方法.

    作者:张海;郭文明 刊期: 2006年第07期

  • 钙介导As2O3诱导的线粒体通透性转变孔道开放

    目的研究Ca2+在As2O3介导的PTP开放中的作用,探讨As2O3诱导粒体通透性转变孔道(PTP)开放的机制.方法提取大鼠肝线粒体,通过紫外分光光度仪检测Res作用下线粒体的膨胀,借此测定线粒体PTP的开放状态;借助荧光探针Rh123检测线粒体膜电位的变化.结果用10μmol/LAs2O3加10μmol/LCa2+处理线粒体,PTP开放.单独使用10μmol/LAs2O3处理,或先用0.5mmol/LEGTA螯合Ca2+,然后用10μmol/LAs2O3加10μmol/LCa2+处理,线粒体D540不下降.分别用0、5、10和20μmol/LAs2O3处理线粒体,D540变化可分别被50、20、10和5μmol/LCa2+介导.结论Ca2+能介导As2O3诱导的PTP开放;As2O3诱导细胞凋亡通过降低诱发PTP开放所需的Ca2+阈值促使PTP开放,有可能通过调节细胞内的Ca2+来调控线粒体PTP开放进而调控细胞凋亡.

    作者:乔东访;马安德;晏芳;王慧君 刊期: 2006年第07期

  • 磁共振灌注成像监测组织工程骨血管化的实验研究

    目的探讨磁共振灌注成像在组织工程骨血管化监测中的应用价值.方法在13只恒河猴的25个胫骨上制备20mm的骨膜与骨缺损,依据填充的材料不同随机分为五组,A组:β-磷酸三钙(β-TCP)+骨髓基质干细胞(BMSCs)+血管束;B组:β-TCP+血管束;C组:β-TCP+BMSCs;D组:β-TCP;E组:空白对照.术后4、8、12周行磁共振灌注成像检查并计算信号强度-时间(SI-T)曲线的大线性斜率(SSmax)和基线值(SIbaseline),拍摄恒河猴胫骨X线片并计算其透光度,同时行放射性核素骨显像检查.结果术后4、8、12周A组的SSmax值高,术后8周与4周相比SSmax有较大幅度的提高(P=0.003).术后8周A组5个样本的同位素计数比值与磁共振灌注成像检查的SSmax呈正相关关系(rs=0.899,P=0.038),术后12周A组5个样本的SSmax与X线片透光度呈负相关(rs=-0.892,P=0.042).结论SI-T曲线的SSmax能够准确地反映组织工程骨的血管化情况,磁共振灌注成像检查具有无创、无辐射、高灵敏度和可定量分析的优点.

    作者:王学明;裴国献;金丹;魏宽海;江汕;唐光辉 刊期: 2006年第07期

  • 胸外科术后住院病人并发症和猝死原因探析

    目的探讨胸外科术后住院病人的并发症和导致猝死的危险因素及预防.方法通过对4576例普胸手术(肺手术2029例;食道手术2037例,胸壁和纵隔手术510例)病人进行回顾分析,总结分析术后住院期间主要并发症的原因和导致病人猝死危险因素.结果本组胸外科术后住院病人并发症的总发生率2.82%(129/4576),总死亡率为0.92%(42/4576例).并发症148例中,支气管胸膜瘘43例,食管吻合口瘘34例,胸腔感染52例,复张性肺水肿19例.总死亡42例,因支气管胸膜瘘、食管吻合口瘘和胸腔感染等死亡25例,占死亡的59.5%;猝死17例,占死亡的40.5%,其中死于心源性猝死的8例,肺梗塞6例,复张性肺水肿2例和脑猝死1例.与对照组比较住院期间出现并发症和猝死病人均为相对高龄;术前均有不同程度的呼吸和心血管疾病.结论胸外科术后住院病人的并发症发生率较高,并发症引起的死亡率也较高;导致猝死的危险因素相对较多,对高危亚群病人围手术期进行有效的监测和治疗,有可能减少死亡率.

    作者:线胤生;党诚学;王作仁;陈武科 刊期: 2006年第07期

南方医科大学学报杂志

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